,免疫学2

力振摇即可成为均匀的乳剂。
(2) 白油佐剂：9份油和1份司本-80混合后加2％吐温-80和1％~2%
硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与抗原水
相1：1混合，强力振摇，可配制成性状良好的乳剂疫苗。
非颗粒性佐剂
细胞因子 多种细胞因子都具有佐剂的作用,可分别提高病毒、细菌和寄生 虫疫苗的免疫效果,不同细胞因子佐剂的作用机制有差异。
（1）用铝粉加烧碱合成法 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O （2）用明矾加碳酸钠合成法 2 KAl(SO4)2+3 Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑ （3）用三氯化铝与氢氧化钠合成 A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
子完成各自的功能，在免疫应答中发挥作用。
细胞因子类免疫佐剂 （cytokine）
细胞因子的分类（根据生物活性）
1. 经典的细胞因子：淋巴毒素（LT）、肿瘤坏死因子（TNF） 干扰素（INF） 2. 对体液免疫和细胞免疫具有调节作用的因子： 白细胞介素（IL）和集落刺激因子（CSF）
微生物佐剂
某些菌体及其成分、代谢产物等能起到佐剂作用,这类佐剂有革 兰氏阴性菌的脂多糖、革兰氏阳性菌的脂磷壁酸、短小棒状杆菌、 分枝杆菌及其组成成分、酵母菌的细胞壁、白色念珠菌提取物、 细菌的蛋白毒素(霍乱毒素、破伤风毒素) 等。
蜂胶
蜂胶是蜜蜂采自植物幼芽分泌的树脂,并混入蜜蜂上腭分泌物以 及蜂蜡、花粉及其他一些有机物的一种天然物质,含有多种酮类、 酸类、醇类、酚类、脂类、烯烃和萜类等化合物,还含有多种氨 基酸、酶、多糖、脂肪酸、维生素及多种无机化学元素,它作为 佐剂具有良好的免疫增强作用。
蜂胶佐剂（ Propolis）
免疫学选轮
Medical Immmunology
佐剂（ajuvant）指预先或与抗体同时注入体内，可增强机体对抗原
的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质。
佐剂可分为：①生物性佐剂，如卡介苗（BCG）短小棒状杆菌（CP）， 脂多糖（LPS），细胞因子（GM-CSF）等。②无机化合物，如氢氧化铝 [AI(OH)3]；③人工合成物，如模拟双链RNA的双链多聚肌苷酸-胞苷酸 （poly I:C）和模拟细菌来源的低甲基化CpG寡核苷酸等。④有机物，如 矿物油等。⑤脂质体，如免疫刺激复合物（ISCOMs）等.
佐剂名称
类型
特点
缺点
商品化
佐剂的比较
即是细胞免疫的强刺激剂、 黏稠，能造成组织损 弗氏完全佐剂 贮藏型/油乳 也能刺激体液免疫；可引起 伤等缺点，还可能有 Roche/Sigma （FCA） 佐剂 迟发型超敏反应；佐剂活性 致癌作用；需制备油 高于其他佐剂。 包水乳剂。 弗氏不完全佐剂 贮藏型/油乳 仅能刺激体液免疫；不能诱 需制备油包水乳剂。 Roche/Sigma (FIA) 佐剂 发迟发型超敏反应 可降解鲨烯与Tween 80和 Span 85混合后进行微流化进 MF59 油乳佐剂 而形成均一的滴状油包水乳 Chiron公司 液；耐受性良好；第一个可 用于人体的疫苗佐剂。 含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸 有种属特异性，需根 的寡脱氧核苷酸；有很强的 据动物种属设计相应 粘膜佐剂活性，通过膜受体 的寡核苷酸序列；需 TLR9直接激活DC和B细胞，是 构建表达CpG的质粒 水溶性分子佐 CpG-ODN佐剂 一种高效的Thl型疫苗佐剂； 与病毒颗粒联合免疫。 非商品化 剂 不同类型CpG-ODN具有不同疫 苗佐剂活性,B和c型CpG-ODN 在小鼠体内的体液免疫佐剂 效果优于A型CpG-ODN. 既是抗原载体，也是免疫佐 稳定性较差；脂质体 剂；Novasomes为非磷脂亲 在制备过程中要求一 水脂分子，在体内稳定性比 定的技术性；费用比 脂质体(LIP)和 人工合成佐剂 常规LIP好，而且价廉、易 其他免疫佐剂高 非商品化？ Novasomes
Qiagen公司 （已停产）
北京康碧泉
MF59
油乳佐剂
佐剂的分类
1. 按佐剂物理性质
• • 颗粒型佐剂 非颗粒型佐剂 2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法） • • 微生物及其组分 非微生物物质 3. 按佐剂在体内存留的时间 • • 贮存型佐剂（depot type adjuvant） 非贮存型（non-depot type adjuvant）
佐剂
佐剂的作用效果和机制
如弗氏完全佐剂（Freund complete adjuvant,FCA）和弗氏不

不同佐剂的作用效果和机制不同。
完全佐剂（freund incomplete adjuvant,FIA）为目前动物实验中 最常用的佐剂；FCA含有灭活的结核分支杆菌和矿物油，可协助 抗原刺激机体产生体液和细胞免疫应答；FIA仅含矿物油成分， 仅可协助抗原刺激机体产生抗体应答。 佐剂的作用机制：①改变抗原物理性状，延缓抗原降解，延长 抗原在体内潴留时间；②刺激抗原提呈细胞，增强其对抗原的加 工和提呈；③刺激淋巴细胞的增值分化，增强和扩大免疫应答。
ISCOM能有效地通过粘膜给药，从而可以用于抗呼吸道感染。 目前，兽用ISCOM疫苗已在国外投放市场。
免疫实验动物用的佐剂配制:
1)弗氏佐剂：矿物油 75%~85％，乳化剂15 ％~25%，混合后经除
菌过滤而成为 FIA ；如向其中加入 0.5mg ／ m1 死结核杆菌即为 FCA。使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合，用
2油乳乳剂
油乳佐剂是用矿物油、乳化剂(如span280 ,Tween280) 及稳定剂 (如硬脂酸铝) 按一定比例混合作为油相,然后与抗原混合制成各 种类型的油水乳剂,其中最著名的是弗氏佐剂(FA) 。该佐剂是用 矿物油(石蜡油) 、乳化剂(羊毛脂) 和杀死的分枝杆菌组成的油 包水乳化佐剂,这3 种成分俱全的佐剂称为弗氏完全佐剂( FCA) , 不含分枝杆菌的佐剂是弗氏不完全佐剂( FIA)
乳化剂
1. 天然乳化剂：阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄以及炼乳
2. 人工合成乳化剂 • 离子型
阴离子类乳化剂：十二烷基磺酸钠和硬脂酸铝
阳离子类乳化剂：氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基 • 非离子型：月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和单油酸脂、
乳剂配方与乳化方法
（1）剂在水中法：
将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成O/W乳剂。若欲得W/O型， 可继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。 （2）剂在油中法： 将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得 O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型， 如欲得O/W，继续加入至变型。该法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5µ m左右，比较稳 定。
颗粒性佐剂
1．盐类佐剂
氢氧化铝胶、明矾、磷酸铝等。
2．油水乳剂佐剂 弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA）、弗
氏不完全佐剂（ FIA）和矿物油白油佐剂。
3．免疫刺激复合物佐剂（ISCOM） 4．蜂胶佐剂（propolis） 5．脂质体佐剂（liposomes）。 6．其他：MF59佐剂、微囊化佐剂（micro-encapsulation)、 硬脂酰酪氨酸佐剂和γ －菊粉等。
非颗粒性佐剂
1．肽类佐剂（peptides）：胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物、
去胞壁酰多肽、脂肽和免疫调节多肽。 2．表面活性分子类佐剂：海藻糖合成衍生物（TDM） 3．核酸及其衍生物类佐剂：合成核苷酸聚合体、CpG 4．含硫复合物类佐剂：左旋咪唑 5．碳水化合物高分子类佐剂：香菇多糖、DEAE-葡聚糖 6．细胞因子类佐剂（cytokine）：IL-2、IL-4和γ-IFN等。
• 是一种优良的天然药物
• • • 供免疫佐剂用的蜂胶外观应具备其固有的特征 具有广泛的生物活性和药理作用（抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消 炎） 具有免疫增强作用： 能保持抗原特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的 产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。
蜂胶佐剂疫苗制备方法：
（1）蜂胶的处理：
蜂胶（4℃以下贮存） 室温浸泡24～48h 冷却 粉碎过筛 按1：4（W/V）加95％乙醇 透明栗色纯净蜂胶浸 过滤或离心取上清
液
4℃以下保存备用
除去干渣计算出浸液中含蜂胶量。
（2）蜂胶佐剂疫苗的制备： 灭活菌液或病毒液，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂胶 10mg，边加边摇荡，成为乳浊状，即可。
中药多糖
中药多糖的免疫佐剂作用:银耳多糖、牛膝多糖、黄芪多糖等可 起到增强单核吞噬细胞的功能;枸杞多糖、香菇多糖等可增强T 细 胞的功能;当归免疫活性多糖、灵芝多糖等可增强B 细胞的功能。
7．脂质分子类佐剂：脂多糖、Vit A和Vit E等脂溶性维生素
8．其他：霍乱毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破伤风类 毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；维生素B12等。
佐剂的分类
颗粒性佐剂
1不溶性铝盐胶体 这是一类在疫苗上应用很广泛的佐剂,通常使用的主要有氢氧化铝明胶、明矾、磷酸三 钙等。铝盐是当前唯一允许用于人的佐剂。 价廉，易制备。 合成方法:
百度文库剂的分类
3脂质体
脂质体是由磷脂和其他极性分子以双层脂质膜构型形成的封闭的向心性囊泡,对 与其结合或偶联的蛋白抗原具有免疫佐剂作用。
脂质体可储存抗原,缓慢释放可溶性抗原,并能将抗原导向巨噬细胞或树突状细胞, 还 可将抗原直接递送至胞质并通过MHC Ⅰ类分子诱导CTL 应答。
CTL:细胞毒T淋巴细胞 脂质体安全无毒，亲水和疏水性物质均可掺入，但制备较难，多数情况下需可溶性免 疫调节剂才有
FIA可引起持续性肉芽肿，FCA中的BCG可引起结合菌素过敏反 应，不能用于人类。
油乳乳剂的合成
该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保持稳定，为抗原在 淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的形成和积聚。
油乳剂疫苗的免疫效力高低，直接与乳化作用的好坏和乳剂成分的质量等有关。 一种好的乳剂疫苗应是油包水（W/O）或水包油（O/W）型，粘度低，颗粒均匀， 稳定性良好，呈乳白色。 “乳剂”是将一种溶液或干粉分散成细小的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所 成的分散体系。被分散的物质称为分散相（内相），承受分散相的液体称连续相 （外相），两相间的界面活性物质称为乳化剂。
佐剂的比较
为免疫小鼠而设计、只适用 于小鼠；含有特效免疫诱导 剂CpG DNA，产生的抗体效价 高于FIA；免疫周期2周；无 ImmunEasy Mouse 毒性，无副作用；容易操作， 水溶性佐剂 Adjuvant 只需加入抗原混合，室温下 5～10分钟后即可注射，无需 加热、超声波处理、乳化等 复杂步骤。 使用时不需复杂乳化过程， QuickAntibody系 水溶性佐剂 抗原和佐剂只需简单混合即 列免疫佐剂 可用于免疫动物。 可降解鲨烯与Tween 80和 Span 85混合后进行微流化进 而形成均一的滴状油包水乳 液；耐受性良好；第一个可 用于人体的疫苗佐剂。
如IL21 的作用是增强机体对抗原的初次和再次免疫应答,促进 IL22 的产生,提高特异性Th 细胞的活力及诱导B 细胞的增殖与分 化,对提高TI 抗原的免疫应答尤其重要。
细胞因子昂贵，有种特异性、毒性及潜在的自身免疫性。
细胞因子类免疫佐剂
细胞因子的概念
是机体的各种细胞在其生命周期中所释放的具有不同 生物学效应的物质，是免疫细胞间相互作用的调节信号。该类 物质相互诱生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络 （cytokine network）系统，各种细胞借助自己所释放的细胞因
免疫刺激复合物（ immunostimulating complex， ISCOM）
• ISCOM由抗原物质与由皂树皮提取的一种糖苷Quil A和胆固醇按 1:1:1混合后自发形成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡。
• ISCOM直径40nm，每个ISCOM约含10～12分子的蛋白质。
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ISCOM应用于多种细菌、病毒和寄生虫病的疫苗，具有产生 “全面”免疫应答的效力，可长期增强特异性抗体应答。