寄生虫实验报告——环卵沉淀试验
寄生虫实验检验技术
实验检验技术一、病原检查1.粪便检查（1）直接涂片法：适用于蠕虫卵、原虫检查（活滋养体检查和包囊的碘液检查）。
（2）浓集法1）加藤厚涂片法。
2）沉淀法：自然沉淀法主要用于蠕虫的检查、离心沉淀法、倒置沉淀法适于比重较大的蠕虫卵检查、汞碘醛离心沉淀法适于原虫滋养体、包囊、蠕虫卵和幼虫的检查；醛醚沉淀法适于蠕虫卵和原虫包囊的检查。
3）漂浮法：饱和盐水漂浮法适于各种线虫卵、带绦虫卵等检查；硫酸锌离心漂浮法适于原虫包囊、多数蠕虫卵等检查；蔗糖溶液漂浮法适于原虫包囊、卵囊或孢子囊检查。
4）尼龙袋集卵法：主要适于血吸虫卵检查。
（3）虫卵计数法1）改良加藤厚涂片法：适于各种蠕虫卵计数。
2）小管浮聚计数法：适于大多线虫卵计数（4）毛蚴孵化法：适于血吸虫病原体检查。
（5）钩蚴培养法：检出率较直接涂片法高7倍。
（6）带绦虫孕节检查法：肉眼可观察。
（7）常用原虫检查染色法：劳氏酸性品红-固绿染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫检查、福氏快速苏木精染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊检查、金胺-酚染色法和改良抗酸染色法适于隐孢子虫卵囊检查。
2.肛门外检查（1）肛门周围蛲虫虫卵检查：有透明胶纸法、棉签拭子法，适于蛲虫、带绦虫检查。
（2）肛门周围蛲虫成虫检查：在肛门附近发现白色小虫，可进一步鉴定。
3.血液及骨髓检查（1）检查微丝蚴：①新鲜血片检查法；②厚血膜法；③活微丝蚴浓集法；④离心浓集法。
（2）检查疟原虫：①新鲜血片检查法：采血、制片（薄血膜，厚血膜）、固定、染色；②定量血沉棕黄色层（QBC）检查法；③疟原虫计数法。
4.其他排泄物与分泌物检查（1）痰液检查：适于肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、蛔蚴等检查，方法有：直接涂片法、消化沉淀法。
（2）尿液和鞘膜积液检查：适于检查班氏微丝蚴，可用离心法。
（3）阴道分泌物检查：适于检查阴道毛滴虫等，可用直接涂片法、悬滴法、涂片染色法。
（4）前列腺液检查：适于检查男性泌尿生殖道的阴道毛滴虫。
寄生虫免疫
土源性线虫病：指不需要中间宿主，其中卵和幼虫在外界发育到感染期后直接感染人的线虫。
食物源性寄生虫病：因生食或半生食含有感染期寄生虫的食物而感染的寄生虫病。
抗原的纯化：通过物理的化学的方法，利用寄生虫的物理化学特性进行组分分离的过程。
纯化的方法：凝胶层析、离子交换层析、亲和层析凝胶层析：凝胶层析是一种以分子大小为基础的分离技术，凝胶中每个颗粒的细微结构的小孔使被分离组分在流经途径上出现差别，大分子物质首先从孔外经过，首先被洗脱出来，其次是较小的组分，最后是小分子物质。
（常用载体：交联葡聚糖、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。
）离子交换层析：是利用离子交换剂作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的层析方法。
离子交换层析原理：依靠静电吸引溶液中带相反电荷的离子结合利用待分离的各种蛋白质的等电点或所带电荷的不同而引起的与载体结合力不同和进行区分。
离子交换层析过程：起始、吸附、解脱、完成亲和层析(affinity chromatography)：将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂有亲和力的蛋白质就被吸附而被滞留在层析柱中。
那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附直接流出，从而与被分离的蛋白质分离，然后选用适应的洗脱液改变条件将被结合的蛋白质洗脱下来亲和层析原理：亲和层析是一种吸附层析抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的，所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在的液相中的相应抗体（或抗原）选择性的结合在固相载体上借以与液相中的其它蛋白质分开达到分离提纯的目的。
理想载体的基本条件：1、不溶于水，但高度亲水2、惰性物质，非特异性吸附少3、具有相当量的化学基团可供活化4、理化性质稳定5、机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速6、通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能够自由通过7、能抵抗微生物和醇的作用固相载体包括皂土、玻璃微球、纤维素、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等在缓冲液离子浓度大于0.05mol/l时对蛋白质几乎没有非特异性吸附。
寄生虫实验报告doc
寄生虫实验报告篇一：寄生虫读书笔记实验报告医学寄生虫学读书笔记实验报告作者：周茜学号：0专业：中西医临床全科1班读书笔记章节一医学寄生虫学绪论医学寄生虫学包括医学蠕虫学、医学原虫学和医学节肢动物学3个部分。
第一节寄生虫生物学1、生物伙伴关系根据其利害关系的不同，可分为：①共生②共栖③寄生2、寄生虫与宿主：受益的一方称为寄生物，受到损害的一方称为宿主。
3、命名：寄生虫的命名按照生物进化规律和亲缘关系进行，其拉丁名由属名和种名组成，属名在前，种名在后。
4、寄生虫有多种分类方式，按其与宿主的关系可分为：①专性寄生虫②兼性寄生虫③偶然寄生虫④机会致病寄生虫⑤体内寄生虫⑥体外寄生虫⑦长期性寄生虫⑧暂时性寄生虫5、寄生虫由于长期过寄生生活，丧失了独立生活的能力，因而必须选择性地寄生于特定宿主，这种现象称为寄生虫的宿主特异性。
根据寄生虫不同生长时期所寄生对象的不同，宿主可以分为：①终宿主②中间宿主③保虫宿主④转续宿主6、寄生虫生活史：指寄生虫完成一代生长发育繁殖的全过程和必要的条件。
7、寄生虫繁殖方式包括有性繁殖和无性繁殖。
第二节寄生虫与宿主间的相互关系1、寄生虫对宿主的致病作用：夺取营养、机械性损伤、毒性作用、免疫损伤2、宿主对寄生虫的抗感染免疫包括固有免疫和适应性免疫。
（一）固有免疫：机体可以通过生理屏障抵御某些寄生虫入侵，或者通过体内的吞噬细胞、嗜酸性粒细胞、自然杀伤细胞、细胞因子和补体等机制对入侵的寄生虫发挥杀伤作用。
（二）适应性免疫：寄生虫感染的适应性免疫特点①寄生虫抗原复杂，成分繁多，具有种、株、期的特异性；②感染形成的免疫力一般不完全也不持久；③适应性免疫应答机制复杂，参与的免疫效应产物有IgG、IgM、IgA、IgE（尤其是IgE）及细胞因子等；④ADCC效应的杀虫驱虫机制在抗寄生虫感染中的作用尤为重要；⑤超敏反应机制参与免疫应答过程。
寄生虫感染的适应性免疫应答①消除性免疫②非消除性免疫寄生虫的免疫逃避现代研究表明寄生虫能有效地逃避宿主致死性攻击，从而在宿主体内存活，其机制可能与寄生虫的抗原变异、抗原伪装、抑制或直接破坏宿主的免疫应答、解剖位置的隔离等因素有关。
牛血吸虫病的诊断、治疗及预防
疫病防治ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．１１，２０２３牛血吸虫病的诊断、治疗及预防方德成天峻县木里镇畜牧兽医站，青海天峻８１７２９９摘 要 牛血吸虫病是一种由血吸虫感染引发的传染性疾病，具有传播速度快、致死率高等特征，可严重影响肉牛健康生长。
疫病检测部门可根据牛血吸虫病的发病经过和临床表现，通过实验室诊断法，确定肉牛是否感染了血吸虫病。
同时，养殖人员应结合养殖区的规模和实际情况，制定科学合理的预防方案，如实施封洲禁牧措施、建设沼气池、加大血吸虫病的宣传力度、制定严格合理的管理制度和加强饲养管理等方式，有效降低血吸虫病的发病率。
关键词 牛血吸虫病；诊断；治疗；预防措施ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２３．１１．０１８ 引言牛血吸虫病又被称为日本分体吸虫病，主要是由日本血吸虫寄生引发的一种传染性疾病。
该病主要在我国的长江流域及以南地区流行，具有传播速度快、致死率高等特征，可严重影响肉牛健康生长。
该寄生虫的中间宿主主要是钉螺。
牛血吸虫病的发病时间有一定的季节性，夏秋季气温偏高的时候最易发生，并且该病对犊牛的危害更大，因为犊牛的免疫力弱，一旦感染上，死亡率高达９０％。
血吸虫的成虫会寄生在患病牛的主静脉和肠系膜小静脉内，随着时间的推移会产生大量虫卵，这些虫卵会顺着血液进入到病牛的其他组织器官中从而引起病变，且会随着病牛的粪便排出体外，威胁其他健康牛的生命安全。
发病牛群的临床表现感染血吸虫病的肉牛有慢性和急性２种情况。
其中，慢性感染的主要临床特征为结肠发生病变、肠道变窄等；急性感染的主要临床症状为发高烧、肝脏明显肿大、粪便带血。
血吸虫病的发病后期会表现出肝硬化、腹中严重积水、静脉扩张、贫血等，对患病牛的粪便进行检测方可最终确诊。
大多数动物感染血吸虫病的临床症状都相似，其中牛感染的情况最为严重。
病理变化通过观察发现，病死肉牛消瘦，供血严重不足，将其进行解剖，观察到其皮下脂肪严重萎缩，肝脏肿大且上面有灰白色或黄色的沙粒状结节。
寄生虫名词解释
昆虫的孳生地：指的是昆虫成虫产卵及幼虫发育的地方。
成蚊的生殖营养周期：指蚊每次从吸血到产卵的周期，分三个阶段：①寻找宿主吸血，②胃血消化和卵巢发育，③寻找孳生地产卵。三个阶段所需的时间决定于胃血消化和卵巢发育的速度，并受栖息场所的温度和湿度的影响。
逆行性感染：蛲虫在人体肛周产卵，虫卵可在肛门附近孵化，幼虫经肛门进入肠内寄生部位发育成成虫，这种感染称逆行性感染。
EPG：每克粪便中ຫໍສະໝຸດ 虫卵数，可以反映人体感染寄生虫的严重程度。
微丝蚴的夜现周期性：丝虫的微丝蚴在外周血液中夜多昼少的现象。
虫卵肉芽肿：由免疫反应引起的，在虫卵周围出现淋巴细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、纤维母细胞聚集。
环卵沉淀试验（COPT）：是以血吸虫卵为抗原的特异免疫血清学试验，当血吸虫卵内毛蚴分泌的抗原物质经卵壳微孔渗出与血吸虫病人血清中相应抗体结合时，在虫卵周围形成特异性的沉淀物，即为阳性反应，反之为阴性反应。
异位血吸虫病：血吸虫病寄生于门静脉以外的其他部位时对机体产生的损伤。
何博礼现象：血吸虫感染的急性虫卵结节的虫卵周围有抗原抗体复合物形成，在光镜下呈火焰状放射状排列，称为~。
全变态：生活史阶段在卵之后又幼虫、蛹、成虫等期，其特点是要经过一个蛹期，各期在外部形态、生活习性差别显著。
机械性传播：节肢动物对病原体的传播只起携带输送的作用。
生物性传播：病原体在节肢动物内经历了发育、增殖或发育和增殖的阶段，才能传播到新的宿主。
昆虫的变态：昆虫从幼虫变为成虫要经过外部形态、内部结构、生理功能、生活习性及行为和本能上的一系列变化，这些变化过程的总和，称~
寄生虫实验报告——环卵沉淀试验
寄生虫实验报告实验室：形态×教师姓名：×××实验日期：年月日学生姓名：×××环卵沉淀试验（Circumoval precipitin test, COPT）【实验原理】COPT是以血吸虫虫卵为抗原的特异性免疫学试验。
虫卵内的毛蚴成熟后能分泌可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA），SEA自卵壳微孔渗出，附于卵壳表面，与待检血清内特异性抗体相结合，在虫卵周围形成抗原—抗体复合物沉淀，镜下可见泡状或指状沉淀物沉积在虫卵表面，此为阳性反应。
在正常人血清中，因无相应抗体存在，在虫卵周围不出现特异性沉淀物，即为阴性。
根据环沉率（是指100个虫卵中出现沉淀物的虫卵数，即阳性虫卵数/观察虫卵数×100%）可判定待检血清的COPT反应是否为阳性，根据所形成的沉淀物大小可判定反应强度。
【材料与方法】实验材料：血吸虫虫卵冻干粉，待检血清，载玻片，盖玻片，注射器针头，滴管，石蜡，刀，蜡盒，酒精灯，显微镜，吸水纸实验方法：1、用滴管滴加一小滴待检血清于洁净载玻片上，用注射器针头挑取少许血吸虫冻干卵粉末，将其与血清充分混匀；2、覆盖盖玻片，用石蜡密封四周，防止水分蒸发和细菌孳生、繁殖；3、室温下静置约1~1.5h以后，镜检观察、记录结果。
实验过程注意事项：①玻片应清洁无油，手持玻片时勿将手指接触玻片表面，以避免油渍污染。
②滴加待检血清的量应当适宜，若血清过少，则易致漏检。
若血清过多，则覆盖盖玻片时血清易在载玻片上铺展开来，使用石蜡密封时不易操作，此时可以使用吸水纸吸去盖玻片周围的液体再进行密封。
③挑取冻干虫卵粉末少量即可，过多则导致虫卵堆叠，镜检时不易观察和做出判断。
使用的注射器针头应保持干燥，否则会粘取大量虫卵粉末，可用吸水纸擦拭注射器针头再使用。
④混匀虫卵和血清时不要过度用力，以免造成虫卵破裂。
⑤石蜡密封要完全，以免水分蒸发，影响镜检。
寄生虫整理
一.蠕虫蛔虫致病1.幼虫移行造成的组织机械性损伤及变态反应移行经肺时,肺部点状出血,炎症细胞浸润和嗜酸性粒细胞集聚。
患者出现咳嗽、血痰、发热、皮肤荨麻疹。
具一过性特点。
——称肺蛔虫症（Loeffler综合症）临床常见蛔虫性哮喘痰检查见嗜酸性粒细胞或蛔蚴2、成虫1）掠夺营养影响吸收常见临床表现：患者常呈间歇性脐周疼痛、食欲不振、恶心、呕吐、消化不良等儿童常见神经精神症状，如惊厥、夜惊、磨牙。
重度感染致发育障碍2）引起超敏反应者出现荨麻症、皮肤瘙痒、血管神经性水肿等（IgE介导）3）并发症胆道蛔虫症（64%）最常见蛔虫性肠梗阻，儿童多见蛔虫性胰腺炎、阑尾炎、蛔虫性肠穿孔4）异位寄生蛔虫性胸膜炎、肝蛔虫病、蛔虫卵性肉芽肿、气管、支气管蛔虫病，眼底、鼻腔、耳道蛔虫症等诊断1、粪便直接涂片法（首选）(direct fecal smear)2、虫卵沉淀法、浓聚法3、饱和盐水浮聚法（2、3可以提高检出率）4、驱虫治疗性诊断流行呈世界性分布，我国流行亦广泛1、传染源：病人、带虫者2、传播途径和方式：通过污染的食物或水源，经口感染3、感染率：农村高于城市，儿童高于成人4、感染季节：与当地气温、生产和生活活动关系密切首选用药：阿苯哒唑(albendazole) 其次：甲苯哒唑、伊维菌素蛲虫致病：1.肛门、会阴部皮肤瘙痒及炎症或湿疹常见症状：烦躁不安、失眠、食欲减退、消瘦、夜间磨牙及夜惊因瘙痒抓破皮肤引起继发性感染虫体附着处致肠粘膜轻度损伤，出现消化道功能紊乱及一般肠道症状儿童长期反复感染不愈，影响身心健康2.异位寄生损害：蛲虫性阑尾炎泌尿生殖系统炎症尿道炎、膀胱炎、阴道炎、子宫内膜炎、输卵管炎、卵巢炎异位寄生处引起以虫体或虫卵为中心的蛲虫性肉芽肿，常误诊为肿瘤或结核病其次：肝、肺、脾等诊断查虫卵——肛周用透明胶纸粘贴法（清晨）（ellophane-tape impression)查成虫——肛周捉成虫（晚入睡后）流行肛门——手——口直接感染（自身反复感染）感染期卵散落在衣裤、被褥、玩具、食物等造成间接接触感染用药：阿苯哒唑（首选）甲苯哒唑蛲虫膏（外用）钩虫致病1、幼虫所致病变及症状1）钩蚴性皮炎俗称：粪毒、粪触块、着土痒、地痒疹（ground itch）接触部位皮肤烧灼针刺感，奇痒，后出现充血斑点或丘疹，1-2天成水疱，抓破可继发感染2）呼吸道肺部损害（一过性特征）幼虫移行经肺，穿破微血管，引起出血及炎性细胞浸润。
寄生虫学实验诊断技术(4)
寄生虫学实验诊断技术(4)阴道后穹窿、子宫颈及阴道壁上取分泌物，然后在有1～2滴生理盐水的载玻片上作涂片镜检，可发现活动的虫体。
天气寒冷时，应注意保温。
悬滴法：取阴道分泌物置于周缘涂抹一薄层凡士林盖片上的生理盐水中，翻转盖片小心覆盖在具凹孔的载玻片上，稍加压使两片粘合，液滴悬于盖片下面，镜检。
（四）其它器官组织检查1．骨髓穿刺主要检查杜氏利什曼原虫无鞭毛体。
一般常作髂骨穿刺，患者侧卧，露出髂骨部位。
视年龄大小，选用17～20号带有针芯的干燥无菌穿刺针，从髂骨前上刺后约1cm处刺入皮下，当针尖触及骨面时，再慢慢地钻入骨内约0.5～1.0cm，即可拔出针芯，接上2ml的干燥注射器，抽取骨髓液。
取少许骨髓液作涂片；甲醇固定，同薄血膜染色法染色，油镜检。
2．淋巴结穿刺⑴利什曼原虫：检出率低于骨髓穿刺，但方法简便、安全，且患者经治疗后，淋巴结内原虫消失较慢，故仍有一定价值。
一般选腹股沟部，先将局部皮肤消毒，用左手拇指和食指捏住一个较大的淋结，右手取干燥无菌的6号针头刺入淋巴结，此时淋巴结组织液自能进入针内。
稍待片刻，拔出针头，将针头内少量的淋巴结组织液注于载玻片上，作涂片染色检查。
也可用摘除的淋巴结的切面做涂片，染色后镜检。
⑵丝虫成虫：可用注射器从可疑的淋巴结节中抽取成虫，或剖检摘除的结节寻找成虫，也可作病理组织切片检查。
3．肌肉活检⑴旋毛虫幼虫：用外科手术从患者的腓肠肌或肱或股二头肌取米粒大小的肌肉一块，置于载玻片上，加50％甘油滴，盖上另一载玻片，均匀用力压紧，低倍镜下观察。
取下肌肉须立即检查，否则幼虫变得模糊，不易检查。
⑵猪囊尾蚴：摘取肌肉内的结节，剥除外层纤维被膜，在2张载玻片间压平、镜检。
也可经组织固定后作切片染色检查。
4．皮肤检查疥螨，蠕形螨，利什曼原虫等。
⑴疥螨：参看“疥螨和疥疮”！一节。
⑵蠕形螨：参看“蠕形螨和蠕形螨病”一节。
⑶利什曼原虫：在皮肤上出现丘疹和结节等疑似皮肤型黑热病患者，可选择皮损较明显之处，作局部消毒，用干燥灭菌的注射器，刺破皮损处，抽取组织液作涂片；或用消毒的锋利小剪，从皮损表面剪取一小片皮肤组织，以切面作涂片；也可用无菌解剖刀切一小口，刮取皮肤组织作涂片。
寄生虫学实验诊断技术
寄生虫学实验诊断技术一、病原检查（一）粪便检查粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。
要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时。
如检查肠内原虫滋养体，最好立即检查。
盛粪便的容器要干净，并防止污染与干燥；粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果。
1．直接涂片法用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。
方法简便，连续作3次涂片，可提高检出率。
⑴蠕虫卵检查：滴一滴生理盐水于洁净的载玻片，用棉签棍或牙签挑取绿豆大小的粪便块，在生理盐水中涂抹均匀；涂片的厚度以透过涂片约可辨认书上的字迹为宜。
一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。
应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。
虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有色泽；卵内含卵细胞或幼虫。
⑵原虫检查：1）活滋养体检查：涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。
气温愈接近体温，滋养体的活动愈明显。
必要时可用保温台保持温度。
2）包囊的碘液染色检查：直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理盐水。
如碘液过多，可用吸水纸从盖片边缘吸去过多的液体。
若同时需检查活滋养体，可在用生理盐水涂匀的粪滴附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，再盖上盖片（图21－1）。
涂片染色的一半查包囊；末染色的一半查活滋养体。
图21－1 原虫包囊碘液染色操作方法碘液配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水100ml。
3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前较佳的方法为金胺酚改良抗酸染色法。
对于新鲜粪便或经10％福尔马林固定保存（4℃1个月内）的含卵囊粪便都可用此法染色。
染色过程是先用金胺－酚染色，再用改良抗酸染色法复染。
方法步骤如下：金胺－酚染色法：①染液配制：1g／L金胺－酚染色液（第一液）：金胺0.1g，石碳酸5.0g，蒸馏水100ml；3％盐酸酒精（第二液）：盐酸3ml，95％酒精100ml；5g／L高锰酸钾液（第三液）：高锰酸钾0.5g，蒸馏水100ml。
②染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，10～15分钟后水洗；滴加第二液，1分钟后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置荧光显微镜检查。
寄生虫实验技术
其它器官组织检查
5. 皮屑检查：疥螨。用刀片刮取健康部和病患交界 皮屑检查：疥螨。 处的痂皮进行镜检（需出血）。 处的痂皮进行镜检（需出血）。 直接检查法：置平皿或黑纸上，曝晒或加热（ 直接检查法：置平皿或黑纸上，曝晒或加热（4050℃ ）， 分钟后， ℃ ），30-40分钟后，移去皮屑检查白色虫体。 分钟后 移去皮屑检查白色虫体。 显微镜镜检：置载玻片，滴加煤油、 ％ 显微镜镜检：置载玻片，滴加煤油、10％NaOH、 、 液体石蜡， ％甘油后， 液体石蜡，50％甘油后，上加另一载玻片按压后检 查。 虫体浓集法：置试管中，加入10％ 虫体浓集法：置试管中，加入 ％ NaOH后过夜或 后过夜或 加热使皮屑溶解，而后静置或离心（ 加热使皮屑溶解，而后静置或离心（2000rpm， ， 5min）使虫体沉淀后镜检。 ）使虫体沉淀后镜检。
免疫学方法
带绦虫孕节检查法
绦虫节片用清水洗净，置于两载玻片之间， 绦虫节片用清水洗净，置于两载玻片之间， 轻轻压平，对光观察内部结构， 轻轻压平，对光观察内部结构，并根据子宫 分支情况鉴定虫种。 分支情况鉴定虫种。 也可用注射器从孕节后端正中部插入子宫内 徐徐注射炭素墨汁或卡红， 徐徐注射炭素墨汁或卡红，待子宫分支显现 后计数。 后计数。
排泄物与分泌物等的检查
2．十二指肠液和胆汁：检查贾第鞭毛虫滋养体、 ．十二指肠液和胆汁：检查贾第鞭毛虫滋养体、 华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等； 华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等； 可滴于载玻片上加盖片后直接镜检。 可滴于载玻片上加盖片后直接镜检。 为提高寄生虫检出率，可加生理盐水稀释搅拌后， 为提高寄生虫检出率，可加生理盐水稀释搅拌后， 分装离心管， 离心5～ 分钟 分钟， 分装离心管，以2000rpm离心 ～10分钟，取沉渣 离心 涂片镜检。如过于粘稠，先加10％ 涂片镜检。如过于粘稠，先加 ％NaOH消化后再 消化后再 离心。 离心。
寄生虫病常免疫学诊断
寄生虫病常用的免疫学诊断方法刘凡@ 2006-04-26 12:53寄生虫病目前还是危害我国人民身体健康的重要疾病。
根据近年的全国调查报告，共发现我国有人体寄生虫56种，主要为肠道寄生虫。
其中半数以上为不常见虫种，尚不包括疟疾、黑热病、血吸虫、丝虫以及弓形虫、卡氏肺孢子虫、巴贝西虫和锥虫等重要寄生虫。
人均寄生虫感染率高达62.6%。
估计全国有7亿多人感染寄生虫，最多的1人同时感染9种寄生虫，特别在农村人口中。
因此对寄生虫的检验工作是一项非常重要和基本的技术。
对寄生虫的检验不仅要能熟悉各种寄生虫的生活史及它们各个时期的形态特征，而且要求掌握对各种标本的处理技术(如取材、制片、染色、镜检)及必要的免疫学等检验方法。
目前,寄生虫诊断技术主要包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查三个方面。
实际应用中免疫学检查比较高效和准确，几乎所有的免疫学方法均可用于寄生虫病的诊断，但是各有各的优缺点，各有各的应有条件，主要而且常用的免疫检验方法有：1.环卵沉淀试验(COPT)：这是国内外公认的用以诊断血吸虫病的有效血清学方法之一。
现在该法已趋向完善，不但提高了它的诊断效果，而且使该法更适合于现场推广应用。
虫卵的处理有甲醛处理冰冻干卵抗原；热处理超声干卵抗原等。
方法有双面胶纸条法、蜡封片法、塑料管、薄膜抗原片COPT，聚乙烯醇缩甲醛氯仿COPT(PVF-COPT)等，均有实用价值，已经作为基本消灭和消灭血吸虫病地区首先考虑应用的血清免疫学诊断方法。
2.间接红细胞凝集试验：已用于多种寄生虫病的诊断和流行病学调查。
可分为间接血凝(IHA)，反向间接血凝(RIHA)，间接血凝抑制试验(IHAI)，反向间接血凝抑制试验(RIHAI)，可以检测抗原或抗体，有较高的敏感性和一定的特异性。
单克隆抗体的应用使敏感性和特异性有所提高。
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)：目前国外ELISA已广泛应用于寄生虫病免疫学诊断中。
许多商品试剂盒已被引入国内，但是价格较高。
实验二十 日本血吸虫病实验室诊断技术
实验二十日本血吸虫病实验室诊断技术日本血吸虫病是一种人畜共患的寄生虫病，被世界卫生组织列为全球重点防治疾病之一。
它严重威胁着疫区人和动物的健康和生命安全，给畜牧业带来巨大的经济损失。
在我国，本病严重流行于长江流域及其以南13个省、市、自治区。
家畜如牛、羊、猪感染日本血吸虫后，不仅祸害自身，更重要的是作为人体血吸虫病的主要保虫宿主，为传播本病起了重要作用。
大量调查研究表明，家畜是血吸虫病流行最主要的传染源和污染源。
控制传染源是综合防治疫病、扑灭疫情的重要环节，而控制传染源的前提是确诊传染源。
因此，应用灵敏、快速、经济的诊断方法确诊传染源，己成为日本血吸虫病流行病学调查、疫情监测、以及控制其流行和扑灭疫情必需解决的问题，这样才能做到有的放矢，减少在人力、物力和财力等方面的浪费。
当前对于日本血吸虫病的诊断方法已有大量的报道，根据本科教学的需要，下面介绍几种本科阶段应该掌握或者需要了解的实验室常用的日本血吸虫病诊断方法。
一、实验目的及要求1.熟悉日本血吸虫卵和毛蚴的形态特征。
2.掌握血吸虫病虫卵检查方法。
3.掌握血吸虫病毛蚴孵化方法。
4.了解血吸虫病的几种常见的血清学（免疫学）诊断方法。
二、实验器材(一)病原学诊断1．直接涂片法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：50%甘油水溶液或普通水；（3）器材：载玻片、滴管、盖玻片、显微镜。
2．沉淀法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛、滴管、金属环、载玻片、显微镜（普通离心机）。
3．浮集法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水、饱和食盐水、33％的硫酸锌溶液；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（60目/英寸）、滴管、金属环、载玻片、显微镜。
4.毛蚴孵化法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：pH约6.8-7.2，温度约20-30℃的灭菌自来水(脱氯处理)；（3）器械：专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（40目/英寸）、尼龙筛网兜（260目/英寸）、塑料袋、长颈烧瓶（或三角瓶）（500ml）、脱脂棉、天平、温箱。
寄生虫技术5.14
染色质量影响因素
固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜；
血膜在制备后应尽量在当天染色，一般夏天不 超过48小时，冬天不超过72小时,放置时间越久， 厚血膜越不易脱血，染色效果也差。
镜检
●厚薄血片的检查仍被认为是不可替代的确诊疟
疾的 “金标准”
●显微镜检查是唯一可查到原虫实体并鉴别 4种 人体疟原虫
虫卵计数法
淘虫检查法
试管滤纸检查法
带绦虫孕节检查法
一、肉眼观察
孕卵节片——寄生于动物消化道的绦虫会不断随
宿主粪便排出呈断续面条状(白色)的孕卵节片。 虫体——一些消化道寄生虫有时可随粪便排出。
直接挑出虫体，判明虫种或进一步鉴定。
二、直接涂片法
适合检查：蠕虫卵、原虫包囊和滋养体 优点：简便、快速，为门诊常用方法 缺点：阳性率低、易漏检
三、3种染色法
1.碘液染色法：
染色方法同直接涂片法，仅用碘液代替生理盐水
能较明显显示原虫包囊的形态特征
阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫包囊的常用鉴定方法 2.铁苏木素染色法：
粪便加水调稀涂片
染色前用甲醇固定，染液需使用时临时配置
阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊的鉴定
3种染色法
3.金胺-酚改良抗酸染色法： 涂片：方法同铁苏木素染色法 染色：先金胺-酚染色，再改良抗酸染色复染 镜检：囊内子孢子染成玫瑰红色，月牙形，结构清晰 粪便中非特异性颗粒被染成蓝黑色 应用：隐孢子虫卵囊检查
薄血膜
厚血膜
最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜 厚血膜——确立诊断 薄血膜——确定虫种
制片过程图示
标签
标准的疟疾厚薄血膜片
●厚血膜血量不宜过多或过少
●薄血膜平整,无皱折和空泡，显微镜下红细胞单
环卵沉淀试验基本原理
环卵沉淀试验基本原理宝子，今天咱们来唠唠环卵沉淀试验这个超有趣的东西的基本原理哦。
你知道吗？环卵沉淀试验啊，就像是一场微观世界里的奇妙派对。
这个试验主要是和血吸虫的虫卵有关呢。
血吸虫那可是个小坏蛋，会在人体里捣乱。
这个试验的原理呢，就像是给虫卵找“冤家对头”。
我们先得有血吸虫的成熟虫卵，这些虫卵就像是一个个小小的“城堡”，里面住着血吸虫的胚胎呢。
然后呢，我们把含有抗体的血清加进去。
这血清里的抗体啊，就像是一群英勇的小卫士，它们一直在人体里巡逻，就等着发现像血吸虫虫卵这样的“敌人”。
当把血清和虫卵放在一起的时候啊，就开始热闹起来啦。
如果这个人感染了血吸虫，血清里就会有针对血吸虫的特异性抗体。
这些抗体就像长了眼睛一样，一下子就能发现虫卵这个目标。
然后呢，抗体就会紧紧地黏附在虫卵的周围。
就好像小卫士们把虫卵这个“城堡”给包围起来了一样。
随着时间的推移呢，就会出现沉淀现象。
你可以想象成啊，抗体和虫卵周围的一些物质发生了反应，就像大家在互相拉扯、纠缠，最后形成了一些小颗粒，这些小颗粒多了就沉淀下来了。
如果在虫卵周围形成了明显的沉淀物，那就说明很有可能这个人感染了血吸虫。
这就像是小卫士和“敌人”战斗后的痕迹一样，清晰可见。
这个试验其实很巧妙的。
它不需要特别复杂的仪器，就像是一场简单又直接的对决。
但是呢，它也有自己的小脾气。
比如说，这个试验的结果有时候可能会受到一些因素的影响。
如果血清保存不当，里面的抗体可能就没那么有活力了，就像小卫士们都累得没力气战斗了，那可能就会影响到最后的沉淀效果。
而且啊，这个试验虽然能够发现血吸虫感染的一些迹象，但也不是百分之百准确的。
就像生活中我们有时候也会看错东西一样。
不过呢，它在血吸虫病的诊断中还是起到了很重要的作用。
它就像一个小侦探，给医生们提供一些线索，让医生们能够进一步去确认到底是不是血吸虫病。
在做这个试验的时候啊，那些科研人员就像一群特别细心的工匠。
他们得小心翼翼地处理虫卵，不能把虫卵弄坏了，就像对待宝贝一样。
环卵沉淀实验报告
1. 掌握环卵沉淀试验（Circumoval precipitin test, COPT）的原理和方法。
2. 学会使用环卵沉淀试验检测血清中是否存在血吸虫虫卵，从而进行血吸虫病的诊断。
二、实验原理环卵沉淀试验是一种特异性免疫学试验，以血吸虫虫卵为抗原。
当虫卵内的毛蚴成熟后，能分泌可溶性虫卵抗原（sOVAg）。
当sOVAg与血吸虫感染者血清中的特异性抗体结合时，在虫卵周围形成特异性沉淀物，即环卵沉淀反应。
通过观察虫卵周围沉淀物的出现和强度，可以判断患者是否感染血吸虫。
三、实验材料1. 实验动物：实验感染血吸虫的兔肝。
2. 实验试剂：COPT抗原片、COPT阳性对照片、COPT阴性对照片、待检血清、生理盐水、盖玻片、载玻片、石蜡、显微镜等。
四、实验方法1. 准备抗原片：将实验感染血吸虫的兔肝中分离出的成熟虫卵，制成抗原片。
2. 取待检血清：抽取患者血清，置于37℃温箱中，待其自然凝固。
3. 加样：在载玻片上滴加2滴待检血清，用针尖挑取适量抗原片（100-150个）加在血清中，混匀。
4. 覆盖：加盖一块24mm×24mm的盖玻片，四周用石蜡密封。
5. 孵育：将载玻片置于37℃温箱中，孵育48小时。
6. 观察：取出载玻片，在显微镜下观察虫卵周围是否出现沉淀物。
如有沉淀物，则记录其形态和强度。
五、实验结果1. 阳性结果：虫卵周围出现泡状、指状、片状或细长卷曲状的折光性沉淀物，边缘整齐，与卵壳牢固粘连。
2. 阴性结果：虫卵周围无沉淀物或沉淀物厚度小于10μm。
1. 实验过程中，应注意抗原片的制备和质量控制，以保证实验结果的准确性。
2. 待检血清的采集和处理应严格遵循操作规程，避免影响实验结果。
3. 实验过程中，应严格控制温度和时间，以确保实验结果的可靠性。
4. 实验结果解读：阳性结果提示患者可能感染血吸虫，需进一步检查确诊。
阴性结果提示患者可能未感染血吸虫，但需结合临床症状和其他检查结果综合判断。
环卵沉淀试验
环卵沉淀试验环卵沉淀试验介绍：环卵沉淀试验是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。
成熟虫卵内毛蚴的分泌排泄物是良好的抗原性物质，抗原自卵内渗出后与血吸虫感染者血清作用时，在卵的周围形成特异性沉淀物，属于沉淀反应。
是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。
环卵沉淀试验正常值：虫卵周围无沉淀物或沉淀物厚度小于10/1m。
环卵沉淀试验临床意义：异常结果：环卵沉淀反应阳性是宿主体内存活虫卵的指征，也可作为疗效观察的指标。
正常人环卵沉淀率为阴性。
患者阳性率为97.3%，假阳性率为3.1%(用新鲜虫卵的假阳性为1.9%)。
本试验对肺吸虫患者有交叉反应，交叉反应的阳性率为6.4%;对华支睾吸虫和丝虫患者交叉反应占1%。
患者好转后环卵反应下降，但阴转时间较长。
一般需要3～4年。
环卵沉淀是衡量临床疗效的一个实用指标，如患者末次治疗后3～5年环沉率≥5%，且还有临床征象，应考虑给予复治。
需要检查的人群：消化道异常者。
环卵沉淀试验注意事项：不合宜人群：一般无不适合人群。
检查前禁忌：检查前不要吃抗寄生虫的药物，以免影响结果。
检查时要求：1.加入虫卵数量要适当，否则影响结果。
计算虫卯时，凡不成熟卵和破坏卵不计算在内。
2.检测每批标本应同时做阳性对照。
用过的玻片应用3%苯酚液浸泡1―2d，以便消毒。
环卵沉淀试验检查过程：1.用蜡笔在清洁的载玻片上划两条相距约20mm的直线，在中央滴加待检血清2滴。
2.用针尖挑取干虫卵100―150个加在血清中混匀(如用鲜虫卵可用20~1)，加盖一块24mmX24mm盖玻片，四周用石蜡密封，置37℃温箱48h 后观察结果。
环卵沉淀试验
环卵沉淀试验文章目录*一、环卵沉淀试验的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、环卵沉淀试验的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、环卵沉淀试验的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、环卵沉淀试验的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、环卵沉淀试验的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应环卵沉淀试验的基本信息1、定义环卵沉淀试验是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。
成熟虫卵内毛蚴的分泌排泄物是良好的抗原性物质,抗原自卵内渗出后与血吸虫感染者血清作用时,在卵的周围形成特异性沉淀物,属于沉淀反应。
是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。
常规法用载波片或凹玻片进行,加样本血清后,挑取适量鲜卵或于卵(100～150个,从感染动物肝脏分离),覆盖24×24mm盖片,四周用石蜡密封,置37℃恒温中48小时后,低倍镜观察结果,必要时需观察72小时后的反应结果。
典型的阳性反应为泡状、指状、片状或细长卷曲状的的折光性沉淀物,边缘整齐,与卵壳牢固粘连。
阴性反应必须看完全片,阳性者观察100个成熟卵计算环率及反应强度比例。
分级强度判读:“+”为卵周出现泡状、指状沉淀物的面积小于卵周面积的的1/4,片状沉淀物小于1/2,细长曲带状沉淀物不足卵的长径。
“++”为泡状、指状淀物总面积大于卵周积1/4,片状沉淀物大于1/2,曲带状沉淀物相当于或超过卵的长径。
“+++”为泡状、指状沉淀物大于周积的1/2,片状物面积等于或超过卵的大小,曲带状沉状物超过卵长径数倍。
2、专科分类消化3、检查分类病原微生物检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹非空腹环卵沉淀试验的正常值和临床意义1、正常值虫卵周围无沉淀物或沉淀物厚度小于10/1m。
2、临床意义异常结果:环卵沉淀反应阳性是宿主体内存活虫卵的指征,也可作为疗效观察的指标。
正常人环卵沉淀率为阴性。
患者阳性率为97.3%,假阳性率为3.1%(用新鲜虫卵的假阳性为1.9%)。
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寄生虫实验报告
实验室：形态×教师姓名：×××
实验日期：年月日学生姓名：×××
环卵沉淀试验
（Circumoval precipitin test, COPT）
【实验原理】
COPT是以血吸虫虫卵为抗原的特异性免疫学试验。
虫卵内的毛蚴成熟后能分泌可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA），SEA自卵壳微孔渗出，附于卵壳表面，与待检血清内特异性抗体相结合，在虫卵周围形成抗原—抗体复合物沉淀，镜下可见泡状或指状沉淀物沉积在虫卵表面，此为阳性反应。
在正常人血清中，因无相应抗体存在，在虫卵周围不出现特异性沉淀物，即为阴性。
根据环沉率（是指100个虫卵中出现沉淀物的虫卵数，即阳性虫卵数/观察虫卵数×100%）可判定待检血清的COPT反应是否为阳性，根据所形成的沉淀物大小可判定反应强度。
【材料与方法】
实验材料：血吸虫虫卵冻干粉，待检血清，载玻片，盖玻片，注射器针头，滴管，石蜡，刀，蜡盒，酒精灯，显微镜，吸水纸
实验方法：
1、用滴管滴加一小滴待检血清于洁净载玻片上，用注射器针头挑取少许血吸虫冻
干卵粉末，将其与血清充分混匀；
2、覆盖盖玻片，用石蜡密封四周，防止水分蒸发和细菌孳生、繁殖；
3、室温下静置约1~1.5h以后，镜检观察、记录结果。
实验过程注意事项：
①玻片应清洁无油，手持玻片时勿将手指接触玻片表面，以避免油渍污染。
②滴加待检血清的量应当适宜，若血清过少，则易致漏检。
若血清过多，则覆盖
盖玻片时血清易在载玻片上铺展开来，使用石蜡密封时不易操作，此时可以使用吸水纸吸去盖玻片周围的液体再进行密封。
③挑取冻干虫卵粉末少量即可，过多则导致虫卵堆叠，镜检时不易观察和做出判
断。
使用的注射器针头应保持干燥，否则会粘取大量虫卵粉末，可用吸水纸擦拭注射器针头再使用。
④混匀虫卵和血清时不要过度用力，以免造成虫卵破裂。
⑤石蜡密封要完全，以免水分蒸发，影响镜检。
【实验结果】
镜检可见浅黄色、椭圆形的血吸虫虫卵，卵壳厚度均匀，较薄且无卵盖，卵壳一侧有侧棘（由于压片原因，部分虫卵可见侧棘，部分虫卵则观察不到），卵壳内壁有一薄层胚膜，内含毛蚴，毛蚴与卵壳的间隙中有时可见大小不等圆形或椭圆形的油滴状头腺分泌物，为可溶性虫卵抗原。
在部分虫卵表面，可见泡状或指状、折光性较强的沉淀物，即虫卵抗原—抗体复合物。
截取部分视野中拍摄阳性虫卵图片，见下述图1、2、3、4、5、6。
结果判定：
1）环沉率：镜下沿一定方向推进，连续观察100个虫卵，其中阳性虫卵数为15，因此环沉率为(15/100)×100%=15%。
实验环沉率＞5%，故环卵沉淀试验结果阳性。
2）分级强度：镜下观察阳性虫卵，部分泡状沉淀物的面积较小，小于虫卵面积的1/2，反应强度为“+”；部分泡状沉淀物的面积大于虫卵面积的1/2，反应强度为“++”；亦有部分泡状沉淀物的面积大于虫卵本身面积，反应强度为“+++”。
其中反应强度为“+”的虫卵较多，“++”“+++”的虫卵较少。
表明COPT总体反应强度不高。
图1 图2
图3 图4
图5 图6
【实验讨论】
本实验采用环卵沉淀试验来检测血清中是否存在血吸虫虫卵，从而做出诊断。
实验结果检测为阳性，但反应强度不高，造成这一现象的可能原因有：（1）做好的标本应当置于37℃温箱，并于48h后观察，但实验中受条件所限，标本置于室温下1.5h后观察，使COPT 反应温度和时间均不足，从而导致镜检环沉率和反应强度不高；（2）混匀虫卵和血清时，造成虫卵破裂，影响了参与抗原抗体反应的虫卵数目；（3）虫卵内的毛蚴需成熟后方能分泌可溶性虫卵抗原，未成熟时没有SEA分泌，使参与反应的抗原数量减少；（4）试验用血吸虫虫卵冻干粉，在对虫卵进行冷冻干燥过程的中，可能造成抗原破坏，影响抗原数量；（5）由于操作过程中的偶然误差（未遵循实验注意事项）或镜检时的漏检、误检，导致观察现象有误。
实验时要严格遵循实验方法，认真操作，以期得到较好的结果。
COPT为血吸虫病所特有的免疫学诊断方法，具有较高的敏感性（94.1%~98.6%）和特异性（1.9%~3.6%），主要用于血吸虫病的辅助诊断、疗效考核、流行病学调查及疫情监测。
实验常规方法由于操作步骤繁琐，不易于标准化，因而现在有了许多改进方法，包括塑料管法COPT、双面胶纸条法环卵沉淀试验（DGS-COPT）、PVF抗原片法、血凝板法、组织内环卵沉淀反应（IOP）、酶联环卵沉淀反应（ELCOPT）等等。