11-乳粉中维生素C的高效液相色谱法测定

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

磷酸二氢钾( pH = 2. 5) 作为流动相,这三种水相色谱柱均分离 理想。在目标峰附近无干扰峰。采用 Agilent TC - C18 分析维 生素 C 标准品的液相色谱图见图 1。
图 1 维生素 C 标准品液相色谱图( 5 mg / L)
2. 5 方法学验证 2. 5. 1 方法的线性范围和定量限 维生素 C 在 0. 5 mg / L ~ 10 mg / L 质量浓度范围内,线性良好,得到标准曲线回归方程 为 Y = 3. 23 × 104 X - 6. 80 × 103 ,相关系数为 0. 999。方法的定 量限为 5 mg / kg。 2. 5. 2 方法的回收率与精密度 用不含维生素 C 的乳粉样 品进行添加回收 和 精 密 度 实 验,样 品 空 白 和 样 品 添 加 的 色 谱 图见图 2 ~ 图 3,乳粉中添加维生素 C 的回收率和精密度实验 结果见表 1。
2602
【论著】
中国卫生检验杂志 2011 年 11 月 第 21 卷 第 11 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology,Nov 2011; Vol 21 No 11
乳粉中维生素 C 的高效液相色谱法测定
李为鹏,林海丹* ,谢守新,陈毓芳,王岚,邹志飞
[文献标识码] A
[文章编号] 1004 - 8685( 2011) 11 - 2602 - 03
Determination of vitamin C in milk powder by high performance liquid chromatography
LI Wei - peng,LIN Hai - dan* ,XIE Shou - xin,CHEN Yu - fang,WANG Lan,ZOU Zhi - fei ( Guangdong Entry - Exit Inspection and Quarantine Technology Center,Guangzhou 510623,China)
目前,维生素 C 检测常用的方法有 2,6 - 二氯酚靛酚滴定 法[1]、碘滴定法[2,3]、2,4 - 二硝基苯肼比色法[4]、邻苯二胺荧 光法[5 ~ 7]、固蓝盐 B 分光光度法[8]。这些方法操作步骤繁杂。 目前,液相色 谱 法 在 食 品 中 维 生 素 C 的 检 测 中 已 有 广 泛 应 用[9 ~ 11]。乳品中维生素 C 测定的标准方法[12]已出台,其方法 采用邻苯二胺荧光法测定。高效液相色谱法测定奶粉中维生 素 C 的文献有报道[13,14],但测定是还原型维生素 C,不能测定 已氧化的脱氢抗坏血酸,本文对乳粉中维生素 C 的液相色谱 法进行研究,对样 品 的 提 取 溶 液 进 行 比 较 筛 选,对 去 除 蛋 白、
100 mg / kg 添加水平范围内,回收率在 84. 6% ~ 108% 之间,相对标准偏差 3. 96% ~ 7. 81% ,方法的定量限为 5 mg / kg。结
论: 该法实用、准确,适用于乳粉中维生素 C 检测。
[关键词] 乳粉; 维生素 C; 高效液相色谱
[中图分类号] O657. 7 + 2
维生素 C 是一种水溶性维生素,是人体必需营养素,严重 缺乏会导致坏血 病,因 此 它 又 被 称 为 抗 坏 血 酸。 人 体 无 法 对 维生素 C 进行合成,只能通过食物摄取。婴幼儿配方奶粉中 的维生素对婴幼 儿 的 健 康 成 长 尤 为 重 要,尤 其 对 无 法 进 行 母 乳喂养、将配方奶粉作为主要营养来源的婴儿而言。
2603
个月。临用前用 3% 偏磷酸水溶液将标准贮备溶液逐级稀释 得到的 浓 度 为 0. 5 mg / L、1. 0 mg / L、2. 0 mg / L、5. 0 mg / L、 10 mg / L的标准工作溶液。 1. 4 色谱条件
色谱柱: Agilent TC - C18 色谱柱,( 250 × 4. 6 mm,5 μm) ; 流动 相: 0. 05 mol / L 磷 酸 二 氢 钾 ( pH = 2. 5 ) ; 流 速: 1. 0 ml / min; 柱温: 35℃ ; 进样量: 10 μl; 检测波长: 240 nm。 1. 5 样品处理
精 密 称 取 50 mg ( 精 确 到 0. 1 mg) 抗 坏 血 酸 标 准 品 于 100 ml容量瓶中,以 3% 偏磷酸水溶液定容至刻度,配成标准 贮备溶液浓度为 500 mg / L。置于 4℃ 冰箱避光保存,保存期 1
中国卫生检验杂志 2011 年 11 月 第 21 卷 第 11 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology,Nov 2011; Vol 21 No 11
维生素 C 的为水溶性化合物,一般采用水相提取,兼顾维 生素 C 分子中的二烯醇基具有极强的还原性,易氧化为脱氢 抗坏血酸,本实验 采 用 二 硫 苏 糖 醇 将 氧 化 型 的 脱 氢 抗 坏 血 酸 还原为还原型抗坏血酸,测定样品中维生素 C 的总量更准确。 维生素 C 在酸性条件稳定,因此选用酸溶液提取。实验比较 草酸溶液,偏磷酸 溶 液 和 乙 酸 溶 液 的 提 取 效 果 和 沉 淀 蛋 白 能 力,结果表明 1% 乙酸溶液和 3% 偏磷酸溶液的提取和沉淀蛋 白的效果好,兼顾维生素 C 稳定性试验结果,其在 3% 偏磷酸 溶液中最为稳定,因此本方法选择 3% 偏磷酸溶液作为提取溶 剂。 2. 3 净化条件的优化
称取 1. 0 g 试样于 50 ml 具塞塑料离心管中,加入 1. 0 ml 20 mg / ml 二硫苏糖醇,置暗处反应半小时,取出加入 3% 偏磷 酸水溶液溶解并定容至 10 ml,涡旋混匀 1 min,置水平往复振 荡器上振荡或超声波水浴中超声提取 10 min,取出,加入 5 ml 正己烷涡旋混匀 30 s,以不低于 4000 r / min 离心 5 min,下层水 相过 0. 45 μm 水相滤膜后,供液相色谱测定。
( 广东出入境检验检疫技术中心,广州 510623)
[摘要] 目的: 建立高效液相色谱法测定乳粉中维生素 C 的含量的分析方法。方法: 样品用 3% 偏磷酸溶液提取,正己
烷脱脂净化,用高效液相色谱仪( C18 柱) 分析,流动相为 0. 05 mol / L 磷酸二氢钾( pH = 2. 5) ,流速 1. 0 ml / min,二极管阵 列检测器紫外检测波长为 240 nm,维生素 C 以光谱图和保留时间定性,外标法峰面积定量。结果: 乳粉样品在 5 mg / kg ~
[基金项目] 广东省科技计划项目( 2009B050700034) ; 中国检验 检疫科学院计划项目( 2009JK011)
[作者简介] 李为鹏( 1986 - ) ,男,学士,助理工程师,主要从事 食品添加剂检测研究。
* 通讯联系人,E - mail: linhaidangz@ yahoo. com. cn
脂肪的净化分离条件进行优化,从而建立简便、有效可行的分 析方法,适用于日常乳粉中维生素 C 的检测,同时本文对 pH 值影响维生素 C 溶液稳定性进行深入探讨。
1 材料与方法 1. 1 材料与试剂
抗坏血酸标准品( 纯度大于 99% ) Sigma 公司; 二硫苏糖 醇( 纯度大于 99% ) Sigma 公司; 甲醇( 色谱纯) ; 正己烷、磷酸 二氢钾、偏磷酸、乙酸( 分析纯) 广州分析试剂厂; 超纯水( 由 Mill - Q 纯水器系统制得) 。 1. 2 仪器与设备
2 结果与讨论 2. 1 标准溶液稳定性
维生素 C 溶液不稳定,我们研究表明其在水溶液中的稳 定性受 pH 值的影响很大。配制不同 pH 值的标准溶液,观察 其响应值与测定时间关系,结果表明维生素 C 的标准工作液 ( 10 mg / L) 在 pH < 2 的偏磷酸溶液和 pH = 2 的 1% 乙酸溶液 中 6 h 之内稳定,几乎不 降 解,24 h 后 测 定 分 别 降 低 8% 和 26% ,; 在 pH = 3 水 溶 液 中 6h 降 解 32% ,24 h 后 测 定 降 解 94% ; pH = 4 和 pH = 6 溶液中 2 h 分别降解 52% 和 58% ,24 h 后测定均降解 100% 。 2. 2 提取溶液的选择
由于乳粉中 含 有 脂 肪,需 要 脱 脂 步 骤。 在 水 相 提 取 溶 剂 中加入正己烷,液 液 分 配 脱 脂,可 除 去 油 溶 性 的 脂 类 杂 质,而 极性物质维生素 C 则仍在水相中,达到净化的效果。 2. 4 色谱条件的优化
维生素 C 是极性化合物,在普通的反相色谱 C18 柱上保留 不强,一般使用离子对试剂来增加在 C18 柱上的保留。本实验 考虑维生素 C 为酸性化合物,增加流动相的酸度,在反相色谱 C18 柱上更好地保留。试验纯水、0. 05 mol / L 磷酸二氢钾( pH = 4) 和 0. 05 mol / L 磷酸二氢钾( pH = 2. 5) 作为流动相的色谱 分离效果,结果表明,纯水、0. 05 mol / L 磷酸二氢钾( pH = 4) 出 峰太快且峰形不佳,采用 100% 0. 05 mol / L 磷酸二氢钾( pH = 2. 5) 缓冲溶液作为流动相,峰形好。色谱柱需选择具有较低 的碳载量,同时进行了完全封端的色谱柱,这类色谱柱适合高 水相流动相的应用。使用 Ultimate AQ - C18 、Agilent TC - C18 、 Ecosil - C18 等水相色谱柱进行试验,结果表明采用 0. 05 mol / L
[Abstract] Objective: To develop a high performance liquid chromatographic ( HPLC) method for the determination of vitamin C in milk powder. Methods: Sample was extracted with 3% metaphosphate acid solution,and the extract was then treated with n - hexane for the removal of lipids prior to HPLC analysis using a mobile phase of 0. 05 mol / L potassium dihydrogen phosphate solution ( pH = 2. 5) at a flow rate of 1. 0 ml / min with PDA detection at the 240 nm. Vitamine C was affirmed according to PDA spectrogram and retention time and quantified by peak area with external standard method. Results: The recoveries of the method spiked at 3 levels ( 5 mg / kg,50 mg / kg and 100 mg / kg) were within the range of 84. 6% ~ 108% ,with RSDs ranging from 3. 96% to 7. 81% . The detection limit of the method was 5 mg / kg. Conclusion: The method is practical,accurate and suitable for the determination of vitamin C in milk powder. [Key words] Milk powder; Vitamin C; High performance liquid chromatography ( HPLC)
高效液相色谱仪( 配有岛津 LC 20AD 泵,SIL 20AC 自动进 源自文库器,SPD M20A 二 极 管 阵 列 检 测 器、LC solution 色 谱 工 作 站) ; 超声波水浴( 博励行仪器公司) ; 高速冷冻离心机( 德国 Sigma 公司) ; 涡旋振荡器( 德国 Heidolph 公司) ; 水平往复振荡 器( 德国 IKA 公司) 。 1. 3 标准工作液的配制
相关文档
最新文档