实验六双波长分光光法测定

Cs
每片中含SMZ的毫克数
m SMZ
Cs
Ax As
100 W
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W称 1000
Cs = 0.505mg/ml
W称=0.06960g
W=552.64mg
由于参比波长对测定影响较大， 故采用对照品溶液来确定。此波长 可因仪器不同而异，测定时应仔细 选择。
三、实验内容
1、供试品溶液的制备（教师准备）
取本品10片，精密称定，研细，精密 称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg 与甲氧苄啶10mg)，置于100mL量瓶 中，加乙醇适量，振摇15分钟使磺胺 甲噁唑与氧苄啶溶解，加乙醇至刻度， 摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液。
一、实验目的 1．掌握双波长分光光度法测定原理。 2．学习双波长分光光度法在复方制 剂分析中的应用。
复方磺胺甲噁唑片的处方为： 磺胺甲噁唑（SMZ） 400g 甲氧苄啶 （TMP） 80g 制成1000片 每片含SMZ：360~440mg(Chp 2000)
二、基本原理
当吸收光谱重叠的a、b两组分共 存时，若要消除a组分的干扰测定b组 分，可在a组分的吸收光谱上选择两 个吸收度相等的两波长λ1和λ2，测定 混合物的吸光度差值。然后根据ΔA 值计算b的含量。
磺胺甲噁唑（SMZ）在257nm波长 处有最大吸收；甲氧苄啶（TMP）在此 波长吸收最小并在304nm波长附近有一 等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定 波长（λ2），在304nm波长附近选择参 比波长（λ1）。
A257＝AS，257＋AT,257 A304＝AS，304＋AT,304 ΔA＝ A257－ A304 ∵AT,257＝AT,304
＝AS，257－AS，304 ＝ΔEC SMZl ΔA与CSMZ有线性关 系。
在λ2与λ1两波长处分别测定供试 品溶液与SMZ对照品溶液的吸收度， 求出供试品溶液吸收度差值(ΔAx) 、 SMZ 对 照 品 溶 液 的 吸 收 度 差 值 (ΔAs) ，计算，即得。
Ax C x As Cs
Cx
Ax As
二、对照品溶液的制备（教师准备）
精密称取在105℃干燥至恒重的磺 胺甲噁唑对照品50mg与甲氧苄啶对 照品10mg，分别置于100mL瓶中， 各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 分别作为对照品溶液(1)与对照品溶 液(2)。
三、磺胺甲噁唑的测定
精密量取供试品溶液与对照 品溶液(1)，(2)各2mL，分别置 于100mL量瓶中，各加0.4％氧 化钠溶液稀释至刻度，摇匀。
取对照品溶液(2)的稀释液，以 257nm为测定波长（λ2），在304nm波长 附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为 参比波长(λ1)，要求ΔA＝Aλ2－Aλ1＝0。
再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品 溶液的稀释液与对照品溶液(1)稀释液 的吸收度，求出各自的吸收度差值 (ΔA)，计算，即得。
四、操作注意事项
测定之前应先检查仪器波长是否 准确。
五、思考题
1．双波长分光光度法测定复方制剂有 何优点?
2．应用双波长分光光度法应如何选择 测定波长和参比波长?