寄生虫实验报告——环卵沉淀试验

寄生虫实验报告

实验室：形态×教师姓名：×××

实验日期：年月日学生姓名：×××

环卵沉淀试验

（Circumoval precipitin test, COPT）

【实验原理】

COPT是以血吸虫虫卵为抗原的特异性免疫学试验。虫卵内的毛蚴成熟后能分泌可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA），SEA自卵壳微孔渗出，附于卵壳表面，与待检血清内特异性抗体相结合，在虫卵周围形成抗原—抗体复合物沉淀，镜下可见泡状或指状沉淀物沉积在虫卵表面，此为阳性反应。在正常人血清中，因无相应抗体存在，在虫卵周围不出现特异性沉淀物，即为阴性。根据环沉率（是指100个虫卵中出现沉淀物的虫卵数，即阳性虫卵数/观察虫卵数×100%）可判定待检血清的COPT反应是否为阳性，根据所形成的沉淀物大小可判定反应强度。

【材料与方法】

实验材料：血吸虫虫卵冻干粉，待检血清，载玻片，盖玻片，注射器针头，滴管，石蜡，刀，蜡盒，酒精灯，显微镜，吸水纸

实验方法：

1、用滴管滴加一小滴待检血清于洁净载玻片上，用注射器针头挑取少许血吸虫冻

干卵粉末，将其与血清充分混匀；

2、覆盖盖玻片，用石蜡密封四周，防止水分蒸发和细菌孳生、繁殖；

3、室温下静置约1~1.5h以后，镜检观察、记录结果。

实验过程注意事项：

①玻片应清洁无油，手持玻片时勿将手指接触玻片表面，以避免油渍污染。

②滴加待检血清的量应当适宜，若血清过少，则易致漏检。若血清过多，则覆盖

盖玻片时血清易在载玻片上铺展开来，使用石蜡密封时不易操作，此时可以使用吸水纸吸去盖玻片周围的液体再进行密封。

③挑取冻干虫卵粉末少量即可，过多则导致虫卵堆叠，镜检时不易观察和做出判

断。使用的注射器针头应保持干燥，否则会粘取大量虫卵粉末，可用吸水纸擦拭注射器针头再使用。

④混匀虫卵和血清时不要过度用力，以免造成虫卵破裂。

⑤石蜡密封要完全，以免水分蒸发，影响镜检。

【实验结果】

镜检可见浅黄色、椭圆形的血吸虫虫卵，卵壳厚度均匀，较薄且无卵盖，卵壳一侧有侧棘（由于压片原因，部分虫卵可见侧棘，部分虫卵则观察不到），卵壳内壁有一薄层胚膜，内含毛蚴，毛蚴与卵壳的间隙中有时可见大小不等圆形或椭圆形的油滴状头腺分泌物，为可溶性虫卵抗原。在部分虫卵表面，可见泡状或指状、折光性较强的沉淀物，即虫卵抗原—抗体复合物。截取部分视野中拍摄阳性虫卵图片，见下述图1、2、3、4、5、6。

结果判定：

1）环沉率：镜下沿一定方向推进，连续观察100个虫卵，其中阳性虫卵数为15，因此环沉率为(15/100)×100%=15%。实验环沉率＞5%，故环卵沉淀试验结果阳性。

2）分级强度：镜下观察阳性虫卵，部分泡状沉淀物的面积较小，小于虫卵面积的1/2，反应强度为“+”；部分泡状沉淀物的面积大于虫卵面积的1/2，反应强度为“++”；亦有部分泡状沉淀物的面积大于虫卵本身面积，反应强度为“+++”。其中反应强度为“+”的虫卵较多，“++”“+++”的虫卵较少。表明COPT总体反应强度不高。

图1 图2

图3 图4

图5 图6

【实验讨论】

本实验采用环卵沉淀试验来检测血清中是否存在血吸虫虫卵，从而做出诊断。实验结果检测为阳性，但反应强度不高，造成这一现象的可能原因有：（1）做好的标本应当置于37℃温箱，并于48h后观察，但实验中受条件所限，标本置于室温下1.5h后观察，使COPT 反应温度和时间均不足，从而导致镜检环沉率和反应强度不高；（2）混匀虫卵和血清时，造成虫卵破裂，影响了参与抗原抗体反应的虫卵数目；（3）虫卵内的毛蚴需成熟后方能分泌可溶性虫卵抗原，未成熟时没有SEA分泌，使参与反应的抗原数量减少；（4）试验用血吸虫虫卵冻干粉，在对虫卵进行冷冻干燥过程的中，可能造成抗原破坏，影响抗原数量；（5）由于操作过程中的偶然误差（未遵循实验注意事项）或镜检时的漏检、误检，导致观察现象有误。实验时要严格遵循实验方法，认真操作，以期得到较好的结果。

COPT为血吸虫病所特有的免疫学诊断方法，具有较高的敏感性（94.1%~98.6%）和特异性（1.9%~3.6%），主要用于血吸虫病的辅助诊断、疗效考核、流行病学调查及疫情监测。实验常规方法由于操作步骤繁琐，不易于标准化，因而现在有了许多改进方法，包括塑料管法COPT、双面胶纸条法环卵沉淀试验（DGS-COPT）、PVF抗原片法、血凝板法、组织内环卵沉淀反应（IOP）、酶联环卵沉淀反应（ELCOPT）等等。