酶联免疫试剂盒实验操作注意事项
肿瘤相关抗原 CA125 定量检测试剂盒 （酶联免疫法） 说明书
肿瘤相关抗原CA125定量检测试剂盒（酶联免疫法）CanAg CA125 EIA产品编号： 400-10产品说明书编号：400-10 酶联免疫试剂盒用于体外诊断2007年11月规格：96人份/盒用途CanAg CA125 EIA试剂盒用于定量检测人血清中CA125的含量。
检测方法说明CA125是一种高分子量的粘蛋白型糖蛋白，最初是由Bast等人建立的Oc125单克隆抗体命名的。
现已表明，在CA125抗原上的不同表位可同时表达Oc125单抗系列的识别位点，故可应于建立针对CA125抗原不同位点的检测方法。
CanAg CA125 EIA试剂盒是建立在两株鼠单克隆抗体的基础上，Ov197和Ov185，它们直接结合CA125抗原蛋白核心的两个独立位点。
实验原理CanAg CA125 EIA 试剂盒采用直接夹心技术基础上的固相、非竞争性检测法。
标准品，质控品，病人标本与生物素标记的抗CA125抗体以及辣根过氧化酶标记的抗CA125示踪液，在链亲和素包被的微孔中一起温育。
清洗后，加入底物/显色缓冲液(过氧化氢和3,3',5,5'四甲基联苯胺)使其发生酶反应。
如果血清中存在抗原，就会显示为蓝色。
颜色的深度与标本中的CA125浓度呈正比。
颜色的深度可用酶标仪在620nm (也可选择加入终止液后在 405 nm )进行检测。
每次试验均需根据每个标准液的浓度与其相对应的吸光度绘制标准曲线，病人标本中的CA125浓度即可从标准曲线上读出。
试剂●CanAg CA125 EIA试剂盒能检测 96人份标本。
●试剂盒的有效期标示于包装盒外标签上。
●禁止使用过期的试剂。
●不同批号的试剂禁止混用。
●试剂盒贮于+ 2℃至+ 8℃贮存，避免冷冻。
●打开包装的试剂其稳定性如下表，避免污染。
试剂使用后，用原包装密封好试剂并立即于+ 2℃至+ 8℃贮存。
不稳定性说明TMB HRP 缓冲液应该为无色或呈很浅的蓝色。
溶液完全变为蓝色则提示试剂被污染了，应丢弃，禁止使用。
小鼠肌酸激酶(CK)酶联免疫分析试剂盒 说明书
小鼠肌酸激酶(CK)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E2030m3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过3个月，-80℃不应超过6个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；高血脂的标本不需进行特殊处理，可直接检测。
操作步骤实验开始前，请提前配制好所有试剂；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，均应用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
建议各实验室在操作前先进行预实验以建立最佳稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
每孔加检测溶液A工作液100ul（在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应，此时蓝色立转黄色。
终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
酶联免疫试剂盒实验操作规程及注意事项
操作规程：溶液配制1、针对呋喃唑酮、呋喃它酮、氯霉素等试剂盒，他们的1X洗液、1X样品稀释液、终止液是通用的。
检测数量大的情况下可以大量配制洗液、样品稀释液等，一般建议一个礼拜重配一次。
2、可以或需要前处理前配制的溶液：呋喃类：缓冲溶液、样品稀释液、1M HCL、1M NaOH、10mM邻硝基苯甲醛、洗涤工作液氯霉素：样品稀释液、洗涤工作液3、检测时配制的溶液：呋喃类：A、B液需在洗板前配制好，并混合均匀。
氯霉素：酶结合物工作液、A B液样本处理呋喃类：1、1g组织样本+4ml水+0.5ml 1M HCL+400ul 10nM邻硝基苯甲醛，剧烈涡动1min；2、60℃温箱孵育1h，然后拿出来涡动30s，继续孵育0.5h；3、依次加入5ml缓冲溶液、400ul 1M NaOH、6ml乙酸乙酯；4、剧烈涡动1min后4000g离心10min；5、取3ml上清液50-60℃氮气吹干，加入2ml正己烷，再加入1ml样品稀释液，高速涡动30s；6、4000g以上，离心5min，去上层及中间层杂质，取下层液体待测。
氯霉素：1、3g样品+ 6 mL 乙酸乙酯，充分涡动1 min后4000 g 离心 10 min；2、取 4 mL 上层乙酸乙酯50-60℃氮气吹干，加入2 mL正己烷，充分涡动10 s，再加入 1 mL 样品稀释液，低速涡动 1 min；3、4000 g 以上，离心 5 min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，取50 µL 进行检测。
检测过程呋喃唑酮：1、加50ul标准品/样品+50ul酶标二抗+50ul抗体工作液后室温（23-27℃）反应30min；2、每孔加260ul洗涤工作液洗板，共洗4次，拍干，加入混合好的100ul AB液，室温下避光反应15-20min（看颜色深浅），加入50ul终止液后读板。
呋喃它酮：1、加50ul标准品/样品+50ul酶结合物后室温（23-27℃）反应30min；2、每孔加260ul洗涤工作液洗板，共洗4次，拍干，加入混合好的100ul AB液，室温下避光反应15-20min（看颜色深浅），加入50ul终止液后读板。
酶联免疫吸附试验(ELISA)操作注意事项
（2）温育温度的选择。 在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温 度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一 种则为43℃下45分钟。从免疫测定抗原抗体反 应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时 间最为完全，产物最稳定。如2－8℃下反应24 小时。较高的反应温度，由于分子运动的加快， 反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳 性样本测定没有问题，但对分子含量少的弱阳 性样本则有漏检的可能。因此，如须选择反应 条件，建议在临床ELISA测定中尽量使用较低 温度较长反应时间的条件。
而将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着 水面，可使温度迅速平衡。让反应板飘浮在水面 上。就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可 提高测定的重复性。
洗涤在ELISA虽不是一个反应步骤，但也决定着实 验的成败。ELISA就是靠洗涤清除残留在板孔中没 能与固相抗体（抗原）结合的物质，以及在反应过 程中非特异性的吸附于固相载体的干扰物质，以保 证ELISA测定的特异性。 洗涤液为非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯 载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂 既含疏水基团，也含亲水基团，使蛋白质回复到水 溶液状态，从而脱离固相载体。 在实验室中，ELISA测定的洗板一般有两种方式， 即手工和洗板机洗板。为保证微孔板的均一性使结 果准确可靠，最好选用洗板机洗板。若手工洗板， 要注意浸泡时间和孔间洗液最好不要互相流动。流 水冲洗法让水流冲击板孔表面，简便、快速，洗涤 效果较好。
3 加样本及反应试剂
4 温育
温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个 因素。 ELISA属于固相免疫测定，要使液相中的抗原或抗 体与固相上的特异性抗体或抗原完全结合，必须在 一定温度条件下反应一定的时间。一般温育所需时 间与温度成反比，即温度越高，所需时间相对较短。 最为常用的温度有37℃和室温(20－25℃)，其次是 43℃和2－8℃，目前国内ELISA商品试剂盒的反应 温育时间通常为37℃30－60分钟。 关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：
酶联免疫分析试剂盒说明书
人chemerin酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中chemerin含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中chemerin水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入chemerin抗原、生物素化的抗人chemerin抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的chemerin呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20,000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释10,000pg/ml，5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312.5pg/ml，156pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制10,000pg/ml标准品：取0.5ml20,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
HE4 测定试剂盒（酶联免疫吸附法） 说明书
产品编号：404-10
产品使用说明书 2008 年 02 月
有效期至 批号 生产日期 目录号 制造商 包含有<96>个测试
酶联免疫吸附试剂盒 规格：96 人份
体外诊断医疗器械 温度范围
使用说明 生物危险性 试剂盒组成 来源于小鼠
来源于人类
用途 HE4 EIA 是酶联免疫方法定量测定人血清中 HE4 含量的试剂盒。本测定试剂盒可用于辅助监控对侵袭性
1×15mL
2℃～8℃贮存，至瓶签所标示的有效期
生物素标记的 HE4 单克隆抗体来源于小鼠，浓度约为 1μg/mL。其中包含磷酸盐缓冲液（pH 7.2），牛血清白 蛋白，封闭剂，清洁剂，惰性红色染料以及非叠氮钠化合物作为防腐剂。直接使用。
酶结合物 HE4 抗体
示踪液，HRP 标记的 HE4 抗体
1×0.75mL
稳定性如下表所示：
组分
数量
第一次开封后试剂的贮存和稳定性
微孔板
链霉亲和素包被的微孔板
1块
2℃～8℃贮存至微孔板上标示的失效期
12×8，链霉亲和素包被的微孔板条，可拆分。打开包装后，应立即将未使用的微孔板条放入装有干燥剂的铝
品 A
1×8mL
2℃～8℃贮存至瓶签上标示的失效期
5 瓶，冻干粉
复溶后在 2℃～8℃稳定 4 周，在-20℃ 或更低温度时可稳定 4 个月。
含有 HE4 抗原的标准品溶于含有牛血清白蛋白和惰性黄色染料的磷酸盐缓冲溶液中，并且含有非叠氮化合物作 为防腐剂，以冻干粉状存在。在使用之前用蒸馏水或去离子水进行复溶。 注：标准品 HE4 的准确浓度具有批号特异性，而且标示于每瓶的标签上。
底物液 TMB
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、 检验申请单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV （1+2）]测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml ，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆，用肝素、EDTA 或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml 的全血标本，或少于0.1ml 的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h 后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min ，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h ，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d ，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d 。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
医院检验科免疫室 体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共 页3．方法原理本实验采用HIV 特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。
当待测标本中存在HIV 抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB 底物参与反应的情况下，产生显色反应。
酶联免疫吸附试验注意事项
酶联免疫吸附试验注意事项一、前言酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的生物学实验技术，用于检测抗体或抗原的存在。
在进行ELISA实验时，需要注意许多细节，以确保实验结果准确可靠。
本文将详细介绍ELISA实验中需要注意的事项。
二、试剂准备1. 标准品的制备：标准品是ELISA实验中非常重要的一个组成部分，它通常用于建立标准曲线，从而确定未知样本中抗体或抗原的浓度。
在制备标准品时，应该按照厂家提供的说明书严格操作，并注意其保存方式和有效期。
2. 酶标板的处理：在使用酶标板之前，应该先进行预处理。
通常情况下，酶标板需要用PBS（磷酸盐缓冲液）或其他缓冲液洗涤数次才能去除表面上可能存在的污染物。
此外，在使用酶标板之前还应该对其进行预热处理。
3. 酶联试剂盒中其他试剂的制备：除了标准品和酶标板之外，ELISA试剂盒中还包括其他试剂如探针、底物、停止液、缓冲液等。
在制备这些试剂时，应该按照说明书中的要求进行操作，并注意其保存方式和有效期。
三、样本处理1. 样本的收集和保存：在进行ELISA实验之前，需要先收集样本并储存起来。
对于血清或血浆样本，应该使用无菌的容器进行收集，并在室温下离心去除细胞残留物。
此外，在储存样本时应该避免反复冻融，以免影响实验结果。
2. 样本的稀释：在ELISA实验中，通常需要将样本稀释到一定浓度才能进行检测。
稀释倍数应该根据实验需要和样品浓度确定，并严格按照说明书中的要求进行操作。
四、实验操作1. 洗板步骤：洗板是ELISA实验中非常重要的一个步骤，它用于去除不特异性结合物质以及未结合试剂等。
在洗板时应该注意以下几点：（1）洗涤次数：通常情况下，每个孔洗涤3-5次即可。
（2）洗涤缓冲液：不同的试剂盒可能需要使用不同的洗涤缓冲液，应该按照说明书中的要求进行操作。
（3）洗涤时间：洗板时间应该控制在适当的范围内，过长或过短都可能影响实验结果。
2. 加样步骤：在加样时应该注意以下几点：（1）加样量：加样量应该根据实验需要和样品浓度确定，并严格按照说明书中的要求进行操作。
人白介素10(IL-10)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人白介素10（IL-10）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：12.5pg/ml-800pg/ml,最低检测限：3pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-10，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-10含量。
说明?试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
?浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
?中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
?刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述：白细胞介素10（IL-10）是近几年新发现的细胞因子，又称细胞素合成抑制因子，为含178个氨基酸残基的单肽链糖蛋白（其中Ｎ端18个氨基酸信号肽序列）。
IL-10分子量35-40kDa，通常为二聚体，其基因为单拷贝基因。
人的IL-10基因定位于第1号染色体上，限制性内切图谱提示该基因至少含3个间隔序列，同其他已知细胞因子基因的核苷酸序列货对应的蛋白质序列比较，IL-10与这些细胞因子无明显的顺序同源性。
IL-10主要由Th2细胞产生，但Tho 细胞、Th细胞、CD8+T细胞、活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、肝细胞、角化细胞等也可产生。
IL-10是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子，能改变机体的免疫应答和MHCⅡ类抗原的表达，并介导Th1和Th2两类细胞之间的相互调节。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-10抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-10抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IL-10呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
酶联免疫吸附法实验操作注意事项
配制 体积 （１ ｍ）
ｌＯ Ｏ ２０ ０ ３ ００ ４ ００ ５ ００
甲醇 （ Ｉ ｍ）
Ｏ ２ ０ ３ ０ ４ ０ ５ ０
Ｐ Ｓ 冲 液 （ ｉ Ｂ缓 ｍ）
９ ０ ｌ ８Ｏ ２ ７０ ３ ６０ ４ ５０
霉【】 中国粮 油 学报 ． ９ ９ ０ ． Ｊ． １ ９ ， １
速 ， 证 每 个 孔 的 放 置 时 间 一 致 。 为 了做 保
到 这 一 点 ， 好 准 备 两 个微 量 移 液 器 （ 量 况 下 试 剂 盒 的 有 效 期 为 六 个 月 ， 出厂 时 最 微 刚
移 液 器 量 程 一 般 是 ２ ～２ ０ ｌ 一次 加 不 测 试 盒 的 吸 光 度 值 最 高 ， 存 时 间越 长 其 ０ ０ ， 储
适 当 稀 释 就 可 以解 决这 一 问 题 。
（） 然 标 准 溶 液 的 浓 度 很 低 ， 是 严 参考文献 ６虽 但 色谱法 测定粮食 和混合 饲料 中的棕 曲 霉 素 Ａ 结 果 的 相 关 性 ［ ］粮 食 储 藏 ， Ｊ．
２ ０ Ｏ１ ０ ０， ．
涤 液 ， 果 测 试 盒 孔 数 较 多 ， 要 分 几次 使 格 规 范 的 实 验 操 作 不 可 忽 视 ， 实 验 中 要 ［】唐为 民 ． 用酶联 免疫吸 附法和 高压液 相 如 需 在 １ 采
表 １
检 验 中 的应 用 越 来 越 普 及 ， 别 是 在 真 菌 特
毒 素 的测 试 上 ， 主 要 特 点 是 灵敏 度高 ， 其 特
异 性 好 ， 作 简 便 ， 果 易 判 断 。但 是 在 操 操 结 作 过 程 中 有 一 些 细 节 必 须 注 意 ， 果 马 马 如 虎 虎 不 认 真 对 待 ， 必 对 最 终 结 果 产 生 很 是
酶联免疫吸附试验的原理、操作方法及注意事项
影响实验结果 。 因此 ， Ｅ ＩＡ试验实际操作 中除了 在 ＬＳ 选 择优 良仪器设 备和试 剂外 ，正确 的操 作是保 证
ＥＩ ＬＳ Ａ检测结果准确可靠的必要条件。 必须熟知试验
每 次 加样 必 须 更 换 吸头 ，做 到 １ 样 品 １个 吸 个
振动 ３ 秒 ， Ｏ 使底物与终止液充分混合再读数 。
４７酶标仪读数 环节 ．
使 用 前 应 先 预热 仪 器 １～ ０分 钟 ，并 调 整 到 试 ５３
验要求 的波长 ， 使测定结果更稳定。 最 好 先 擦拭 微 孔 板底 部并 压 平 板条 ，避 免 反 应 板底划痕 、 不平 、 印或 液面高度差异造成 干扰 ， 指 致 使读数结果不准确 。因此要保持酶标板干净， 不能用 手触 摸板 底 留下指 印 。
４５ 洗 涤 反 应 板 环 节 ．
ＥＩ ＬＳ Ａ试验是靠洗 涤来达到分离游离 和结合 的 酶标记物。 酶联免疫 吸附板每次洗涤要充分。 通过洗 涤 以消除残 留在板孔 中没能与固体抗原或抗体结合 的物质 ，以及在反应过程 中非特异吸附于固相载体 上的干扰物质 。如果洗涤不充分 ， 应该除去的杂质没 有洗 掉 ， 这样 就会 影 响试验 结果 。 洗板时需保证微孔板平放 ， 将洗涤液注满各孔 ， 尽量避免漏液 、 溢液现象。
Ｅ ＩＡ反应终 止 后需 要在 １ ＬＳ Ｏ分钟 内读 数 ，否则
头 ，以免发生交叉 污染。每次加样应加在板孔的底
部 ， 免加在孔壁上部 ， 注意不可溅 出 ， 可产生 避 并 不 气泡 ， 以免加 样 不 准确 ， 响 试验结 果 。 影
猫干扰素(IFN-)酶联免疫分析
预期应用 ELISA 法定量测定猫血清、血浆或其它相关液体中干扰素α（IFNα）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 IFNα水平。用纯化的抗体包被微孔板， 制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 IFNα抗原、生物素化的抗猫 IFNα抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 IFNα呈正相关。用酶标仪 在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成 1. 酶联板：一块（96 孔） 标准品（冻干品）：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，其浓度为 500 pg/mL，做系 列倍比稀释后，分别稀释成 500 pg/mL ，250 pg/mL，125 pg/mL，62.5 pg/mL，31 pg/mL，15.6 pg/mL，7.8 pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/mL， 临用前 15 分钟内配制。 如配制 250 pg/mL 标准品：取 0.5ml 500 pg/mL 的上述标准品加入含有 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 2. 样品稀释液：1×20ml/瓶。 3. 检测稀释液 A：1×10ml/瓶。 4. 检测稀释液 B：1×10ml/瓶。 5. 检测溶液 A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液 A 1：100 稀释，稀释前根据预先 计算好的每次实验所需的总量配制（每孔 100ul），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 1ul 检测溶液 A 加 99ul 检测稀释液 A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 6. 检测溶液 B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液 B1：100 稀释。稀释方法同检测 溶液 A。 7. 底物溶液：1×10ml/瓶。 8. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 9. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 标本的采集及保存 1．血清：标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟，取上清即可检测 ， 或将标本放于 -20℃保存，但应避免反复 冻融。 2．血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心 15 分钟，或将标本放于 -20℃保存，但应避免反复 冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 各试剂在使用前平衡至室温。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样 品 100ul，注意不要有气泡，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃反应 120 分钟。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。 3. 每孔加检测溶液 A 工作液 100ul，37℃,60 分钟。洗板 3 次，350ul/每孔，甩干。 4. 每孔加检测溶液 B 工作液 100ul，37℃，60 分钟，洗板 5 次，甩干。
大鼠胆固醇（CH）酶联免疫分析 试剂盒说明书
大鼠胆固醇（CH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中胆固醇（CH）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胆固醇（CH）水平。
用纯化的大鼠胆固醇（CH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胆固醇（CH），再与HRP标记的胆固醇（CH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆固醇（CH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠胆固醇（CH）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：27pmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
ELISA试剂盒检测过程中的注意事项
ELISA试剂盒检测过程中的注意事项ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。
下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。
一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。
可用水和电子天平进行确定。
但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。
吸取不同的液体后，要更换枪头。
即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。
也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。
没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。
加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光敏感的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因：未加入酶标记物。
elisa操作步骤及注意事项
elisa操作步骤及注意事项以elisa操作步骤及注意事项为题，本文将为大家介绍elisa（酶联免疫吸附测定法）的操作步骤和注意事项。
一、操作步骤1. 准备工作在进行elisa实验前，需要准备好实验所需的试剂和仪器设备，包括酶标板、试剂盒、洗涤缓冲液、底物溶液、阻断缓冲液等。
同时，需要对实验室台面和仪器进行消毒，并佩戴好实验手套和口罩，以确保实验的准确性和安全性。
2. 样品处理将待测样品（如血清、尿液、细胞培养上清液等）和对照样品放置在室温下静置，使其达到室温后，进行稀释处理。
通常情况下，待测样品需要按照一定比例进行稀释，以确保其浓度处于检测范围之内。
3. 酶标板涂覆将酶标板中的亲和素或抗体溶液加入到孔板中，然后将其在4℃下静置过夜，使亲和素或抗体能够均匀地吸附在酶标板上。
4. 标准曲线制备将标准品按照一定比例稀释，以制备出一系列浓度递增的标准品溶液。
然后将这些标准品溶液依次加入已涂覆的酶标板孔中，孔位之间要保持一定的距离。
5. 样品孔加样将样品溶液加入到酶标板的样品孔中，注意每个孔的加样量要保持一致。
为了保证实验的准确性，通常会设置阳性对照孔和阴性对照孔，以验证实验的可靠性。
6. 孔板洗涤使用洗涤缓冲液对酶标板进行洗涤，去除未结合的物质和杂质。
洗涤时要注意洗涤液的温度和洗涤次数，以确保洗涤的充分彻底。
7. 酶标记物加入将酶标记的二抗或酶标记的亲和素加入到酶标板的孔中，使其与靶分子结合。
然后，将酶标板置于恒温摇床上，进行孵育反应，使酶标记物与靶分子发生特异性结合。
8. 反应终止通过加入反应终止溶液，使酶标记物的酶活性停止，并终止酶标记物与靶分子的结合。
终止溶液的选择要根据实验所使用的底物和酶标记物来确定。
9. 读板测定使用酶标仪或多功能酶标仪对酶标板进行测量，测定底物的反应产物的吸光度。
根据吸光度值，可以计算出样品中靶分子的浓度。
二、注意事项1. 严格控制实验条件在进行elisa实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、时间等。
ELISA检测注意事项
ELISA实验的影响因素
• 标本在冰箱中保存时间过长易导致血清 IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一 般血清置4℃冰箱5天内完成测试。如需 保存一周以上则要-20℃冰冻保存 • 融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免 气泡 • 尽量避免反复冻融，反复冻融过程中产 生的机械剪切力将对样本中的蛋白等分 子产生破坏作用
（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致； （2）加样过快，孔间发生污染； （3）加错样本； （4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区； （5）不同批号试剂盒中组分混用； （6）温育时间、洗板、显色时间不一致； （7）孔内污染杂物； （8）酶标仪滤光片不正确； （9）血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝 固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。
洗 涤
• ELISA是靠洗涤来达到分离结合与未结合 抗原抗体复合物及酶标记物的目的，同 时洗涤也可将非特异吸附的蛋白质的干 扰以及血球、细菌中的酶干扰清除掉。 • 最好要求使用洗板机：减少操作者人为 误差、保护操作者、降低板孔残液量。
洗 涤
• 以HRP作为标记酶的ELISA试剂盒中使用 的洗板液一般为含0.05%Tween20的中性 PBS，Tween20为一种非离子去垢剂，既 含亲水基团，也含疏水基团，其作用机理 是，借助其疏水基团与经疏水性相互作用 被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基 团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸 附，促使蛋白质脱离固相而进入液相，这 样就可达到去掉非特异吸附物的目的。
ELISA试验中可能出现的问题 及原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因）
白板（阳性对照不显色） （1）漏加酶结合物； （2）洗板液配制中出现问题，如量筒； （4）终止剂当显色剂使用。 全部板孔均有显色 （1）洗板不干净； （2）显色液变质； （3）加底物的吸尖受酶或金属离子污染； （4）洗板液受酶等污染。 （5）由于仪器或加样头造成的交叉污染。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。
1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。
1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。
2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。
2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。
2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。
3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。
3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。
3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。
4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。
4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。
4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。
5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。
5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。
5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。
5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。
5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。
6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。
6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。
6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。
7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。
7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。
7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。
此外，本文档涉及附件，请在附件部分查看相关详细信息。
小鼠巴尔通体(Bartonella)酶联免疫分析试剂盒注意事项
小鼠巴尔通体(Bartonella)酶联免疫分析试剂盒注意事项
1．操作严格按照阐明书进行，本试剂不一样批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。
3．浓洗涤液也许会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响成果。
4．封板膜只限一次性使用，以防止交叉污染。
5．底物请避光保留。
6．试验成果鉴定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参照波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和多种废弃物都应按传染物处理。
终止液为2M 旳硫酸，使用时必须注意安全。
保留条件及有效期
1．试剂盒保留：；2-8℃。
2．有效期：6 个月__。
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酶联免疫试剂盒实验操作注意事项
1. 检测试剂盒在使用前，需在室温下进行复温。
本试剂盒加样后室温反应时间为10分钟，环境温度对检测结果会有很大的影响，所以控制好环境温度（国际标准室温是20-25℃）是试剂盒检测性能发挥所必须的条件。
另外，所有反应过程需保持在水平位置，禁止倾斜放置。
2.样品提取尽量采用离心取上清的方法，对样品的稀释可以有效降低基质干扰，但稀释一定是要保证整个反应在同一体系下反应，对AFB1样品来说，甲醇的含量须始终保持与标准品一致（35%）。
3. 加样过程做重复孔是使检测结果更真实的接近于实际值，在确保加样精度的前提下，避免孔与孔之见的污染，每孔必须更换枪头，酶标板微孔中避免出现气泡，如不慎有气泡用干净枪头戳破，加样时确保用枪方法的一致性，减少非系统误差。
4. 洗板过程很重要，有条件建议使用洗板机，如人工洗板，则在加入洗液过程中，每孔中的液体尽量不要溢出到邻近板孔，如果洗板效果不好很容易造成本底偏高。
5. 加样过程一定要迅速准确，尽量保持每孔反应时间的均一性和加样顺序的前后一致性，如果样本超过20个，请用排枪做，避免造成前后反应时间不一致而导致的结果偏差。
6. 数据分析和处理，建议使用专门软件，根据具体情况选择合适的拟合方式，对AFB1试剂盒来说，建议使用CS曲线进行分析。
7.AFB1具有见光分解的特性，样品提取加样等过程请注意避光。