实验十八血清胆红素测定(改良j-g法)
综合性试验(二)
标准曲线的制作
ml 标准1 1 空白1 标准2 2 空白2 标准3 3 空白3 标准4 4 空白4
12mg/dl标 准液
生理盐水
0.05
0.15 1.6 0 0.4 1.2
0.05
0.15 1.6 0.4 0 1.2
0.1
0.1 1.6 0 0.4 1.2
0.1
0.1 1.6 0.4 0
0.15
0.05 1.6 0 0.4 1.2
思考题
• 1．重氮试剂法测总胆红素时为何需使用加 速剂? • 2．重氮试剂法基本原理?有何优缺点?
抑制剂
碱性酒石酸钠溶液
0.05
1.2
0.05
1.2
结合胆红素
加入物(ml)
血清 咖啡因试剂
结合胆红素
0.2 0
空白管
0.2 1.6
双蒸水
对氨基苯磺酸 重氮试剂
1.6
0 0.4 室温反应1min，准确计时
0
Байду номын сангаас0.4 0
抑制剂 酒石酸钠溶液
0.05 1.2
0.05 1.2
混匀，600nm，1cm光径比色，空白管调零，读取各管吸光度，在标准曲 线上查出相应的胆红素浓度
0.15
0.05 1.6 0.4 0 1.2
0.2
0 1.6 0 0.4 1.2
0.2
0 1.6 0.4 0 1.2
咖啡因试剂
对氨基苯磺 酸 重氮试剂
混匀，RT10min
1.2
碱性酒石酸 钠溶液
混匀，600nm,1cm光径，对应空白管调零，测各标准管吸光度， 以浓度为X轴，吸光度为Y轴，作标准曲线 3 6 9 12
相当于胆红
3种血清总胆红素测定方法的比较
3种血清总胆红素测定方法的比较
贾丽霞;张红艳;程书珍
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2007(016)024
【摘要】目的对钒酸氧化法、改良J-G法、胆红素氧化酶法进行方法学比较,选择胆红素测定的最好方法.方法用钒酸氧化法、改良J-G法和胆红素氧化酶法测定血清中的总胆红素,按NCCLC评价方案系统评价其重复性、回收率、线形范围及溶血、脂血对胆红素测定的干扰影响,然后对测定结果进行比较.结果钒酸氧化法与改良J-G法、胆红素氧化酶法有良好的相关性;其回收率均在95.0%～105.0%;其线形范围分别是:0～678 μmol/L,0～634 μmol/L,0～575 μmol/L.三酰甘油≤8.0 mmol/L、血红蛋白≤6.0 mmol/L对钒酸氧化法无明显干扰.结论钒酸氧化法测定胆红素准确、灵敏、稳定,线形范围宽,是测定胆红素的理想方法.
【总页数】2页(P3462-3463)
【作者】贾丽霞;张红艳;程书珍
【作者单位】河北工程大学医学院,河北,邯郸,056002;河北工程大学医学院,河北,邯郸,056002;河北工程大学医学院,河北,邯郸,056002
【正文语种】中文
【中图分类】R730.43
【相关文献】
1.血清总胆红素重氮法和钒酸盐氧化法测定方法的评价 [J], 孙虹;王建琼;刘琳;张昱璠;赵崇吉
2.血清总胆红素测定方法的比较 [J], 王念跃;张永臣
3.溶血对血清总胆红素测定方法的影响 [J], 许晓文
4.乙型肝炎患者空腹血清总胆红素测定方法学研究 [J], 陈华
5.新生儿血清总胆红素水平对两种血糖测定方法准确性的影响 [J], 杨瑞生;房娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
改良J—G法检测新生儿溶血病患者血清胆红素的问题探讨
改良J—G法检测新生儿溶血病患者血清胆红素的问题探讨作者：叶章发张超桂远望来源：《中国实用医药》2014年第30期【摘要】目的分析改良J-G法检测新生儿溶血病患者血清胆红素存在的问题。
方法使用改良J-G法分别检测患儿血清、稀释血清以及使用亚硝酸盐法检测血清胆红素项目，进行统计、分析。
结果改良J-G法检测总胆红素、间接胆红素，血清与稀释血清检测结果之间差异有统计学意义（P0.05）。
结论使用改良J-G法检测新生儿溶血病患者血清胆红素时，必要时应稀释血清进行检测，以免影响检测结果的可靠性。
【关键词】改良J-G法；新生儿溶血病；血清胆红素在临床实验中发现，使用改良J-G法检测新生儿溶血病患者血清胆红素，当其黄疸较为严重时，实验检测结果存在一定问题，现报告如下。
1 材料与方法1. 1 标本来源本院排除其他严重疾病、且黄疸较为严重的新生儿溶血病患者血液标本51例，其中男28例，女23例。
1. 2 仪器 OLYMPUS AU-2700全自动生化分析仪。
1. 3 试剂①国内某品牌改良J-G法总胆红素检测试剂。
试剂1：盐酸0.7 mol/L ，对氨基苯磺酸20 mmol/L ，柠檬酸0.7 mol/L，咖啡因 0.18 mol/L。
试剂2：亚硝酸钠溶液20mmol/L。
②国内某品牌改良J-G法直接胆红素检测试剂。
试剂1：盐酸0.3 mol/L ，对氨基苯磺酸30 mmol/L 。
试剂2：亚硝酸钠溶液10 mmol/L。
③兰森生物技术有限公司公司提供总胆红素、直接胆红素亚硝酸盐法检测试剂。
RANDOX（Human-Sera分析用人血清基质）定值冻干质量控制血清。
1. 4 方法由儿科护理人员使用真空采血管，采集患儿股静脉血液3.00～5.00 ml，及时送检验科处理备用。
首先，准确吸取离心处理后的血清0.25 ml，使用生理盐水倍比稀释，稀释至根据肉眼观察颜色，判断其大致在正常人血清总胆红素参考值上限水平；然后，分别吸取血清0.25 ml、各管稀释血清0.25 ml，放置各自检测试管中，上机进行改良J-G法胆红素项目实验检测；同时，血清标本进行亚硝酸盐法胆红素项目检测。
血清直接胆红素测定实验设计
血清直接胆红素的测定病人准备：要求病人处于安静状态，生活状态处于日常状态，避免过度空腹、饮食、饮酒吸烟标本采集，处理，保存和要求：收集无溶血，无黄疸，无脂浊的新鲜血清或肝素血清，避光保存。
混合，必要时可用过滤器过滤。
实验原理：血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成偶氮胆红素。
醋酸钠缓冲液保持反应的pH，反应完全后加入终止试剂（叠氮钠）以破坏重氮试剂，最后加入碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的黄色偶氮胆红素，在600nm波长比色，从标准曲线找直接胆红素含量。
实验仪器设备及试剂：咖啡因试剂碱性酒石酸钠溶液5g/L亚硝酸钠溶液5g/L 对氨基苯磺酸溶液5g/L叠氮钠溶液胆红素标准溶液加样枪分光光度计（或半自动生化仪）实验操作：一。
取两支试管，按表1操作表1 改良J—G发测定血清直接胆红素操作表加入物 (ml) 直接胆红素空白管血清0.2 0.2咖啡因苯甲酸钠试剂— 1.6对甲基苯磺酸—0.4重氮试剂0.4 —混匀，准确1分钟重氮钠0.05 —咖啡因甲苯酸钠试剂 1.55 —室温10分钟碱性酒石酸钠 1.2 1.2混匀，600nm波长比色，以空白管调0，读取各管吸光度。
从标准曲线上查出直接胆红素浓度。
二．标准曲线的制作表2 胆红素标准曲线的制作表加入物 (ml) 对照管 1 2 3 4 5胆红素标准贮存液— 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0稀释血清 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 —相当于胆红素浓度 0 34.2 68.4 103 137 171（u mol/L)混匀（不可产生气泡),按直接胆红素的测定方法操作。
每一浓度做2个平行管，用对照管调零，读取各管吸光度，以各管吸光度的均值为纵坐标，以相应胆红素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
参考范围：血清结合胆红素0~6.8umol/L(0~0.4mg/dl）注意事项：1.本法在10 —37℃范围内测定，不受温度变化的影响，两小时内显色非常稳定且灵敏度高，轻度溶血对本法无影响。
最新实验十八 血清胆红素测定(改良J-G法)
实验十八血清胆红素测定(改良J-G法)（改良J-G法）【目的】1.熟悉血清胆红素测定的原理和方法；２.掌握胆红素测定的正常参考范围及临床意义。
【原理】血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成偶氮胆红素；未结合胆红素需要在加速剂（咖啡因-苯甲酸钠）作用下，分子内氢键破坏后，才能与重氮试剂反应生成偶氮胆红素。
醋酸钠缓冲液保持反应的pH，反应完成后加入终止试剂（叠氮钠）以破坏重氮试剂，最后加入碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，从标准曲线查找总胆红素和结合胆红素含量。
【器材】试管及试管架、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、秒表。
【试剂】1．咖啡因试剂称取无水水醋酸钠41.0g，苯甲酸钠38.0g，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na）0.5g，溶于约500ml去离子水中，再加入咖啡因25.0g，搅拌使溶解（加2入咖啡因后不能加热溶解），用去离子水补足至1L，混匀。
过滤后置棕色瓶，室温保存。
2．碱性酒石酸钠溶液称取氢氧化钠75.0g，酒石酸钠（Na2C4H4O6·2H2O）263.0g，用去离子水溶解并补足至1L，混匀。
置塑料瓶中，室温保存。
3．5g/L亚硝酸钠溶液仅供学习交流冰箱保存，稳定期不少于2周。
若发现溶液呈淡黄色，应废弃重配。
4．5g/L 对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H2O）5.0g，溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。
5．重氮试剂临用前取上述亚硝酸钠溶液0.5ml和对氨基苯磺酸溶液20ml，混匀即成。
6．5.g/L叠氮钠溶液7．胆红素标准液（1）目前一般用未结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：收集无溶血、无黄疸、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用过滤器过滤。
取过滤后的血清1ml，加入新鲜0.154mmol/L NaCl溶液24ml，混合。
血清胆红素测定
血清胆红素测定病人准备：病人准备除了特殊检验有专门规定外，一般要求病人处于安静状态，生活饮食处于日常状态，目前已公认过度空腹、饮食、饮酒、吸烟及姿势体位等可影响某些检验结果，现分述如下：1. 运动：肌肉活动的影响可分短暂性的和持续性的两类，短暂性影响为血浆脂肪酸含量，可因运动而暂时减少，而后渐渐增加而恢复。
丙氨酸可因运动暂时增加达180%，受到持续性影响主要是一些与肌肉有关的酶，如肌酸激酶、乳酸脱氢酶等，据称一场60min的手球训练赛后11h，肌酸激酶活性比赛前仍增加达125%，长期坚持体育锻炼还会提高性激素水平，因此采血前宜安静，不作过大的活动。
2. 食物：进餐后血浆脂肪、蛋白质、糖类有所增加。
有人研究于高脂餐后2-4h采血，多数人碱性磷酸酶含量增高，主要来自肠源性同工酶，且与血型有密切关系，O型或B型兼为Le+分泌型者增高更明显。
一般认为高蛋白质餐使血浆尿素增加，但不影响肌酐含量，高比例不饱和脂肪酸食物，可减低胆固醇含量；食物如含有动物血液，可引起粪隐血假阳性。
故在做相应检验时，应对食物有一定的控制。
3. 过度空腹：一般血液生化检验要求病人晚餐后禁食，至次日晨采血，空腹约8-12h。
但过度空腹，某些检验会有异常结果。
例如血清胆红素可因空腹48h而增加240%；血糖可因空腹过长而减少为低血糖；血脂空腹过度，甘油三酯、游离脂肪酸反有增加，故空腹并非越长越好。
4. 饮酒：饮酒后使血浆乳酸、尿酸盐增加。
长期饮酒者高密度脂蛋白胆固醇偏高，平均红细胞体积增加，甚至可以将这项作为嗜酒者的筛选检查。
5. 吸烟：瘾烟者血液一氧化碳血红蛋白含量可达8%，而不吸烟者含量在1%以下。
血液学方面亦有变化，白细胞数增加，嗜酸粒细胞减少，中性粒细胞及单核细胞增多，血红蛋白偏高，平均红细胞体积偏高。
6. 药物：药物对检验的影响非常复杂，15000多种药物对检验有干扰作用。
众所周知，抗生素、磺胺类药物，对肝功能有大小不一的影响，甚至几片常用药物可以引起严重的药物反应，故在采样检查之前，暂停各种药物是为上策，如不可停用，则应了解可能对检验结果产生的影响。
胆红素测定方法
胆红素测定方法胆红素是一种由肝脏产生的黄色物质，它在人体内起着重要的代谢作用。
胆红素的测定可以帮助医生判断肝功能和胆道疾病的情况，以及监测患者的治疗效果。
因此，准确测定胆红素水平对于临床诊断和治疗具有重要意义。
目前，常用的胆红素测定方法主要有血清胆红素测定法、尿胆红素测定法和组织胆红素测定法。
下面将分别介绍这三种方法的原理和操作步骤。
血清胆红素测定法是通过分析血液中的胆红素水平来判断肝功能和胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者血清标本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出血清中的胆红素浓度。
这种方法操作简单，结果准确，是临床上常用的胆红素测定方法之一。
尿胆红素测定法是通过分析尿液中的胆红素水平来判断胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者尿液标本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出尿液中的胆红素浓度。
这种方法简便快捷，适用于临床快速筛查。
组织胆红素测定法是通过分析组织样本中的胆红素水平来判断肝功能和胆道疾病的情况。
操作步骤如下，首先，取一定量的患者组织样本，加入试剂混匀；然后，使用分光光度计测定混合液的吸光度，根据吸光度值计算出组织中的胆红素浓度。
这种方法需要临床实验室条件支持，操作相对复杂，但结果准确可靠。
除了上述常用的胆红素测定方法外，近年来还出现了一些新的胆红素测定技术，比如高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）、蛋白质质谱技术等。
这些新技术能够更加准确地测定胆红素水平，为临床诊断和治疗提供更可靠的依据。
总的来说，胆红素测定是临床诊断和治疗中不可或缺的一部分，不同的测定方法各有特点，医生可以根据具体情况选择合适的方法进行检测。
随着医学技术的不断发展，相信胆红素测定方法也会不断完善，为临床诊断和治疗提供更多的选择和便利。
实验十八 血清胆红素测定(改良J-G法)
实验十六血清胆红素测定（改良J-G法）【目的】1.熟悉血清胆红素测定的原理和方法；２.掌握胆红素测定的正常参考范围及临床意义。
【原理】血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成偶氮胆红素；未结合胆红素需要在加速剂（咖啡因-苯甲酸钠）作用下，分子内氢键破坏后，才能与重氮试剂反应生成偶氮胆红素。
醋酸钠缓冲液保持反应的pH，反应完成后加入终止试剂（叠氮钠）以破坏重氮试剂，最后加入碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，从标准曲线查找总胆红素和结合胆红素含量。
【器材】试管及试管架、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、秒表。
【试剂】1．咖啡因试剂称取无水水醋酸钠41.0g，苯甲酸钠38.0g，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）0.5g，溶于约500ml去离子水中，再加入咖啡因25.0g，搅拌使溶解（加入咖啡因后不能加热溶解），用去离子水补足至1L，混匀。
过滤后置棕色瓶，室温保存。
2．碱性酒石酸钠溶液称取氢氧化钠75.0g，酒石酸钠（Na2C4H4O6·2H2O）263.0g，用去离子水溶解并补足至1L，混匀。
置塑料瓶中，室温保存。
3．5g/L亚硝酸钠溶液称取亚硝酸钠0.5g，用去离子水溶解并定容至100ml，混匀，置棕色瓶，冰箱保存，稳定期不少于2周。
若发现溶液呈淡黄色，应废弃重配。
4．5g/L 对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H2O）5.0g，溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。
5．重氮试剂临用前取上述亚硝酸钠溶液0.5ml和对氨基苯磺酸溶液20ml，混匀即成。
6．5.g/L叠氮钠溶液7．胆红素标准液（1）目前一般用未结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：收集无溶血、无黄疸、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用过滤器过滤。
胆红素测定
临床意义
（1）黄疸及鉴别 DBi/TB 比值<20% 溶血性黄疸 比值40%~60% 肝细胞性黄疸 比值> 60% 阻塞性黄疸
（2）肝细胞损害程度和预后的判断。 （3）新生儿黄疸病情掌握。 （4）再障等疾病，TB减少。
思考 题
TB与DBi测定中试剂有何区别，为什麽？
胆红素的分类
（2）结合胆红素(Bc) ：与葡萄糖醛酸基结合， 具亲水性，与重氮试剂直接反应，又称直接 胆红素。占总胆红素的1/5。
黄疸分类
根据总胆红素的浓度 隐性黄疸:总胆红素17.1~34.2µmol/L。 显性黄疸:总胆红素大于34.2µmol/L。
注：TB 17.1µmol/L(2mg/dL)
DBil测定原理(改良J-G法)
血清中的DBi在强酸环境中，与重氮对氨基苯磺 酸反应,生成有色偶氮胆红素, 通过测定550nm处吸 光度值的变化，即可计算出样本中DBi的浓度。
TB测定原理(改良J-G法)
血清中的结合胆红素在强酸环境中与重氮 对氨基苯磺酸反应,生成有色偶氮胆红素,非 结合胆红素在表面活性剂的作用下,也能进行 这样的反应,通过550nm比色,计算其含量。
解。 （2）约10%~20%来自于组织中非Hb的血红素，如肝中
释放的的血红素等。 （3）极少部分是由于骨髓造血过程中，生成的Hb或血红
素，以及少量未成熟RBC的分解（无效造血）产生的 血红素。
胆红素的分类
（1）未结合胆红素(Bu)：未与葡萄糖醛酸基结 合，具亲脂性，须加入加速剂破坏分子内部的 氢键后才能与重氮试剂反应，又称间接胆红素。 占总胆红素的4/5。
黄疸分类
根据造成黄疸的原因 (1)溶血性黄疸 (2)肝细胞性黄疸 (3)阻塞性黄疸
三种黄疸的比较
不同稀释方式对血清胆红素测定结果的影响
不同稀释方式对血清胆红素测定结果的影响程涌江;李丽;陈海鸣【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2010(028)006【总页数】2页(P474-475)【关键词】胆红素;钒酸盐氧化法;重氮法;稀释方法【作者】程涌江;李丽;陈海鸣【作者单位】广州中医药大学第一附属医院检验科,广州,510405;广州中医药大学第一附属医院检验科,广州,510405;广州中医药大学第一附属医院检验科,广州,510405【正文语种】中文【中图分类】R446.1当前国内检测胆红素的方法多为钒酸盐氧化法和重氮法(改良J-G法)。
当胆红素水平超过线性范围时，通常用生理盐水稀释后再测定，但在应用中我们发现该稀释方法的检测结果会产生明显偏差，现报道如下。
1 材料和方法1.1 仪器 Olympus AU5421全自动生化分析仪。
1.2 试剂钒酸盐氧化法试剂盒(四川迈克公司，批号0507151)；重氮法试剂按操作规程[1]自配；标准品(Roche公司的 cfas)；水平1、2质控品(Aalto Scientific公司)。
1.3 方法随机收集高胆红素血清标本10例，其浓度均在钒酸盐氧化法和重氮法的线性范围内，用该2种方法测定其总胆红素(T-Bil)和直接胆红素(D-Bil)，并用以下3种方案各测定1次。
A，直接测定标本T-Bil和D-Bil；B，用生理盐水将标本稀释5倍后测定，结果乘以5；C，将10份无黄疸、溶血、脂血的新鲜血清标本混合均匀测定其胆红素含量(C1)，将标本与混合血清按1∶4混合，测定混合后胆红素(C2)，按以下公式计算结果：标本中的胆红素=5C2-4C1。
1.4 统计学分析用SPSS 17.0软件作配对t检验。
2 结果2.1 T-Bil测定 3种方案检测T-Bil的结果及其与方案A测定结果的偏差见表1。
经配对t检验：钒酸盐氧化法B与A差异有显著性(P<0.001)，C与A差异无显著性(P=0.709)；重氮法B与A差异有显著性(P=0.001)，C与A差异无显著性(P=0.714)。
微量法与改良J_G法测总胆红素的比较
VT 组延长( t = 2. 80、2. 66, P < 0. 05) , 两组最慢心
率 Q-Tc 差异不显著( P > 0. 05) 。见表 1。
表 1 各组的参数测算值比较
ms
分组 例数
VT 组 11 无 VT 组 14 对照组 25
最快心率
最慢心率
Q-T c
Q-T c
519. 3 ? 21. 8 v 428. 1 ? 19. 8 v
= 1. 1068X + 17. 5214。 三、结 论 用微 量法 和பைடு நூலகம் 良 J- G 法测 得 的
总胆红素值差 异不显 著, 因此, 临床 上 末梢血微量法测 得的总 胆红素 值可 作 为新生儿 黄 疸动 态 观 察的 指 标, 测 得 的总胆红素值用 回归方 程校正 后可 作 为光疗或换血的依据。
改良 J- G 法 等, 微 量法 用 末 稍 血 测 分钟内在足跟 部位用 抗凝毛 细玻 管采 归系 数 b = 1. 1068 ( t = 15. 1616, P <
定, 较适 用 于 新生 儿。但 我 们 发现 用 末梢血 50~ 60Ll, 经 12 000 转/ min 离心 0. 01) , 截距 a= 17. 5214, 回归方程为 Y
2 王伊敏, 钱谷生, 马凤琳. 束 支传导阻滞 患者 Q-T、J-T 离散度 与 室性心律失常的关系. 心电图学杂志, 1998, 17( 3) : 148.
3 刘 霞, 张娟赢, 徐以惠, 等. 心肌缺 血与 Q-T 与 Q-Tc 间期的 动 态变化. 临床心电学杂志, 1999, 8( 1) : 17. 7.
二、结 果
一、对象和方法
39 例新生 儿, 总 胆红 素 用 微量 法
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
第十一页，共30页。
七．相关知识与临床意义
胆红素空间结构示意图
胆红素的特有结构赋予其亲
脂疏水的性质, 易自由透过细胞 膜进入血液。
第十二页，共30页。
O
H
O
N
H
C
O
HN
N H
NH O
O C
HO
七．相关知识与临床意义
1. 胆红素主要源于血红素的降解
读取各管吸光度，然后与相应的胆红素浓度绘制标准曲线
第七页，共30页。
四．操作步骤
2．总胆红素的测定：取3支试管（总胆红素2组平行，空白 管1管），标明总胆红素管和空白管，然后按下表操作
试剂(ml)/管别
总胆红素管
血清
0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂
1.6
氨基苯磺酸溶液
—
重氮试剂
0.4
混匀，总胆红素管置室温15分钟，按下表继续操作：
❖ 咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的pH值同 时兼有加速作用。(叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定 管的偶氮反应。) 最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮 胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到 598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其他红色与棕色色素产生的 吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。最后形成的绿 色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因对氨基苯磺酸之间形成的黄 色色素混合而成。
1. 试述改良J-G法测定血清胆红素的基本原理。 2. 试述胆红素代谢的基本过程以及血清胆红素测定在黄疸鉴 别诊断中的意义。
第三十页，共30页。
胆红素过多，超过了肝细胞摄取、转化和排泄胆红素的能力， 造成血液中未结合胆红素浓度显著增高所致。
血清胆红素的检验及临床意义
血清胆红素的检验及临床意义发表时间：2011-04-18T10:10:51.360Z 来源：《中外健康文摘》2011年第1期作者：陈建杰[导读] 目的探讨血清胆红素的检验临床意义。
陈建杰 (黑龙江省虎林市云山农场职工医院 158420)【中图分类号】R185 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)01-0174-02【摘要】目的探讨血清胆红素的检验临床意义。
临床意义判断有无黄疸及黄疸的程度；判断黄疸的类型；结合血清胆红素分类判断黄疸类型。
Bδ／Tbil百分比升高是指示急性肝炎恢复良好的可靠指征。
肝移植后动态监测Bδ有助于排斥反应的早期诊断。
【关键词】血清胆红素检验临床意义血清胆红素是体内衰老红细胞裂解而释放出的血红蛋白而产生的，包括间接胆红素和直接胆红素。
间接胆红素通过血液运至肝脏，通过肝细胞的作用，生成直接胆红素。
1咖啡因法1.1.原理本法又称改良Jendrassik-Grof法。
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素，在同样条件下，游离胆红素须有加速剂使胆红素氢键破坏后与重氮试剂反应，咖啡因、苯甲酸钠为加速剂，醋酸钠维持pH同时兼有加速作用。
维生素C(或叠氮钠)破坏剩余重氮试剂，中止结合胆红素测定管的偶氮反应。
加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530 nm转移到598 nm，非胆红素的黄色色素及其他红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略而不计，使灵敏度和特异性增加。
最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
1.2.试剂(1)咖啡因试剂：无水醋酸钠56 g，苯甲酸钠56 g，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)1.0 g溶于约700 m1的蒸馏水中，再加入咖啡因37.5 g，搅拌至完全溶解，然后加蒸馏水稀释至1 000 ml，过滤后置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。
(2)碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)320 g，加蒸馏水溶解并稀释至1 000 ml，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。
血清总胆红素微分光谱法测定
血清总胆红素微分光谱法测定
孙明洪
【期刊名称】《江西医学检验》
【年(卷),期】1996(014)002
【摘要】目前检测血清总胆红素．实验室广泛采用改良J-G法及BOX法。
直接分光光度法测定胆红素主要受血清中HbO2等色索的严重干扰。
我们根据微分光谱法的原理，用国产723型分光光度计直接比色测定血清总胆红素．计算其一阶导数的近似值。
能有效地清除Hb等色素的干扰。
【总页数】3页(P12-14)
【作者】孙明洪
【作者单位】新钢公司第一医院，336513
【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.微分脉冲催化极谱法及等离子发射光谱法测定奶粉中铬含量 [J], 王静;孙涛;张景东
2.KHC3法测定血清总胆红素的方法学评价 [J], 杨晓东;卢建明
3.2,4-二氯苯胺法测定血清总胆红素与结合胆红素 [J], 徐坚强;张恩;谢服役
4.亚硝酸盐氧化法测定血清总胆红素的技术性能评价 [J], 齐杰玉;郭爱芹;刘玮
5.微分紫外吸收光谱法测定复方磺胺甲基噁唑片剂的含量 [J], 张建朝;马牧;李保家;赵桂新
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两种稳定单一重氮试剂测定血清胆红素的方法
两种稳定单一重氮试剂测定血清胆红素的方法胡望平;林珊【期刊名称】《人民军医》【年(卷),期】1992()10【摘要】长期以来,胆红素测定的对氨基苯磺酸重氮试剂均需临用前配制,剩余丢弃。
本文介绍两种稳定单一重氮试剂,对血清胆红素测定简便实用。
一步法为单一胆红素试剂可稳定30多天,二步法把单一重氮试剂与加速剂分开,可稳定90～100d,并可按用J-G法。
材料与方法【一步法】一、试剂 1.总胆红素试剂:取枸橼酸42g、脲36g、无水对氨基苯磺酸346.4 mg、亚硝酸钠34.5 mg、1mol/L盐酸0.14ml、乳化剂OP 0.1ml,溶于蒸馏水并加至200ml,置棕色瓶4℃贮存。
2.直接胆红素试剂;取无水对氨基苯磺酸1039mg、亚硝酸钠6.9mg、1mol/L盐酸0.14 ml,溶于蒸馏水并加至200 ml,贮存于棕色瓶内置4℃冰箱。
3.标本空白试剂:取枸橼酸42g、脲36g、无水对氟基苯磺酸348mg、1mol/L盐酸0.10ml、乳化剂OP0.1ml,溶于蒸馏水并加至200ml。
【总页数】2页(P64-65)【关键词】血清;胆红素;测定;单一重氮试剂【作者】胡望平;林珊【作者单位】南京军区福州总医院生化科【正文语种】中文【中图分类】R446.112【相关文献】1.纳氏试剂两种配制方法对水质氨氮测定的影响比较 [J], 邓向红2.稳定单一重氮试剂显色法测定GGT [J], 胡望平;梁小亮3.单一试剂测定血清胆红素探讨 [J], 王先鸣;韩平治4.钒酸氧化法与J—G法,重氮试剂法测定血清胆红素的比较 [J], 李之珍;胡晓武5.钒酸氧化法与J-G法、重氮试剂法测定血清胆红素的比较 [J], 李之珍;胡晓武因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血清总胆红素和结合胆红素的测定
重氮反应法
方法
胆红素氧化酶法 直接分光光度法
改良J-G法测定血清总胆 红素和结合胆红素
原理
非结合胆红素
咖啡因-苯甲酸钠 重氮试剂 偶氮胆红素
结合胆红素
总胆红素
碱性酒石酸钠
偶氮胆红素
试剂
• 咖啡因-苯甲酸钠试剂 • 碱性酒石酸钠溶液 • 对氨基苯磺酸溶液 • 重氮试剂 • 叠氮钠溶液 • 胆红素标准液(100μmol/L)
充分混匀，波长600nm，对照管调零。
校正曲线的制作
加入物(ml) 管 号
0
胆红素标准贮存液 (100μmol/L) 同一稀释用血清 相当于胆红素浓度 -0.2 0
1
0.1 0.4 20
2
0.2 0.3 40
3
4
5
0.3 0.4 0.2 0.2 0.1 60 --
80 100
充分混匀，按总胆红素测定法操作。用0号管调零。
血清总胆红素结合胆红素和未结合胆红
素的概念
胆红素的代谢
1
4
结合胆红素和未结合胆红素的概念
直接胆红素
重氮试剂
未经肝脏 处理的胆 红素 间接胆红素
经过肝脏处理,与葡萄 糖醛酸(少量与硫酸) 结合后的胆红素
二、实验:
血清总胆红素和结合胆 红素的测定
Thanks
操作
• 样品的测定
• 校正曲线的制作
样品的测定
加入物(ml) 血清 总胆红素管 结合胆红素管 对照管 0.2 0.2 --0.4 0.05 1.55 1.2 0.2 1.6 0.4 ---1.2
咖啡因-苯甲酸钠 1.6 对氨基苯磺酸 -重氮试剂 0.4 37℃水浴10min 叠氮钠 -咖啡因-苯甲酸钠 -碱性酒石酸 1.2
改良J—Grof法测定血清直接胆红素的数学校正
改良J—Grof法测定血清直接胆红素的数学校正
张建新
【期刊名称】《分析化学》
【年(卷),期】1998(26)7
【摘要】提出了改良Ｊ－Ｇｒｏｆ法血清直接胆红素测定值的数学校正方法，该方法对胆红素标准血清和控制样品的分析结果与目前植十分一致，对样品的分析与自动生化分析仪的分析结果高度相关，为血清直接胆红素的准确测定提供一个可靠的方法。
【总页数】4页(P872-875)
【作者】张建新
【作者单位】南京铁道医学院预防医学系
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.两点终点法测定血清直接胆红素 [J], 张旭;顾华庆;戴强
2.改良化学氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的评价 [J], 陈新宇;胡云良;丁红香
3.生理盐水与人血清做稀释剂对钒酸盐氧化法测定直接胆红素的影响 [J], 牛敏;陈汉芳;彭萍;刘岚剑
4.新型化学氧化法测定血清直接胆红素分析 [J], 张仲全
5.亚硝酸盐氧化法测定血清直接胆红素的临床研究 [J], 黄文渊
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实验十六血清胆红素测定
（改良J-G法）
【目的】
1.熟悉血清胆红素测定的原理和方法；
２.掌握胆红素测定的正常参考范围及临床意义。
【原理】
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成偶氮胆红素；未结合胆红素需要在加速剂（咖啡因-苯甲酸钠）作用下，分子内氢键破坏后，才能与重氮试剂反应生成偶氮胆红素。
醋酸钠缓冲液保持反应的pH，反应完成后加入终止试剂（叠氮钠）以破坏重氮试剂，最后加入碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，从标准曲线查找总胆红素和结合胆红素含量。
【器材】
试管及试管架、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、秒表。
【试剂】
1．咖啡因试剂
称取无水水醋酸钠，苯甲酸钠，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2），溶于约500ml去离子水中，再加入咖啡因，搅拌使溶解（加入咖啡因后不能加热溶解），用去离子水补足至1L，混匀。
过滤后置棕色瓶，室温保存。
2．碱性酒石酸钠溶液
称取氢氧化钠，酒石酸钠（Na2C4H4O6·2H2O），用去离子水溶解并补足至1L，混匀。
置塑料瓶中，室温保存。
3．5g/L亚硝酸钠溶液
称取亚硝酸钠，用去离子水溶解并定容至100ml，混匀，置棕色瓶，冰箱保存，稳定期不少于2周。
若发现溶液呈淡黄色，应废弃重配。
4．5g/L 对氨基苯磺酸溶液
称取对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H2O），溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。
5．重氮试剂
临用前取上述亚硝酸钠溶液和对氨基苯磺酸溶液20ml，混匀即成。
6．L叠氮钠溶液
7．胆红素标准液
（1）目前一般用未结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：
收集无溶血、无黄疸、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用过滤器过滤。
取过滤后的血清1ml，加入新鲜L NaCl溶液24ml，混合。
在414nm波长，1cm光径，以L NaCl溶液调零点，其吸光度应小于；在460nm的吸光度应小于。
（2）配制标准液的胆红素须符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，光径±，波长453nm，摩尔吸光系数应在60700±1600范围内；改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866。
（3）胆红素标准贮存液（171μmol/L）：
准确称取符合要求的胆红素10mg，加入二甲亚砜1ml，用玻璃棒搅拌，使成混悬液。
加入L碳酸钠溶液2ml，使胆红素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，以稀释用血清洗涤数次并入容量瓶中，缓慢加入L盐酸2ml，边加边摇（勿用力摇动，以免产生气泡）。
最后以稀释血请加至刻度。
配制过程中应尽量避光，贮存容器用黑纸包裹，置4℃冰箱3天内有效，但要求配后尽快作校正曲线。
【操作】
取试管3支，按下表操作：
表3-20 改良J-G法测定血清胆红素
加人物(m1)总胆红素管结合胆红素管空白管
血清
咖啡因苯甲酸钠试剂-
对氨基苯磺酸--
重氮试剂-
混匀，准确1分钟
叠氮钠--
咖啡因苯甲酸钠试剂--
室温10分钟
碱性酒石酸钠
混匀，600nm波长比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
从标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
【标准曲线制作】
取试管6支，编号，按下表操作：
表3-21 胆红素标准曲线的绘制
加人物(m1)对照管12345
胆红素标准贮存液－
稀释用血清-
相当于胆红素浓度（μ
010*******
mol/L）
混匀（不可产生气泡），按总胆红素测定法操作。
每一浓度做3个平行管，用对照管调零，读取各管吸光度，以各浓度吸光度均值为纵坐标，以相应的胆红素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
【正常参考范围】
血清总胆红素～μmol/L
血清结合胆红素（1分钟） 0～6μmol/L
【临床意义】
血清总胆红素测定可判断有无黄疸及反映黄疸的程度。
总胆红素在～μmol/L时为隐性黄疸；超过μmol/L时，肉眼可见、皮肤、粘膜、巩膜黄染，称显性黄疸。
血清总胆红素和结合胆红素同时测定，其百分比可用于鉴别黄疸类型。
溶血性黄疸时，血清总胆红素升高，以为结合胆红素升高为主，结合胆红素占总胆红素的20%以下；肝细胞黄疸时，结合胆红素占总胆红素的35%以上；阻塞性黄疸时，结合胆红素升高更明显，占总胆红素的50%以上。
再生障碍性贫血及数种继发性贫血（主要由癌或慢性肾炎引起），血清总胆红素减少。
【结果及分析】
【思考题】
1. 简述血清胆红素测定的原理。
2. 血清胆红素测定中破坏氢键的组分是什么
3. 肝细胞性黄疸时，血清中何种胆红素升高。