维生素C的定量测定—2,6-二氯酚靛酚滴定法
维生素C的测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法
实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法一、测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀；托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉；吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶；记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。
及试剂本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
生物化学实验：维生素C定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
【 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1% 草酸无此作用。
【若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白 陶土脱色，或加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红 色
五、2%草酸的滴定V4
【取10ml 2%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V4
V3 – V4相当于X mg抗坏血酸
ʺ计算
锥形瓶中10ml滤液中维生素C含量 ＝ V3 – V4 /V1 – V2 X 0.1 (mg)
5g蔬菜或水果的维生素C含量（样品） ＝ V3 – V4 /V1 – V2 X 0.1 X 10 (mg)
【取10ml 1%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V2
V1 - V2相当于0.1mg抗坏血酸
四、 样品抗坏血酸液的滴定V3
【取滤液10ml(相当于样品Vc的1/10)置100ml锥形瓶中
【 用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V3。
ʺ注意事项
【某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可 加数滴丁醇或辛醇
【整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过 程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml， 如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改 变提取液稀释度
【 Fe2＋可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2＋的样品可用8% 乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2＋不会很快与染料起作用
维生素C定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
ʺ目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法
ʺ实验原理
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验四 维生素C的定量测定----2,6-二氯靛酚滴定法
思考题
1、要测得准确的维生素C值，实验过程 中应注意哪些操作步骤，为什么？ 2、在测定过程中，样品的草酸提取液为 什么不能暴露在光下？ 3、试简述维生素C的生理意义。
实验仪器
新鲜水果（苹果、猕猴桃、甜橙） 吸管 容量瓶（50ml） 滴定装置（酸式滴定管） 锥形瓶（50-100ml） 研钵 漏斗 纱布
实验试剂
标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶 于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为 0.1mg/ml，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
实验四
维生素C的定量测定----2， 6-二氯靛酚滴定法
一、原理
维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2， 6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原 后变为无色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品 中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全还 原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为 淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，则样品 液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有 维生素C的量成正比。
实验步骤
1 提取
水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干 表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5 毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容 量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至 刻度，充分混匀后过滤。
实验步骤
2 滴定
1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准抗坏血酸溶液1ml和9ml 1%草酸于50ml锥形瓶1 中，同时量取10ml草酸加入另一个50ml锥形瓶2中作空白 对照，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现， 15秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯 酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K）。 取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml（V3），用已标定 的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15 秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，记 录两次滴定所得的结果，求平均值V1。空白滴定方法同前 （V2），
维生素C的定量测定实验报告
生物化学实验报告维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。
在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%HCl；5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。
五、实验操作1、样品的提取松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。
准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。
放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。
最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。
准确称取得大枣 2.0025g、菜椒1.9963g。
分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。
（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液 1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s 即终点；样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；六、数据记录七、数据计算由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸：T = 0.1mg / 0.26ml = 0.385 mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量公式：1000⨯=m VT m 其中：m 100g 样品中含抗坏血酸的质量；V 滴定时所用去染料的体积数；T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml ；0m 10ml 样液相当于含样品之质量数。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法
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8
1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过 程中应注意哪些操作步骤？为什么？
（1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因 为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc；
(2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化， 避免因为标准溶液的误差造成的误差； (3) 整个操作过程 要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超 过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样 品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提 取液稀释度。
OC
C OH
O
C OH
+O
HO C
HO C H
C H 2O H
OC
Cl
N
OH
Cl
2,6-二氯酚靛酚 氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色)
CO CO HO C
O + HO
HO C H
C H 2O H
Cl
NH
OH
Cl
2,6-二氯酚靛酚 还原型(无色)
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三、器材仪器和主要试剂
偏磷酸:2%溶液(W/V)* ,
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸 性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色, 当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则 表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗 坏血酸的含量。
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当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液 呈淡红色，即为终点。
VC 还原型
脱氢VC 氧化型
3、滴定:
1）样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml，用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝 色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染 液毫升数（滴定过程宜迅速，不超过2分钟），取其平均值----VA；
2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前注意：1. 滴定过程宜迅速，一般不超过2min，因为样品中某些杂质亦能还原二氯酚靛酚，尽管其还原能力较弱且还原速度较Vc更慢2. 滴定所用染料宜控制于1~4ml，如果样品含Vc含量过高/低，可酌量增/减样液3. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速Vc氧化计算m = VT /m0 × 100式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)V：滴定时所用去染料体积(ml)T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)m0：10ml样液含样品之质量数(g)试剂和器材试剂1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
维生素C的测定——2,6一二氯靛酚滴定法
实验六、维生素C的测定——2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。
该染料在酸性溶液中是粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。
（2）试剂①1%草酸溶液（m/V）②2%草酸溶液（m/V）③抗坏血酸标准溶液准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，置冰箱中保存。
用时取出5ml，置于50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，配成0.02mg／ml 的标准使用液。
标定吸取标准使用液 5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液 0.5ml、1%淀粉溶液 3滴，以 0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。
计算 c＝088.021VV式中 c——抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；V1—一滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2—一滴定时所取抗坏血酸的体积，ml；0.088—一1ml 0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取 2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml 含有 52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。
次日过滤于 250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。
每星期标定一次。
标定取 5ml已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%草酸溶液 5rnl，摇匀，用 2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s不褪色为终点。
计算：T＝21V Vc式中 T—一每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c—一抗坏血酸的浓度，mg/ml；V1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；V2——消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。
⑤ 0.000167mol／L碘酸钾标准溶液精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100ml，取出 lml，用水稀释至100ml，此溶液 lml相当于抗坏血酸 0.088mg。
实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法
3、滴定:
1）样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml，用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝 色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染 液毫升数（滴定过程宜迅速，不超过2分钟），取其平均值----VA；
2）空白滴定用10ml 2%HCl代替脱色滤液，2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出 现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下滴定所用的染液毫升数------VB；
1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过 程中应注意哪些操作步骤？为什么？
（1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因 为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc；
(2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化， 避免因为标准溶液的误差造成的误差； (3) 整个操作过程要 迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过 2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品 含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取 液稀释度。
(3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反 应进行得很慢
五、思考题
1、指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优 缺点？
2、简述维生素C的生理意义。
维生素C的定量测定-2，6-二氯酚靛酚法
一、实验目的 二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂 四、实验操作 五、思考题
维生素C的定量测定—2-6-二氯酚靛酚滴定法
维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法实验目的1.学习定量维生素C的原理和方法2.掌握微量滴定技术实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。
它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。
它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。
维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。
在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。
氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。
当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。
但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。
所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。
其化学反应式如下：仪器、试剂（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗（二）材料、试剂1、新鲜蔬菜或新鲜水果2、1%草酸溶液1g草酸溶于100ml蒸馏水中3、2%草酸溶液2g草酸溶于100ml蒸馏水中4、标准维生素C溶液准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。
在使用前临时配制。
5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法
Vc含量测定_2,6-二氯靛酚滴定法实验十五抗坏血酸含量测定(2,6-二氯酚靛酚法)一、目的学习维生素C的生理功能和性质，掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素 C是一种水溶性维生素，是人类营养中最重要的维生素之一，人体缺乏维生素 C时会出现坏血病，因此它又被称为抗坏血酸。
此外维生素 C还具有预防和治疗感冒以及抑制致癌物质产生的作用。
维生素C的分布很广，尤其在水果(如弥猴桃、橘子、柠檬、山植、袖子、草莓等)和蔬菜(觅菜、芹菜、青椒、菠菜、黄瓜、番茄等)中的含量更为丰富。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素 C在金属铜和抗坏血酸氧化酶存在下极易氧化，因此，在用铜制品做食品时，维生素 C易丢失。
此外在碱性溶液中，维生素 C也易被破坏，而在酸性溶液中比较稳定。
利用它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能被染料2，6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型，该染料在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后变为无色。
因此用 2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2，6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现淡红色。
用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、仪器、试剂和材料1(仪器(1)天平(2)组织捣碎机(3)微量滴定管(5ml)(4)容量瓶(50ml)(5)刻度吸管(5ml，10ml)(6)锥形瓶(100ml)2(试剂(1)l,草酸溶液:草酸1g溶于 100ml蒸馏水中(2)2,草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中(3)抗坏血酸标准溶液(0.1 mg,ml):精确称取10mg纯抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)用1,草酸溶液溶解并定容至100ml。
实验六 实验七 维生素C的定量测定-2,6-二氯酚靛酚法
五、思考题
1、指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有 何优缺点？ 2、简述维生素C的生理意义。
盐酸：2%溶液(W/V) 抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml)：称取50mg(准确至0.1mg)抗 坏血酸，溶于浸提剂 中并稀至250ml。现配现用。 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液：称取碳酸氢 钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中，然后称取2,6－二氯靛酚 50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至 250ml,过滤至 棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其 滴定度。
四、实验操作
1、提取: 桔子肉10克(西红柿、猕猴桃、枣5克)于研钵 加 2%HCl约10ml 充分研磨 提取液通过两层纱布滤入50ml容量 瓶2%HCl定容到50ml或100ml。
2、脱色:干燥锥形瓶（≧150ml） 加高岭土一匙(用于吸附生物 样品中的色素 )加入定容液充分振摇（约10分钟）静置 上清液 滤纸过滤得脱色滤液。 3、滴定:
计算
维生素Ｃ（mg/100g）样品＝（VA-VB） SV100/WD 式中： VA：滴定样品用去2,6-二氯酚靛酚钠的平均ml数 VB：滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚钠的ml数 S：每毫升2,6-二氯酚靛酚钠溶液相当于维生素Ｃ的mg数
0.088 mg/ml
V：样品提取液总毫升（定容后的ml数，50或100 ml ） D：滴定时所取的样品提取液ml数(10 ml) W：样品的重量（g）
饱和的多羟基化合物，以内酯形式存在。 还原型 氧化型
C=O HO HO C C HC HO C H HO CH 2OH O C=O C=O C=O HC C H O
CH 2OH
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C一、目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
维生素C能够还原染料2,6-二氯酚靛酚，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，被还原后成无色。
当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全。
因此，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、试剂和器材（一）试剂2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸馏水中1%草酸溶液：1g草酸溶于100ml蒸馏水中标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）: 准确称取50mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至500mL，贮于棕色瓶中，冷藏。
最好临用前配制。
存，冷藏(最好临用时配置)；5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液，棕色瓶贮存，冷藏(4℃下可保存一周)，临用时以标准抗坏血酸液标定。
0.1%2.6―二氯靛酚溶液称取2.6―二氯靛酚钠盐500mg，溶于300ml热水中，冷后加水稀释至500ml，过滤后盛于棕色药瓶内，保存在冰箱中。
（二）器材1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)；2. 吸管1.0ml、10.0ml；3. 容量瓶25ml, 100ml；4. 微量滴定管5ml；5. 天平；6. 研钵；7. 漏斗Φ8cm.。
四、操作步骤1. 样液制备适量称取青椒一份10g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，抽滤（或四层纱布过滤，纱布再用少量2%草酸洗几次，合并滤液），滤液转入50ml容量瓶后用2%草酸定容，若不易过滤研磨后以2%草酸洗涤，离心(4000r/min，10min)2—3次，合并上清液于50mL 容量瓶中，定容至刻度。
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维生素C的定量测定—2，6-二氯酚靛酚滴定法
实验目的
1.学习定量维生素C的原理和方法
2.掌握微量滴定技术
实验原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。
它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。
它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很丰富。
维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。
在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料2，6—二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6—二氯酚靛酚，同时将维生素C氧化成脱氢维生素C。
氧化型的2，6—二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈兰色。
当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C尚未全被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原成无色。
但当溶液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即时溶液呈红色。
所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时2，6—二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。
其化学反应式如下：
仪器、试剂
（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml）、微量滴定管、漏斗
（二）材料、试剂
1、新鲜蔬菜或新鲜水果
2、1%草酸溶液
1g草酸溶于100ml蒸馏水中
3、2%草酸溶液
2g草酸溶于100ml蒸馏水中
4、标准维生素C溶液
准确称取20mg纯维生素C 粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml，再取其中10ml稀释至100ml，即得0.02mg/ml的维生素C溶液。
在使用前临时配制。
5、0.02%2，6—二氯酚靛酚溶液
溶解50mg2，6—二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO3的热水中，冷后稀释至250ml，过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。
使用时用维生素C 标准液标定其浓度。
实验步骤
（一）2，6—二氯酚靛酚溶液的标定：
取5ml维生素C标准液及5ml1%草酸溶液于50ml的锥形瓶中，用配制好的2，6—二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持15s不褪色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于0.1mg维生素C，由此可求出每ml2，6—二氯酚靛酚溶液相当于维生素C的mg数。
（二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不可食部分，切碎，混匀）约10克，于研钵中，加入等体积的2%草酸溶液研磨成浆状，得匀浆液。
将匀浆液移入100ml容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转移，加入30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液各5ml，脱色，然后用1%的草酸稀释至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤。
（弃去最初流出的几毫升溶液）（三）用移液管吸取滤液5或10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色15s不褪色为止。
记录所用染料的ml数。
为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过2min。
（此步骤平行作2—3次）
（一）计算
维生素C含量（mg/100g样品）=（VT/W）×100
式中：V为滴定样品所耗用的染料的平均ml数
T为1ml染料相当于维生素C的mg数
W为滴定时所用样品稀释液中含样品的g数
注意事项
1.整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素C被氧化。
滴定过程一般不超过2min。
滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml，若滴定结果不在此范围，则必须增减样品量或将提取液稀释；
2.本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢；
3.提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与2，6—二氯酚靛酚反应，但反
应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点；
4.若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、
30%Zn（AC）2和15%K4Fe（CN）6溶液等，本实验用30%Zn（AC）2和15%K4Fe （CN）6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。
5.在生物组织和组织提取液中，维生素C还能以脱氢维生素C及结合维生素C 的形式存在，它们同样具有维生素C的生理作用，但不能将2，6—二氯酚靛酚还原脱色.
6. 2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而1%的草酸无此作用
思考题
1.指出3—4种维生素C含量丰富的物质。
2.为了准确测定维生素C的含量，实验过程中应注意哪些操作步骤？为什么？。