石斛组织培养方案
铁皮石斛种苗组培实施方案
铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
铁皮石斛组培方案样本
铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目二、理解铁皮石斛培养办法和环节, 纯熟掌握外植体取材、消毒、接种、初代培养操作过程。
三、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
四、实验环节配方：依照不同阶段, 培养基配方有所差别。
如表1表1 各种培养基配方配制（以1000ml幼株生根壮苗培养基为例）10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于干净大烧杯中, 加热至沸腾；2）精确称量100g香蕉果肉, 切成碎片状, 并倒入上述烧杯中, 加热煮沸5min, 其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序, 量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水烧杯, 混合均匀；4）将2）和3）溶液混合, 然后加入30g蔗糖, 并移取2ml NAA（0.1mg/ml）, 混合均匀；5）加热至沸腾, 加入8g琼脂并煮沸5min, 其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时, 调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内, 33.3ml/瓶。
注意事项:①溶解香蕉蒸馏水尽量多, 以保证香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时, 要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序；③煮沸时, 小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表, 保证灭菌锅各指标和功能正常, 以防事故发生；2）把带灭菌培养基装入锅内, 盖上锅盖, 对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀, 调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后, 关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后, 调节电压至135V, 保持20min；6）关闭电源, 使之自动降温至0℃。
10min后, 打开排气阀和锅盖；7）5—10min后, 取出培养基放于实验台上冷却, 待用。
石斛组织培养与繁殖
石斛组织培养与繁殖0. 引言石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。
本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。
利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。
1.材料及方法1.1实验材料铁皮石斛为采自山区野生原种。
2009 年移栽至室内。
1.2试验方法1.2.1外植体的选取及预处理取2009 年的新生枝条作为外植体。
剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。
在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。
1.2.2接种在培养基中保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。
并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。
其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA0. 5 〜1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 〜1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0.4mg/L。
诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 〜0. 5 mg/L 。
1.2.3组织培养室的条件接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co1.2.4诱导生根枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2〜0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。
铁皮石斛组织培养实验流程
铁皮石斛组织培养实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛的组织培养作者：黄子聪来源：《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要：铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，为传统名贵中药。
由于对生境要求十分苛刻，加之人为过分采收，现已濒临灭绝，已被列为“濒危珍稀植物”。
对铁皮石斛的组织培养及人工栽培进行研究，实现保护野生铁皮石斛资源的同时满足人们的消费需求，具有重要的现实意义。
关键词：铁皮石斛；组培快繁一、铁皮石斛组培培养（一）材料与方法1.供试材料供试材料：果荚：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的铁皮石斛单株进行授粉，获得果荚。
茎段：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的、二年生的、具有20厘米以上的铁皮石斛，自上而下剪下15厘米左右，带回实验室，备用。
2.方法（1）消毒方法果荚的消毒方法：将生长了5个月的果荚用消毒的剪刀从植株上剪下，带到超净工作台下，用75%的酒精浸泡2分钟，然后用灭菌去离子水清洗两次，放在灭菌的空瓶中。
播种前，将要切开的部位及花朵着生位置在酒精灯下稍微过火，然后再将基切开，播种。
（2）种子无菌播种将灭菌的果荚在果荚蒂附近的位置上用灭菌的手术刀切开一个约1.5厘米的切口，然后直接将种子均匀地撒在培养基上。
放在培养架上进行光照培养。
培养基配方：Z0：MS+NAA0.1mg/L+土豆汁100g/L（3）原球茎的增殖及分化将转绿的原球茎转接到增殖分化培养基上，每瓶接种6个点，每个点5个原球茎，5瓶一个重复，设3次重复。
茎段的消毒方法：选取茎段特征明显的铁皮石斛单株，用消毒的剪刀从节间靠下的位置将优选单株剪下，然后将叶片摘除，在自来水下将表面的灰尘洗去。
接下来将茎段上的叶鞘撕掉，特别是底部与节相连接的位置要去干净，同时注意不要伤到休眠芽，再用洗洁精进行表面清洗，在自来水下将洗洁精清洗干净，带到超净工作台下，用75%酒精浸泡两分钟，期间不断地搅拌，再用灭菌去离子水清洗2两，切成每段3-5节，用0.1%升汞（加吐温20 2滴）浸泡9分钟，期间不断地搅拌，倒去升汞溶液，再用灭菌去离子水清洗6次，每次2分钟。
铁皮石斛组培技术介绍
铁皮石斛组培技术介绍铁皮石斛的组织培养技术，大都以茎段、根尖、原球茎、茎尖和种胚等为外植体。
除了固体培养外，近几年来还出现了铁皮石斛液体悬浮培养。
一、铁皮石斛组培技术（1）茎段培养1.培养条件2.取材与消毒从铁皮石斛植株上切下长2～5cm的幼嫩茎段，在流水下冲洗，用刷子蘸少许洗衣粉水溶液轻轻刷洗，并经自来水充分洗净。
在超净工作台上将茎段放置在75%的酒精中消毒30s后，再用0.1%的HgClz 水溶液浸泡8～10min，无菌水冲洗5～6次。
3.诱导培养用解剖刀将铁皮石斛的幼嫩茎段切下，接种在诱导培养基①中进行培养。
15～20天后，外植体开始萌动，茎段膨大，切面及顶部组织形成疏松组织。
继续培养20天后，转入培养基②中，切面及顶部膨大组织的表面形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的类原球茎颗粒物。
4.增殖培养将诱导形成的原球茎转入到增殖培养基中，原球茎增殖速度很快，增殖倍数可达3～4倍，同时部分原球茎开始分化出芽点并长出1～2片小叶，原球茎的增殖与芽分化同时进行。
5.生根培养待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。
培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90%以上。
6.出瓶苗的过渡管理当苗高3cm以上、具3～4片叶时，便可出瓶移栽。
移栽前，将生根瓶苗打开瓶盖，移至常温下炼苗7天，然后将瓶苗取出，洗去附着在根部的培养基，用0.01%的高锰酸钾溶液浸泡8～10min，栽种于已灭菌的碎树皮基质中(移栽前浇透水)，放置在遮光度50%～60%、湿度达80%以上的温室中，2 个月后，成活率达90%以上。
（2）种子培养(胚培养)取人工授粉的铁皮石斛果实，用75%的酒精表面消毒，30秒后再用0.1%升汞消毒8分钟，无菌水冲洗4—5次。
在无菌操作下，把果实切成0.1mm方块，接种到培养基上，每瓶3—5块。
铁皮石斛的组织培植
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛的组织培育
铁皮石斛的组织培育简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种常见的地生兰花，被广泛用于中药材的生产和兰花观赏。
由于其极高的药用价值和观赏价值，铁皮石斛的组织培育技术日益受到关注。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养原理、培育步骤以及培育过程中需要注意的问题。
组织培育原理铁皮石斛的组织培育是通过体细胞分裂和再生的方法，通过悬浮培养、离体培养和液体培养等技术手段，将铁皮石斛的一部分组织或细胞培养繁殖，获得大量的无性繁殖植株。
组织培育的原理基于植物的细胞分化和再生能力，通过合适的培养基和生长因子的添加来促进细胞分裂和再生。
组织培育步骤1. 选择合适的母株：选择生长旺盛、健康无病虫害的铁皮石斛母株作为组织培育的起始材料。
2. 材料消毒：将选取的铁皮石斛茎段进行表面消毒，以防止外来病菌的污染。
3. 切割茎段：将消毒后的茎段切割成1.5-2.0厘米的小段，保证每个小段都有叶鞘和芽。
4. 建立悬浮培养：将切割好的茎段转移到含有适量植物生长因子的悬浮培养基中，使其暴露在光照下，利用悬浮培养的方式促进茎段细胞分裂和再生。
5. 培养条件控制：控制培养温度在25-30摄氏度，光照强度在2000-3000勒克斯，通风和湿度适宜。
6. 培养时间：一般培养时间为6-8周，待茎段上出现新芽后再进行下一步操作。
7. 幼苗分离：将培养好的茎段转移到含有植物生长调节剂的培养基中，促进幼芽的生长，待幼苗生长到一定程度后进行分株。
注意事项- 消毒环节非常重要，一定要保证茎段的无菌状态，以防止病菌和病毒的感染。
- 培养环境的温湿度要适宜，过高或过低的温度、过干或过湿的环境都会影响铁皮石斛的组织培育效果。
- 选择合适的培养基和生长调节剂，可以促进茎段的细胞分裂和再生，提高组织培育的成功率。
- 铁皮石斛的组织培育需要耐心和细心，注意观察幼嫩茎段的生长情况，及时调整培养环境和添加必要的营养物质。
结论铁皮石斛的组织培育是一种有效的繁殖方法，它可以大幅提升植物繁殖速度和质量。
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖
铁皮石斛的组织培养与快速繁殖摘要：实验以铁皮石斛优良品种的茎段为外殖体，诱导丛生芽，壮苗生根，从而实现大量繁殖。
当NAA 的浓度为0.3mg/L , 6-BA 的浓度为5mg/L 时，铁皮石斛丛生芽的增殖率最高。
在MS 培养基中，铁皮石斛壮苗生根的最好培养基为MS + 6 - BA ( 2mg/L ) + 20 ％香蕉汁。
不同激素浓度的6-BA 对铁皮石斛壮苗生根的影响比较得出，不加6-BA 的培养基小苗生根率低、发根迟、根数少；而加人6-BA 后以大幅度提高生根率，尤以在6-BA 0.4mg/L 的培养基中小苗生根快，根数多。
从不同培养基对铁皮石斛试管苗生长的影响看出，幼苗用MS 培养基比用KC 培养基培养生长好。
铁皮石斛培养60d 左右时生长速度最快。
香蕉提取液能促进生长，从而使苗的生长加快。
以MS ＋香蕉汁20 ％的培养基为最好。
关键词：铁皮石斛；组织培养；丛生芽；壮苗生根铁皮石斛是兰科著名的盆载观花植物，具有很高的观赏价值。
近年来，铁皮石斛培养及快速繁殖技术的研究，取得了很大的成果。
本实验对药用铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序，为快速育苗提供了有价值的技术资料和科学依据。
利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。
1 材料与方法1.1 试验材料铁皮石斛优良品种，来源于日本。
1.2 试验方法1.2.1 外植体的选取和预处理将从日本引进的生长旺盛的铁皮石斛健康植株，以茎芽为中心剪下，芽的上下各留0.5cm的茎段，用洗衣粉浸泡20min 左右，取出后再用自来水反复冲洗数次，备用。
1.2.2 外植体的灭菌将预处理过的外植体用75 ％的酒精溶液灭菌30 s，然后用无菌水冲洗l 次，将茎段腋芽的苞叶拨去，然后将0.1 ％的HgC12 溶液倒人烧杯中灭菌10 min ，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，最后用无菌水冲洗5 、6 次将HgCl2溶液冲净并接种到培养基上。
石斛组培育苗的流程
石斛组培育苗的流程
石斛组培育苗的流程主要包括以下几个步骤：
1. 选择生长健壮的3～6厘米长的新芽作为外植体。
2. 用消过毒的利刀将新芽从母体切下，经自来水冲洗30分钟后，剥去最外面一层叶鞘。
3. 在75%的酒精中迅速蘸一下，立即放入15%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟，或放入0.1%的升汞溶液中浸泡8～10分钟，并不时用手轻摇。
4. 取出后再剥去多余的组织，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5～10分钟，取出后用无菌水冲洗数次。
5. 在无菌条件下剥去叶苞片，以顶芽或侧芽作为外植体接种于试管中。
6. 将顶芽接种于KC加1毫克/升NAA的固体培养基或KC液体培养基中，而将侧芽接种于KC固体培养基中培养。
控制室温26℃、光照2000勒克斯、每天光照16～24小时。
液体培养基每两周要更换1次。
7. 对那些只长芽、不长根的个体，可将其转入生根培养基中培养，并在生根培养基中添加少量植物生长素，如0.1毫克/升NAA等。
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛组培技术
• • • • • • • • • • • 一 茎段培养 必要的培养条件 取材与消毒 诱导培养 增殖培养 生根培养 出瓶苗的过渡管理 二 种子培养（胚培养） 三 茎尖培养 四 原球茎培养 五 根尖培养
石斛生产基地
实训时，我们看到的批量的铁皮石斛的生产，以及 工作人员正在上盆，移栽石斛。由此，我们了解到 铁皮石斛生长缓慢，周期长。
组织培养的流程
培养基的流程
培养基配制 灭菌 接种 培养 驯化移栽
灭菌
•接种前我们应该做的灭菌工作： 1.在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫 外线灯； 2.接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿 拖鞋等； 3.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然 后搽拭工作台面； 4.先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾 过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
铁皮石斛的组织培养
园艺3133 王冬玲 12号
目录
一 组织培养的概念 五 驯化移栽
二
组织培养的流程
六
铁皮石斛简介
三
灭菌
七
ห้องสมุดไป่ตู้
铁皮石斛的组培技术
四
接种
八
石斛生产基地
组织培养的概念
• 植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分 离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无 菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植 株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
接种
无菌接种的具体步骤： •将初步洗涤及切割的材料放入烧杯， 带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用 无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放 置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 •．材料吸干后，一手拿镊子、一手 拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的 切割。 •用灼烧消毒过的器械将切割好的外 植体插植或放置到培养基上。
铁皮石斛组织培养
小苗可以用苔藓或水苔!中苗就要树皮石子加苔藓!大苗可用石子树皮等!至于用来培养组织苗的培养基属难告知恩，这个我知道，我就想出了MS培养基，没有其他适合的了吗？培养基也属于商业秘密啊？很多好一些的营养基都是商业密秘!我会去给你找个适合石斛的营养基.只能给你个普通的!希望你喜欢石斛较常见的培养基配方,花宝三克,百分之十到百分之二十的萍果汁一千毫升,蔗糖浓度百分之三点五.琼脂十五克.蒸溜水一千克氢离子浓度调节到一万纳摩/升(PH5.0)常规铁皮石斛开花后采用人工方法授粉，将其种子接种在１／２ＭＳ液体培养基中非共生萌发培养时，再转入含有０．０１％Ｏｒｙｚａｌｉｎ＋０．０１％秋水仙碱的１／２ＭＳ液体培养基中进行诱变处理，然后转入１／２ＭＳ固体培养基上，光照；取新生长的根尖固定，用压片法制备染色体标本，卡宝品红染色液染色，染色体数目为２ｎ＝７６的幼苗为四倍体铁皮石斛，按通常方法进行栽培管理。
现在大部分采用松树皮发孝后来种的！铁皮石斛组织培养的培养基用到的主要基本培养基是MS培养基，也不只是这一种，其它的WV、winte等都可以用，但是一般多用MS培养基，也可以用1/2MS培养基，大量元素减半，其它元素不变。
除此之外，还有加一些生长素（如IAA、IBA、NAA等），细胞分裂素（如6-BA等）。
但是不同的培养时期也不同的激素配合。
如诱导愈伤组织时，要两种激素的配合。
增殖传代时也要两种激素的配合，但生长素为主；分化时以分裂素为主，壮苗和生根以生长素不主。
一般用量都是0.1-10mg/L这个范围里。
此外，还有的加了什么香蕉素，椰看你是用什么外植体，或是想诱导什么先了，一般如果是茎段的话，用一般的MS+0.3mg/L NAA+5mg/L 6-BA做诱导培养基就好，但是如果你要用根茎做外植体诱导原球茎的话，最号用1/2MS加上水解乳蛋白和激动素和6-BA 就好,量看你外植体了，不同的类型不同乳等。
一般NAA：6-BA是10：1，即2：0.2mg/L（一）繁殖技术石斛的繁殖方法分为有性繁殖和无性繁殖两大类，目前生产上主要采用无性繁殖方法。
石斛组织培养
一、增殖、分化培养基的筛选 1 材料与方法 1.1 材料原球茎为实验室培养（MS+4.0mM NAA+10%香蕉） 1.2 方法1.2.1 培养基的配制表1 影响因素与水平的设定水平 培养基 NAA(mg/L)马铃薯提取液1 MS 0 0%2 1/2MS 0.25 20% 3-0.5 -表2 培养基试验号 培养基 NAA(mg/l) 马铃薯提取液 pH 重复数 1 1 1 2 5.80 10 2 1 2 1 5.81 10 3 1 3 2 5.83 10 4 2 1 1 5.81 10 5 2 2 2 5.80 10 62315.7910注： 10各三角瓶，大瓶4个（容积200ml ），小瓶6个（容积100ml ）；大瓶注入培养基25ml ，小瓶瓶中注入15ml 培养基。
1.2.2接种量超净台上，接入原球茎，接入量如表3所示：表3 各瓶接入的原球茎重量（g ）1.2.3 指标的确定与结果统计瓶号 试验组 小瓶大瓶 123456789101 0.41 0.45 0.41 0.40 0.52 -0.44 1.25 1.17 1.20 1.18 2 0.29 0.41 0.52 0.48 0.32 0.44 1.01 1.05 1.07 0.883 0.30 0.40 0.39 0.44 0.42 0.22 1.08 1.02 0.65 0.93 4 0.51 0.54 0.58 0.44 0.29 0.39 1.07 1.21 1.12 1.00 5 0.39 0.36 0.29 0.57 0.46 0.41 0.84 0.97 1.29 0.96 60.40 0.40 0.37 0.36 0.40 0.38 0.91 1.49 0.86 0.78接种后77天统计原球茎重量、分化程度。
2 结果图1 各处理原球茎增殖、分化情况（从左至右处理号依次为：1、2、3、4、5、6）2.1 增殖重量表4 各瓶的原球茎增殖率（%）瓶号 试验组 大瓶小瓶 合计1 23456789101 17.07- - 0.00 -57.69 -122.73 238.40 229.91 336.67 175.42 171.452 - -- - -- - - 20.56 -100.00 -80.063 --52.50 --45.45 -85.71- 340.74 126.47 173.85 - 59.664 -41.18 35.19 -13.79 -90.91 3.45 -41.03 5.61 -16.53 29.46 -80.00 -17.625 5.13-68.97 -84.21 -93.48 -242.86 238.14 93.80 -6.25 55.666--- - -50.00 -76.32 52.75 26.17 26.74 67.95 -6.14注：“-”表示材料已死亡。
铁皮石斛组织培养与栽培技术分析
移植到炼苗房，让其在炼苗房内栽植 3 口，而底部则需要做好封闭，同时设置 收后，应注意及时喷施保护性杀菌剂以
周左右的时间，在此期间内，实现试管 防虫网，避免蚊虫进入对作物生长带来 预防病害的发生。
苗对自然环境的适应的整个过程。经过 影响。
就铁皮石斛培养目前的发展形式
一段时间的培育，幼苗的叶子呈现浓绿
因素进行有效控制变化铁皮石斛种子 苗来说，则需要采用多菌灵，进行杀菌 正常发育的幼苗和污染幼苗、少根幼苗
的发芽率，进而影响铁皮石斛的产量和 处理之后，进行单独栽植，避免由于杀 进行分区栽植。
质量。有部分学者对种龄与萌芽的关系 菌处理不
进行研究之后可以发现，在采用组织培 带来不良影响。
片左右，颜色正常的情况下方可出瓶。 当的基质。在对多种基质的培养情况进 石斛生物特性的研究，以便于为其提供
除此之外，对根系的生长状态也具有一 行对比分析之后可以发现以石灰岩碎 更加适宜的生长环境。
定的要求，具体表现为根系表皮应呈现 石滤水层 5cm+锯末 8cm+活苔藓 2cm
作者单位： 山东省德州市
优势，无论是萌芽时间还是萌芽率都表 究之后，选择适当的栽种区域，一般而 长适宜温度为 20～30℃。夏季温度高
现为种龄越大萌芽所用时间越短，萌芽 言，有野生铁皮石斛分布的区域更适宜 时，大棚内须通风散热，同时进行喷雾
率越高。由此可见，在进行组织培养时 铁皮石斛的栽培。如在栽植区域没有野 降温保湿；冬季气温低时，可通过加温
光照。郑勇平等认为，光照强度控
养技术进行萌芽操作时，选用了 2-6月
2、栽培地与栽培设施的选择
制在 3万 lx以内最适宜铁皮石斛组培
种龄的种子进行分别培养，其中种龄较
为了保证铁皮石斛的产量和质量， 苗的生长；温湿度。铁皮石斛组培苗在
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术铁皮石斛是一种具有药用价值的珍稀植物，主要分布在我国南方地区，具有滋补强壮、美容养颜等功效。
随着市场需求的增加，铁皮石斛的种植和生产也逐渐受到关注。
为了提高铁皮石斛的产量和质量，探索组培苗驯化移栽技术成为一种重要研究方向。
铁皮石斛组培苗驯化移栽技术是利用无菌条件下，通过组织培养技术，将铁皮石斛的组织细胞培养成幼苗，然后进行驯化和移栽，以提高铁皮石斛的生长速度和产量。
该技术在当前的铁皮石斛种植中具有重要意义，可以保证铁皮石斛的质量和产量，缩短生长周期，提高生产效益。
一、组培苗培育1. 原料植物的选择：选择健壮、生长良好的成年铁皮石斛植株，从中选择茎尖或芽尖作为组织培养的外植体。
2. 表面消毒：将外植体表面进行消毒处理，常用的消毒剂包括75%酒精擦拭、0.1%过氧化氢浸泡等方法，以杀灭表面的细菌和病原体。
3. 外植体无菌培养：将消毒处理后的外植体置于无菌条件下进行培养，通常在含有植物生长调节物质的培养基上进行，利用植物生长调节物质的作用，促进外植体的生长和增殖。
二、组培苗驯化1. 生长环境的控制：组培苗需要在恒温、恒湿、无菌的条件下进行生长，保持光照适宜、温度稳定等环境条件，以保证组培苗的健康生长。
2. 逐步减少培养基中植物生长调节物质的浓度，使组培苗逐渐适应外界环境，准备进行移栽。
三、组培苗移栽1. 土壤选择：选择肥沃、疏松、透气性好的土壤，并进行消毒处理，防止土壤病原体的侵害。
2. 移栽时间：在气温适宜的季节进行移栽，通常选择春季或秋季，避免高温或寒冷对组培苗造成伤害。
3. 移栽后的管理：移栽后需要对组培苗进行适当的养护管理，包括保持土壤湿润、加强施肥、防治病虫害等工作，促进组培苗的生长和成活。
虽然组培苗驯化移栽技术在铁皮石斛种植中具有重要意义，但在实际操作过程中还存在一些问题和难点，需要进一步加强研究和改进。
在组培苗培育过程中，如何选择合适的外植体、消毒处理的方法以及培养基配方的优化等问题，都需要进行深入研究和探讨。
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石斛组织培养方案
1、植物介绍：
石斛（Dendrobium）属兰科多年生草本气生植物，全世界兰科植物约700属，近2000种，世界各地均有分布。
我国兰科有170余属，约有1200余种，而石斛属有74种和2个变种。
石斛属为兰科第二大属，石斛属植物中有近40 种具有药用价值。
1）供试材料来源：
选取长势旺盛的枝条，去除多余的叶片，切取除顶芽剩余的作为外植体。
提供的材料去十堰花鸟市场购买。
2）技术路线：
外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽
2方法步骤：
1）外植体的剪取与消毒程序的筛选：
切取除顶芽外的石斛作为外植体段去叶片留叶柄→流水冲洗30min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3~7min→无菌水冲洗4~5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成带有1~2个腋芽的小
段
2)初代培养基的筛选：
选用MS为最基本的培养基，根据需要的不同，添加激素6-BA、NAA、ZT。
3)增殖培养基的筛选：
以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、ZT含量的不同，诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1~4号），生根培养基设2系列处理（培养基5~6号），培养基配方表如下：
表中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g/L，pH值5.6~5.8，在115MPa气压下灭菌20min。
4)生根培养基的筛选
不同的培养基进行生根的优势也不一样，根据大量的材料表明1/4 MS中的小苗生根均明显优于全量的MS培养基，所以用激素以IBA
0.5mg/L效果最好，生根情况好且所需天数也最短。
最适培养基应
该为1/4 MS+IBA 0.5mg/L
5)试管苗移栽试验：
当苗根长到1~1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基。
用多灵菌500~800倍浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒
过的苗床上。
苗床基质分5个处理，分别为沙：草炭土=1:1、沙：蛭石=1：1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。
（根据资料查找以腐苔藓为基
质最好，成活率达80%以上，草炭土和沙半量也可达50%的成活率。
）。