水牛奶中β-乳球蛋白过敏原表位定位的初步研究
不同乳源品种对乳制品致敏原含量的影响研究
不同乳源品种对乳制品致敏原含量的影响研究乳制品过敏是一种常见的食物过敏反应，许多人在摄入乳制品后可能会出现不同程度的过敏症状。
因此，了解乳源品种对乳制品中致敏原含量的影响是非常重要的。
本文将讨论不同乳源品种对乳制品致敏原含量的影响，并探讨其可能的原因。
首先，我们来讨论乳源品种对乳制品中过敏原含量的影响。
研究表明，不同乳源品种的乳制品中过敏原含量存在差异。
例如，牛奶和羊奶中的过敏原含量可能会有所不同。
一项研究发现，相比于牛奶，羊奶中的β-半乳糖醛酸酯（BLG）的含量较低，而BLG是牛奶中的主要过敏原之一。
这意味着对于那些对牛奶过敏的人来说，可能更容易耐受羊奶。
另外，不同品种的牛奶中过敏原含量也可能存在差异。
一项研究发现，不同品种的奶牛所产生的牛奶中的过敏原分布有所不同。
具体来说，荷斯坦奶牛产生的牛奶中的β-乳球蛋白（BLG）含量比布朗瑞西奶牛产生的牛奶中的BLG含量更高。
这意味着在选择乳制品时，对于对BLG过敏的人来说，选择布朗瑞西奶牛生产的乳制品可能更合适。
然而，需要注意的是，不同乳源品种对乳制品致敏原含量的影响可能会受到其他因素的干扰。
例如，饲养和加工过程中的环境条件、饲料的种类和质量等因素都可能对乳制品中的过敏原含量产生影响。
因此，在进行这种研究时，需要综合考虑多个因素的影响。
接下来，我们来探讨不同乳源品种对乳制品中过敏原含量影响的可能原因。
首先，乳源品种的基因差异可能导致乳制品中的过敏原含量差异。
不同乳源品种的动物可能在产生过敏原的基因表达上存在差异，这可能是造成乳制品中的过敏原含量差异的原因之一。
此外，乳源品种的饲养环境和饲料因素也可能影响乳制品中的过敏原含量。
例如，不同饲养环境下的奶牛可能受到不同类型和质量的饲料供给，这可能会影响它们身体内过敏原的含量。
研究表明，饲养环境和饲料的种类和质量对乳制品中的过敏原含量具有一定的影响。
最后，加工过程中的处理方法也可能影响乳制品中的过敏原含量。
在乳制品的加工过程中，例如热处理和发酵等，可能会导致过敏原的降解或变性，从而降低乳制品中过敏原的含量。
加热对牛乳中β-乳球蛋白(β-LG)的影响
加热对牛乳中β-乳球蛋白(β-LG)的影响
陈文亮;毛仁淡
【期刊名称】《中国乳业》
【年(卷),期】2006(000)002
【摘要】@@ 1 β-LG的来源与特性rn牛奶包含了下列蛋白质:酪蛋白(casein)、乳清蛋白(whey,其中包括β-乳球蛋白和α-乳白蛋白)、免疫球蛋白及血清白蛋白(BSA).β-LG是乳清蛋白中的主要蛋白质,分子量约为18400 kDa,存在于反刍动物及一些非反刍动物的乳汁中.β-LG在60年前已被发现,但对于其生理及生物化学方面的功能尚未明确.β-LG是牛奶中主要热敏感蛋白,主要由162个氨基酸所组成,并且在C106～C119及C66～C160的位置上有双硫键的键结,在C121位置上具有单一硫键.
【总页数】2页(P54-55)
【作者】陈文亮;毛仁淡
【作者单位】国立交通大学生物科技学院,台湾,新竹;国立交通大学生物科技学院,台湾,新竹
【正文语种】中文
【中图分类】TS252
【相关文献】
1.澳系荷斯坦牛β-乳球蛋白多态性对泌乳性能的影响
2.加热和加压对β-乳球蛋白的影响
3.超高温灭菌乳系列之二——加热对牛乳中微生物的影响
4.超高效液相色
谱法快速检测牛乳中β-乳球蛋白5.澳大利亚研究剪切、加热及PH值对β-乳球蛋白构象变化的影响及其构象变化对抗原性的影响
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大豆过敏原11S球蛋白G2中A2链结合表位的预测
大豆过敏原11S球蛋白G2中A2链结合表位的预测刘阳星月;张迪;姚亚亚;苗字叶;刘壮;李慧静【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2018(039)018【摘要】采用生物信息学软件NCBI GenBank数据库、PDB数据库、SWISS-MODEL、Deep View 4.1等预测11S球蛋白G2中A2链的二级结构和三级结构模型,使用DiscoTope 2.0 Server软件预测B细胞构象表位,发现构象表位多位于无规则卷曲处.定位B细胞线性结合表位,结果表明11S球蛋白G2中A2链的可能线性表位有:37KPDNRIE43、79PSYTNGP85、114SQQRGRSQRP123、52WNPNNK57、196QQGGSQSQKGKQQE209、241QGENEEED248、267RKPQQEEDDDDEEEQ281、287TDKGC291.此表位预测为后续制肽、免疫等操作找出更准确的肽序,以便建立适合我国大豆过敏人群的食品大豆过敏原的检测技术.【总页数】7页(P152-158)【作者】刘阳星月;张迪;姚亚亚;苗字叶;刘壮;李慧静【作者单位】河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定071000;河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000【正文语种】中文【中图分类】TS214.2【相关文献】1.大豆7S伴大豆球蛋白和11S球蛋白亚基分析 [J], 陈振家;郝利平2.生物信息学技术在食物过敏原表位预测中的应用 [J], 龙伟;李欣;高金燕;陈红兵3.7S伴大豆球蛋白及其糖基化产物对大豆11S球蛋白热聚集的影响 [J], 孙炜炜;于淑娟4.水牛奶中β-乳球蛋白过敏原表位定位的初步研究 [J], 李欣;高金燕;陈红兵5.β-伴大豆球蛋白及其主要抗原表位与大鼠小肠上皮黏膜蛋白结合的比较 [J], 张琦玉; 赵元; 秦贵信; 强嘉楠; 鲍男因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国水牛分子育种的研究进展
中国水牛分子育种的研究进展马云;白芳;左春生;宋新强;马慧芳;李爱民【摘要】概述了中国水牛分子育种的研究进展,包括水牛遗传的多样性和起源研究,产奶性状、免疫功能、繁殖性状基因的研究,功能基因的克隆与分析以及生产性能的微卫星标记等方面的内容.指出目前中国水牛分子育种研究中存在的问题,并展望了水牛分子育种的前景.%Progress on molecular breeding for Chinese buffalo,including the buffalo and the origin of genetic diversity studies,milk production traits,immune function,reproductive traits gene research,cloning and functional analysis,and production performance of microsatellite markers and so on were summarized in this paper.The problems and prosbect of the molecular breeding research progress for water buffalo were pointed out.【期刊名称】《德州学院学报》【年(卷),期】2012(028)002【总页数】6页(P63-68)【关键词】水牛;分子育种;研究进展【作者】马云;白芳;左春生;宋新强;马慧芳;李爱民【作者单位】信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000;信阳农业高等专科学校动物科学系,河南信阳464000;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】O157.5自从对中国水牛开展分子遗传学研究以来，研究的功能基因已超过40个，研究的内容涉及功能基因的编码序列和非编码序列.编码序列主要包括与中国水牛的产奶性状，免疫功能，繁殖性状等相关的基因，非编码序列包括微卫星DNA序列和线粒体DNA的D－Loop序列.本文就现阶段我国水牛分子育种方面的研究进展作一综述，以期为中国水牛起源进化和遗传多样性提供科学依据，同时也为水牛遗传资源保护及定向育种提供基础资料.1.1 水牛产奶性状相关基因的研究进展关于中国水牛产奶性状的候选基因研究较多，主要涉及GH、GHR、DGAT1、PRL、PRLR、STAT、α－乳清蛋白基因等多个功能基因.耿荣庆等［1］发现GH除了能加快肌肉骨骼的生长外，还能参与调节性腺的发育成熟.王锦等［2］发现水牛和黄牛的GH－intron3和GH－extron5基因片段存在的差异可能会引起产奶性状的不同.Yuan等［3］克隆并通过SSCP检测到DGAT1全基因组序列中的7个多态性位点.Tantia等［4］发现印度水牛的DGAT1基因为K232（K232A）等位基因型，这两个非保守性的突变与奶中高脂肪产量，高乳脂率和蛋白率有关.朱佳杰等［5］使用RT－PCR技术，第一次扩增出广西本地沼泽型水牛PRLR基因部分保守序列，与奶牛相比，形成4个氨基酸变异.但这些变异与乳房发育，产奶功能的关系尚不清楚.杜挺媛等［6］发现PRL 基因的第三外显子可能是影响产奶和繁殖性能的关键部分.有研究显示，STAT1的一个SNP的突变C显著增加奶业协作组织DNA样本库奶牛的乳脂率和乳蛋白率.但此基因在水牛身上的研究尚未获得突破性的进展.研究发现水牛奶中α－乳清蛋白的含量比普通牛高出一倍多［7］.樊宝良等［8］克隆了水牛α－乳清蛋白基因的部分序列，与牛的相应序列相比存在一些碱基差异.姜一等［9］对水牛α－乳清蛋白基因的3′端调控区进行了PCR扩增及重组质粒的酶切鉴定.刘建忠等［10］克隆并测定了水牛α－乳清蛋白全基因的核苷酸序列，发现在5′调控区发生的多处突变可能与水牛乳汁中α－乳清蛋白的高水平表达有关.Dlugos CA等［11］发现在α－乳清蛋白基因片段上存在串联重复拷贝，也可能与水牛奶中高乳清蛋白含量有关.A.M.H.等［12］采用PCR－RFLP技术，对水牛κ－酪蛋白基因的研究结果显示，只有纯合的BB基因.1.2 水牛免疫功能相关基因的研究进展关于免疫功能相关基因的研究主要集中在白细胞介素受体（interleukine，IL）基因和干扰素（interferon，IFN）基因.白细胞介素和干扰素在抗肿瘤、抗病毒、免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用［13，14］.阳玉梅等［15－18］采用常规PCR和RTPCR技术，分离出水牛的IL－2、IL－4、IL－5、IL－10、IFN－γ、IL－18和IFN－α基因.李恭贺等［19］扩增出了IL－lp基因的完整编码区，有16处的核苷酸位点发生了突变.史喜菊等［20］从福安和富钟水牛基因组中克隆了IFN－α基因，并从中发现了BoIFN－αI和BoIFN－αJ两个亚型.徐贤坤等［21］将水牛IFN－γ基因亚克隆至PGEX－6P－1中，采用ELISA和Western－blot试验鉴定，结果显示，获得的重组蛋白具有良好的免疫活性.Sukumar等［22］通过体外诱导，分离出水牛的GNLY／NK－lysin（NKL）基因，并对其表达机制进行研究，证明GNLY／NK－lysin（NKL）在水牛的免疫反应起重要作用.1.3 水牛繁殖性状相关基因的研究进展在中国水牛繁殖性状的研究中，目前主要是针对牛的双胎性状开展了一些研究.涉及的基因主要有FSH、FSHR、FS、INH－α亚基基因等.陈宝剑等［23］发现广西沼泽型水牛与印度水牛的FSH－β亚基cDNA序列的同源性达99%.牛金涛等［24］用PCR扩增合成的FSHR基因5′端侧翼序列片段在720bp处有1个碱基缺失，可能与水牛FSHR基因的转录启动和表达调控有关.邓继贤等［25］通过RT－PCR技术扩增得到的水牛的FS cDNA序列有两处氨基酸的突变，这些突变可能影响到FS正常的生物学功能发挥以及水牛的繁殖机能.谢体三等［26］采用RT－PCR方法扩增得到水牛的INH－α亚基基因序列，并对其进行原核表达.为深入研究抑制素对FSH的反馈调节机制以及利用水牛INH－α亚基基因提高繁殖力提供了基础.O.Suneel等［27］分离出摩拉水牛的CYP19基因，SSCP结果显示，在exon2上发生了突变，为预测水牛发情期，降低不孕率提供基础.在中国水牛上，一些基础研究也在不断深入，特别是对一些重要功能基因的分子遗传特征、功能和表达的研究.农微等［28，29］首次扩增出扮演信号分子的Ia型内源性配体（Ghrelin）成熟蛋白编码cDNA序列.并发现Ghrelin可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.李恭贺等［30］扩增得到的水牛Ghrelin cDNA片段与黄牛前原Ghrelin基因仅有6个碱基的差异.Hua等［31］对影响性别的SRY 基因5′侧翼序列进行初步分析表明，SRY基因的核心启动子位于其5′侧翼310bp 富含GC区.付强等［32］证明SRY基因为雄性特异.张毅等［33］对比中国沼泽型水牛和河流型水牛SRY基因序列，存在1个错义意突变G／C，沼泽型水牛为G，河流型水牛为C.Saket K等［34］从水牛cDNA中成功的分离出MHC－DQA1和MHC－DQA2基因，并证实了它们为非等位基因.Miao Y等［35］发现水牛MC1R基因中的河流型等位基因EBR或携带c.310A（p.104S）的等位基因与其黑色表型相关.袁志栋等［36］首次报道了克隆、分析水牛朊蛋白成熟片段基因，为疯牛病的研究奠定了基础.李秋玲等［37］对4个品种151头牛的UCP3基因的多态性及其与血清生化指标的相关性研究结果显示，在两个水牛品种上优势基因型AA略占优势.Strazzullo M等［38］用比较基因法获得水牛的MYOD1和MYF6基因序列，并对MYOD1基因的多态性进行检测，为水牛肌肉功能基因的研究提供基础.Yindee M等［39］对水牛Y染色体上的DBY、ZFY和SRY基因片段分析的结果显示，江河型和沼泽型水牛起源不同.微卫星DNA在水牛中的研究较多，但这些研究大多数用于分析水牛的亲缘关系和起源进化，与生产性状相关联的分析研究较少.张毅等［40］对海南兴隆水牛47个样品30个微卫星座位检测发现，26个微卫星座位具有多态性.杨泽宇等［41］对德宏水牛81个个体的15个微卫星座位进行检测，发现德宏水牛群体遗传多样性较丰富.刘庆华等［42］对4个福安水牛群体的微卫星标记结果表明，福安水牛也具有较丰富的群体遗传多样性.许明等［43］对峡江水牛、海子水牛、西林水牛、恩施山地水牛、江汉水牛及一个对照群体尼里一拉菲水牛进行聚类分析，提出了群体间亲缘关系的远近与其所处地理位置远近紧密相关.田强等［44］分析得到贵州6个地方水牛群体的遗传多样性较高，且黔南水牛与毕节水牛之间的遗传距离最远.崔奎青等［45］对60个广西本地水牛样本进行检测，23对引物中，有19对可以获得特异性产物且存在多态.王冬蕾等［46］应用13个微卫星标记结合荧光－多重PCR技术，对8个品种水牛进行遗传结构分析，发现7个群体具有特有的等位基因，有11个座位为高度多态位点.田强等［47］还提出了贵州白水牛是其产地的普通水牛群的一个突变群.张毅等［48］对沼泽型水牛群体、河流型水牛品种和杂交水牛群体研究分析表明，中国水牛总体上具有纯正的沼泽型水牛血统.中国水牛分子育种多态性研究较多，主要是在线粒体DNA（mtDNA）和细胞色素b（Cytb）上.陈智华等［49］利用PCR－RFLP方法，对德昌水牛DRB3基因第二外显子进行检测，结果表明，德昌水牛具有10种基因型，具有丰富的遗传多态性.齐国强等［50］在我国10个地方水牛品种110个个体的mtDNA D－loop区序列上共检测到107个核苷酸多态位点，提出中国水牛可能有两个母系起源.谢文关等［51］用PCR扩增、测序和生物信息学方法检测中国水牛21个群体232条线粒体DNA D－loop全序列，和齐的结果一致.同时他认为还可以细分为B1和B2两个亚支.谢文美等［52］发现涪陵水牛mtDNA具有丰富的遗传多样性，并发现存在沼泽型水牛支系A和B.刘若余等［53］对30头温州水牛的研究也得到了与谢相似的结果.蔡欣等［54］的研究结果表明，水牛基因Cytb序列中碱基A和T的含量较高，中国水牛和沼泽型水牛具有较近的亲缘关系，也可能有2个或者2个以上的母系起源.张春梅［55］对29头德宏水牛的Cytb全序列的测序和分析，表明德宏水牛具有丰富的遗传多样性，德宏水牛可能起源于2个母系.李世平等［56］对18头海子水牛CytbZH基因全序列的分析也显示，海子水牛可能存在两种甚至更多不同的母系起源.这些多态性的研究结果在中国水牛的起源问题上是大致相同的.中国水牛分子育种研究已取得较大进展，获得了许多关于中国水牛分子遗传特征的信息，也发现了一些与生产性状有关联的功能基因和基因类型，为今后中国水牛的进一步研究奠定了一定的基础.但是，中国水牛分子育种研究目前还处于起步阶段，存在系统性不够、研究经费不足、群体的稳定性差等问题.随着分子生物学研究的不断深入，分子育种将在水牛的研究中得到广泛的应用，从而加快水牛的育种进程，大大提高水牛奶用和肉用性能，有望成为未来水牛新品种培育和品种改良的主要工具之一.【相关文献】［1］耿荣庆，王兰萍，冀德君，等.牛生长激素基因（BGH）编码区的遗传变异特征［J］.云南农业大学学报，2009，24（4）：494－496.［2］王锦.水牛产奶数量性状基因多态性研究［D］.南宁：广西大学，2008.［3］YuanJ，zhouJ，dengX，et al.Molecular cloning and single nucleotide polymorphism detection of buffalo DGTA1gene［J］.Biochem Genet，2007，45（7－8）：11－ 21.［4］Tantia M S，Vijh R K，Mishra B P，et al.DGAT1and ABGG2polymorphism in Indiancattle（Bosindicus）and buffalo（Bubalus bubalis）breeds［J］.BMC Vet 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D－loop区遗传多样性与母系起源［J］.中国牛业科学，2009，35（5）：1－5.［52］谢文美，苏锐，李明晖，等.涪陵水牛mtDNAD－loop区遗传多样性研究［J］.西北农业学报，2008，17（5）：56－60.［53］刘若余，张伟，金大，等.温州水牛线粒体DNAD－loop遗传多态性分析［J］.中国牛业科学，2007，33（1）：1－3.［54］蔡欣，陈宏，雷初朝，等.中国3个牛种cytb基因多态性及其系统发育研究［J］.西北农林科技大学学报，2007，35（2）：43－47.［55］张春梅，李瑞生，陈爱君，等.德宏水牛mtDNACytb基因多态性研究［J］.湖北农业科学，2009，48（9）：2065－2067.［56］李世平，常洪，马国龙，等.海子水牛Cytb基因序列分析［J］.安徽农业科学，2007，35（30）：9470－9471，9504.。
奶牛β-乳球蛋白研究进展
奶牛β-乳球蛋白研究进展葛继文;黄品;徐君;王兆;王强;杨帆;蔡亚非【期刊名称】《中国奶牛》【年(卷),期】2013(000)009【摘要】β-Lg as a particular whey protein in fresh milk (7％～12％) is secreted by mammary gland epithelium in wide variety of species such as cattle and other ruminants,and the function of the whey protein is not clear.Up to now,several genetic variants and their affect the composition,quality and milk yield are detected.Single nucleotide polymorphism (SNP) describes a single-base difference(transition,transversion mutation,insertion and deletion) in DNA sequences among individuals,and SNPs analysis are extensively applied in genetic studies of human disease,breeding animals and plants.Because of the association between the polymorphisms of the β-Lg (β-Lg,GenBank accession No:DQ489319) and m ilk production,β-Lg gene,as a candidate and biochemical markers gene,was used for meliorate the heredity diathesis of the herd and enhance the milk production.%β-乳球蛋白(β-Lg)是由乳腺上皮细胞合成分泌的一种特有乳清蛋白,是鲜奶中蛋白质的一种,占鲜奶蛋白质的7％～12％,是牛和其他反刍动物乳中乳清蛋白的重要组分,其功能目前尚不明确.研究已确定β-乳球蛋白在牛乳中存在多种遗传变构体,不同变构体对奶牛牛乳的组分、性质和产量有一定的影响.单核苷酸多态性(SNP,Single nucleotide polymorphism)主要是指基因组DNA某一特定核苷酸的改变(转换、颠换、插入或缺失)引起的点突变,使得群体之间和个体之间产生了差异,已被广泛应用于医学、遗传学、动植物育种等领域.利用β-乳球蛋白多态性与产奶性能在基因上的连锁关系,将乳蛋白基因作为生化标记应用到辅助育种中,可改进畜群的遗传素质,提高生产性能.【总页数】4页(P25-28)【作者】葛继文;黄品;徐君;王兆;王强;杨帆;蔡亚非【作者单位】芜湖卫岗乳业有限公司,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000;安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室,芜湖 241000【正文语种】中文【中图分类】S823.3【相关文献】1.大豆异黄酮对高产奶牛泌乳后期乳腺肥大细胞分泌肿瘤坏死因子-α和表面型免疫球蛋白A水平的影响 [J], 朱志宁;郝振荣;王明;蒋林树;郭玉琴2.壳聚糖对奶牛产奶性能、乳体细胞数及血清免疫球蛋白的影响 [J], 田丰;任海军;史彬林;闫素梅;赵鹏3.壳聚糖对奶牛产奶性能、乳体细胞数及血清免疫球蛋白的影响 [J], 田丰;任海军;史彬林;闫素梅;赵鹏4.奶牛酪蛋白和β-乳球蛋白基因多态及其对泌乳性状的影响 [J], 赖淑静;齐瑞利;袁陶燕;何俊;吴兵兵;傅衍;牛冬5.补充脂质对不同β-乳球蛋白显型奶牛的乳产量及乳汁组成的影响 [J], G．Bobe;兰欣怡（摘译）;卜登攀（校）因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牛乳β-乳球蛋白变异体检测方法研究进展
牛乳β-乳球蛋白变异体检测方法研究进展
王亚玲;贾舸;赵军英;乔为仓;张明辉;陈历俊
【期刊名称】《中国食品学报》
【年(卷),期】2024(24)3
【摘要】β-乳球蛋白(β-LG)是牛乳中重要的天然活性营养物质,也是牛乳中主要的过敏原之一。
β-乳球蛋白约为乳清蛋白总量的50%,是牛乳中主要的乳清蛋白,具有较强的热敏感性和致敏性,在优质乳品工业中起关键作用。
其不仅作为牛奶热处理强度的评估指标,还作为食品中牛乳过敏原的标志蛋白,有效识别和检测牛乳β-乳球蛋白非常重要。
已报道的牛乳β-乳球蛋白有13种变异体,其中A和B是牛乳β-LG的常见变异体,且含量最高。
根据不同的检测原理,文章简述近年来牛乳β-乳球蛋白变异体的三大类检测方法,总结电泳法、色谱法和免疫法的原理、优缺点及部分应用实例,重点介绍液相色谱法和毛细管电泳法两种定量方法,并展望牛乳β-乳球蛋白未来的发展方向。
【总页数】12页(P446-457)
【作者】王亚玲;贾舸;赵军英;乔为仓;张明辉;陈历俊
【作者单位】北京三元食品股份有限公司、国家母婴乳品健康工程技术研究中心、北京市乳品工程技术研究中心、母婴研究技术创新中心
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.牛乳过敏原β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立
2.利用β-乳球蛋白遗传变异体检测牦牛乳中的普通牛乳
3.降低牛乳中β-乳球蛋白致敏性方法的研究进展
4.牛乳中β-乳球蛋白检测方法的建立
5.牛乳过敏原β-乳球蛋白检测方法的研究进展
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凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定乳与乳制品中 β-乳球蛋白的含量
染色液的器皿中，染色 12 h。染色后的凝胶用脱 色也浸泡脱色，至凝胶背景无色为止。用光密度 仪对凝胶进行测定分析，根据光密度值计算 β-乳 球蛋白的含量。
受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过 程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。因 此，采用不连续系统，对相同样品，相同电流下， 在 5%、12%、15%以及 20%的分离胶上进行电泳， 对分离效果进行了比较，见图 1-图 4。
2.5 确定检出限 根据限量要求，对 0.2376 mg/mL 的标准样品
（较接近于空白样品）20 个平行样进行电泳，得到 标准偏差，由 LOD=3×SD 得到检出限。液态奶中 为 24 mg/100mL，奶粉、奶酪中为 240 mg/100g。 2.6 实际样品的测定
用 SDS -PAGE 测 定 β - 乳 球 蛋 白 的 标 准 溶
述，改良的考马斯亮蓝染色与传统考马斯亮染色 液，其测定结果表明 β-乳球蛋白的标准溶液与
相比，不仅使用低毒的有机试剂，缩短了脱色时 光密度值之间存在着较好的线性关系，相关系数
间，并且能达到与传统考马斯亮蓝染色的定量效 r 为 0.99，回归方程分别为 Y＝1.5452X-0.7139，
目前 β-乳球蛋白常用的检测方法有高效液 相色谱法[2-3]和电泳法[4-8]，与液相方法相比，电泳 法具有成本低、操作简单，耗时短，重复性高等特 点。
收稿日期：2008-10-22
1 材料与方法
1.1 材料与仪器 30%丙烯酰胺单体贮备液、1 mol/L Tris-HCl
缓 冲 液 ，pH 6.8、1.5 mol/L Tris -HCl 缓 冲 液 ，pH 8.8、10%过硫酸铵、10%SDS 溶液、N,N, N’,N’-四 甲基乙二胺（TEMED）溶液；样品缓冲液（4 mg 溴 酚蓝，1.6 mL 1 mol/L Tris-HCl 缓冲液，pH 6.8，4 mL SDS 溶液，1.2 mL β-巯基乙醇，100％甘油 2.2 mL，全部混合后用水稀释定容至 20 mL）；
反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白
色
谱
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反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的 !/ 乳白蛋白和 " / 乳球蛋白
李 * 慧， * 陈 * 敏， * 李 * 赫， * 罗永康， * 戴蕴青
! 第"期
李 ! 慧， 等： 反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的 ! ! 乳白蛋白和 " ! 乳球蛋白
#’ ) - ， 表明该法重现性良好。 # ! $" 回收率
・ "",・
终选择用于测定 ! ! 乳白 蛋 白 和 " ! 乳 球 蛋 白 的 流 动 相 及 梯 度 洗脱条件如 “"" #” 节所述。标准品和样品的分离结 果 分 别 见 图 " 和图 $ 。 ! ! 以 ! " # % $ 测定 ! ! 乳白蛋白 和 " ! 乳 球 蛋 白 最 小 检 出 限， 结果见表 $ 。由表 $ 还 可 看 出， 两组分在测定的浓度范围内 线性关系良好。
（ 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 $""".+ ） 关键词： 反相高效液相色谱 （ 45/6578 ） ； （ ! /)"39"):$01# ） ； （ " /)"39(;)(:$)1# ） ； 乳清蛋白 （ <2-& =%(9-1# ） ! / 乳白蛋白 " / 乳球蛋白 中图分类号： >&%. * * 文献标识码： ? * * 文章编号： $""" /.#$+ （ !""# ） "$ /"$$& /"! * * 栏目类别： 技术与应用
水牛乳中β-乳球蛋白的IgG结合表位的定位研究的开题报告
水牛乳中β-乳球蛋白的IgG结合表位的定位研究的开题报
告
一、背景与意义：
β-乳球蛋白是一种含有半硫键的囊泡蛋白质，主要存在于哺乳动物种的乳汁和血浆中。
水牛乳中β-乳球蛋白含量丰富，其含量比牛奶中的β-乳球蛋白高出数倍，因此
受到了广泛的关注。
β-乳球蛋白具有抗菌、抗病毒、抗氧化等生物学活性，对人类健
康有很好的保健作用。
研究水牛乳中的β-乳球蛋白，探究其结构与功能具有重要的理
论意义和应用价值。
二、研究内容：
本研究将采用重叠肽法和生物信息学方法，对水牛乳中β-乳球蛋白的IgG结合表位进行定位分析。
首先利用质谱技术分离和纯化水牛乳中的β-乳球蛋白，然后进行重
叠肽法分析其IgG结合表位。
同时，利用生物信息学方法构建β-乳球蛋白的三维结构，并预测其可能的IgG结合区域。
最后，对实验结果进行综合分析，归纳β-乳球蛋白的IgG结合表位的特点和定位。
三、预期结果：
通过本研究的分析，可以明确得到水牛乳中β-乳球蛋白的IgG结合表位定位，揭示其结构与功能之间的关系，为进一步研究水牛乳中β-乳球蛋白的生物学活性和应用
价值提供重要的理论指导。
四、研究意义：
水牛乳中β-乳球蛋白具有丰富的营养成分和生物学活性，在保健、医学等领域有广泛的应用前景。
研究水牛乳中β-乳球蛋白的IgG结合表位，有助于进一步探究其结
构与功能之间的关系，为其在医疗保健和食品加工领域的应用提供理论基础和技术支撑。
牛乳中主要蛋白过敏原研究现状
ａｅ ａｅ ，－ｌ ｔ ｌ ｕｉ １ Ｌ ） ｎ —ａｔｂ ｍ ｎ（ Ｌ ）ｎａｄｔ ｎ ｈ ｓａｃ ｒｓｅｔ ｆ Ｏ ’ ｍｌ ｒ ｃｓｉ ３ ａ ｏ ｏ ｌ ３ Ｇ ａ ｄ ｌ ａ ｕ ｉ 一 Ａ ． ｉｏ ， ｅ ｅｅ ｈ ｏｐ ｃ ｏ ＣＷ Ｓ ｉ ｎ ｃ ｇ ｂ ｎ（－ ｃｌ Ｉ ｄ ｉ ｔ ｒ ｒ ｐ ｋ
白蛋 白、 免疫 球蛋 白及乳铁蛋 白是次要过敏原 。 对牛乳 中的主要过敏 原的结构特征 、 表位 、 改性等 的研 究进行
介绍。
０ 酪蛋 白由 １９ 氨基 酸组成 ，每个分子 结合 【 。 一 ９个 ８ 磷酸根 ，结合位点 主要 集 中在肽链 的第 ４ ～ ９位 个 ３７ 置处 ， 这个部位经Байду номын сангаас酶解得到 的磷肽可结合 钙 、 、 、 铁 铜 锌等金属离子形成可溶性 ，促进金属离子 在体 内的吸
对 牛乳 蛋 白过敏 原 的研 究进 行 展 望 。
关键词 ： 牛乳过敏 ； 酪蛋 白； Ｂ一乳球蛋 白； 【 ０一乳 白蛋白 ； 表位 ； 改性
Ｐ ＲＯＧＲＥＳＳＲＥＶＩ ＥＷ ０Ｎ ＡＪ Ｍ ０Ｒ ＰＲＵ Ｅｌ ＡＬ ＲＧＥＮＳ０Ｆ Ｃ０Ｗ Ｌ ｌ ｌ ＬＥ ＭＩ Ｋ ＹＵＥ Ｘｉ ｑ ｎ ， Ｕ ａ ， ｏＣｈ ｎ — ｉｇ Ｗ Ｃｈ ｏ Ｇｕ ｅ
营 健 养康
食品研究与开发
第０ 第０ ２８ １期 ０年０ ２ １ ９ 月 卷
牛乳中主要蛋 白过敏原研究现状
岳喜庆 。 吴超 ， 郭展
（ 阳农业大学 食品学院 ， 沈 辽宁 沈阳 １０ ６ ） １ １ １
摘 要： 牛乳蛋 白过敏原的研究成为近几年 国 内外的研 究热点之 一。依据 有关牛乳 中过敏 原的研 究报道 ， 对牛乳 中 的主要过敏原酪蛋 白、 一 ｐ 乳球蛋 白（ — Ｇ） ｏ 乳 白蛋 白（ 一 Ａ） ｐＬ 及 【 一 仅 Ｌ 的结构特征 、 表位、 改性等的研究现状进行介绍 ， 并
牛乳清β-乳球蛋白过敏原非酶改性技术研究进展
牛乳清β-乳球蛋白过敏原非酶改性技术研究进展王红梅;张永忠【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2007(035)006【摘要】牛乳乳清蛋白质中的β-乳球蛋白(β-Lactoglobulin或β-LG)是婴儿牛乳过敏的主要过敏原.由于酶水解导致隐蔽于分子内部的抗原决定部位裸露,反而增强了其过敏性,并且产生影响风味的苦味肽.热处理、糖基化作用、乳酸发酵和脂肪酸结合等非酶改性技术可有效降低乳蛋白的过敏原性.热处理使蛋白质之间生成热诱导性聚合物,降低过敏性.通过糖基化作用产生糖基化终产物,掩盖抗原决定部位.乳酸菌发酵产生干酪素和蛋白酶,水解蛋白脱敏.硬脂酸与β-乳球蛋白结合以不同结合度结合,脱敏效果不同.相对来说,糖基化反应和乳酸发酵法的脱敏效果较好.为使β-乳球蛋白过敏原改性效果更好,可将两种或两种以上改性方法相结合.【总页数】6页(P48-53)【作者】王红梅;张永忠【作者单位】东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030;黑龙江省教育学院职教部,哈尔滨,150080;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】TQ936.21+【相关文献】1.消除乳清蛋白中β-乳球蛋白致敏性的研究进展 [J], 李永涛;张兰威;孔保华2.牦牛乳清中α-乳白蛋白与β-乳球蛋白的热聚合反应 [J], 王立枫;马莺;李琳;崔杰3.聚合物/磷酸盐双水相分离乳清分离蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白条件的优化[J], 张鹤;姜彬;冯志彪;屈玉霄;李璇4.高效液相色谱法测定乳清蛋白中的α乳白蛋白和β乳球蛋白及其改性降敏 [J], 赵倩如;朱丽英;赵权宇;江凌5.超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定乳清蛋白粉中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白 [J], 杜娟;郑云鹏;董洪涛;张凤霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牛乳β-乳球蛋白热稳定与免疫原性关系的光谱学研究
牛乳β-乳球蛋白热稳定与免疫原性关系的光谱学研究吴序栎;朱倩倩;成小娟;徐宏;刘志刚;吴晖【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2011(031)008【摘要】利用圆二色性光谱和荧光光谱对牛乳β-乳球蛋白的热变性过程进行光谱学分析,得到其热变性过程的光谱学特征；结合生物信息学方法,进一步分析了热变性过程中牛乳β-乳球蛋白构象变化的特点,探讨了热变性使牛乳β-乳球蛋白蛋白构象变化导致其免疫原性发生变化的关系,建立了一种研究过敏原蛋白热变性与免疫原性关系的光谱实验方法,为探讨热变性改变食物中主要过敏原的免疫原性提供了理论依据.%The thermal denaturation of βactoglobulin of milk was investigated by using DSC, circular dichroism spectra, and fluorescence spectra systematically. And its corresponding immunogenicity was tested with ELISA experiments. In addition, bioinformatics methods were also used to explain the spectral characteristics and its corresponding immunogenic change, analyze the conformational changes of the protein during thermal denaturation, and discuss the relationship between conformational change of βactoglobulin caused by heat and immunogenic change. Results from this study should be useful to the establishment of a spectral method examining the extent of thermal denaturation of the food allergen, and be helpful to the understanding of the mechanism of immunogenic change of food allergen treated by heat【总页数】5页(P2205-2209)【作者】吴序栎;朱倩倩;成小娟;徐宏;刘志刚;吴晖【作者单位】华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510642;深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳 518060;深圳大学化学与化工学院,广东深圳518060;深圳大学化学与化工学院,广东深圳518060;深圳大学化学与化工学院,广东深圳518060;深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳 518060;华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】TQ936.2【相关文献】1.婴幼儿配方奶粉中牛乳β-乳球蛋白的荧光偏振免疫分析方法研究 [J], 龙再浩;孙运;马中春;李冰2.婴幼儿配方奶粉中牛乳β-乳球蛋白的荧光偏振免疫分析方法研究 [J], 龙再浩;孙运;马中春;李冰;3.荧光光谱法和分子对接研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与牛乳β-乳球蛋白的相互作用 [J], 金建昌;王石磊;刘彩琴;王楠;杜琪珍4.牛乳成分对乳热稳定性影响的研究概况 [J], 封家旺;金红岩;顾庆云;李封赛;达娃卓玛;李鼎5.降低牛乳中β-乳球蛋白致敏性方法的研究进展 [J], 杨晶晶;赵树静;刘甜甜;李艳艳;李红娟;李洪波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
食物过敏原表位定位技术的研究进展
食物过敏原表位定位技术的研究进展武涌;李欣;陈红兵;高金燕【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)023【摘要】表位是过敏原的物质基础,表位定位技术是过敏原表位研究的丁具,包括表位定位和表位预测两种.新的表位定位技术主要包括噬菌体展示技术、质谱技术、表面等离子共振技术、蛋白芯片技术、核磁共振技术.相比于传统的过敏原表位定位技术,新的表位定位技术在灵敏度、准确性和快速等方面具有优势.表位预测是运用生物信息学方法对过敏原表位进行预测.本文将对新的表位定位技术在表位定位中的应用、表位预测以及相关应用进展进行阐述.【总页数】5页(P406-410)【作者】武涌;李欣;陈红兵;高金燕【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;南昌大学生命科学与食品工程学院食品系,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌,330047;南昌大学生命科学与食品工程学院食品系,江西南昌,330047【正文语种】中文【中图分类】TS201.6【相关文献】1.基于液相色谱-质谱联用技术检测食物过敏原研究进展 [J], 熊丽姬;佟平;肖娜;陈红兵2.非热加工技术消减食物过敏原研究进展 [J], 郭颖希;王满生;成军虎;韩忠3.食物过敏原检测技术研究进展 [J], 王雅清;倪皓洁;李华韬;潘童;杨仁迪;傅玲琳;王彦波4.食物致敏原表位定位技术的研究进展 [J], 胡永芯;李欣;程剑锋;马鑫;孟轩夷;陈红兵;武涌5.辐照技术消减食物过敏原致敏性研究进展 [J], 罗春萍;冯娟;项缨;谢庭辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
-乳球蛋白过敏原线性 表位串联体的分子设计
牛乳β-乳球蛋白过敏原线性表位串联体的分子设计韩 婷1,2，高金燕3,*，李 欣1,2，陈红兵1,2(1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室， 江西 南昌 330047；2.南昌大学中德联合研究院， 江西 南昌 330047；3.南昌大学食品系， 江西 南昌 330047)摘 要：本实验以牛乳β-乳球蛋白中与人血清IgE 结合的7个B 细胞表位(B 1、B 2、B 3、B 4、B 5、B 6和B 7)和1个T 细胞表位(T)为研究对象，旨在使设计出的牛乳β-乳球蛋白多表位串联体分子中各表位能够保留独立的抗原性。
按照表位串联体设计原则，B 细胞表位之间的连接序列为甘氨酸(G)，T 细胞与B 细胞表位之间的连接序列为两个赖氨酸(KK)。
通过生物信息学的研究，借助DNAStar 软件和SOMPA 网络服务器，对这8个表位连接顺序进行优化组合后，设计出的串联体分子组合结构为：T-K-K-B 1-G-B 6-G-B 5-G-B 3-G-B 7-G-B 2-G-B 4，其氨基酸序列是：KIPAVFKIDALNENKVLVLDTKKLIVTQTMKGEVDDEALEKFDKALKALPGKTKIPAVFKIDAGKPTPEGDLEILLQ KGKALPMHIRLSFNGLLDAQSAPLRVYVEELKPGAQKKIIAEKTKI 。
经过预测，该串联体中各表位均呈现出了抗原性，且没有新的表位产生。
研究结果表明，分子设计正确，研究方法值得同类工作借鉴。
关键词：β-乳球蛋白；表位串联体；表位预测；食物过敏Molecular Design of A Tandem of Multiple Epitopes of β-lactoglobulin Allergen from Cow MilkHAN Ting 1,2，GAO Jin-yan 3,*，LI Xin 1,2，CHEN Hong-bing 1,2(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China ；2.Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China ；3.Department of Food Science, Nanchang University, Nanchang 330047, China)Abstract: Seven B-cell IgE-binding epitopes (B 1, B 2, B 3, B 4, B 5, B 6, B 7) and a T-cell epitope (T) in β-lactoglobulin from cow milk was used to design a tandem of multiple epitopes of the β-lactoglobulin from cow milk, in which the epitopes remain their independent antigenicity. According to the epitope tandem design principle, the linker between B cell epitopes is a glycine(G) while it is a di-lysine(KK) between T cell epitope and B cell epitope. The connection order of the eight epitopes was optimized through bioinformatics methods using the software of DNAStar and the network server-SOMPA.The optimized tandem molecular is: T-K-K-B 1-G-B 6-G-B 5-G-B 3-G-B 7-G-B 2-G-B4. And its amino acid sequence is:KIPAVFKIDALNENKVLVLDTKKLIVTQTMKGEVDDEALEKFDKALKALPGKTKIPAVFKIDAGKPTPEGDLEILLQ KGKALPMHIRLSFNGLLDAQSAPLRVYVEELKPGAQKKIIAEKTKI. The results showed that the molecular designation is correct, and the study methods are worth using reference to similar studies.Key words: β-lactoglobulin ；tandem ；epitope prediction ；food allergy中图分类号：TS201.6 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)11-0465-04收稿日期：2008-05-28基金项目：国家自然科学基金项目(30560096；30860220) ；教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目(IRT0540)作者简介：韩婷(1986-)，女，硕士研究生，研究方向为食品质量安全。
乳品中常见过敏原特征多肽的筛查及制备应用
乳品中常见过敏原特征多肽的筛查及制备应用
雷雯;徐增益;陈燕秋
【期刊名称】《肥料与健康》
【年(卷),期】2022(49)4
【摘要】β-乳球蛋白是乳品中主要的过敏原物质,乳品过敏主要见于婴幼儿,严重时可能出现生命危险,是影响人体健康安全的主要因素之一。
利用蛋白质组学数据库UniProt、酶解模拟软件Skyline、试验验证,对过敏原β-乳球蛋白的特征多肽进行筛查,筛选出1条稳定性强、抗干扰性能优越的多肽IDALNENK,并制备合成了
^(13)C、^(15)N标记的IDAL*NENK(^(13)C_(6),^(15)N-Leu)作为β-乳球蛋白的内标物。
采用同位素稀释质谱法检测乳品中过敏原时将上述特征多肽作为内标物,可以准确定量乳品中β-乳球蛋白的含量,且灵敏度较高。
【总页数】5页(P69-73)
【作者】雷雯;徐增益;陈燕秋
【作者单位】上海化工研究院有限公司/上海市稳定同位素检测及应用研发专业技术服务平台
【正文语种】中文
【中图分类】O657.63
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1.微阵列ELFA和IBT 2种过敏原筛查方法临床应用评价
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水牛乳β-酪蛋白基因多态性与消化性能及抗氧化性能的关联研究
水牛乳β-酪蛋白基因多态性与消化性能及抗氧化性能的关联
研究
赵烜影;郭鸰;任大喜;李楠;李玲;刘振民
【期刊名称】《中国奶牛》
【年(卷),期】2022()1
【摘要】本研究以水牛乳β-酪蛋白(β-CN)基因多态性分析结果为依据,从水牛乳中分离并纯化出具有活性的β-酪蛋白亚型。
采用体外消化模型分析其在胃肠道中的消化性能;根据水解液的抗氧化活性来分析生物活性肽的释放。
高效液相色谱法(HPLC)结果显示,水牛乳中β-CN有A和B两种等位基因。
消化性能结果显示A 等位基因更利于β-酪蛋白在肠道的消化,抗氧化性结果显示A等位基因的1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)清除能力要优于B等位基因,但在·OH自由基清除能力和还原性能力上B等位基因更有优势。
β-CN基因多态性与体外消化功能和抗氧化活性的不同密切相关。
这些结果可为精准设计水牛乳功能性乳制品提供理论基础。
【总页数】5页(P12-16)
【作者】赵烜影;郭鸰;任大喜;李楠;李玲;刘振民
【作者单位】乳业生物技术国家重点实验室;东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室;浙江大学动物科学学院奶业科学研究所;中国农业科学院广西水牛研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S823.3
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收稿日期：2007-07-27 * 通讯作者基金项目：国家自然科学基金项目(30560096)；教育部长江学者和创新团队发展计划项目(IRT0540)作者简介：李欣(1980-)，女，博士研究生，研究方向为食品生物技术。
水牛奶中β-乳球蛋白过敏原表位定位的初步研究李 欣1,2，高金燕3， 陈红兵1,2,*(1.南昌大学 食品科学教育部重点实验室，江西 南昌 330047；2.南昌大学中德联合研究院，江西 南昌 330047；3.南昌大学食品系，江西 南昌 330047)摘 要：为绘制水牛奶中β-乳球蛋白的过敏原表位，本实验以兔抗水牛乳β-乳球蛋白的抗体IgG 为固相筛选分子，免疫筛选噬菌体随机七肽库，采用间接ELISA 和竞争抑制ELISA 鉴定阳性克隆。
经四轮富集后，得到16个阳性克隆子，进行测序，得到5个不同的肽段。
与已知的表位比对，初步确定了六个I g G 识别表位，分别为：第41～51位(VYVEELKPIPE)、第51～64位(EGDLEILLQKWENDE)、第81～96位(VFKIDALNE NKVLVLD)、第141～56位(KALPMHIRLSFNPTQL)、第127～136位 (LNENKVLVLD)和第145～159 位(MHIRLSFNPTQLEEQ)。
关键词：水牛乳；β-乳球蛋白；筛选；表位定位；食物过敏Primary Epitope Mapping of β-Lactoglobulin from Buffalo MilkLI Xin 1,2，GAO Jin-yan 3，CHEN Hong-bing 1,2,*(1.Key Laboratory of Food Science, Ministry of Education, Nanchang University, Nanchang 330047, China；2.Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China；3.Department of Food Science, Nanchang University, Nanchang 330047, China)Abstract ：To map the mimotopes of β-lactoglobulin from water buffalo milk, the specific rabbit antibody against buffalo β-lactoglobulin were used to pan the specific phage from a heptapeptide phage display library. The positive clones were identified by indirect ELISA and competitive ELISA. After fourth round enrichment , sixteen positive clones were obtained and five different clones peptide sequence were deduced by DNA sequencing. Compared with the known IgG epitopes of β-lactoglobulin,six epitopes have been identified, which are located at fragment 41～51(VYVEELKPIPE), fragment 51～64(EGDLEILLQKWENDE),fragment81～96(VFKIDALNE NKVLVLD), fragment 141～156(KALPMHIRLSFNPTQL), fragment127～136(LNENKVLVLD) and fragment 145～159(MHIRLSFNPTQLEEQ respectively.Key words ：buffalo milk ；β-lactoglobulin ；panning ；epitope mapping ；food allergy中图分类号： TS201.6 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)10-0360-04牛乳β-乳球蛋白是乳清中的一种主要蛋白质，由162个氨基酸残基组成，分子量约为18.4kDa，是牛乳中的主要过敏原之一。
β-乳球蛋白有五个异构体分别为：A 、B 、C 、D 和D r ，其中A 和B 比较常见。
而水牛乳中也含有丰富的β-乳球蛋白，两者除第1和162位的氨基酸不同，其余氨基酸序列一致。
水牛乳的β-乳球蛋白只有一个突变体，根据泳动速度和离心情况，与B 型相似。
有研究表明，两者的存在着免疫交叉反应[2]。
因此，水牛乳中的β-乳球蛋白的过敏问题也值得研究。
本实验采用随机肽库筛选水牛乳中β-乳球蛋白的模拟表位,与已知序列比对，对其IgG 结合表位进行初步定位，可以初步阐明水牛乳中β-乳球蛋白过敏原的物质基础。
1材料与方法1.1材料噬菌体7肽库(Ph.D-7.TM Phage Display Peptide Library) New England Biolabs公司，库浓度为6.00×1012pfu/ml，受体菌为E.coli 2738，-96g III自动测序引物。
主要试剂：H R P 抗M 13单抗(1:5000稀释工作浓度) Amersham Biosciences公司；邻苯二胺 Sigma公司，溶于柠檬酸和磷酸氢二钠的底物缓冲液，底物浓度0.4mg/ml。
离心机，Bio-Rad 凝胶呈像仪，Bio-Rad M680自动读板仪。
抗水牛乳β-乳球蛋白兔IgG，本实验室采用免疫亲和层析方法制备，浓度为5.8mg/ml，纯度达电泳纯。
水牛乳β-乳球蛋白是本实验室通过离子交换层析和凝胶层析方法制备，其浓度为43mg/ml，纯度高于商品化的β-乳球蛋白，即大于90%。
1.2方法1.2.1噬菌体随机肽库的筛选 将纯化的多克隆抗体IgG用包被缓冲液(0.1mol/L NaHCO3，pH8.6)稀释至10μg/ml，每孔100μl包被96孔酶标板,4℃轻微震荡，孵育过夜。
弃去包被液，每孔加满封阻液(0.1mol/L NaHCO3，5mg/ml BSA，0.02%的NaN3)，4℃封阻2h；用TBST(50mmol/L Tris-HCl，150mmol/L NaCl，0.1% Tween-20)快速洗板六次，每孔加入2×1011个噬菌体，室温轻摇震荡60min；弃去未结合噬菌体液，用T B S T洗板10次，每孔加入甘氨酸洗脱液(0.2mol/L pH2.2 Glycine-HCl，1mg/ml BSA) 100μl，室温轻摇10m i n，洗脱特异性结合的噬菌体，收集洗脱液于微量离心管，加入中和缓冲液；留取5μl用于滴度测定，剩余洗脱物进行扩增，用于下一轮筛选。
同样的方法进行第2、3、4轮筛选，洗脱液中的Tween-20浓度依次为0.25%、0.5%、0.5%。
1.2.2待测随机克隆的挑选E.coli2738过夜培养物以1:100进行稀释加到试管中,第3和4轮的平板上挑取30个单菌落加到试管中，37℃摇培养4.5～5h培养物转入微量离心管中，离心30s。
上清转入另一管中，再离心。
用移液器将80%的上清转入新鲜离心管，此即为扩增噬菌体贮液，进行E L I S A 检测及D N A序列测定。
1.2.3噬菌体滴度的测定 用L B培养基对洗脱液进行倍比稀释，分别取各稀释度的噬菌体加入到制备好的对数生长期的E.coli 2738菌液中，室温温育后加入到上层琼脂中混匀，均匀铺于平皿上，培养过夜。
记录平皿上蓝斑个数。
噬菌体滴度=平皿中蓝斑个数×稀释倍数，即每10μl的噬菌体形成单位。
1.2.4间接ELISA鉴定阳性克隆 用包被缓冲液稀释抗体(100μg/ml)，每孔100μl包被96孔酶标板，4℃过夜。
弃包被液，每孔加满封阻液，4℃封阻2h。
0.5%T B S T洗板3次，每孔一个克隆的上清液，37℃ 2h，洗板三次，加入1:5000稀释的HRP conjugate anti-M13抗体100μl/孔，室温孵育1h，洗板后加100μl/孔OPD底物显色液，室温作用10～20min 显色，2mol/L H2SO4终止反应，490nm处读数[3]。
1.2.5间接抑制ELISA方法用包被缓冲液稀释抗体(100μg/ml)，每孔100μl包被96孔酶标板，4℃过夜。
弃包被液，每孔加满封阻液，4℃封阻2h。
0.5%T B S T洗板三次，每孔加50μl扩增的噬菌体和50μl 1mg/ml水牛乳β-乳球蛋白，37℃ 2h，洗板三次，加入1:5000稀释的HRP conjugate anti-M13 抗体100μl/孔，室温孵育1h，洗板后加100μl/孔OPD底物显色液，室温作用10～20min显色，2mol/L H2SO4终止反应，490nm处读数。
1.2.6D N A提取和序列测定从1.2.3中挑到的噬菌斑进行扩增，得到的噬菌体上清用 PEG/NaCl进行沉淀。
沉淀物重悬于100μl碘化物缓冲液中，加入250μl乙醇。
室温温育10m i n。
离心10m i n，弃上清；用70%的乙醇洗沉淀，短暂真空干燥。
沉淀重悬于30μl TE[10mmol/L Tris-HCl (pH8.0)，1m m o l/L E D T A]中，琼脂糖凝胶电泳鉴定。
D N A序列的测定是自动双脱氧方法，由上海生工完成。
公司提供的自动测序引物：-96 III 5'-OH CCC TCA TAG TTA GCG TAA CG-3'。
2结果与分析2.1亲和淘选结果从表1可知，第四轮筛选后的噬菌体产出率比第一轮高1000倍，说明经过四轮的筛选可以有效富集特异性噬菌体。
2.2间接ELISA和间接抑制ELISA进行阳性克隆子鉴定按1.2.2步骤，从第三轮和第四轮分别挑选的30个克隆子，分别标为1～30号。
将收集上清进行间接E L I S A，测定其吸光值，结果如图1和2所示。
从图1和2分别筛选14和2个效价较高的克隆，其中第三轮的两个克隆分别标为6(3)和28(3)。
将这16个克隆子进行扩增，再通过间接E L I S A和竞争抑制E L I S A，测定其吸光值，结果如图3和4所示。
可知所得到的16个克隆子均被抑制，被确定为阳性。
2.3测序及表位初步定位结果D N A测序结果表明，有5个不同的核苷酸序列，将其分别编号为I、I I、I I I、I V、V，对应的氨基酸表1 亲和淘选噬菌体随机肽库的回收率Table 1 Recovery of washed phages by biopanning淘选轮数投入量(pfu)产出量(pfu)回收率12×10113×104 1.5×10－7 22×10112×105 1.0×10－6 32×10116×106 3.0×10－5 42×10112×107 1.0×10－4序列如表2所示。