出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

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3、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌

↓36±1℃,48±2h
↓44.5±0.5℃,24±2h
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↓
↓
↓
↓
浑浊，产气
不产气浑浊，产气不产气：粪大肠菌群阴性
查MPN表
大肠菌群阴性查MPN表
报告大肠菌群
报告粪大肠菌群
的MPN值
的MPN值
大肠菌群计数检验的操作
MPN法
LST不产气（-）小导管里无气泡
LST产气（+）
36℃±1 ℃ 培养24h
加入 Kovacs氏试剂
接触面红色，阳性
甲基红反应(MR)
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
VRBA平板计数法
选择15~150平板计数典型和
可疑菌落
36℃±1 ℃ 18h ~24h
典型菌落为紫红色周围有红色胆盐沉
淀环，0.5mm
挑选10个菌落接种到BGLB
结果报告
经最后证实大肠菌群阳性的BGLB试管比例乘以VRBA菌落数再乘以稀释倍数，即为每克（毫升）样品中大肠菌群数。如：稀释倍数10-3 ,吸取样品稀释液1ml
大肠菌群和粪大肠菌群的检测流程图 MPN法
检样25g
↓
稀释（三个连续的稀释度，如10-1，10-2，10-3）
↓
接种（每个稀释度接种3管LST，每管1ml）
↓ 36±1℃,48±2h
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↓
↓
浑浊，产气
不产气
↓
报告大肠菌群阴性

出口食品大肠菌群和大肠杆菌的检验方法

出口食品大肠菌群和大肠杆菌的检验方法1.仪器和设备1. 1恒温培养箱：36 ± 1 C1. 2恒温水浴箱：44.5 ± 1C1. 3高压灭菌锅1. 4均质器1. 5 试管:18 x 150mm 18 x 180mm1. 6 锥形瓶:500ml 250ml1. 7平皿：直径为90mm1. 8灭菌均质杯1. 9灭菌吸管1. 10酒精棉1.11天平：感量0.1g1.12 冰箱：0-4 C 和-15 〜-20 C1.13显微镜2.培养基的制备2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤称35.6g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18 x 180mm试管中，每管10ml，于121 C高压灭菌15min。

2.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB称40g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18x 180mm 试管中，每管10ml, 121 C高压灭菌15min。

2.3EC肉汤称37g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的18x 180mm 试管中，每管吸8ml, 121 C高压灭菌15min。

2.4伊红美蓝琼脂（EMB称37.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于三角烧瓶，121 C高压灭菌15min。

摇匀冷却至45 C倾注平皿。

2.5营养琼脂称33g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，121 C高压灭菌15min。

制成斜面备用。

2.6生理盐水称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18x 150mm试管内，121 C高压灭菌15min。

2.7成品生化管2.7.1 色氨酸肉汤2.7.2 MR-VP 2.7.3 Koser 氏枸橼酸盐琼脂2.7.4 革兰氏染色试剂盒2.7.5 Kovacs 氏靛基质试剂2.7.6甲基红指示剂2.7.7 V-P 试剂甲液和乙液3.操作步骤3.1样品的稀释和培养3.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化实验。

食品卫生微生物学检验大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数

大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤
6.2 初发酵实验对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Escherichia coli
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属等的细菌检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指标
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Coliforms
食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of faecal coliforms
℃± 1 ℃ 36 36℃
验
24h~ 48h
报告结果
大肠菌群计数
大肠菌群计数
大肠菌群计数
第一法
MPN法
第二法平板计数法第三法 Petrifilm测试片法

MMFSCNJ出口食品中大肠菌群粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

MM_FS_CNJ_03出口食品大肠菌群粪大肠菌群大肠杆菌测定MM_FS_CNJ_0334出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法1. 适用范围本方法适用于出口食品的检验。

2. 主要试剂和仪器. 主要试剂（包括培养基）月桂基硫酸盐胰蛋白月示（LST肉汤；煌绿乳糖胆盐（BGLB肉汤；EC肉汤；伊红美蓝琼脂（EMB）；营养琼脂斜面；色氨酸肉汤；MR-VP培养基；Korser 氏枸椽酸盐肉汤；结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液；生理盐水；革兰氏染色液；Kovacs 氏靛基质试剂；甲基红指示剂；Voges— pros kauer （V-P）试剂。

. 仪器吸管：1mL具刻度；5mL和10mL具1mL刻度；水浴箱：±C；培养箱：36 ±1 °C, 土°C；冰箱：0〜5C和—15〜—20C；均质器；乳钵和研棒；平皿：直径90mm；天平：感量；显微镜；稀释瓶：100mL 200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶；玻璃珠：直径约5mm；菌落计数器。

3. 过程简述. 样品制备以无菌操作取有代表性的样品。

如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。

若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15C保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4C冰箱保存。

检验前冷冻样品可于2〜5C 18h内解冻，或在45C以下15min内解冻。

不同食品样品匀液的制备. 液体食品以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠），以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇），制成1 : 10的样品匀液。

. 固体和半固体食品以无菌操作取样25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8000r /min 均质1〜2min,制成1 : 10样品匀液（也可用灭菌乳体研磨的方法代替）。

稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液，女口10〈10 3> 10 4 ........................................... 。

大肠菌群检测

曹双：请综合看看各种方法，比较一下，有些内容是一致的，有些是每种方法不同于其他方法的，注意比较。

第一篇（蓝色部分为说明和附录，去掉这部分剩下的为连续文件）大肠杆菌检验方法SN 0169—92出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法GB/T 4789.6—1994食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验（这两个检验方法另有完全的PDF文件，见文件夹）以SN标准方法为例，进行说明。

样品制备：以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。

稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。

从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。

附：这是一种9管MPN法测定方法，什么是MPN法（最近似法）？MPN法简介发布日期：2010-05-13 浏览次数：212The Most Probable Number Method In the following example, a set of 3 tubes of an all purpose broth medium is inocuThe Most Probable Number MethodIn the following example, a set of 3 tubes of an all purpose broth medium is inoculated from each of the ten-fold dilutions, with each tube being inoculated with one ml.After incubation, the number of tubes showing growth is recorded. As the succeeding dilutions were made, the organisms were diluted to such an extent that none were in the inocula of seven of the tubes (marked negative). In order to estimate the number of organisms per ml of the sample which would cause this kind of growth response, we locate the three sets of tubes which show dilution of the organisms "to extinction" –i.e., those tubes which were inoculated from the 10–2, 10–3 and 10–4 dilutions.附录1g检样中最近似值(MPN)表 (补充件)以0.1、0.01、0.001g各用3管。

MM_FS_CNJ_0349出口食品中大肠杆菌检验方法

出口食品中大肠杆菌（葡萄糖苷酶荧光）检验方法. 适用范围本方法适用于出口食品（不包括贝类）卫生质量地监视和出口前地筛选检验. 主要试剂和仪器. 主要试剂（包括培养基）肉汤：见；琼脂培养基：见；生理盐水：见.. 仪器吸管：和，带刻度；试管：X;稀释瓶：三角瓶或广口瓶；玻璃珠;均质器;水浴箱或培养箱：±c；长波紫外光灯：，功率V •. 样品制备按照第章进行.. 过程简述. 每个样品选三个连续稀释倍数地稀释液，每个稀释倍数地稀释液接种三管肉汤，每管.•将接种管于内放入±0水浴或培养箱内，培养土•. 将各管培养物拿至暗室，在长波紫外光灯照射下观察. 凡显蓝色荧光地为大肠杆菌阳性. 在阳性管上做好标记并记录..从产气而不显荧光地各管取培养物.划线接种琼脂平板，土c培养土.. 将培养后地平板拿至暗室，打开皿盖，在长波紫外光灯照射下观察有无蓝色荧光. 凡显蓝色荧光地，无论其面积大小，均记为原管培养物为大肠杆菌阳性.. 结果计算按管和琼脂平板地大肠杆菌阳性数，查表，报告每克（毫升）样品中大肠杆菌地值.. 来源：附录培养基和试剂（补充件）肉汤胰蛋白月示.或胰酪胨氯化钠乳糖磷酸氢二钾磷酸二氢钾月桂基硫酸钠蒸馏水将各成分溶于蒸馏水中，分装试管（内装倒立小发酵管）.每管.°C高压灭菌. 最终± .琼脂培养基胰酪胨水解蛋白酵母浸膏牛肉浸膏可溶性淀粉氯化钠琼脂蒸馏水将各成分溶于水中，无须调值.C高压灭菌.冷却至〜C,倾注平板.. 生理盐水氯化钠蒸馏水分装于三角瓶或广口瓶，每瓶.C高压灭菌.。

大肠菌群检验方法及操作方法

大肠菌群检验方法及操作方法1、什么是大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。

2、大肠菌群的组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。

3、大肠菌群的测定意义◆粪便污染的指标菌：大肠菌群或粪大肠菌群◆以大肠菌群作为粪便指标菌原因：1)在粪便中数量最大；2)在外环境中存活的时间与致病菌大体相同；3)检测方法简便容易。

◆大肠菌群的测定意义：1)判断食品中否受到粪便污染。

2)有利于控制肠道传染病的发生和流行。

3)有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况。

4、大肠菌群的生物学特性1 形态与染色：革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌。

2 发酵乳糖产酸产气3 培养特性：在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；4 在麦康凯琼脂上的典型菌落：呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。

5、大肠菌群检验方法及操作方法◆国家标准：◆三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验)◆行业标准：◆两步法：推测试验→证实试验表1 大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征MPN法简介Most Probable Number Method最大可能数•对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。

•MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。

6、粪大肠菌群的检验•粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

•于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃24h产气的一群细菌；在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h 内产生吲哚的耐热大肠菌群。

检验方法：7、检验注意事项1）从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。

进出口SN标准微生物检测方法之大肠杆菌和大肠菌群计数方法

大肠杆菌和大肠菌群计数方法Enumeration of Escherichia coli and the coliform章节内容：·传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法·LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）·瓶装水检测方法·贝类和贝类肉制品检测方法·柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法·大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法·参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。

大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。

虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。

某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。

1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。

由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。

再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。

与已知的非产气致病菌容易区别开来。

因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。

肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂。

于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。

1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。

虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。

于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。

【实用文档】SN0169-92出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

SN0169-92代替ZBX09002一88 Methodforexaminationofcoliform，fecalcoliformandescherichiacoliinfoodforexport 1、主题内容与适用范围本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。

本标准适用于出口食品的检验。

2、设备和材料2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。

2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。

2.3 培养箱：36±1℃，44.5±0.5℃。

2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。

2.5 均质器。

2.6 乳钵和研棒。

2.7 平皿：直径90mm。

2.8 天平：感量0.1g。

2.9 显微镜。

2.10稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。

2.11玻璃珠：直径约5mm。

2.12菌落计数器。

3、培养基及试剂3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(胨)(LST)肉汤。

3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。

3.3EC肉汤。

3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。

3.5 营养琼脂斜面。

3.6 色氨酸肉汤。

3.7MR-VP培养基。

3.8Korser氏枸椽酸盐肉汤。

3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。

3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。

3.11生理盐水。

3.12革兰氏染色液。

3.13Kovacs氏靛基质试剂。

3.14甲基红指示剂。

3.15Voges-proskauer(V-P)试剂。

4、样品制备4.1 以无菌操作取有代表性的样品。

如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。

若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4℃冰箱保存。

检验前冷冻样品可于2～5℃18h内解冻，或在45℃以下15min内解冻。

4.2 不同食品样品匀液的制备4.2.1 液体食品以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇)，制成1：10的样品匀液。

食品中大肠菌群的检验

食品中大肠菌群的检验简介大肠菌群是指含有大肠菌属（Escherichia coli）和奇异变形杆菌属（Coliform bacteria）的细菌群体。

它们存在于人和动物的肠道中，也可以存在于环境中，如土壤、水体和食品中。

食品中的大肠菌群是导致食品中毒的主要病原体之一。

因此，对食品中大肠菌群的检验非常重要，以确保食品的卫生和安全。

本文将介绍食品中大肠菌群的检验方法和操作流程。

方法和步骤1. 样品采集样品采集是食品中大肠菌群检验的第一步。

根据需要检验的食品种类，选择合适的采样方法。

常见的食品样品包括水果、蔬菜、肉类和乳制品等。

采集样品时，应使用干净无菌的容器，并避免污染。

确保样品的代表性，避免极端状况下的取样，如选择已烂的水果或有明显变质的食品。

2. 样品处理样品处理是为了提取样品中的菌群以进行后续的检测。

处理过程应在无菌条件下进行，以避免外部的污染。

常见的样品处理方法包括：•加入盐水：将样品加入含有氯化钠的缓冲液中，以便菌群的释放。

•搅拌和均质：使用搅拌器或者均质器将样品搅拌均匀，以确保菌群的均匀分布。

•过滤：通过滤膜将样品过滤，以分离固体物质和悬浮物。

3. 培养基选择选择适当的培养基是进行大肠菌群检验的关键。

常用的培养基包括马铃薯葡萄糖琼脂（Plate Count Agar，PCA）、大肠杆菌选择琼脂（MacConkey Agar）、经典蓝琼脂（Eosin Methylene Blue Agar）等。

不同的培养基适用于不同目的的检验。

PCA适用于总菌群计数，MacConkey Agar适用于大肠菌群的选择性检测，Eosin Methylene Blue Agar适用于大肠杆菌的计数和鉴别。

4. 培养和孵育将样品处理后的培养基平板进行孵育。

孵育的时间和温度根据菌群的生长特性而定。

一般情况下，孵育时间为24小时，温度为37摄氏度。

培养过程中，需要注意避免交叉污染。

每个样品应使用独立的培养基平板进行孵育，且标记清楚以区分不同样品。

大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结

大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法（1）大肠菌群（colifoms）在36°C培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。

（2）粪大肠菌群（Fecal colifoms）也称耐热大肠菌群。

指大肠菌群中能在44.5℃生长、发酵乳糖产生气体的一群细菌。

与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。

食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低。

作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。

（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。

是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。

一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。

主要有：O抗原(菌体抗原，150个)；K抗原(荚膜抗原，90个)；H抗原( 鞭毛抗原，50个)（4）致泻性大肠埃希氏菌能侵入肠粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。

产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。

致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻；肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎；(O157：H7；O104：H4；O111；O126等)侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾；粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。

2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系3、相关检验方法标准GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数GB 4789.39- -2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数GB4789.6- 2016 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏O157:H7/NM检验。

大肠菌群和粪大肠菌的检验

实验四大肠菌群和粪大肠菌的检验一、实验目的要求1、了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。

2、学习并掌握大肠菌群检验的原理和方法。

二、原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。

食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。

三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶2个制生理盐水3、250ml三角瓶1个制EMB琼脂4、18×180mm试管8支稀释及制双料乳糖胆盐发酵管5、18×150mm试管20～25支单料乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管6、13×130mm试管20支制蛋白胨水、EC肉汤7、1ml移液管 5 支8、10ml移液管 3 支9、直径为90mm平皿12套制EMB平板10、250ml量筒1支（二）应灭菌消毒的器材剪刀1把开瓶器不锈钢药匙1把滴管胶头4只称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0.85%NaCl生理盐水300ml 500ml三角瓶2、乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支5支60ml 18×180mm试管(装有导管)单料：10ml/ 8支90ml 18×150mm试管(装有导管)3、EMB琼脂：1瓶120ml 250ml三角瓶4、乳糖发酵管：3ml/支5支20ml 13×130mm试管(装有导管)5、EC肉汤：3ml/支6支20ml 13×130mm试管(装有导管)6、蛋白胨水：2ml/支10支20ml 13×130mm试管四、实验内容（第一天）样品处理及初发酵接种：所需培养基与器材：? 培养基：1. 0.85%NaCl生理盐水：300ml 1瓶2. 乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支3～5支18×180mm试管(有导管)单料：10ml/支6～8支18×150mm试管(有导管)? 灭菌器材：500ml广口瓶（内带5mm带玻璃珠）1～2个18×180mm试管3支250ml量筒1支1ml移液管 5 支10ml移液管3支当样品袋装样品时：消毒酒精、棉花、无菌剪刀、称量纸、不锈钢药匙、橡皮胶头3只；当样品瓶装样品时：石炭酸消毒纱布两块、开瓶器。

大肠菌群测定步骤

食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤一、培养基制备1、生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0ml将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，1210C高压灭菌15min，备用。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，1210C高压灭菌15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。

3、样品制备（在无菌室中进行）（1）固体或半固体样品无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，制成1：10的样品稀释液备用。

（2）液体样品以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制成1：10的样品稀释液备用。

4、样品稀释用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，制成1：100的样品匀液。

按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。

等10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。

根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

二、大肠菌群的测定（MPN法）1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。

360C+10C培养24h-48h后，观察倒管内是否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。

对未产气的试管，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未产气，可按。

报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。

实验二食品中大肠菌群的检验

②用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，混匀，制成1 ：100的稀释液。
③另取1mL灭菌吸管，按②操作依次做10倍递增稀释液，每
稀释一次，换用一支1 mL灭菌吸管。
2）乳糖发酵实验接种1mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内。接种3个稀释度，每一稀释度接种3管，置（36土1)℃
汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是
否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，
如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复
发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
LST结果判断
大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管。
阳性管 10ml 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1ml 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 0.1ml 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 3 6 9 3 6 9 12 6 9 12 16 9 13 16 19 4 7 11 15 7 11 15 19 MPN 10ml 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 阳性管 1ml 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 0.1ml 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 11 15 20 24 16 20 24 29 9 14 20 26 15 20 27 34 21 28 35 42 29 36 44 MPN 10ml 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 阳性管 1ml 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0.1ml 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 53 23 39 64 95 43 75 120 160 93 150 210 290 240 460 1100 1100+ MPN

大肠杆菌检测方法

大肠菌群及检验一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。

调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因.粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多.大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。

大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。

粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性.大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。

二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。

目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准.两个标准方法在检测程序上略有不同.（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。

乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。

36±1℃培养48±2h，观察是否产气.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

食品中大肠菌群、大肠杆菌检验

♦ 抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，有利于抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，
大肠菌群细菌的生长和挑选，大肠菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。虽然抑菌剂用量甚微，但如果称量误差，也可然抑菌剂用量甚微，但如果称量误差，对抑菌作用产生萄糖、麦芽糖、能发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露木糖、阿拉伯糖等，醇、木糖、阿拉伯糖等，均产酸产气。大部分菌株迅速发酵乳糖，某大部分菌株迅速发酵乳糖，些不典型菌株则迟缓或不发酵乳糖。些不典型菌株则迟缓或不发酵乳糖。
♦四项生化试验（IMViC试验）四项生化试验（试验）试验
/
初发酵和证实试验
♦ 利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验，培养利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验，
基的配制略有不同，基的配制略有不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖 ℃ 产酸产气” 产酸产气”。 ♦ 初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。经过证实试验后，有时可能成为阴性。有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。因此，在实际检测发酵与证实试验相差较大。因此，工作中，证实试验是必需的。工作中，证实试验是必需的。
大肠菌群并非细菌学分类命名，大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语。生细菌领域的用语。它不代表某一个或某一属细菌，一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。及血清学方面并非完全一致。其中主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。克雷伯氏菌属等。

食品微生物大肠菌群检测方法

食品微生物大肠菌群检测方法食品微生物大肠菌群检测是食品安全领域中的一项重要工作，其结果直接关系到食品的卫生安全。

在食品加工、储存和运输过程中，微生物大肠菌群的存在和数量是一个重要的指标，因此需要建立准确、可靠的检测方法来保障食品安全。

本文将介绍几种常用的食品微生物大肠菌群检测方法，以供参考。

一、传统培养法。

传统培养法是一种常用的微生物检测方法，其原理是将食品样品在适当的培养基上进行培养，然后通过计数菌落形成的数量来确定大肠菌群的存在和数量。

这种方法简单易行，成本低廉，但需要较长的培养周期，且存在一定的误差。

因此，在实际应用中，需要结合其他方法进行验证。

二、分子生物学方法。

分子生物学方法是近年来发展起来的一种食品微生物检测方法，其原理是利用PCR、实时荧光定量PCR等技术，通过检测食品样品中的微生物DNA或RNA来确定大肠菌群的存在和数量。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速的优点，能够准确地检测出微生物的存在和数量，但需要较为复杂的实验操作和设备。

三、免疫学方法。

免疫学方法是利用抗原与抗体之间的特异性反应来检测微生物的存在和数量。

常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫荧光法等。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速的优点，但需要较为复杂的实验操作和设备，且对样品的预处理要求较高。

综上所述，食品微生物大肠菌群检测方法有多种，各有优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行检测。

在实际应用中，可以结合多种方法进行验证，以确保检测结果的准确性和可靠性。

希望本文介绍的方法能够为食品安全领域的从业人员提供一定的参考价值。

出口食品厂卫生细菌检验方法

出口食品厂卫生细菌检验方法（一）工器具（包括工作台）细菌污染情况的检验检验项目：A大肠菌群1.培养基去氧胆酸盐琼脂2.检验方法（1）取样在100cm²或50cm²的工器具面积上（冬天取100cm²，夏天取50cm ²），用消毒棉签沾无菌蒸馏水擦拭，然后放入无菌生理盐水中（100cm²的工器具面积放入100ml的生理盐水中，50cm²的工器具面积放入50ml的生理盐水中）充分振摇制成原液（1：1）（2）接种与培养用无菌吸管分别吸上述原液1ML注入灭菌平皿中，做两个平皿，倒入冷至45℃左右的培养基约15ML，摇匀凝固后再上层倒入3-5ml培养基旋转平板，复盖于表面37℃培养18小时，控制菌落密度在每个平皿10个左右阳性率最正确，如果菌落密度大，可以将原液稀释10倍100倍（3）结果报告平板上出现的大肠菌群呈深红色，菌落直径大于0.5mm，周围可能有雾状胆盐沉淀，菌落形态有的边缘整齐，呈圆形，扁平，有的边缘不齐，表面凸起或呈波形，且为玫瑰红色，这是检验为阳性，每平方厘米大肠菌群=测的菌落数*稀释倍数，每1平方厘米大肠菌群不到一个的，可化为每平方米上的个数（二）操作者手的检验方法同工器具的检验，用灭菌的棉签揩拭手掌面（手背面不取）将棉签放入已准备好的灭菌生理盐水中，振挡摇匀，吸入平皿中每皿1ml,作两个平皿，37培养18小时，取出计数，计算单位以一只手掌面的大肠菌群个数为报告结果。

B.金huang色葡萄球菌1.培养基（1）生理盐水（2）10Nacl肉汤（3）B-P培养基（4）兔血浆2.检验方法：（1）取样：在100cm²或50cm²的工器具面积上（冬天取100cm²，夏天取50cm²），用消毒棉签沾无菌蒸馏水擦拭，然后放入无菌生理盐水中（100cm²的工器具面积放入100ml的生理盐水中，50cm²的工器具面积放入50ml的生理盐水中充分振摇制成原液（1：1）（2）接种与培养1)将上述制成的原液取1ml放入灭菌平皿后，倾注15-20ml的BP培养基，36±1℃培养，46±2小时2)或是吸取0.1ml，用L棒涂布于表面干燥的BP琼脂平板，36±1℃培养，46±2小时3)从平板上至少挑取1个可疑的金huang色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验（3）报告结果定性报告如BP琼脂平板的可疑菌落做血浆凝固酶实验为阳性，即报告100cm²或50cm²的工器具上金huang色葡萄球菌存在C.细菌总数1.培养基：平板计数琼脂2.检验方法：（1）取样：同大肠菌群的取样方法（2）接种与培养：用无菌吸管分别吸上述原液1ML注入灭菌平皿中，做两个平皿，倒入冷至45℃左右的培养基约15ML，摇匀凝固后，37℃培养18小时，控制菌落密度在每个平皿10-250个为好，如果菌落密度大，可以将原液稀释10倍100倍（3）报告结果每平方厘米细菌总数=测的菌落数*稀释倍数，每1平方厘米细菌总数不到一个的，可化为每平方米上的个数，（二）空气中杂菌数的测定（沉降法）。