石斛组织培养方案

石斛组织培养方案

1、植物介绍：

石斛（Dendrobium）属兰科多年生草本气生植物，全世界兰科植物约700属，近2000种，世界各地均有分布。我国兰科有170余属，约有1200余种，而石斛属有74种和2个变种。石斛属为兰科第二大属，石斛属植物中有近40 种具有药用价值。

1）供试材料来源：

选取长势旺盛的枝条，去除多余的叶片，切取除顶芽剩余的作为外植体。提供的材料去十堰花鸟市场购买。

2）技术路线：

外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽

2方法步骤：

1）外植体的剪取与消毒程序的筛选：

切取除顶芽外的石斛作为外植体段去叶片留叶柄→流水冲洗30min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3~7min→无菌水冲洗4~5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成带有1~2个腋芽的小

段

2)初代培养基的筛选：

选用MS为最基本的培养基，根据需要的不同，添加激素6-BA、NAA、ZT。

3)增殖培养基的筛选：

以MS为基本培养基，按激素6-BA、NAA、ZT含量的不同，诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1~4号），生根培养基设2系列处理（培养基5~6号），培养基配方表如下：

表中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g/L，pH值5.6~5.8，在115MPa气压下灭菌20min。

4)生根培养基的筛选

不同的培养基进行生根的优势也不一样，根据大量的材料表明1/4 MS中的小苗生根均明显优于全量的MS培养基，所以用激素以IBA

0.5mg/L效果最好，生根情况好且所需天数也最短。最适培养基应

该为1/4 MS+IBA 0.5mg/L

5)试管苗移栽试验：

当苗根长到1~1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基。

用多灵菌500~800倍浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒

过的苗床上。苗床基质分5个处理，分别为沙：草炭土=1:1、沙：蛭石=1：1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。（根据资料查找以腐苔藓为基

质最好，成活率达80%以上，草炭土和沙半量也可达50%的成活率。）