胶体金培训44页PPT
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胶体金试纸条诊疗技术培训课件
形状各异。
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用 于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
胶体金试纸条诊断技术的原理
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就 会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 记，这决定了它具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊疗 技术
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
测定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用 于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
胶体金试纸条诊断技术的原理
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就 会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 记，这决定了它具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊疗 技术
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
测定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
《胶体金检测技术》ppt幻灯片
培训资料
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。
《免疫胶体金技术》课件
该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
实验六 胶体金免疫层析技术PPT课件
第2页/共16页
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
第3页/共16页
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
第9页/共16页
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
第10页/共16页
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
第11页/共16页
胶体金快速诊断技术的特 点
粒为球形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，
形状各异。
第4页/共16页
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于 抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
第5页/共16页
胶体金试纸条诊断技术的原 理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
第6页/共16页
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
第3页/共16页
简介
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗
第9页/共16页
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 （免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色 质 控 线条（R）。
第10页/共16页
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
第11页/共16页
胶体金快速诊断技术的特 点
粒为球形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，
形状各异。
第4页/共16页
简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。 胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于 抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
第5页/共16页
胶体金试纸条诊断技术的原 理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
第6页/共16页
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
胶体金的制备及其应用PPT课件
胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液 或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内 抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
结果判读
怀孕
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 缺点 定量问题 灵敏度问题
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
免疫胶体金技术(转)PPT课件
前景展望
1 2 3
不断改进技术
随着科学技术的不断发展，免疫胶体金技术将不 断改进和完善，提高检测的灵敏度和特异性。
拓展应用领域
免疫胶体金技术的应用领域将不断拓展，不仅限 于医学诊断，还可应用于食品安全、环境监测等 领域。
实现自动化和智能化
未来免疫胶体金技术将与自动化、智能化技术相 结合，提高检测的效率和准确性，为临床诊断和 科学研究提供更好的服务。
用。
04
免疫胶体金技术具有操作简便、特异性高、稳定性好 等优点，但也存在一些限制，如检测灵敏度相对较低， 对某些低浓度目标物质检测效果不佳。
对未来研究的建议
01
深入研究免疫胶体金技 术的反应机制和影响因 素，为优化技术提供理 论支持。
02
探索新型的标记物和信 号放大策略，提高检测 灵敏度和特异性。
成熟发展
90年代至今，免疫胶体金 技术不断优化，应用范围 逐渐扩大。
02
免疫胶体金技术的制备方法
胶体金的制备
制备原理
利用氯金酸的水溶液在碱性条件下加热产生聚合物颗粒，通过控制反应条件如 温度、pH值和反应时间，可控制胶体金的粒径大小。
制备步骤
将氯金酸水溶液加热至沸腾，加入氢氧化钠调节pH值至碱性，继续加热至溶液 变为橙红色，冷却后即可获得胶体金溶液。
免疫抗原的制备
抗原选择
选择具有特异性识别能力的抗原，如抗体、多肽等，确保与 目标分子有高亲和性。
抗原制备
将抗原与载体蛋白结合，形成抗原-载体蛋白复合
结合原理
利用抗原-抗体之间的特异性结合反应，将免疫抗原与胶体金结合，形成胶体金 标记的免疫复合物。
结合方法
免疫胶体金技术(转)ppt课 件
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备方法 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的优缺点及前景展望 • 结论
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
21
吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
免疫胶体金PPT课件
免疫胶体金技术的应用领域
医学诊断
食品安全
用于检测各种疾病相关 的抗原、抗体，如HIV、
肝炎、癌症等。
用于检测食品中的有害 物质和添加剂，保障食
品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等 环境中的有害物质，保
护环境健康。
生物科学研究
用于研究生物分子相互 作用、细胞信号转导等
生物学过程。
02
免疫胶体金技术的原理
结果判断主观
02
该技术结果判断需要人工进行，不同操作者判断标准可能存在
差异，导致结果不一致。
适用范围有限
03
免疫胶体金技术主要适用于定性检测，对于定量检测和结构分
析等方面存在局限性。
改进方向
提高特异性
通过改进抗体和抗原的纯化技术、优化标记物和检测条件等手段， 提高免疫胶体金技术的特异性。
实现自动化
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、结果直观等。
免疫胶体金技术的发展历程
01
02
03
起源
20世纪70年代，英国科学 家利用胶体金标记技术制 备出了第一个单克隆抗体。
发展
随着技术的不断完善，免 疫胶体金技术在医学、生 物学等领域得到了广泛应 用。
最新进展
近年来，纳米胶体金标记 技术的研究取得了重要突 破，提高了检测的灵敏度 和特异性。
抗体与抗原的结合
将抗体与抗原混合，使其在一定 条件下结合。
洗涤
去除未结合的抗原和抗体，提高 实验的特异性。
胶体金的标记
胶体金的制备
通过还原剂的作用将金离子还原成胶体金颗粒。
胶体金的标记
将已制备好的胶体金与已结合的抗体结合，形成 金标抗体复合物。
胶体金 ppt课件
(三) 技术要点
• 1.试剂盒组成 ①滴金反应板 (图20-1)胶体 金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一， 由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或 抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。② 胶体金标记物 ③洗涤液 。
2.操作要点
• 2.操作要点 ①将反应板平放于实验台面上，于 小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗 入；②于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2 滴，待完全渗入；
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒
免疫胶体金技术培训课件
免疫胶体金技术
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（四）制备胶体金的注意事项
1. 玻璃器皿的清洁
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏 水反复洗涤→晾干
2. 试剂配制
应尽量使用分析试剂
各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制
3. 影响胶体金颗粒大小的因素
加入还原剂的速度
搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小
免疫胶体金技术
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三. 胶体金探针的制备
免疫胶体金技术
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（二）胶体金的基本概念 胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金
溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm 之间。
免疫胶体金技术
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二. 胶体金的制备
(一) 可用多种方法制备胶体金 1. 分散法:包括机械分散法、超声波法、电分
散法和胶溶法等
2. 凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法（氧 化法、水解法和还原法）
3. 其中应用最多的是化学还原法
免疫胶体金技术
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化学还原法
【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还 原剂，使金离子还原为金原子。在适当条件下， 还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒，形成 金溶胶。
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
免疫胶体金技术
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(一)免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
【基本原理】
1. 直接法---将胶体金标记的一抗直接对标本进行染色, 然后在光镜或电镜下观察
方法简单, 但一种探针仅限于检测一种抗原, 较局限
2. 间接法---先将未标记的特异性一抗与标本中的抗原 结合, 然后加金标二抗或SPA与一抗结合, 在光镜或电 镜下对抗原的分布进行定位研究
胶体金试纸条检测技术(课堂PPT)
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
16
谢谢观看!
17
快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！
欢迎批评指导！！
2019
18
3
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
4
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
5
➢胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球
形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状
各异。
6
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
14
胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙 虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
7
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
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➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
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胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
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➢胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球
形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状
各异。
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胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易 判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这 决定了它具有很好的特异性。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙 虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
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二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
评价指标
灵敏度：试剂具有检测出最低量被检物的能力。 灵敏度是诊断试剂的首要质量指标。 特异性：试剂正确检定不存在的被检物质的能力（即 无假阳性）。 精密度：重复测定值之间的符合程度，批内CV（变 异系数）值应小于15%。 稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间。
发展方向
形式创新
显示窗口的设计、显示结果显示设计
吸水棒吸水后会改变颜色
技术创新
Technology 技术
项目开发技术路线图
抗体的制备 抗体膜的制备 装配
固相膜筛选
胶体金标记 技术的研究
胶体金的制备 胶体金标记物的制备 胶体金标记物吸附在玻纤上
固相技术 的选择优化
试纸板的生产 切割
组装、包装
膜的介绍
1、硝酸纤维素膜 在检测线和对照线条带区域固 定抗体 2、包被材料 将抗原或抗体通过喷膜机喷到 硝酸纤维膜上的过程叫包被过程。
3、喷膜机 喷膜机是将包被液包被到膜上 面的机器。 影响产品质量和实验效果的参 数有： ①喷膜速度 ②喷膜参数 ③灌注量 ④线条间隔和位置
金子垫的介绍
1、标记材料 将胶体金和标记材料结 合起来的过程叫标记。 标记材料的作用是和胶 体金标记物结合，捕获目 标蛋白，结合膜上T线材 料，从而显示出检测结果。
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔价格源自最经济3-5元5-10元
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3.胶体金检测卡的组成
3.1结构：主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜（NC 膜），吸水垫4个部分组成，从下至上依次首尾互相衔 接，粘贴在PVC底板上。
3.胶体金检测卡的组成
3.2作用： ⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的
过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对 检测结果的干扰。
pH调至8.0 标记抗体
BSA或PEG
封闭
12000转/分
离心
复溶
封闭多余的游离胶体金， 稳定胶体金标记物 将胶体金标记物沉淀
将胶体金标记物重新溶解
3.胶体金检测卡的组成
（3）金垫制备 将标记好的金标复合物喷涂在玻璃纤维素膜上，在 干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 （4）样品垫制备 将样品垫处理液浸涂在玻璃纤维素膜上，在干燥间 或烘箱中37℃将其烘干。
T:Clen-BSA Y2:羊抗鼠抗体
预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C） 分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗 鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在 玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样 滴加在样品垫上，当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓 度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从 而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在 检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗 （Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的 抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和 金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包 被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫 红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有 盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条 紫红色条带。
⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素 膜上，是追踪抗体与抗原的反应。
⑶硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能 够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在 检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结 果。
⑷吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金 垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生 反应。
结果判定：
阴性:检测线(T)与质控线(C)都出现，表明样品中不含有 盐酸克伦特罗或其残留量低于检测限。 阳性:只有质控线(C),无检测线(T)，表明样品中盐酸克伦 特罗的浓度高于检测限。 无效:在质控线（C）处，无紫红色条带出现，判定为试纸 条无效。
4.胶体金检测卡的原理
4.2夹心法
预先在硝酸纤维素膜的检测线（T）上和质控线（C） 分别包被上犬细小抗体和羊抗鼠二抗，将胶体金标记 的犬细小免疫鼠抗体固着在玻璃纤维上制成金垫，组 装成试纸条。将检测样本加入加样孔内，由于层析的 原理向上移动，当遇上干燥的金标复合物，将其溶解， 并带着金标复合物继续往上移动，至硝酸纤维素膜的 检测线。如果样品中有犬细小病毒抗原存在，包被在 检测线上的犬细小抗体和胶体金标记的犬细小抗体与 样品中的犬细小病毒抗原将会在检测线上形成一个夹 心的免疫复合物，呈一条紫红色条带，判定为阳性。 若感染犬细小病毒越严重，样品中犬细小病毒含量就 越高，条带颜色就越深。如果样品中没有犬细小病毒， 检测线（T）上没有色带出现，判定为阴性。样品和 金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包 被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫 红色条带，证明本检测卡有效。
3.胶体金检测卡的组成
（5）印膜制备 将硝酸纤维素膜（NC膜）贴在PVC底板上，将印膜机 的C,T线调整到合适的距离，然后进行印膜，最后将 印好的膜放在干燥间或烘箱中37℃将其烘干。
3.胶体金检测卡的组成
（6）组板 将吸水垫和制备好的金垫、样品垫裁切至合适的宽 度，与印好C,T线的硝酸纤维素膜贴在PVC板相应的位 置。
胶体金溶液
2.胶体金的制备
2.2注意事项： （1）玻璃器皿的清洁
制金前，玻璃器皿先用王水或铬酸溶液浸泡24小 时，用自来水冲洗干净，然后依次用清洁剂洗涤3次， 自来水冲洗3次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗3次。
胶体金溶液澄 清透亮，颜色 均一，无异物 、无漂金现象 。
2.胶体金的制备
（2）试剂的配制 制备胶体金需要配制的氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶 液必需使用双蒸水。 氯金酸溶液可以存放在4℃冰箱中，保存1年左右。 还原剂柠檬酸三钠溶液需要新鲜配制。
1.胶体金的结构及性质
1.2胶体金的结构 胶体金是由一个基础金原子核与包围在外层的 负离子层（AuCl2-）构成，呈球形(小颗粒)或 椭圆形(大颗粒)。胶体金颗粒最外层可以吸附 大量的正离子，能够均匀的分散在溶液中。
1.胶体金的结构及性质
1.3胶体金的性质 （1）外观：随着胶体金粒径的逐渐增大， 胶体金溶液的颜色从橙色逐渐变为紫色。
胶体金快速检测卡的研制 及应用
胶体金组 李 晓
主要内容1Biblioteka 胶体金的结构及性质2
胶体金的制备
3
胶体金检测卡的组成
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胶体金检测卡原理
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胶体金检测卡产品介绍
1.胶体金的结构及性质
1.1胶体金的概念 胶体金：指的是粒径在1～100nm之间能够均匀、 稳定地、分散在液体中的金纳米颗粒，因其水溶 液呈胶体状，因此称之为胶体金溶液。
3.胶体金检测卡的组成
3.胶体金检测卡的组成
3.3制作过程 （1）胶体金的制备
将氯金酸加热煮沸，用柠檬酸三钠还原制成粒径约为 40nm酒红色的胶体金溶液。
胶体金溶液澄清透亮，颜 色均一，无异物、无漂金 现象。
3.胶体金检测卡的组成
（2）胶体金的标记
胶体金
0.2mol/L K2CO3 适量抗体
（2）特性：由于胶体金表面呈负电性，能够与表面 带正电荷的蛋白（抗原、抗体）通过静电作用结合 进行标记。
2.胶体金的制备
2.1制备方法（还原法）：采用还原剂将氯金酸（ HAuC14）还原成胶体金，常用的还原剂有柠檬酸钠 、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。
柠檬酸钠 加热煮沸 氯金酸（HAuC14）
组装好的大板
3.胶体金检测卡的组成
（7）切条 根据检测卡卡槽的宽度，将组装好的大板裁切成一 定宽度的检测条，裁切宽度均一，无压痕，无划伤。
3.胶体金检测卡的组成
（8）包装 将裁切好的检测条压入检测卡壳内，配上吸管和干 燥剂装入铝箔袋内，并密封好，按照一定的规格装入 包装盒内。
4.胶体金检测卡的原理
原理
竞争法
基于检测小分子半抗 原和包被抗原对胶体 金标记抗体的竞争关 系，主要是针对食品 安全药物残留快速检 测产品。
夹心法 基于包被抗原（或 抗体）与胶体金标 记抗原（或抗体） 能够与检测抗体（ 或抗原）形成夹心 复合物。主要是针 对动物疫病检测产 品。
4.胶体金检测卡的原理
4.1竞争法
Y1:Clen单克隆抗体