大花蕙兰四倍体的离体诱导和鉴定
蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)离体快繁及四倍体培育研究
蕙兰（Cymbidium faberi Rolfe）离体快繁及四倍体培育研究蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)为兰科(Orchidaceae)兰属(Cymbidum Sw.)多年生草本花卉,具有很高的观赏价值,也是经济价值最高的兰花之一。
兰花主要靠分株繁殖,生长速度慢,繁殖系数低,另外兰花种子没有胚乳和子叶,常规播种难以萌发。
兰花育种的主要方法是杂交育种,但由于兰花种子发育不全,杂交育种很繁琐。
冈此,繁殖和育种是兰花的主要问题。
迄今为止,有关兰花的研究主要集中于洋半和国兰中的墨兰,而蕙兰的相关研究很少。
通过组织培养进行多倍体的诱导是进行快速繁殖和品种改良的有效途径。
为此,本文对蕙兰组织培养中多倍体诱导进行了研究,以期为蕙兰新品种的选育奠定基础。
蕙兰离体再生体系的研究结果表明:最佳外植体消毒方式是以洗涤剂浸泡10 min,自来水冲洗30 min,75%乙醇消毒60 s,0.1%升汞消毒10 min(加数滴吐温-20).无菌水冲洗4-6次为宜。
初代诱导芽分化的适宜培养基为MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA,诱导率达93.3%:其继代增殖的适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA,增殖系数为4.8;适宜的生根培养基为MS,植株和根系生长状况良好,生根率为100%,移栽成活率为85%。
在建立离体再生体系基础上,利用秋水仙素溶液为诱变剂,采用浸泡法和混培法对蕙兰进行多倍体诱导,结果表明:两种方法中以浸泡法处理效果较好,以0.5%秋水仙素溶液浸泡处理48 h为佳,诱变产生的植株经染色体鉴定,其染色体数目为2n=4x=88,属四倍体类型,诱导率高达13.3%。
四倍体蕙兰在二倍体的适宜增殖培养基上增殖,在MS+1.0 mg/LIBA的生根培养基上生根,增殖与生根情况良好,移栽成活率为60%。
对诱导获得的四倍体蕙兰新种质与二倍体植株进行了外部形态和细胞学的比较观察,结果表明:在同一生长阶段和环境条件下,四倍体植株叶片形态充分体现了器官的巨人性。
大花蕙兰四倍体的离体诱导和鉴定
大花蕙兰四倍体的离体诱导和鉴定王木桂;曾瑞珍;谢利;黎扬辉;曾飞燕;杜宝贵;张志胜【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2010(030)001【摘要】采用组织培养方法研究了秋水仙素处理对大花蕙兰类原球茎增殖、分化和四倍体诱导的效应.结果表明,秋水仙素处理明显抑制类原球茎的增殖和分化,提高类原球茎褐变率和死亡率;在试验浓度和时间范围内,秋水仙素浓度越高,处理时间越长,抑制作用越强,解除抑制作用所需的继代次数越多.所有秋水仙素处理均能诱导出四倍体,但不同处理的四倍体诱导率不同,当处理浓度为0.05%、时间为5 d时,四倍体诱导率最高,为23.7%.二倍体及其四倍体的气孔保卫细胞长度和气孔密度均存在极显著的差异.四倍体植株比二倍体矮,茎部较粗壮,株型紧凑,叶片颜色浓绿、质地变硬.秋水仙素处理和组织培养相结合是创建大花蕙兰多倍体的有效方法.【总页数】7页(P56-62)【作者】王木桂;曾瑞珍;谢利;黎扬辉;曾飞燕;杜宝贵;张志胜【作者单位】华南农业大学,广东省植物分子育种重点实验室,广州,510642;华南农业大学,广东省植物分子育种重点实验室,广州,510642;华南农业大学,广东省植物分子育种重点实验室,广州,510642;广州花卉研究中心,广州,510360;广州花卉研究中心,广州,510360;广州花卉研究中心,广州,510360;华南农业大学,广东省植物分子育种重点实验室,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】Q813.5【相关文献】1.铁皮石斛四倍体离体诱导和鉴定及生理特性研究 [J], 杨岚;师帅;向增旭2.甜叶菊同源四倍体离体诱导及鉴定 [J], 李红;杨岚;向增旭3.菊科类青蒿同源四倍体的诱导和根尖染色体鉴定研究 [J], 张宇4.茅苍术同源四倍体离体诱导与鉴定 [J], 王红娟;杨岚;李雅婷;向增旭5.木薯同源四倍体的离体诱导及鉴定 [J], 周慧文;肖亮;曾文丹;严华兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大花蕙兰(Cymbidium hybridium)离体快速繁殖技术
关键词： 大花蕙兰 （ｙ ｂ ｉ ｂ ｄ ｍ ； 织培养 ； Ｃｍ ｉｕ ｈ ｒ ｉ ）组 ｄ ｍ ｙ ｉｕ 快速繁殖
中图分类号：６ ２３ ￥ ８ ．１ 文献标识码 ： Ａ
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文 章 编 号 ：６ １９ ６ （０ ６０ —３ ５０ １７ —９ ４２ ０ ）４０ ６ —５
繁殖技术
殷丽青 ， 王广 东 ， 张建军 ２ ， ｇ 沈革志 杜永芹 ， ， － ， ， 李秀芬
（． １ 南京农 业 大学 园艺学 院 ， 京 ２ ０９ ；． 市 农业 科学 院 林木果 树 研究所 ， 南 １０ ５２上海 上海 ２ １０ ） ０ １６
ห้องสมุดไป่ตู้
大花蕙兰(Cymbidium hybridium)离体快速繁殖技术
大花蕙兰(Cymbidium hybridium)离体快速繁殖技术殷丽青;王广东;张建军;王新其;沈革志;杜永芹;李秀芬【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2006(024)004【摘要】以大花蕙兰茎尖和茎节段作外植体进行了离体快速繁殖技术研究.结果显示:茎尖诱导芽的效果优于茎节段;适宜诱导培养基为MS+BA 4.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+AC 0.6 g·L-1,茎尖在该培养基上芽的诱导率为71.4%;丛芽增殖适宜培养基为MS+BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+AC 03.g·L-1,增殖率为3.79;原球茎增殖、分化的适宜培养基为MS+BA 1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+AC 0.3 g·L-1,增殖率为6.1,分化率为71.1%;生根和壮苗的适宜培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1+AC 0.3 g·L-1,试管苗生根率达100%.【总页数】5页(P365-369)【作者】殷丽青;王广东;张建军;王新其;沈革志;杜永芹;李秀芬【作者单位】南京农业大学,园艺学院,南京,210095;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106;南京农业大学,园艺学院,南京,210095;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106;上海市农业科学院,林木果树研究所,上海,201106【正文语种】中文【中图分类】S682.31【相关文献】1.大花蕙兰快速繁殖技术的研究 [J], 付志惠2.熵权赋权法灰色系统理论在大花蕙兰(Cymbidium hybridium)品种综合评价中的应用初探 [J], 高兰阳;尚迪;许震寰;文颖3.大花蕙兰快速繁殖技术的研究 [J], 鞠守勇;高小蛾;陈其国;李莉;高广斌4.植物生长调节剂对3个大花蕙兰(Cymbidium hybridium)品种类原球茎及不定芽诱导的影响 [J], 周音;张建军;殷丽青5.复合抗氧化剂对大花蕙兰(Cymbidium hybridium)组织培养的影响 [J], 周音;张建军;殷丽青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验_杨丽娟 (1)
北方园艺2009(6):51~53 试验研究第一作者简介:杨丽娟(1984 ),女,在读硕士,从事园林植物培育的研究。
E mail:yangflower1220@ 。
通讯作者:高素萍(1966 ),女,博士,教授,现主要从事城市生态及园林植物应用研究工作。
E mail:gsp65@ 。
基金项目:四川省 十一五 育种攻关资助项目。
收稿日期:2009-01-16秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验杨丽娟1,高素萍1,邹宗兰2,陈 果3(1.四川农业大学林学园艺学院,四川雅安625014;2.阳春园艺有限公司,四川郫县611700;3.成都市百花潭公园,四川成都610072)摘 要:在离体培养条件下,以大花蕙兰 红宝石 原球茎为材料,比较了秋水仙素浸泡法和混培法在不同浓度、不同处理时间诱导大花蕙兰体细胞染色体加倍的效果。
结果表明:无论是用秋水仙素溶液浸泡处理还是将秋水仙素加入培养基中混培处理,均可诱导大花蕙兰多倍体的产生。
但以后者混培法效果较好,在秋水仙素浓度为3%,处理15d 的条件下,诱导率最高达30%。
对变异株进行细胞学观察后发现,染色体为2n=4x =80,为四倍体;而二倍体对照染色体为2n=2x=40。
关键词:大花蕙兰;秋水仙素;多倍体中图分类号:S 682.2+9 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2009)06-0051-03大花蕙兰(Cymbidium hybrid )是兰科(Orchidaceae)兰属中的一部分大花附生种类及其杂交种,是世界上栽培最普及的洋兰之一。
我国于20世纪80年代开始从国外引进大花蕙兰,对大花蕙兰的组织培养技术进行了不少探索研究,一些品种建立了脱毒快繁体系[1 4],但有关多倍体的诱导国内尚未见报道。
多倍体植物普遍具有器官巨大性、抗性强、新奇变异等特征,是花卉育种中重要的种质资源[5]。
试验以大花蕙兰二倍体 红宝石 为材料,利用秋水仙素进行多倍体诱导[6 8],创造大花蕙兰多倍体新种质资源,为尽快培育具有自主知识产权的大花蕙兰新品种奠定基础。
秋水仙素诱导杂交兰四倍体及倍性鉴定
秋水仙素诱导杂交兰四倍体及倍性鉴定兰属(Cymbidium)花卉花型优美,花色艳丽,是一类具有重要观赏价值和经济价值的花卉,在世界各地具有广阔的市场前景。
国内外关于兰属花卉种间杂交培育新品种的报道较多,而多倍体育种方面研究相对较少。
本研究以兰属杂交兰(大花蕙兰×墨兰)与蕙兰进一步杂交所获得的F1代杂交兰根状茎为材料,以秋水仙素为诱变剂,对杂交兰多倍体诱导和鉴定技术进行了系统的研究,旨在建立杂交兰多倍体诱导和鉴定技术体系。
主要研究结果如下：1.以杂交兰根状茎为材料,分别采用浓度为0.02%、0.05%、0.10%、0.20%的秋水仙素对其无菌苗的根状茎浸泡处理24h、48h和72h诱导杂交兰四倍体,试验结果表明,以0.10%的秋水仙素处理48h诱导效果最佳,变异率为36%。
变异的根状茎较未处理的根状茎膨大明显,茎段粗壮,变圆分节,着生有绒毛,生长势变缓。
2.对秋水仙素诱导获得杂交兰变异材料进行倍性鉴定,成功获得了染色体加倍植株。
染色体观察表明,四倍体植株染色体数为2n=4x=80,二倍体对照为2n=2x=40。
加倍后的四倍体植株较二倍体植株粗壮,叶片变厚,颜色变深,茎基部粗壮,颜色深,生长势变缓,根系变粗,根状茎增粗,保卫细胞增大,叶绿体数目增多,气孔密度减小等特点,可作为新材料加以利用。
3.由于杂交兰生长周期较长,生根需要较长时间,而根状茎较易获得,因此本文以杂交兰根状茎茎尖为材料,比较茎尖的不同采集时间、预处理方法、解离时间和染色方法对杂交兰根状茎茎尖染色体制片的影响。
结果表明,取材时间为上午10：00-11：00,预处理方式为8-羟基喹啉处理6-7h,解离采用5mol/L HCl在25℃下30min,染色液以卡宝品红染色液染色15-20min染色体制片效果最佳。
大花蕙兰原球茎的诱导、增殖及植株再生研究
大花蕙兰原球茎的诱导､增殖及植株再生研究摘要:从大花蕙兰(Cymbidium hybridum)试管苗取材,诱导原球茎,建立植株再生体系,分析了不同激素及其浓度对原球茎诱导､增殖和植株生根的影响｡结果表明,不定芽比叶片更容易诱导出原球茎;生长素NAA对原球茎的诱导效果好于2,4-D,最适合原球茎诱导的激素组合为1.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA;原球茎增殖培养基中添加1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA增殖效果较好,增殖系数可达7.90;最适生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖｡关键词:大花蕙兰(Cymbidium hybridum);原球茎;组织培养;植株再生Study on Protocorm Induction, Proliferation and Plantlet Formation of Cymbidium hybridumAbstract: Explants were drawing from Cymbidium hybridum plantlet for protocorm induction and plantlet regeneration. Effects of the kind and concentration of plant growth regulators on protocorms induction, proliferation and root formation were analyzed. The results showed that introducing protocorm from adventitious bud was more easily than from leaf primordial. NAA was more effective for protocorm induction than 2,4-D. The optimum hormone combination for protocorm induction was 1.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA. The multiplication coefficient of protocorm was the highest (7.90) in medium adding 1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA. The optimal medium for root formation was 1/2 MS+0.5 mg/L NAA+ 30 g/L sucrose.Key words: Cymbidium hybridum; protocorm; tissue culture; plant regeneration大花蕙兰(Cymbidium hybridum)是兰科兰属中大花型附生种类的杂交种,具有花大色艳､花多且花期长的特点,深受大众喜爱[1]｡大花蕙兰的繁殖方式主要以分株为主,由于长期无性繁殖,造成带病毒植株日益增多,使兰花的品质下降;同时新品种的培育也对繁殖方式和快繁技术提出了需求｡目前,兰属植物的组织快繁主要是以原球茎(Protocorm-like body,PLB)为外植体诱导出愈伤组织或胚性愈伤组织,进而获得小植株[2-8]｡国内对大花蕙兰组织培养[9-16]多数是采用茎尖､侧芽为外植体,通过诱导原球茎获得小植株｡本实验以大花蕙兰试管苗的不定芽和叶片为外植体,诱导和增殖原球茎,建立大花蕙兰的快速繁殖体系,以达到加大试管苗繁殖系数､简化繁殖步骤的目的｡1 材料与方法1.1 材料供试材料为华中农业大学园艺林学学院种质资源实验室的大花蕙兰试管苗｡1.2 方法1.2.1 原球茎的诱导从长势良好的大花蕙兰试管苗上取大小一致､高2~3 mm的不定芽及叶片作为外植体,将叶片切割成0.5~1.0 cm2的小块｡外植体接种在MS+30 g/L蔗糖+6 p 1.2.3 生根培养生根培养以1/2MS为基本培养基,附加6 g/L琼脂和质量分数0.5%的活性炭,添加不同浓度的NAA与蔗糖(表3),pH 5.5~5.8｡每处理接种15个不定芽,重复3次,培养条件同1.2.1｡60 d后统计外植体的苗高､根长大于1 cm的根数目､根长和生根率｡1.2.4 炼苗移栽将生根培养得到的大花蕙兰试管苗炼苗移栽,以水苔为栽培基质,移栽前用无菌水将植株根部的培养基冲洗干净,再植入穴盘,移入遮阴棚中培养｡每天向叶片喷水数次,每周浇施1~2次稀释的营养液｡2 结果与分析2.1 原球茎的诱导将大花蕙兰叶片和不定芽接种到含不同激素配比的培养基,30 d后原球茎的诱导结果见表1｡诱导30 d后,处理A1~A4的叶片有肿胀膨大的现象,但没有诱导出原球茎;而处理A5~A8的腋芽周围有绿色半透明颗粒状组织产生并逐渐长大,即诱导产生的原球茎(图1),说明不定芽较叶片易发生再分化产生原球茎｡其中A6处理的原球茎诱导效果最好,诱导率达76.9%｡培养基中BA浓度相同时,1.0 mg/L NAA的诱导效果要好于0.5 mg/L 2,4-D;随着BA浓度的增高,两种生长素的诱导率都有所增加｡可见实验范围内原球茎诱导的最佳激素浓度组合为 1.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA｡2.2 原球茎的增殖培养增殖培养40 d后,不定芽周边长出新的原球茎(图2),一般产生5~8个,最多达到15个(表2)｡激素BA和NAA的浓度不同,增殖系数也会发生变化｡B5处理,即BA 和NAA的浓度分别为1.0 mg/L和0.5 mg/L时增殖系数最高,为7.90｡BA和NAA 浓度过高或过低均不利于原球茎的增殖｡2.3 生根培养将增殖培养获得的大花蕙兰原球茎转移到含不同浓度NAA和蔗糖的生根培养基上,20 d后各处理陆续有根形成,并有新的叶片展开｡培养60 d后各处理生根及苗生长情况见表3和图3｡由表3可知,大花蕙兰原球茎的生根情况较好,除C1处理外,其他处理的生根率均达到100.0%｡在相同的蔗糖浓度条件下,NAA浓度对各处理之间苗高､叶片数和根长的影响不显著｡而NAA为0.5 mg/L时,较高的蔗糖浓度对植株苗高有显著的促进作用｡各处理中,C4(0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖)处理的幼苗生长情况最好,试管苗苗高､叶片数､根长均大于其他处理,其中苗高和根长显著大于其他处理｡2.4 炼苗移栽移栽培养7 d后,幼苗未出现死亡现象,但部分移栽苗叶尖变黄,且大多发生于较小的植株,较大的植株则生长良好｡说明试管苗个体越大､越健壮,移栽后的生长状况越好,移栽越易成活｡一般适于移栽的植株要求苗高5 cm以上､具有展开叶3~5片,以及2条以上长度大于1 cm的根｡3 讨论在以叶片为外植体诱导原球茎时,叶片虽有膨大的现象,但生长30 d左右后叶片逐渐死亡,没有原球茎产生,与Teixeira da silva等[17]的报道一致,叶片诱导原球茎不成功可能与激素的种类有关[18]｡本实验发现2,4-D的诱导效果没有NAA好,与Huan等[5,6]的报道是一致的,实验浓度范围内1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L BA对原球茎的诱导效果好,这与徐宏英等[11]的结果略有差异,可能与试管苗体内的激素浓度变化有关｡传统的增殖方式主要是由原球茎直接获得生根的小植株;也有的以初次诱导的原球茎或原球茎薄层细胞为外植体诱导出愈伤组织或胚性愈伤组织,获得增殖的原球茎后再获得小植株[19,20]｡本实验中以不定芽为外植体,有原球茎的形成,但未见愈伤组织形成｡增殖培养40 d后增殖系数均在4.67以上,1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA的增殖效果最好,增殖系数达7.90,高于以往的报道[21]｡在生根实验中,较高浓度的NAA和蔗糖有利于根的生长和植株伸长,可适当缩短生根时间,对移栽后植株的生长有利｡参考文献:[1] 胡松华. 热带兰花[M]. 北京:中国林业出版社,2002.[2] BEGUM A, TAMAKI M, TAHARA M, et al. Somatic embryogenesis in cymbidium through in vitro culture of inner tissue of protocorm-like bodies[J]. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science,1994,63(2):4p [5] HUAN L V T, TAKAMURA T, TANAKA M. Callus formation and plant regeneration from callus through somatic embryo structures in Cymbidium orchid[J]. Plant Science,2004,166(6):1443-1449.[6] HUAN L V T, TANAKA M. Callus induction from protocorm-like body segments and plant regeneration in Cymbidium(Orchidaceae)[J]. Journal of Horticultural Science & Biotechnology,2004,79(3):406-410.[7] ROY J, BANERJEE N. Induction of callus and plant regeneration from shoot-tip explants of Dendrobium fimbriatum Lindl. var. oculatum Hk. f[J].Scientia Horticulturae,2003,97(3):333-340.[8] ZHAO P, WU F, FENG F S, et al. Protocorm-like body (PLB) formation and plant regeneration from the callus culture of Dendrobium candidum Wall ex Lindl.[J]. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 2008, 44(3):178-185.[9] 刘园,王四清.大花蕙兰(Cymbidium hybridum)的研究动向[J]. 园艺学报,2005,32(4):748-752.[10] 谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京:中国林业出版社,1991.237-278[11] 徐宏英,赵玉明,谢海军,等.大花蕙兰组培快繁影响因素分析[J]. 园艺学报,2002,29(2):183-185.[12] BEGUM A, TAKAMI M, KAKO S. Formation of protocorm-like bodies (PLB) and shoot development through in vitro culture of outer tissue of Cymbidium PLB[J]. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science,1994,63(3):663-673.[13] CHANG C,CHANG W C. Plant regeneration from callus culture of Cymbidium ensifolium var. misericors[J]. Plant Cell Reports,1998,17(4):251-255. [14] KUSUMOTO M. Effects of coconut milk, agar and sucrose concentrations and medium pH on the proliferation of Cymbidium protocorm-like bodies cultured in vitro[J]. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science,1980,48(4):503-509.[15] MOREL G M. Tissue culture: A new means of clonal propagation of orchids[J]. Am Orchid Soc Bull,1964,33:473-478.[16] DA SILVA J A T, YAM T, FUKAI S, et al. Establishment of optimum nutrient media for in vitro propagation of Cymbidium sw.(Orchidaceae) using protocorm-like body segments[J]. Propagation of Ornamental Plants,2005,5(3):129-136.[17] TEIXEIRA DA SILVA J A, TANAKA M. Multiple regeneration pathways via thin cell layers in hybrid Cymbidium (Orchidaceae)[J]. Journal of Plant Growth Regulation,2006,25(3):203-210.[18] GOW W P, CHEN J T, CHANG W C. Influence of growth regulators on direct embryo formation from leaf explants of Phalaenopsis orchids[J]. Acta Physiologiae Plantarum,2008, 30(4):507-512.[19] TEIXEIRA DA SILVA J A, CHAN M T, CHAI M L, et al. Priming abiotic factors for optimal hybrid Cymbidium (Orchidaceae) PLB and callus induction, plantlet formation, and their subsequent cytogenetic stability analysis[J]. ScientiaHorticulturae,2006,109(4):368-378.[20] SILV A J A T, SINGH N, TANAKA M. Priming biotic factors for optimal protocorm-like body and callus induction in hybrid Cymbidium(Orchidaceae), and assessment of cytogenetic stability in regenerated plantlets[J]. Plant Cell, Tissue and Organ Culture,2006,84(2):100119-100128.[21] 杨玉珍,孙天洲,孙廷,等. 大花蕙兰组织培养和快速繁殖技术研究[J].北京林业大学学报,2002,24(2):86-88.。
秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验
秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验
杨丽娟;高素萍;邹宗兰;陈果
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2009(000)006
【摘要】在离体培养条件下,以大花蕙兰"红宝石"原球茎为材料,比较了秋水仙素浸泡法和混培法在不同浓度、不同处理时间诱导大花蕙兰体细胞染色体加倍的效果.结果表明:无论是用秋水仙素溶液浸泡处理还是将秋水仙素加入培养基中混培处理,均可诱导大花蕙兰多倍体的产生.但以后者混培法效果较好,在秋水仙素浓度为3%,处理15 d的条件下,诱导率最高达30%.对变异株进行细胞学观察后发现,染色体为2n=4x=80,为四倍体;而二倍体对照染色体为2n=2x=40.
【总页数】3页(P51-53)
【作者】杨丽娟;高素萍;邹宗兰;陈果
【作者单位】四川农业大学,林学园艺学院,四川,雅安,625014;四川农业大学,林学园艺学院,四川,雅安,625014;阳春园艺有限公司,四川,郫县,611700;成都市百花潭公园,四川,成都,610072
【正文语种】中文
【中图分类】S682.2+9
【相关文献】
1.不同浓度秋水仙素对二倍体野生蕉的多倍体诱导 [J], 孙嘉曼;卢江;韦绍龙;韦弟;李朝生;张进忠
2.秋水仙素诱导抗枯1号香蕉多倍体试验 [J], 谭平;唐晓华;劳世辉;魏岳荣;洪林;
3.秋水仙素诱导抗枯1号香蕉多倍体试验 [J], 谭平;唐晓华;劳世辉;魏岳荣;洪林
4.秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验 [J], 杨丽娟;高素萍;邹宗兰
5.泥蚶多倍体胚胎的激发诱导：Ⅰ.低温与秋水仙素的诱导 [J], 费志清;尤仲杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大花蕙兰离体快繁关键技术及多倍体诱变研究的开题报告
大花蕙兰离体快繁关键技术及多倍体诱变研究的开
题报告
一、研究背景
大花蕙兰是一种用途广泛的观赏植物，由于其色彩鲜艳、花型美丽、耐寒耐热等特点，受到了广泛的喜爱。
然而，大花蕙兰具有生长缓慢、
萎凋率高、繁殖难度大等特点，限制了大花蕙兰的大规模生产和推广。
因此，开发一种有效的繁殖方法和提高大花蕙兰的育种效率，对于该品
种的发展具有重要意义。
二、研究内容
本研究主要涉及以下两个方面：
1. 大花蕙兰离体快繁关键技术的研究
通过对大花蕙兰离体培养条件的优化，筛选出适宜的培养基配方、
激素浓度和光照强度等关键因素，建立适合大花蕙兰离体快繁的体系。
同时，探究不同发育阶段的组织器官对于快速繁殖的影响，并优化相应
的培养策略，提高大花蕙兰离体快繁的成功率。
2. 大花蕙兰多倍体诱变技术的研究
利用化学物质或物理因素等方法诱导大花蕙兰发生染色体不分离或
结构异常等现象，使其产生多倍体，研究多倍体对于大花蕙兰形态、生
长和花序性状等方面的影响。
同时，对多倍体与野生型大花蕙兰的遗传
差异进行分析，为大花蕙兰的育种提供理论基础。
三、预期成果
本研究的预期成果包括：
1. 建立适合大花蕙兰离体快繁的体系，提高其经济效益和育种效率；
2. 探究多倍体对大花蕙兰生长和发育方面的影响，为其育种提供理
论基础；
3. 提出有效的多倍体诱变方法，为其他植物的多倍体育种提供参考。
综上所述，本研究对于推动大花蕙兰的发展和促进观赏园艺产业的
发展具有重要的理论和实际意义。
大花蕙兰原球茎增殖、分化与离体保存的研究
大花蕙兰原球茎增殖、分化与离体保存的研究胡燕梅;方中明;郭云贵;夏景波【期刊名称】《安徽农业大学学报》【年(卷),期】2016(43)1【摘要】以大花蕙兰原球茎为材料,从培养时间、基本培养基、糖浓度、培养方式及切割方式5个方面探讨了原球茎增殖、分化及离体保存的问题。
结果表明,2个月内随着培养时间的延长,原球茎增殖与分化越显著,但培养2个月后,原球茎增殖不明显,分化却持续增加;1/2MS基本培养基利于原球茎增殖与分化,而3MS基本培养基利于原球茎保存;糖浓度的高低对原球茎增殖与分化影响显著,20 g·L^(-1)蔗糖适于原球茎保存,50 g·L^(-1)蔗糖适于原球茎增殖,而原球茎分化成苗应选用30 g·L^(-1)白糖;在3种培养方式中,固体培养利于原球茎分化,液体振荡培养利于原球茎增殖,液体静置培养利于原球茎离体保存;片状切割法利于原球茎增殖与分化,整体剥离接种法利于原球茎保存。
即以2.0 mg·L^(-1) 6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA为激素组合时,以片状切割法接种原球茎于1/2MS+50 g·L^(-1)蔗糖的培养基中并以液体振荡方式培养时利于原球茎增殖;以片状切割法接种原球茎于1/2MS+30 g·L^(-1)白糖的培养基添中并以固体方式培养时利于原球茎分化成试管苗;以整体剥离法接种原球茎于3MS+20 g·L^(-1)蔗糖培养基中并以液体静置方式培养时利于原球茎保存。
上述结论为大花蕙兰试管苗快速繁殖与离体保存提供了有效的技术支持。
【总页数】6页(P67-72)【作者】胡燕梅;方中明;郭云贵;夏景波【作者单位】江汉大学期刊社;武汉生物工程学院生命科学与技术学院;暨南大学生物科技学院发育与再生生物学系【正文语种】中文【中图分类】S682.31【相关文献】1.大花蕙兰原球茎增殖分化影响因素研究2.5种天然有机物对大花蕙兰类原球茎增殖与分化的影响3.“益培灵”的抑菌效果及对大花蕙兰类原球茎增殖与分化的影响4.大花蕙兰类原球茎增殖与分化影响因素的初步研究5.大花蕙兰与春剑杂交原球茎增殖及分化研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大花蕙兰假鳞茎离体诱导与发育调控研究
大花蕙兰假鳞茎离体诱导与发育调控研究大花蕙兰（Dendrobium spectabile）是一种美丽的兰花，由于其花朵大、花色丰富而备受喜爱。
然而，由于其生长周期长、繁殖难度较高，导致其市场供应不稳定。
为了解决这个问题，研究者开始对大花蕙兰的离体培养和发育调控进行研究。
离体培养是指将植物体的一部分组织、细胞或器官从固体培养基中剥离，转移到液体或半固体培养基中进行培养的一种方法。
在大花蕙兰的离体诱导研究中，研究者通常选择茎段、茎尖或鳞茎作为外植体材料。
首先，外植体材料经过消毒处理，以防止细菌或真菌感染。
然后，将外植体材料转移到含有激素的培养基中，以刺激其再生或分化。
在大花蕙兰的离体培养研究中，通常会添加激素，如生长素（IAA、NAA）和细胞分裂素（BA、KT），以实现茎尖、茎段的增殖和鳞茎的萌发。
大花蕙兰的离体培养发育调控研究主要包括鳞茎的诱导、增殖和生根。
首先，诱导鳞茎的方法是将大花蕙兰的茎段经过消毒处理后移植到含有组织分化激素的培养基中培养。
通过控制培养基中激素的类型和浓度，可以促使茎段分化为鳞茎。
研究发现，添加细胞分裂素和生长素的培养基可以提高鳞茎的诱导率和质量。
其次，增殖鳞茎的方法是将诱导成功的鳞茎进行分离，然后将其转移到含有细胞分裂素和生长素的培养基中培养。
通过控制培养基中激素的类型和浓度，可以促使鳞茎再生新的鳞茎。
研究发现，不同的激素对大花蕙兰鳞茎的增殖具有不同的效果，如BA可以促进鳞茎的增殖，而KT可以促进鳞茎的生长。
最后，生根是大花蕙兰离体培养的最后一步。
通常，离体培养的茎尖和茎段是缺乏根系的，因此需要在培养基中添加辅助物质来促进根系的形成。
研究发现，添加生长素和辅助物质（如红霉素和腐植酸）的培养基可以促进大花蕙兰茎尖和茎段的生根。
综上所述，大花蕙兰的离体诱导与发育调控研究是重要的兰花研究领域。
通过研究大花蕙兰的离体培养和发育调控，不仅可以实现其快速繁殖和大规模生产，还可以为其抗病虫害、品质改良和基因工程研究提供基础。
大花蕙兰花粉离体萌发试验初报
大花蕙兰花粉离体萌发试验初报
王利民;王四清;王彩霞;刘慧
【期刊名称】《中国农学通报》
【年(卷),期】2005(21)4
【摘要】采用开花当天的大花蕙兰花粉,设计了多种人工花粉萌发培养基对其培养,结果证明大花蕙兰的人工花粉萌发培养基的蔗糖浓度应为30%,添加50mg/LGA3和0.15%CaCl2可以促进花粉的发芽。
试验发现大花蕙兰的花粉在人工培养基上萌芽所需时间较长,约4d左右。
萌芽后很难继续伸长,可见其花粉的人工培养有一定的难度。
【总页数】4页(P122-124)
【关键词】大花蕙兰;试验初报;离体萌发;花粉萌发;CaCl2;人工培养基;蔗糖浓度;GA3;萌芽;添加;伸长
【作者】王利民;王四清;王彩霞;刘慧
【作者单位】北京林业大学园林学院;安阳工学院园艺园林系
【正文语种】中文
【中图分类】S682.31;S965.25
【相关文献】
1.大花蕙兰高山催花试验初报 [J], 陈昌铭;赖梓斌;罗志花
2.墨兰'绿墨素'×大花蕙兰'世界和平'F1代多倍体诱导初报 [J], 宋莲;杨俊旭;刘丹;李枝林;王玉英
3.大花蕙兰组培苗落地移栽试验初报 [J], 陈义增;姚丽娟;陈中林
4.大花蕙兰制种试验初报 [J], 杨至德;刘雪梅;刘景然
5.大花蕙兰花粉贮藏与离体萌发研究 [J], 张晓莹;傅巧娟;赵福康;李春楠;阮若昕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
河北大花蕙兰疫病病原鉴定及其生物学特性分析
河南农业科学，2017，46(8) :83-86Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i：10. 15933/ki. 1004-3268.2017.08.015河北大花蕙兰疫病病原鉴定及其生物学特性分析李小六\李艳梅2,李萍2,范永山2(1.唐山幼儿师范高等专科学校，河北溧县063700; 2.唐山师范学院生命科学系，河北唐山063000)摘要：为了明确大花蕙兰疫病的发生机制，对河北地区引起大花蕙兰疫病的病原菌进行分离、纯化、鉴定和接种试验，并对大花蕙兰疫病的病原菌进行生物学特性分析。
结果表明，河北大花蕙兰 疫病的病原菌为掘氏疫霉（P/iyfop/if/ioca办ec/isZeci)，有伤接种3 d后即可以产生典型疫病症状。
病 原菌的适应能力较强，在24 ~ 32 °C和PH值4.0~ 10.0条件下均能正常生长，其最适生长温度为28 °C，最适PH值为7.在V8培养基、查氏培养基和C A培养基上均生长良好，但在PD A培养基上生长较差。
在无菌水中连续光照培养2d即可诱导产生大量孢子囊和孢囊孢子。
孢囊孢子保湿12.0 h萌芽率即可达90.0%以上，适宜萌芽温度为20 ~40 °C，最适萌芽温度为30 °C，适宜萌芽pH值为4.0~9.0,最适p H值为7.0。
以上研究表明，河北地区大花蕙兰疫病病原菌具有较强的致病 力和环境适应能力。
关键词：大花蒸兰疫病；病原鉴定；掘氏疫霉；生物学特性中图分类号：S436.8 + 1 文献标志码：A 文章编号：1004 -3268(2017)08-0083 -04Pathogen Identification and Biological Characteristics of Cymbidiumhybridium Blight in Hebei ProvinceLI X iaoliu^LI Yanmei2,LI Ping2,FAN Yongshan2(1. Tangshan Preschool Teachers College, Luanxian 063700 , China ；2. Department of Life Science , Tangshan Normal University, Tangshan 063000 , China)Abstract：In order to clarify the occurrence mechanism of Cymbidium hybridium blight, the pathogen was isolated, purified, identified, and re-inoculated in Hebei province. The biological characteristics of the pathogen were analyzed at the same time. The results showed that the pathogen of Cymbidium hybridium blight in Hebei province was identified as Phytophthora drechsleri, which could produce typic blight symptom after 3 days of wound inoculation. The pathogen was strongly adaptive to environment and could grow well at 24—32 °C and pH 4. 0—10. 0. The optimal growth temperature and pH value of the pathogen was 28 °C and 7. 0 respectively. The pathogen could grow well in the Y8 medium, Chavez medium and CA medium, but poor in PDA medium. A large number of sporangia and sporangiospores could be easily induced after 2 days of continuous illumination in autoclaved water. The germination rate of sporangiospores was above 90. 0% after 12. 0 h of moisture culture. The sporangiospore could germinate very well at 20—40 °C and pH 4. 0 —9. 0. The optimal temperature and pH value of sporangiospore germination were 30 °C and 7.0respectively. The above results indicated that the pathogen of Cymbidium hybridium blight in Hebei province possessed strong pathogenicity and environmental adaptivity.Key words：Cymbidium hybridium blight ；pathogen identification ；Phytophthora drechsleri；biological characteristics大花蕙兰(Cymlndmm hybridm m)，又叫虎头兰、自1889年英国培育出第1个大花蕙兰品种以后，欧 喜姆比兰和蝉兰，属于兰科兰属多年生草本植物。
大花蕙兰多倍体的高效诱导
大花蕙兰多倍体的高效诱导
季必霞;陈达伟;张晨晨;闵笛;黄文静;王钰
【期刊名称】《植物研究》
【年(卷),期】2011(31)5
【摘要】以大花蕙兰‘红瀑布’无菌苗丛芽为材料、秋水仙素为诱变剂,采用不同的处理浓度、时间诱导大花蕙兰体细胞加倍。
通过形态学和细胞学观察、统计等方法对其进行倍性鉴定。
结果表明:秋水仙素浓度0.05%,处理时间24 h的条件下,诱导率高达28.2%;多倍体苗外部形态、叶绿体数目、气孔数目和大小与二倍体差异大,加倍后的细胞核明显变大,染色体倍数增加。
【总页数】5页(P558-562)
【关键词】大花蕙兰;秋水仙素;化学诱变;多倍体
【作者】季必霞;陈达伟;张晨晨;闵笛;黄文静;王钰
【作者单位】安徽大学生命科学学院;安徽大学资源与环境工程学院;安徽省中药材产业研发中心
【正文语种】中文
【中图分类】S682.29
【相关文献】
1.墨兰'绿墨素'×大花蕙兰'世界和平'F1代多倍体诱导初报 [J], 宋莲;杨俊旭;刘丹;李枝林;王玉英
2.大花蕙兰丛生芽的高频诱导因素研究 [J], 李国树;崔国全;罗顺聪;徐成东
3.秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验 [J], 杨丽娟;高素萍;邹宗兰
4.大花蕙兰原球茎诱导、增殖与分化影响因素研究 [J], 徐萌;郭绍霞;孙丽;张颖
5.秋水仙素离体诱导大花蕙兰多倍体试验 [J], 杨丽娟;高素萍;邹宗兰;陈果
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(1 Guangdong Provincial Key Laboratory of Plant Molecular Breeding ,Sout h China Agricult ural U niversit y , Guangzhou 510642 , China ;2 Guangzhou Flower Research Center , Guangzhou 510360 ,China)
Abstract :Investigatio ns were carried o ut o n t he effect s of colchicine t reat ment o n p roliferatio n ,differentia2 tio n and tet raploid inductio n of p rotoco rm2like bo dies ( PLBs) of Cy mbi di um‘sunrise’by using of tissue cult ure met hod. The result s showed t hat colchicine t reat ment had o bvio usly inhibitio n effect s o n t he growt h and differentiatio n of PLBs ,and increased t he browning and deat h rate of PLBs ;t he higher t he co n2 cent ratio n of colchicine and t he lo nger t he t reat ment time were , t he st ro nger t he inhibitio n effect s were. Tet raploids were p roduced in all colchicine t reat ment s ,but t he inductio n rate was not t he same in vario us t reat ment s ,t he highest inductio n rate ,23. 7 % ,was o btained by t reating PLBs in MS medium wit h 0. 05 % colchicine for 5 days. The lengt h of sto matal guard cell and t he densit y of sto matal cell bet ween diploid and it s tet raploid were bot h significantly different . The tet raploid plant wit h darker and harder leaves was more st urdy and co mpacted in appearance co mpared to diploid o ne. It is a p ractical way of creating polyploids in Cy mbi di um h y bri di um by t he use of tissue cult ure co mbined wit h colchicine t reat ment met ho d. Key words :Cy m bi di um h y bri di um ;p rotoco rm2like bo dy ;colchicine ;tet raploid ; sto m室 ,广州 510642 ;2 广州花卉研究中心 ,广州 510360)
摘 要 :采用组织培养方法研究了秋水仙素处理对大花蕙兰类原球茎增殖 、分化和四倍体诱导的效应 。结果表明 ,
秋水仙素处理明显抑制类原球茎的增殖和分化 ,提高类原球茎褐变率和死亡率 ;在试验浓度和时间范围内 ,秋水仙
秋水仙素处理和组织培养相结合是诱导观赏植 物产生多倍体的有效方法 ,运用该方法已经在虞美 人[3 ] 、矮牵牛[4 ] 、齿瓣石斛[5 ] 、红掌[6 ] 、杜鹃[7 ] 、非洲 紫罗兰[8 ] 、A l ocasi a[9 ] 、R os a ru gos a[10 ] 、Phl ox s ubu2 l at a[11] 等取得了成功 。在大花蕙兰的多倍体诱导 上 ,张志胜等[12 ] 以墨兰 ×大花蕙兰的杂种 F1 类原 球茎为材料 ,不同浓度的秋水仙素处理均诱导出疑 为多倍体的变异植株 ,但未对变异植株进行染色体 鉴定 。杨丽娟等[13] 对大花蕙兰‘红宝石’进行了秋 水仙素处理 ,也获得了大量变异植株 。邓樱等[14] 对 秋水仙素诱导兰属‘素心黄’的方法进行了研究 ,获 得一定比例的四倍体植株 ,但关于秋水仙素处理对 大花蕙兰的诱导效应缺乏系统的研究 ,也未涉及二 倍体与四倍体植株气孔性状的比较 。
紧凑 ,叶片颜色浓绿 、质地变硬 。秋水仙素处理和组织培养相结合是创建大花蕙兰多倍体的有效方法 。
关键词 :大花蕙兰 ;类原球茎 ;秋水仙素 ;四倍体 ;气孔
中图分类号 :Q813. 5
文献标识码 :A
I n vit r o Induction and Its Identif ication of Tetraploid Cymbi di um hybri di um
在处理完成后转入不含秋水仙素的液体培养基中培 养 ,保证不同处理的类原球茎切块在液体中培养的 时间与对照一致 。处理温度为 (26 ±1) ℃。 1. 2. 2 处理材料的继代 处理后的材料接种到1/ 2 MS (大量元素减半) + 62BA1. 0 mg ·L - 1 + NAA 0. 2 mg ·L - 1 + 活性炭 0. 5 g ·L - 1 + 椰子汁 100 mL ·L - 1 + 卡拉粉 7. 5 g ·L - 1 + 蔗糖 20 g ·L - 1 的 固体继代培养基中 ,每瓶接入 10 块左右 ,每一处理 设 2 个重复 ,每一重复最小样本容量为 30 块 。接种 后把材料放在 (26 ±1) ℃、持续光照的培养室中进行 培养 ,1 个月继代一次 ,不同处理下的材料均继代到 恢复正常增殖与分化 。培养过程中观察类原球茎的 生长情况 ,每继代一次均统计死亡类原球茎块数 、褐 变类原球茎块数 、分化出的芽数和苗数 ,用感量为 0. 01 g 的 Sartorius 天平称重 。在继代过程中死亡 和褐化严重的类原球茎不转入下一代 ,分化出的苗 另转壮苗培养基培养并移栽 。按下列公式计算褐变 率 、死亡率 、绝对生长速度 、芽分化率 、苗分化率 :
1 材料和方法
1. 1 材 料 以大花蕙兰‘日出’的茎尖为外植体诱导产生类
原球茎 , 继代培养后 , 将生长旺盛的类原球茎切 成0. 5 cm3 大小的类原球茎切块用于多倍体诱导 试验 。
试验所用的秋水仙素为 Sigma 公司原装进口 (产品批号 C29754) 。 1. 2 方 法 1. 2. 1 秋水仙素处理 将类原球茎切块浸入不同 浓度秋水仙素的液体培养基中 ,在转速为 90 r/ min 的摇床上处理一定时间 (表 1) ,处理时间短的材料
素浓度越高 ,处理时间越长 ,抑制作用越强 ,解除抑制作用所需的继代次数越多 。所有秋水仙素处理均能诱导出四
倍体 ,但不同处理的四倍体诱导率不同 ,当处理浓度为 0. 05 %、时间为 5 d 时 ,四倍体诱导率最高 ,为 23. 7 %。二倍
体及其四倍体的气孔保卫细胞长度和气孔密度均存在极显著的差异 。四倍体植株比二倍体矮 ,茎部较粗壮 ,株型
本实验室通过墨兰和大花蕙兰杂交于 2004 年 培育出大花蕙兰新品种‘日出’[15] ,该品种具有花朵 数多 、适应性好 、不用上山催花等优点 ,但其株型较 分散 、花朵偏小 。本研究以‘日出’类原球茎为材料 , 系统地研究秋水仙素处理对兰花类原球茎生长 、分 化和四倍体诱导效率的影响 ,旨在建立高效的多倍 体诱导和鉴定技术体系 ,为有效开展大花蕙兰多倍 体育种奠定基础 ,同时期望通过染色体加倍改良‘日 出’的缺陷 ,获得观赏性状优良的新资源 。
褐变率 ( %) = (褐变块数/ 接种总块数) ×100 % 死亡率 ( %) = (死亡块数/ 接种总块数) ×100 % 绝对生长速度 ( %) = ( 培养后重量 - 接种重 量) / 接种重量 ×100 % 芽分化率 ( %) = (分化出的芽数/ 接种类原球茎 块数) ×100 % 苗分化率 ( %) = (分化出的苗数/ 接种类原球茎 块数) ×100 % 1. 2. 3 再生植株的染色体鉴定 在再生植株群体 中 ,每一处理随机抽取 30 株以上的植株 ,进行染色 体数目鉴定 。参考张志胜等[6] 的压片法 ,根据大花 蕙兰根尖的特点进行了改进 。具体步骤如下 :切取 大花蕙兰 植株幼 嫩的 根尖 2 ～ 3 mm , 洗 净后 , 于 15 ℃黑暗条件下 ,在 0. 002 mol ·L - 1 的 82羟基喹啉 中浸泡 7～9 h ;清水洗净后 ,加入新配制的卡诺氏 液于 4 ℃冰箱固定 12 ～ 24 h ; 然后用 1 mol ·L - 1 HCl 先在室温下酸解 3 min ,然后转到 60 ℃的恒温 水浴锅中酸解 9 min ,蒸馏水洗净 ;切取根尖的分生 组织放在预先滴一滴卡诺氏液的载波片上 ,用镊子 压碎 ,弃去残渣 ,快速经过酒精灯的火焰 2～3 次 ;滴 一滴石炭酸品红进行染色 ,染料快干时盖上盖玻片 , 用镊子轻压几下 ,快速经过火焰 6～7 次 。每被测植 株统计 20 个以上细胞 ,85 %以上具有恒定一致的染 色体数作为该植株的染色体数目 ,在 Olymp us2IX71 倒置显微镜下观察 ,选取染色体分散好的细胞拍照 , 并按下述公式计算四倍体诱导率 :