药理实验方法学重点
【源版】中药药理实验方法学
随机号（备用）： 58 24 82 03 47 58/ 6 余数为4，即A组第4个动物（14号）编入B组。
根据余数分组鼠号： A组： 2 4 5 16 17 B组： 1 12 13 20 14 C组： 7 8 10 11 15 18 19 D组： 3 6 9
随机号（备用）： 58 24 82 03 47 24/7余数为3，即C组第3个动物（10号）编入
（3）分层随机
• 先将需严格控制的主要因素，如性别、体 重等分为不同类别，或层次；在每一类别 或层次中分别随机分成一定组。
• 将每一类别或层次随机分成的组,组次相同 的分别合并。
（三）、 重复原则
目的：验证在类似的条件是否可获得结果的 重现以及结果的变异情况 。
要点： A.确定适当的样本数。 B.各组动物数目尽量相同。 按动物类型确定样本数： （1）小动物：计量≥10例; 计数≥20-30例 （2）中等动物：计量≥8例; 计数≥20例 （3）大动物：5-6≥例
二、实验对象
(一)、受试动物
1、按要求选择不同级别符合医学实验标准的动物
一级：普通动物（亦称常规动物或无疾病的动物）；
二级：清洁动物（饲养在温度恒定，普通设施中的动 物，饲料、垫料，用具均经过高压消毒）；
三级：无特殊病原体动物（specific-pathogen free , 简称SPF动物）；在清洁级基础上还需不 带干扰实验的微生物，在隔离室或层流室饲养 。
药理实验实验方法学
第二讲 中药药理研究的基本知识（2） 第三节 实验设计
主要内容
一、基本原则 二、实验对象 三、效应指标 四、剂量设计 五、实验数据的整理
一 基本原则
• 对照原则 • 随机原则 • 重复原则
（一）、对照原则
药理实验方法学
药理实验方法学药理学是研究药物在生物体内作用机理和药效学的科学。
药理实验方法学是药理学的基础，是药理学实验研究的方法和技术的总称。
药理实验方法学的研究对于揭示药物的作用机制、药效学、毒理学等具有重要意义。
下面将介绍一些常见的药理实验方法学。
首先，药理学实验的基本方法之一是体外实验方法。
体外实验是指在体外环境中进行的实验，常用的体外实验方法包括离体器官实验、细胞培养实验等。
离体器官实验是将动物的器官取出后放置在适当的培养液中进行实验，通过观察器官的生理功能变化来研究药物的作用机制。
细胞培养实验是将动物组织中的细胞进行离体培养，然后进行药物的作用研究。
体外实验方法可以减少动物的使用，同时也可以更好地控制实验条件，是药理学研究中常用的方法之一。
其次，药理学实验的另一种方法是体内实验方法。
体内实验是指在活体动物体内进行的实验，常用的体内实验方法包括动物实验、药物代谢实验等。
动物实验是将药物通过不同的给药途径给予实验动物，然后观察动物的生理、病理变化，从而研究药物的药效学和毒理学。
药物代谢实验是研究药物在体内的代谢过程，通过检测药物及其代谢产物在体内的浓度变化来研究药物的代谢途径和代谢动力学。
体内实验方法可以更好地模拟药物在生物体内的作用过程，是药理学研究中不可或缺的方法。
此外，药理学实验还可以采用计算机辅助实验方法。
随着计算机技术的发展，计算机辅助实验方法在药理学研究中得到了广泛应用。
计算机辅助实验方法包括药物分子模拟、药效动力学模拟等。
药物分子模拟是利用计算机对药物分子进行模拟，从而研究药物与受体的结合方式和作用机制。
药效动力学模拟是通过建立药物在体内的动力学模型，模拟药物在体内的代谢和排泄过程。
计算机辅助实验方法可以更好地理解药物的作用机制和药效学特性，为药物研发提供重要的参考。
总之，药理实验方法学是药理学研究的基础，不同的实验方法可以相互补充，共同揭示药物的作用机制和药效学特性。
随着科学技术的不断发展，药理实验方法学也在不断创新和完善，为药物研发和临床应用提供了有力支持。
药理学实验方法包括
药理学实验方法包括
1、体外实验：主要是在体外模拟生物系统的实验，用于研究药物的药理作用机制，
如电聚焦法、半稳定法、趋式滤液法、吸附氯化钾法、血浆药代动力学等。
2、动物实验：通过运用实验动物，研究药物的药理作用、药效学性质，帮助有效的
选择和用药，从而推动药物研发的发展。
3、临床实验：最重要的药理学研究方法，是对导致药物最终出现药效作用的机制和
动力学等进行研究。
通过临床研究，一方面可以评价药物的作用本质，另一方面也可以研
究其作用剂量，并可以用于起草药物的作用规律，从而可以指导有效的用药。
4、免疫学方法：新药研究中常用的药理学实验方法，用于评价药物分子对免疫反应，即向某种特定抗原的免疫反应。
5、微量元素分析：是研究药物的一种实验方法，用于研究药物的化学性质，研究药
物的释放、吸收、转化、排出和代谢谱等。
6、分子生物学方法：是一种新兴的药理学方法，用于研究药物对蛋白质、基因和细
胞内信号传导机制的影响。
7、微生物药理学实验：是研究药物抗病毒、抗菌和抗原过程的一种实验方法，旨在
该药物是否具有抗菌活性，该药物对微生物种群的影响，其有效剂量等。
7中药药理实验方法学
•
取血方法： 取血方法：
小鼠、大鼠---①断尾、 眼底（内眦球后静脉丛， 小鼠、大鼠---①断尾、②眼底（内眦球后静脉丛， --小鼠可取0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc)、 断头、 小鼠可取0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc)、③断头、颈 0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc) 动脉取血。 动脉取血。 兔--①耳缘静脉，②心脏，③股动脉 --①耳缘静脉， 心脏， 犬--①后肢外侧小隐静脉，②前肢背侧皮下头静脉， --①后肢外侧小隐静脉， 前肢背侧皮下头静脉， ③耳缘静脉 豚鼠--①耳缘切割， 心脏穿刺。 豚鼠--①耳缘切割，②心脏穿刺。 --
实验动物分类： 实验动物分类： 按种系分三种情况 按遗传学控制方法分为4 A、按遗传学控制方法分为4类：近交系 动物、突交系动物、F1杂种动物 杂种动物、 动物、突交系动物、F1杂种动物、封闭 群动物。 群动物。 未经遗传学控制的杂种动物。 B、未经遗传学控制的杂种动物。 按微生物学控制方法分5 C、按微生物学控制方法分5类：无菌动 悉生动物、无特殊病原体动物、 物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁 动物、普通动物。 动物、普通动物。
编号：标记常用苦味酸（3%~5%）、中性品 标记常用苦味酸（3%~5%）、 ）、中性品
红（0。5%）、硝酸银（2%）；方法见书，较 5%）、硝酸银（2%）；方法见书， ）、硝酸银 ）；方法见书 大的动物如犬、猫等， 大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈 部或将特制的铝牌固定在耳壳上。 部或将特制的铝牌固定在耳壳上。
•
我国将实验动物分为四级：
一级动物：普通动物（CV）---普通自然 一级动物：普通动物（CV）---普通自然 环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和 环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和 。（ 一般实验用） 一般实验用） 二级动物：清洁动物（CL）---用于一般 二级动物：清洁动物（CL）---用于一般 动物实验，除一级标准外， 动物实验，除一级标准外，还需要不带有动 物传染病病原体。 物传染病病原体。
中药药理实验方法学
中药药理实验方法学
中药药理实验方法学是研究中药作用药理机制的重要科学手段。
近些年来，随着生物医学技术飞速发展，中药药理学也得到了明显的进步，它已经成为中医药广泛应用的重要支持。
中药药理学的实验方法学涵盖了实验室动物模型、毒理学数据的解释、抗病毒活性的分析以及药物的有效成分的发现和鉴定等实验手段。
以实验动物模型为例，实验中需要使用对应的动物模型、试验方法和实验条件来验证药物是否有安全性和某种特异性的活性，或者是否有药物动力学、药代动力学等药理学数据。
实验动物模型一般包括大鼠、小鼠、大白鼠、鸭子等动物，根据药物疗效特点和实验目的，可以采用多种动物模型，进行分析、比较和研究。
毒理学数据的解释是实验的重点，它可以根据实验结果提出药物的剂量效应关系，并从短期和长期的角度研究药物的毒理活性，评价它是否有无毒性和有益作用。
抗病毒活性的分析也是实验中重要和必须的部分，它尤其适用于中药药理学研究，它可以通过免疫细胞杂交等实验手段，分析药物的抗病毒活性、视网膜保护剂作用等，为临床医疗提供实质性的依据。
此外，以中药药物鉴定分离和定量测定为基础的药理学研究，可以精准把握药物的活性成分，从而指导其合理用药。
这在实验中也需要进行调查研究。
总之，中药药理实验方法学是实现理解中药作用机理，为临床应用提供科学依据的重要工具。
多种实验手段结合起来，有助于深入研究中药药理特性、解析药物动力学和药物有效成分等问题。
它为临床医疗应用提供了支持，增加了对中药药效研究的是理解，为临床新药的研制和疾病的防治提供了重要的科学保障。
药理学实验方法
第一章药理学实验方法第一节分子生物学实验方法与技术分子生物技术在药理学实验中运用较为普遍，包括核酸分子探针的标志、核酸分子杂交、多聚酶链反响、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因植物、人类基因治疗等。
现将更为常用的技术引见如下：一、核酸分子探针的标志标志核酸分子探针〔nucleic acid probe〕是停止核杂交的基础，依据核酸分子探针的来源及性质停止选择，选择的基本原那么是具有高度的特异性，探针选择直接影响杂交结果的剖析。
依据检测对象和目的不同，，可选择不同的探针种类及标志方法。
㈠探针种类1．基因组DNA探针是克隆化的各种基因片断，也是最常用的核酸探针，探针应尽能够选用基因编码〔外显子〕，防止运用内含子及其它非编码序列。
2．cDNA探针与mRNA互补的DNA链称cDNA，是一种较为理想的核酸探针，特异性较高。
3．RNA探针RNA与RNA或DNA杂交体的探针动摇性，特异性高。
4．寡核苷酸探针人工分解寡核苷酸片段做探针，可依据需求分解相应序列。
㈡标志物常用的探针标志物有两类：放射性同位素和非放射性同位素。
标志物的检测具有高度灵敏性和特异性。
标志和探针结合不影响杂交的特异性和动摇性。
其中放射性同位素是运用最多的探针标志物，但易形成放射性污染，少数同位素的半衰期短，不能临时寄存。
常用的放射性同位素有32P¸3P¸35S，有时也用14C,125I或131I。
二、核酸分子杂交〔nucleic acid hybridiazation 〕是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下，按碱基互补配对原那么构成异质双链的进程。
核酸分子杂交是分子生物学范围运用最普遍的技术，灵敏度高、特异性强，主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。
三、聚合酶链反响〔polymerase chain reaction，PCR〕是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。
药理学实验的基本知识和基本技术
药理学实验的基本知识和基本技术一、实验动物的种类选择药理学实验常用的动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫、犬、蛙、蟾蜍等。
常根据实验目的和要求选用不同的实验动物。
由于不同的动物具有不同的特点，故所选用的动物应能较好地反映试验药物的选择性作用，并符合节约的原则。
小白鼠：系实验室最常用的一种动物。
易于大量繁殖，且价廉，适用需要大量动物的实验，如药物筛选、半数致死量测定、药物效价比较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。
大白鼠：与小白鼠相似。
一些在小白鼠身上不便进行的实验可选用大白鼠，如药物抗炎作用的实验常选用大白鼠踝关节制备关节炎的模型。
此外也可用大白鼠直接记录血压、作胆管插管，或用大白鼠观察药物的亚急性或慢性毒性。
大白鼠的血压和人相近，且稳定，现常用于抗高血压药物实验。
豚鼠：是实验室常用动物之一。
对组织胺很敏感，容易致敏，常用于平喘药和抗组胺药的实验。
对结核菌亦敏感，故也用于抗结核药的研究。
此外还用于离体心脏及平滑肌实验，其乳头肌和心房常用于电生理特性及心肌细胞动作电位实验，研究抗心律失常药物的机理。
家兔：温顺、易饲养，常用于观察药物对心脏、呼吸的影响及农药中毒和解救的实验。
亦用于研究药物对中枢神经系统的作用、体温实验、热原检查及避孕药实验。
猫：与家兔比较，猫对外科手术的耐受性强，血压较稳定，故常用于血压实验。
但价格较贵。
此外，猫也常用于心血管药物及中枢神经系统药物的研究。
犬：药理实验需大动物时常用犬。
常用于观察药物对心脏泵功能和血流动力学的影响，心肌细胞电生理研究，降压药及抗休克药的研究等。
犬还可以通过训练，用于慢性实验研究，如条件反射、高血压的实验治疗、胃肠蠕动和分泌实验、慢性毒性实验。
蛙和蟾蜍离体心脏能较持久地有节律地搏动，常用于观察药物对心脏的作用；坐骨神经和腓肠肌标本可用来观察药物对周围神经、神经肌肉或横纹肌的作用；蛙的腹直肌还可以用于鉴定胆碱能药物的作用。
须注意：由于动物对外界刺激的反应存在个体差异，在选择实验动物时，还应注意动物的年龄、体重、性别、生理状态、健康状况及其品系、等级等因素对实验的影响。
(完整版)临床药理学检验知识点
(完整版)临床药理学检验知识点完整版临床药理学检验知识点
临床药理学检验是用来评估患者身体对药物的反应以及药物在
身体内的动态过程的方法。
以下是一些常见的临床药理学检验知识点：
药物代谢
羟化作用
许多药物的代谢是通过肝脏中的细胞色素P450酶系统完成的，其中许多酶同时作用于许多化合物。
最常见的代谢途径是羟基化作用，在这个过程中，药物的代谢产物通过尿液排出。
酰胺水解
另一种常见的药物代谢途径是酰胺水解，这种代谢途径主要是
通过肝脏和肾脏的酯酶完成的。
剂量依赖性
最小有效剂量
药物的最小有效剂量是指可以治疗特定疾病的最小剂量，同时最小有效剂量还应该能够保证疗效与毒副作用的平衡。
毒性剂量
毒性剂量是指在不利的条件下，可以引起毒性反应的最小药物剂量。
毒副作用可以通过剂量依赖性来识别和预测。
致死剂量
致死剂量是指在不利条件下，可以引起死亡结果的最低药物剂量。
药效学
亲和力
药物的亲和力是指药物分子结构与细胞蛋白质结构之间的亲和性。
亲和力越大，药物与细胞蛋白质之间的结合就越紧密，药物的药效就越大。
题目作用
药物的靶向作用是指药物与特定的受体或酶结合，产生作用的过程。
药物的目标作用可以用来识别药物在体内的作用模式。
以上是一些常见的临床药理学检验知识点，医生需要透彻了解这些概念，才能更好地判断患者在使用药物时可能会出现的问题。
药理学实验基础知识点总结
药理学实验基础知识点总结药理学实验是药物发现、研究和开发的重要环节，通过实验对药物的药理学特性进行评估，包括药理学作用、药动学、毒性等。
药理学实验要求严谨的实验设计和操作，同时也需要具备丰富的药理学知识和实验技能。
本文将针对药理学实验的基础知识点进行总结，包括实验设计、药理学作用评价、药动学评价、毒性评价等方面的内容。
一、药理学实验的基础知识点1. 实验设计实验设计是药理学实验的重要环节，合理的实验设计可以保证实验结果的可靠性和准确性。
常见的实验设计包括随机对照实验、对照组设计、交叉设计等。
在实验设计中需要考虑到实验对象的选择、样本数量、实验组织、数据分析等方面的内容。
2. 药理学作用评价药理学作用评价是对药物在生物体内产生的药理效应进行评估。
常见的药理学作用评价方法包括体外实验、体内实验、生物化学实验等。
通过这些实验可以评价药物对生物体的生理功能、生化代谢等方面的影响。
3. 药动学评价药动学评价是对药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄等动力学过程进行评估。
常见的药动学评价方法包括药物浓度-时间曲线、体内动力学参数的测定等。
通过这些实验可以评价药物在生物体内的药代动力学特性。
4. 毒性评价毒性评价是对药物在生物体内产生的毒性反应进行评估。
常见的毒性评价方法包括急性毒性实验、慢性毒性实验、致畸毒性实验等。
通过这些实验可以评价药物对生物体产生的毒性效应和毒性机制。
二、药理学实验的常用技术和方法1. 细胞培养技术细胞培养技术是现代药理学实验中常用的技术之一，通过对细胞系和细胞器官进行培养，可以评价药物对细胞的毒性和药理学作用。
常用的细胞培养技术包括细胞传代培养、凋亡检测、免疫细胞化学染色等。
2. 动物实验技术动物实验技术是药理学实验中常用的技术之一，通过对动物进行给药和实验观察，可以评价药物的药理学作用、药代动力学特性和毒性效应。
常用的动物实验技术包括造模实验、行为学实验、代谢实验等。
3. 分子生物学技术分子生物学技术是药理学实验中常用的技术之一，通过对药物靶标和信号通路进行研究，可以揭示药物的作用机制和药效基础。
药理学实验方法
药理学实验方法药理学实验方法第－讲实验动物的选择在药理学实验中，要根据实验目的，选择不同动物，常用动物有：１、青蛙和蟾蜍心脏（离体、在体）实验, 制备坐骨Ｎ－腓肠标本等。
２、小白鼠：药物初筛：镇痛、耐缺氧、抗肿瘤药物、LD５０测定、避孕药实验等。
３、大白鼠：抗炎作用，大白鼠踝关节肿胀实验，血压测量，胆管插管等。
长期性毒性试验。
４、豚鼠：对组胺敏感，并易于致敏，常用抗过敏药（平喘药、抗组胺药）实验。
离体心房、心脏、肠管实验等。
豚鼠对结核菌也敏感，也用于抗结核病药物实验。
5、兔：家兔易得，驯服，便于静脉注射和灌胃，常用于观察药物对心脏的作用和对CNS 的作用。
又由于其体温变化较敏感，也常用于体温实验及热原检查。
家兔也常用于避孕药实验。
6、猫：猫的血压比较稳定，具有咳咳嗽反射和呕吐动作。
因而常用于心血管药物实验和镇咳药、镇吐药实验。
7、狗：狗的血压比较稳定，常用于降压药、升压药和抗休克药实验。
狗比较容易驯服，最适用于慢性实验。
手术造瘘（胃、肠）以便观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。
此外，长期毒性实验也常用狗来进行。
* 附:给药途径及剂量限制1. 小白鼠（1）灌畏法:0.1～0.25ml／10g体重。
（2）皮下注射：0.1～0.3ml／10g体重。
（3）肌肉注射：0.2ml／每侧。
（4）腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。
（5）静脉注射：0.05～0.1ml／10g体重。
1.大白鼠（1）灌畏法:2.0ml／10og体重。
<3.0ml/只。
（2）腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。
第二讲实验动物的麻醉和处死一、各种实验动物的麻醉药物和麻醉方法1药理学实验方法1、乙醚乙醚为挥发性麻醉药。
常用于小动物（小鼠）的麻醉。
使用方法有：开放发和封闭法。
2、戊巴比妥钠戊巴比妥钠的作用稳定、麻醉持续时间中等(一次给药可维持作用2～4 hr)，一般实验均可使用。
常用其3% 溶液。
各种动物所用剂量如下：狗：30mg/kg，iv猫、兔：30～40mg/kg，iv或ip大鼠、小鼠：40～50mg/kg，ip3、乌拉坦乌拉坦的作用较弱，对呼吸的抑制作用小是其优点。
(仅供参考)药理实验方法学
药理实验方法学中山大学药学院药理与毒理学实验室动物实验的一般技术第一节经口给药法⏹有口服(po, per os,)和灌胃(ig，intragastric)两种方法。
试用于小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、狗等动物。
⏹口服法可以将药物放入饲料或溶于饮水中令动物摄取。
⏹为保证剂量准确，可应用灌胃法。
一、小白鼠⏹小鼠灌胃管（长4-5cm，直径1mm），连1-2ml 注射器⏹从口角插入口腔，口腔与食道成一直线。
⏹20g体重小鼠，灌胃管大约插入1/2，如插入的是气管，动物马上死亡。
⏹一次给药容量为0.1~0.3ml/10g体重二、大白鼠⏹大鼠灌胃管（长6-8cm，直径1.2mm），⏹连5-10ml注射器⏹一次给药容量为1~2ml/100g体重三、豚鼠（一）口服给固体药物时，把豚鼠放在金属网上，以左手掌从背部握住豚鼠的头颈部而固定之，以拇指和食指压迫其口角部使口张开。
用镊子夹住固体药物，放进豚鼠舌跟部的凹处，使动物迅速闭口而咽下。
三、豚鼠（二）灌胃1.投液体药物时，助手以左手从动物的背把后腿伸开，并把腰部和后腿一起固定，在右手的拇指和食指间夹住两前腿固定之。
术者右手所持豚鼠用灌胃管沿动物上颚壁滑行插入食道，进而插入胃内灌药。
2.应用木制开口器，把导尿管通过开口器中央的孔插入胃内。
*：注意须回抽一下注射器的内栓，证实注射器内无空气。
最后注入生理盐水2ml，保证投药准确。
四、猫（一）口服小片剂或丸剂以原型口服，粉状或颗粒状药物装入3号胶囊内口服。
温顺猫给予液体药物时，将头部轻轻固定，将口角部与齿裂间注入药液，可自然咽下。
凶暴的猫将固定袋固定后投药。
无味无臭的药物能溶于水中的可混入引水中，不溶的药物可混于饲料中给药。
五、兔固体于兔固定箱。
固体药物同豚鼠。
液体药物将开口器横放于兔口中，将舌头压在开口器下面，把开口器固定。
合适的胃管（导尿管）经开口器中央小孔慢慢插入食道5~6寸长。
为避免误入气管，…六、狗（一）口服口服与猫相似，撬开上下鹗齿裂，将片剂、丸剂、胶囊放入狗的舌跟部，合起使咽下。
药理学实验课讲义
实验一：不同给药途径对药物作用的影响【目的】1．掌握硫酸镁的药理作用。
2．掌握小鼠灌胃给药及腹腔注射的方法。
3．观察硫酸镁不同给药途径产生的药理作用是否相同。
【原理】硫酸镁是一个典型的不同给药途径产生不同药理作用的药物，其口服在胃肠道形成高渗透压，使肠腔外水份向肠腔内渗透，最终导致肠容积增大，对肠壁刺激增加，导致肠蠕动加快，出现泻下作用。
静脉注射硫酸镁主要作用有：抑制中枢神经系统、扩张血管降低血压、阻断神经肌肉接头产生肌松作用等。
【材料】1. 动物小白鼠6 只2. 药品15% 硫酸镁3. 器材小鼠灌胃器、注射器、针头、小天平【方法】1. 小白鼠标号、称重、分组。
2 .1组i.p. 15%MgS0 4 溶液0.2ml/10gH组i.g. 15%MgSO 4 溶液0.2ml/10g3.以存活或死亡观察小鼠灌胃及腹腔注射等量硫酸镁所致药物效应不同。
【思考题】1 .给药途径不同，为什么会影响药物作用？2. 比较各种给药途径的优缺点？实验二：有机磷农药中毒与解救【目的】观察有机磷农药中毒的症状及阿托品、解磷定二药对有机磷农药中毒的解救效果，初步分析其解救原理。
【实验原理】有机磷农药能与胆碱酯酶牢固结合，使之失去水解Ach 的活性，造成突触间隙Ach大量堆积而产生一系列中毒症状（M样、N样症状等）。
阿托品是M 受体阻断药、氯磷啶是胆碱脂酶复活药，可不同程度的解救其中毒症状。
如阿托品解除M样症状，但对肌震颤无效；解磷定可使胆碱酯酶复活，对肌震颤有效。
【材料】1．动物：家兔2．药品：10%敌百虫溶液、0.1%硫酸阿托品溶液、2.5%解磷定溶液3．器材：兔箱、注射器、5#针头、台式磅秤、瞳孔尺【方法】1．取家兔1 只，称重后分别观察下列各项指标：全身状况、活动情况、呼吸（次数、有无呼吸困难、呼吸道有无分泌等），瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等，记录在表内。
2．耳缘静脉注射10%敌百虫溶液1ml/kg ，密切观察上述的各项指标。
药理实验方法学重点
药理实验方法学重点一(1.首过效应:口服给药后，药物在到达体循环之前，经肠道、肠壁和肝脏的代谢分解使进入生物体内的相对药量降低。
2，判断方法:尾静脉给药AUC和门静脉给药AUC—比较判断肝首过—是—尾静脉》门静脉;门静脉给药和十二指肠给药AUC—比较判断肠首过—是—门静脉》十二指肠十二指肠和灌胃给药AUC—比较判断胃首过—是—十二指肠AUC》灌胃AUC 二( 简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项?答:原理:肾外异物包扎，可致肾周围炎，肾外形成一层纤维性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血管紧张素含量增加，血压上升。
属肾性高血压模型。
注意事项:1) 肾外包扎材料除自制双层孔胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。
肾外包扎应足够紧，但不能勒破组织。
2) 如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6个月10%~20%动物形成高血压;如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。
三、(一)佐剂性关节炎1.大鼠AA的制备:选用雄性Lewis、Wistar或SD大鼠，体重200g左右，将每鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1ml致炎。
CFA是将卡介苗或死结合分枝杆菌加入已经高压灭菌的液体石蜡中，浓度为10mg/ml。
原发病变主要表现为早起致炎局部的炎症反应，致炎后18h右后足的肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀;继发病变一般出现于致炎后10d左右，表现为对侧和前肢的肿胀，耳和尾部出现“关节炎”小结，变应性角膜翳以及体重下降等等。
2.小鼠AA的制备:选用雄性CBL/6小鼠，8周龄，4%氟烷吸入麻醉，左侧胫-跗关节皮下两点皮下注57 射100ulCFA，CFA浓度为5ug/ul，对照组同方法注射液状石蜡。
造模后22d处死。
造模24h内原发侧关节出现急性肿胀，第9天肿胀较严重。
模型组穿格子数和活动度明显降低。
第一讲 药理实验方法学概述
第一讲
药理实验方法学概述
一、实验药理学与药理学实验
• 实验药理学（experimental pharmacology）是药理学的重要组成部分，在药理学 的发展过程中占有极为重要的地位。
• 是以实验研究为目的研究药物作用及其作用机
制的学科，是药理学方向的一门应用性专业课。 其任务是培养学生掌握和熟悉实验常用仪器的 正确使用、实验标本的制备、条件的控制和指 标的选择、实验结果的分析、处理等基本技能。
五、药效评价标准
1. 药效评价的定量方法
• 量-效关系分析 为基本分析 • 量反应的量-效关系 剂量与效应 • 质反应的量-效关系 剂量与药效反应率 • 时反应的量-效关系 剂量与潜伏期或持续期 • 时-效关系分析 药效经时变化的动态规律 • 构-效关系分析 结构与药效 • 药-靶关系分析 与酶、受体、蛋白质、载体、膜通
药理实验方法学
主讲 戴梦红
简介
设想和结论都取决于实验结果，没有实验 数据，就没有药理学的知识和内容；
• 药理学是一门实验性学科，其理论、学说、
• 没有先进的、科学的实验方法，就没有可
靠的实验数据，就没有药理学；
• 药理实验方法是促进药理学迅速发展的前
提。
理论教学内容（16学时）
• 药理实验方法概述 • 与药理学有关的实验动物的选择和利用
三、药理实验设计的基本原则
• 重复（replicaton)
• 随机（randonmization) • 对照（control)
三项统计学原则由实验设计奠基者Fisher提
出至今，基本精神未变，但内容有发展
（一）重复
• 重复是实验设计的首要原则 • 精确可靠的实验结果应在相同条件下
重复出来
药理学实验方法学(讲稿)
西北农林科技大学 动物医学院
陕西省“金农”工 程
李引乾
2009.12
参考资料：
(1)中药药理实验方法学 (2)药理学实验方法 (3)定量药理学 (4)中国药典 (5)中国兽药典 (6)兽药质量标准
(7)中国兽药信息网
(8)兽药试验技术规范汇编(农业部兽药评审委员会办公室) (9)生物统计学
测定时： 观，但 (1)查找法：在制作标准曲线上直接查照。该方法比较直 比较粗糙。 (2)回归方程，用方程进行计算。 C=a＋bA 式中，C为浓度，a为截距，b斜率， A为吸光度。
2.回收率——方法的准确度
考察样品基质对测定的干扰情况。
1.0g~0.8g 0.8g~1.0g 80% 125%
lg1/0.7=0.1549）； ∑P—为各组死亡率的总和。
LD50的95%可信限（FL）的计算： FL ＝lg－1 (lgLD50±1.96×Sx50) Sx50—为lgLD50的标准误。
Sx50= i=i Nhomakorabea式中：
p—各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示） q—各剂量组存活率（q=1－p，存活率也均用小数表示） 校正值：如果不含0和100%死亡率时，可用下式计算LD50： LD50＝lg－1 [Xm－i(∑p－3－Pm－Pn)] 4 式中：Pm—最高死亡率； Pn —最低死亡率。
剂量为Dmax；如第一组为2/4或1/4死亡，考虑到4/4死亡组在正式试验时可能的死亡率低于
70%，为慎重起见，将4/4组剂量乘以以1.4( 同理可求出Dmin。
2 1.4
)作为Dmax 。
(2)选择合理的剂量分组方案 分组数(G)一般以5～8组为宜，过少不能反映量-效关系。 各组剂量间的比值(1:r)以1:0.6到1:0.85为宜，取简单值有利 于配制等比药液。
药理实验方法学
药理实验方法学药理实验方法学是药学专业的重要课程之一，它是药理学理论知识与实践操作的结合，是培养学生实验操作能力和科学研究素养的重要环节。
药理实验方法学的学习，对于学生将来从事药物研发、临床药理研究等方面具有重要的指导意义。
本文将从实验前的准备工作、实验操作步骤和实验后的数据处理三个方面，对药理实验方法学进行介绍。
实验前的准备工作。
在进行药理实验之前，首先要进行实验室的准备工作。
这包括检查实验仪器和设备是否正常，准备好所需的试剂和材料，检查实验操作流程和安全注意事项等。
实验室的安全是第一位的，学生们在进行实验前，必须了解实验室的安全规定，并严格遵守。
此外，还需要对实验操作流程进行充分的了解和掌握，确保实验能够顺利进行。
实验操作步骤。
在进行药理实验时，正确的操作步骤是非常重要的。
首先，需要按照实验要求准备好所需的试剂和材料，然后按照操作流程进行实验操作。
在操作过程中，要注意实验条件的控制，例如温度、湿度等因素对实验结果的影响。
同时，要严格按照实验操作规程进行操作，确保实验数据的准确性和可靠性。
在实验操作过程中，还需要注意实验仪器的使用方法和操作技巧，确保实验操作的顺利进行。
实验后的数据处理。
实验结束后，需要对实验数据进行处理和分析。
首先要对实验过程中所获得的数据进行整理和归纳，然后进行数据的统计分析。
通过对实验数据的分析，可以得出实验结果并进行结论。
在数据处理过程中，要注意数据的准确性和可靠性，排除实验误差对数据分析的影响。
同时，还需要对实验结果进行讨论和总结，分析实验结果的意义和影响，为进一步的研究提供参考。
总结。
药理实验方法学是药学专业学生必须掌握的重要实验技能，通过对药理实验方法学的学习和实践，可以培养学生的实验操作能力和科学研究素养。
在进行药理实验时，要注意实验前的准备工作、实验操作步骤和实验后的数据处理，确保实验能够顺利进行并得出准确可靠的实验结果。
希望本文的介绍能够对学生们在药理实验方法学的学习和实践中有所帮助。
药理实验知识点总结
药理实验知识点总结药理学是研究药物在机体内的作用和相应机制的科学，是药物治疗学的基础。
药理实验是药理学的重要组成部分，通过药理实验可以研究药物的作用机制、药物毒理学、药动学等方面的内容，为药物研发、临床应用等提供重要的理论和实验依据。
本文将对药理实验的知识点进行总结，包括实验设计、数据分析、结果解读等方面的内容。
实验设计在进行药理实验时，合理的实验设计是非常重要的，它直接关系到实验结果的可靠性和科学性。
在实验设计中需要考虑的因素包括：实验目的、实验对象、实验方法、实验方案等。
实验目的是实验设计的出发点和目标，是指明实验要解决的问题和达到的目标的一个明确陈述。
实验对象是进行实验的研究对象，可以是动物、细胞、分子等。
实验方法包括实验操作的步骤、技术要求、操作顺序等。
实验方案是对实验过程进行详细规划的文件，它包括实验步骤、实验条件、实验要求等内容。
在实验设计中，还需要考虑实验的可行性、重复性、随机性等要求，以确保实验的科学性和有效性。
数据分析在药理实验中，数据分析是对实验结果进行客观、全面、准确地评价和解释的过程。
数据分析的方法包括统计分析、图表分析、实验数据处理等。
统计分析是对实验数据进行测量、总结、分析、解释的方法，它包括描述统计和推论统计两大类。
描述统计是通过图表、表格等形式对数据进行描述和总结，推论统计是通过统计推断的方法对总体参数进行估计和检验。
图表分析是通过图表的方式对数据进行展示和分析，包括直方图、折线图、饼图等。
实验数据处理是对实验数据进行整理、筛选、计算等处理，以得到符合实际情况的数据。
结果解读在药理实验中，结果解读是对实验结果进行评价和解释的过程，其目的是为了说明实验结果的科学性、可靠性和应用价值。
结果解读需要根据实验数据、理论知识等多方面因素进行综合分析。
在结果解读中需要考虑的因素包括：结果的客观性、实验结果与理论知识的符合程度、结果的可能影响因素等。
结果解读的内容包括对实验结果的说明、结果的应用价值、结果的局限性和不足等方面。
药理实验方法学
药理实验方法学
药理实验方法学（pharmacologicalmethods）是一个非常重要的科学研究领域，主要研究各种药物及其作用机制的影响，对药物治疗有重要意义。
药理学实验方法包括多种多样的实验技术，可以检测和研究药物与生物体关系的机制，以及评价不同药物的疗效。
实验中最常用的药理学技术包括毒理实验，药代动力学实验，药剂学实验，药理学实验，生物分析学实验等。
例如，毒理学实验是研究药物毒性机制的主要技术手段，主要检测药物对机体的剂量依赖性毒性效应；药代动力学实验则重点是揭示药物进入机体后的代谢及动力学规律；药剂学实验则重点是考察药物的溶出状态和速度；药理学实验则主要考察药物的作用机制；生物分析实验则主要考察药物的疗效。
此外，药理学实验还可以用于探索新的药物治疗方案，为临床药物治疗提供重要的理论基础。
根据不同的药物作用机制和治疗目标，药理学实验可以采用多种形式，比如体外实验，动物实验，人体实验等。
有了药理实验方法学，就可以更好地了解药物的作用机制，以及药物治疗的有效性。
实际上，在许多药物研究项目中，药理学实验方法学都发挥着重要作用。
除了揭示药物的活性，它还可以帮助研究人员更好地预测药物的疗效，了解药物的药代动力学，测定药物对机体毒性的程度，进而确定药物的最佳剂量。
总之，药理实验方法学无疑是药物发现、开发以及治疗过程中非
常重要的科学研究领域，提供了重要的理论指导。
这些理论指导有助于我们更好地开发有效而安全的药物，为患者带来更好的治疗效果。
实验一 药理学实验的基本知识和基本技术
实验一药理学实验的基本知识和基本技术一、目的1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2. 更好地掌握药理学基本理论知识；3. 培养科学思维二、基本要求1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；2. 实验时⑴实验器材要妥善保管；⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；⑶注意节约实验药品；⑷维持良好的课堂纪律。
3. 实验后⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；⑶书写实验报告。
三、实验报告的书写1. 题目2. 目的3. 原理4. 材料：实验动物，器材，药品5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来；6. 结果：要求真实、清楚；7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。
四、药理学实验实验设计原则1.随机原则按照机遇均等的原则进行分组。
其目的是使一切干扰因素造成的实验误差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。
2.对照原则空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对照）。
3.重复原则能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情况。
五、实验动物1. 动物的选择（1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。
也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。
（2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。
（3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。
也常用于离体心脏、心房、肠管实验。
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一．1.首过效应：口服给药后，药物在到达体循环之前，经肠道、肠壁和肝脏的代谢分解使进入生物体内的相对药量降低。
2，判断方法：尾静脉给药AUC和门静脉给药AUC—比较判断肝首过—是—尾静脉》门静脉;门静脉给药和十二指肠给药AUC—比较判断肠首过—是—门静脉》十二指肠十二指肠和灌胃给药AUC—比较判断胃首过—是—十二指肠AUC》灌胃AUC 二．简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项?答：原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎，肾外形成一层纤维性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血管紧张素含量增加，血压上升。
属肾性高血压模型。
注意事项：1)肾外包扎材料除自制双层孔胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。
肾外包扎应足够紧，但不能勒破组织。
2) 如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6个月10%~20%动物形成高血压；如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。
三、（一）佐剂性关节炎1.大鼠AA的制备：选用雄性Lewis、Wistar或SD大鼠，体重200g左右，将每鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂（CFA）0.1ml致炎。
CFA是将卡介苗或死结合分枝杆菌加入已经高压灭菌的液体石蜡中，浓度为10mg/ml。
原发病变主要表现为早起致炎局部的炎症反应，致炎后18h右后足的肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀；继发病变一般出现于致炎后10d左右，表现为对侧和前肢的肿胀，耳和尾部出现“关节炎”小结，变应性角膜翳以及体重下降等等。
2.小鼠AA 的制备：选用雄性C57BL/6小鼠，8周龄，4%氟烷吸入麻醉，左侧胫-跗关节皮下两点皮下注射100ulCFA，CFA浓度为5ug/ul，对照组同方法注射液状石蜡。
造模后22d处死。
造模24h 内原发侧关节出现急性肿胀，第9天肿胀较严重。
模型组穿格子数和活动度明显降低。
造模后小鼠对于机械异常性疼痛和热痛出现明显退缩反应。
（二）II型胶原诱导的关节炎 1.小鼠CIA的制备：将鸡或牛II型胶原（CII）溶解于0.01mol/L的醋酸后与同等容积的含有低浓度卡介苗的液体石蜡油（ALCB）充分乳化，CII和ALCB的计量均为4mg/mL.,乳化在冰浴中进行。
在小鼠（18g左右）根部多点皮内注射乳化剂0.1ml，第21d在尾根部加强注射。
加强注射后，由第三者检查关节炎的发生情况。
2.大鼠CIA的制备：CII溶解于0.01mol/L 的醋酸中（CII终浓度为4mg/ml），充分研磨，4度过夜，讲CII溶液滴加至冷的不完全弗氏佐剂（IFA）中，等体积混合，充分乳化。
大鼠（体重150g左右）尾根部和背部分多点皮内注射0.1mLCII乳化剂。
7d后同法再坚强注射一次。
对照组注射0.01mol/L醋酸和IFA的乳化液。
从第20d后开始，用组织测量仪测定后足趾的容积。
评价指标：足趾肿胀度、全身表现评分、关节肿胀数、关节炎指数、X线评分、关节炎病理评分。
四、祛痰药的药理试验方法 1).呼吸道分泌液量测定法小鼠酚红实验法,基本原理：利用酚红小鼠腹腔注射后部分从气道排泄的特点，测定小鼠气道酚红排泄量，以判断受试药对气道通透性和分泌液量的影响.操作步骤：小鼠饥饿16-18h--注射酚红前30min受试药物灌胃--腹腔注射酚红药物，30min 后处死--血凝后，分离气管、气管插管并与注射器相连--用5% NaHco3 0.8ml 洗气管，反复三次--合并洗液，放置，得透明红色上清液，用分光光度计波长545nm比色，根据酚红标准曲线计算出酚红量。
注意事项：1.待小鼠体内血液凝固后，再切开颈部，以免血液中酚红影响。
2.气道内注入NaHco3溶液后吸出时要轻轻进行，一旦用力过度，肺泡会破裂液体流入胸腔。
2)呼吸道纤毛运动实验法---鸽纤毛运动实验法原理：利用气管纤毛运动带动颗粒物从气管内固定的向口腔方向的速度，测定药物祛痰药物，一般测运动2cm所需的时间.操作步骤：鸽气管分离，做2cm的标记---切开气管，将软木屑放在2cm向心端--记录2cm所需时间，观察给药前后0.5h的速度，正常是3-4min。
注意事项：鸽气管暴露实验注意温度，等待时颈部用生理盐水湿润纱布防治干燥.3)豚鼠气道黏液黏蛋白的测定.原理：气道黏液主要由杯细胞和黏液性腺细胞产生和分泌，内含黏蛋白，为黏多糖和蛋白质。
无机酸存在下，己糖醛酸从黏多糖中释放与咔唑起缩合反应，形成有色物，在530nm比色测定.操作：豚鼠麻醉处死，取气管称重----剪开气管用棉棒取黏液--水洗，离心，取上清液待用--上清加四硼酸-浓硫酸溶液，沸水加热15min--用分光光度计530nm 比色。
4)大鼠气道黏液中肺表面活性物质的测定.原理：肺表面活性物质（ps ）由脂质和蛋白质组成，其中约90%是脂质，且绝大部分是定磷脂，因此磷脂的定量即可反应ps 的多少。
操作：制取支气管肺泡灌洗液--肺表面活性物质的测定---置620nm 波长比色法定量。
五、镇痛药的药效实验方法？具体有哪些实验方法？分类：化学刺激法，热刺激法，电刺激法，机械刺激法，慢性疼痛法、化学刺激法：1.小鼠扭体法 2.钾离子皮下透过法 3.缓激肽动脉注射法 4.福尔马林实验。
热刺激法：1.辐射热刺激法 2.小鼠热板法 3.小鼠热水缩尾法 电刺激法：1.大鼠牙髓刺激法2.电刺激大鼠甩尾法。
机械刺激法：1大鼠尾尖部压痛法 2.小鼠尾根部、后肢加压法3.大鼠压足法 慢性疼痛法：1.大鼠关节炎痛 2.神经源性疼痛 3.坐骨神经痛4.癌痛模型六、肝纤维化模型 1、CCL 4诱发的肝纤维化动物模型原理CCL 4−−−→−酶肝450P CCL 3. + CL . 启动脂质过氧化作用损伤肝细胞 操作：SD 大鼠、CCL 4、花生油（高压灭菌）分组：正常组、模型组、不同剂量的受试药物组、阳性对照药组 背部皮下注射CCL 42、异种血清诱发的肝纤维化动物模型 原理：异种血清进入动物体内引起免疫应答形成抗异种血清的抗体，长期刺激产生的免疫复合物来不及清除，沉积于肝脏的血管壁内外。
操作：wistar 雄大鼠、猪血清分组：同上 每只腹腔注射，，每次注0.5ml,每周2次，16周→给药组给予相应药物→血清，肝脏指标检查3、胆总管结扎致肝纤维化动物模型4、乙醇诱导的肝纤维化动物模型5、二甲基硝胺诱导的肝纤维化动物模型6、复合因素建立的肝纤维化动物模型七、发热模型、1.基本原理：发热反应大多是各种致热因子作用于机体，产生和释放内热原，并进一步影响体温调节中枢，使调温起步点提高，体温相应升高。
因此，实验室常用有关的刺激因子激活产生内热原。
操作方法：1测量体温，系将肛表涂上凡士林，使其润滑后插入动物肛门，兔一般插入3-4cm ，大鼠插入2cm ，放置3-5min 后取出读数。
2.引起发热反应包括（1）细菌培养液和内毒素引起的发热。
1）注射杀死的大肠埃希菌或乙型副伤寒沙门菌培养液2）注射伤寒-副伤寒菌苗3）注射腐败干草浸剂4）注射大肠埃希菌菌液5）注入伤寒沙门菌内毒素6）应用啤酒酵母悬液（2）非感染性发热复制法1）化学刺激法：给兔背部注射松节油0.4ml/kg 或2%2,4-二硝基酚乙醇溶液亦用1%角叉菜胶0.1ml ，于大鼠一侧后足趾皮下注射2）注入异性蛋白给兔肌注10%蛋白栋，剂量1.0g/kg ，可在2-3h 内引起体温显著升高3）温刺激法（3）实验性发热反应的影响因素1）动物特点的影响：不同种属、年龄和形态特征，对发热有明显影响2）实验环境温度的影响：实验环境的温度能明显影响发热的反应速度和强度3）实验动物活性的影响：体温实验时，必须考虑到动物的活动情况4）致热物质的注入量和注射部位。
八、抗抑郁药模型 1、应激模型 a.大、小鼠强迫游泳实验 动物在恶劣环境下会出现逃逸行为，当不能逃逸时便出现行为绝望。
大鼠强迫游泳实验是利用行为绝望建立的一种能有效的抗抑郁药的大鼠抑郁模型。
b.小鼠悬尾法 是一种急性行为绝望模型，将小鼠倒挂后，其行为首先是拼命挣扎，企图逃脱，最后进入绝望而静止不动。
大多数抗抑郁药可以明显缩短其不动时间。
c.慢性不可预知性应激实验2.大鼠嗅球切除模型大鼠嗅球切除后许多行为发生改变，如自发活动增加，被动学习能力欠缺等，均可以被抗抑郁剂所逆转。
3.药物诱发的抑郁模型 （利血平、5-HTP 、色胺）利血平拮抗实验:利血平是一种囊泡再摄取抑制剂，他使递质留在囊泡外，易被单胺氧化酶降解，从而使单胺，儿茶酚胺耗尽，动物出现上眼睑下垂、体温下降及强直症状，抗抑郁药能拮抗上述症状。
5-HTP 诱导的甩头行为 大鼠色胺惊厥增强实验4.大鼠隔离残杀行为模型、脑卒中后抑郁模型九、如何从脾脏中取T 细胞：超净台内无菌取小鼠脾脏，将脾脏转入pbs中，研磨制成单细胞悬液，，另取无菌试管，先加入淋巴细胞分离液，然后加入制备的细胞悬液，离心，分层，吸出单个核细胞层在另外无菌试管中，用红细胞裂解液处理，以除去红细胞，离心，弃上清，采用尼龙毛柱法：混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，将注射器固定在支架上，倒入37℃的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，以清洗几次尼龙毛，关上阀门。
将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约5.00×107个细胞／ml。
将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱。
盖上注射器，37℃温育45min至1h。
打开下口，缓慢放流，收集于离心管中。
离心，即获所需的T淋巴细胞。
十、肿瘤细胞的培养：肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。
当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。
另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。
肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。
肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。
一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。
生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。
培养中的肿瘤细胞具以下突出特点：－）形态和性状培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。
电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝走行不如正常细胞规则，可能与肿瘤细胞具有不定向运动和锚着不依赖性有关。
二）生长增殖肿瘤细胞在体内具有不受控增殖性，在体外培养中仍如此。
正常二倍体细胞在体外培养中不加血清不能增殖，是因血清中含有很细胞增殖生长的因子，而癌细胞在低血清中（2%～5%）仍能生长。