零基础光学显微镜使用方法

零基础光学显微镜使用方法

编撰：杨历佳

我在本文中主要介绍的内容有：光学显微镜的组成、各部件的作用和原理、具体的操作方法及注意事项、保养和清洁。

普通光学显微镜按物镜放大倍数可以分10倍、40倍和100倍等。根据微生物等样本的大小,选择不同的放大倍数。例如要观察真菌（如酵母菌等）10×10就可以看的很清楚；如果要观察细菌的话至少要用到10×40；想要看的更为清楚就要用100倍的油镜来看，使用油镜时需要滴加香柏油。一般的镜检用400倍（10×40）基本上就足够了。

光学显微镜的组成结构

光学显微镜主要包括：物镜、目镜、反光镜、粗/细准焦螺旋、遮光器、盖玻片和载玻片等部件。如图：

1、物镜：

显微镜的放大作用主要取决于物镜，是显微镜最重要的光学部件，利用光线使被检物体第一次成像。物镜质量的好坏直接影响显微镜映像质量，它是决定显微镜的分辨率和成像清晰程度的主要部件。所以对物镜的质量和校正很重要，它是衡量一台显微镜质量的首要标准。

物镜刻有“10×”符号的为低倍镜，刻有“40×”符号的为高倍镜，刻有“100×”符号的为油镜。

以40×物镜为例，物镜上的数字分别为：40/0.65和160(∞)/0.17

（1）40表示物镜的放大倍数：放大倍数是指眼睛看到的像的大小与对应标本大小的比值。它指的是长度的比值而不是面积的比值。例:放大倍数为100×，指的是长度是1μm的标本，放大后，像的长度是100μm。要是以面积计算，则放大了10，000倍。显微镜的总放大倍数等于物镜和目镜放大倍数的乘积；

（2）0.65为数值孔径（mm），数值孔径越大，样本观察的分辨率和放大率越大，视场宽度与工作距离越小。

数值孔径的定义是：物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和孔径角（u）半数的正弦之乘积。

（3）160为镜筒长度（mm），∞指无穷大。机械镜筒长（镜筒长度）是指从物镜的安装定位处到显微镜镜筒上端面的距离，标准定为160mm；

（4）0.17为所需盖玻片的标准厚度单位（mm）；

工作距离（物距）：

样本调准焦点时，物镜前端与试样或盖玻片顶面的距离。

10倍物镜有效工作距离为6.5mm，40倍物镜有效工作距离为0.48mm。

油镜：

之所以叫油镜，是因为使用油镜时，需在盖玻片上滴加香柏油。可用于观察衣原体、细菌、细胞器等较细微的结构。

因为油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过玻片→空气→透镜时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。如在透镜与玻片之间滴加香柏油，可使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰。

使用步骤：

（1）使用油镜时，需保持显微镜平衡不倾斜。以免油滴或菌液流淌外溢，影响观察；

（2）先用低倍镜对光，调节反光镜和光圈，以获得最适亮度；

（3）标本放在载物台上，用压片夹固定；

（4）低倍镜找出标本范围后，在标本待镜检部位滴加1滴香柏油；

（5）转动镜头转换器，将油镜头部置于工作位置，从侧面观察并缓慢转动粗准焦螺旋，使油镜头部浸没在油滴内，当油镜头部几乎接触玻片时停止转动；

（6）用目镜观察标本，缓慢向上转动粗准焦螺旋（只能上升、不能下降，以免压碎或损坏镜头），直到看到模糊物像；

（7）转动细准焦螺旋，直到物像完全清晰为止。

注意事项

观察完毕后，应立即用擦镜纸擦干镜头上的香柏油。若油已干，可先用二甲苯滴在擦镜纸上，擦拭镜头，然后再用干净的擦镜纸拭去镜头沾有的二甲苯。

如果不出现物象或者目标不理想时，要重找。在加油区之外重找样本时应按：低倍→高倍→油镜顺序，在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

2、目镜

目镜也是显微镜的主要组成部分，它的主要作用是将由物镜放大所得的实像再次放大。常用的目镜放大倍数有：5×、10×、16×等，装在镜筒的上端，一般以10×目镜较为常用。

3、反光镜

装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面。其作用是将光源、光线反射到聚光器上，再经通光孔照亮标本。凹面镜聚光作用强，适于光线较弱的时候使用；平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。

4、聚光器

聚光器安装在载物台下，其作用是将反光镜反射来的光源聚焦于样品上，以得到更强的照明，使物象获得明亮清晰的效果。

显微镜在安装时，大多都已经调节好聚光器高度。建议不要经常调节聚光镜高度，调节好高度后，就不要再移动其高低位置了。

5、载玻片

载玻片是显微镜观察样本时，用来放样本的玻璃片或石英片。呈长方形、大小为76*26mm、较厚、透光性较好。磨砂部分主要用来防滑。

使用方法：

（1）载玻片必须清洁，手持载玻片时，应注意持平；

（2）滴液体样本时，滴量要适当，以恰好被盖玻片盖满为度；

（3）放盖玻片时，从一侧慢慢盖在水滴上，防止出现气泡。然后用压片夹固定。

（4）清理：用清水或酒精清洗，然后再用棉花或纱布擦干净。最好用擦镜纸，手指避免接触载玻片，以免在其上留下指纹，影响下次观察使用。

6、盖玻片

盖玻片呈正方形，大小为18*18mm或20*20mm等，较薄、透光性较好。

盖玻片的主要功能是保持固体样品平压，液体样品成形为均匀厚度的平坦层。它将样品保持在适当位置，并保护样品免受灰尘和意外接触。防止物镜与接触样品直接接触。

液体等样本观察时，须加盖玻片，以免标本因蒸发而干燥变形或污染侵蚀物镜。同时可使样本表面匀平，光线得以集中，有利于观察。

7、转换器

转换器上装有不同放大倍数的物镜，所以转换器是把不同放大倍数物镜进行转换。转换物镜时不可用手直接对物镜进行转换，否则可能会使物镜脱落或光轴歪斜。必须手持转换器转换物镜。

8、粗准焦螺旋、细准焦螺旋

粗准焦螺旋：调焦距，使镜筒大幅度位移。转一圈镜筒上升或下降约4cm，用低倍镜观察的时候用，高倍镜不能使用；

细准焦螺旋：调焦距，使镜筒小幅度位移，转一圈镜筒只上升或下降不到1mm，一般在使用高倍镜观察的时候使用。

使用显微镜时应先调粗准焦螺旋，确定较清晰的视野。然后再转动细准焦螺旋进行微调，使视野更清晰。粗准焦螺旋是用来寻找观察物的，视野比较大。而细准焦螺旋则是用在已经在镜面中找到了观察物的时候。让视野中的观察物更清晰。

9、其它：

镜筒：连接目镜与物镜；

载物台：放置玻片标本，上面有压片夹；

压片夹：固定玻片标本；

通光孔：通过光线；

镜臂：连接镜座与镜身，使用时一般右手握镜臂；

镜座：显微镜的底座，用以支持整个镜体。

显微镜的使用方法详解