医学检验本科毕业论文

医学检验本科毕业论

文

Revised on November 25, 2020

毕业论文

题目乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证年级2011级层次专科

专业临床医学班级一班

姓名学号

指导教师职称

2014年5月6日

辽宁医学院继续教育学院制

目录

摘要

关键词

英文

致谢

附录

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证

摘要

目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg

标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，ml 3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=，准确度%，ml的RSD为%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应<15%的要求，检测限LOD为ml，

低浓度样品（

关键词

乙肝表面抗原 ELISA 定量分析方法学验证

The reification of the HBsAg ELISA quantitative methodology

Abstract

Object: to verify the quantitative methodology of Fuzhou blueprint biological engineering company to make sure whether it ca be used to the analysis of Clinical Sample. Methods: ELISA quantitative methodology , make an Application of the standard HBsAg kit from the concentration of 8 ng/ml do 2 times diluted six concentration gradient to constitute a standard curve, testing With 6, 3, ng/ml 3 a concentration gradient 5 accurately precise and detection .Results: standard curve ,R2=, the accuracy of RSD of m is %，the RSD that cannot meet the demand of ng/ml basic level is less than <15% in common. The LOD is ml, the testing of Low concentration samples （

Key words

HBsAg Quantitative analysis Verification Methodology.

前言

乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。

1.材料与方法

试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。

仪器

酶标仪：Bio-Rad 680；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。

方法

1.3.1．溶液配置

1×PBS缓冲液的配置：称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。

标准品的配置：原始标准品浓度为8 ng/ml。。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well,共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进行稀释。

质控品的配置：50ul/well, 共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP 管，分别标记为C1，C2，C3，按照下表稀释方案进行稀释。

1.3.2．铺板方案取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按照下表铺板方案进行铺板在相应孔中依次加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul。空白对照加入1×PBS缓冲液。

1.3.3．加样步骤

加入酶标抗体，50 ul/well，震荡。37℃电热恒温培养箱温育60min，取出后洗板4次，加入A、B液, 50 ul/ well，37℃电热恒温培养箱温育15 min。加入终止液，50 ul/ well。酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开Microplate Manager 软件，选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。

2.结果

标准曲线与线性范围