丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒分光光度法说明书-2016上海
丙二醛
丙二醛（MDA）含量测定一、原理植物器官衰老时，或在逆境条件下，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(malondialdehyde, MDA) 是其产物之一，通常利用它作为脂质过氧化指标，表示细胞膜指过氧化程度和植物对逆境地条件反应的强弱。
MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸（TBA）反应，形成在532 nm 波长处有最大光吸收的有色三甲基复合物，该复合物的吸光系数这155[mmol/(L·cm)]，并且在600 nm 波长处有最小光吸收。
可公式A532－A600 = 155 000×C×L （1）算出MDA浓度C（μmol/L），进一步算出单位重量鲜组织中MDA 含量C（μmol/L）。
式中A532和A600分别表示532 nm 和600nm波长处的吸光度值。
L为比色杯厚度（cm）.需要指出的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。
为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。
C/μg/Ml/L=6.45(A523－A600)－0.56A450（2）式中A450、A532、A600分别代表450 nm、532 nm 和600 nm波长下的吸光度值。
用公式（2）可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度，进一步算出其在植物组织中的含量。
二、材料、仪器设备及试剂1、材料植物根或叶。
2、仪器设备研钵，试管，可调加样器，恒温水浴锅，冷冻离心机，分光光度计。
3、试剂（1）5%三氯乙酸（TCA）。
（2）0.67%硫代巴比妥酸（TBA）。
三、实验步骤（1）取0.5 g 植物样品（叶、根），加5%TCA 5 mL，研磨后所得匀浆在3 000 r/min下离心10 min。
（2）取上清液2 mL，加0.67%TBA 2 mL，混合后在100℃水浴上煮沸30 min，冷却后再离心一次。
（3）分别测定上清液在450 nm、532 nm 和600 nm处的吸光度值，并按公式（2）算出MDA浓度，再算出单位鲜量组织中的MDA 含量（μmol/g）。
人丙二醛(MDA)说明书
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
3 酶标包被板
12 孔×8 条
9 标准品稀释液
1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液
6ml×1 瓶
10 说明书
1份
5 显色剂 A 液
6ml×1 瓶
11 封板膜
2张
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定植物组织中的丙二醛（malondialdehyde, MDA）是一种重要的生物指示物，它是脂质过氧化反应生成的副产物，被广泛用于评估植物在环境胁迫下的氧化损伤程度。
本文旨在介绍植物组织中丙二醛含量的测定方法。
一、实验原理脂质过氧化反应是指脂质分子在产生自由基的作用下和氧分子反应产生的一系列复杂化学反应，其中丙二醛是其主要生成产物之一。
丙二醛含量可用氨基苯酚反应法进行测定，方法如下：二、实验步骤1.制备样品：将植物组织样品取出后，立即放入液氮中快速冷冻，然后在-80℃条件下保存。
制备样品时最好避免使用任何金属仪器或操作工具。
2.提取组织丙二醛：取出冰冻样品，加入10%四氢吡啶，用离心机离心5分钟，将上清液移至新离心管中，加入等体积的三氯醋酸/磷酸氢二钾缓冲液（pH=7.4），混合均匀后加入1%氨基苯酚溶液，摇晃混匀后，在沸水中加热15分钟，之后冷却至室温。
3.检测丙二醛含量：加入冷却到室温的硫酸，甲醛，氨基苯酚混合液中，混合均匀后，在室温下放置30分钟，之后用丙酮-石油醚混合液提取反应液中的丙二醛。
4.测定丙二醛含量：用紫外分光光度计检测丙二醛含量，吸收波长为532nm，以硫酸/磷酸氢二钾缓冲液作为空白对照。
三、实验注意事项1.制备样品时，应采取快速操作，避免组织样品在高温、干燥等条件下发生氧化损伤。
2.反应液中的溶液准确测量。
3.注意保护自己的安全，如佩戴防护手套和眼镜，避免反应液溅出。
4.在测定过程中，确保光谱仪的本底值已经清除，否则会影响测试结果。
总之，通过此篇文章的描述，我们可以了解到测定植物组织中丙二醛含量的方法。
这种方法简单、快速、精确，可以广泛应用于植物生理生化领域中的实验研究。
碧云天生物技术脂质氧化(MDA)检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号脂质氧化(MDA)检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0131S 脂质氧化(MDA)检测试剂盒 100次 S0131M脂质氧化(MDA)检测试剂盒500次产品简介：碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。
动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。
此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，相应的反应原理图如下：MDA TBA MDA-TBA AdductMDA-TBA 加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。
另外，MDA-TBA 加合物也可以在535nm 被激发产生最大发射波长553nm ，据此也可以进行荧光检测。
特点：本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA ，使检测更加准确。
丙二醛MDA含量的测定
06
丙二醛MDA含量测定的发展趋势和展 望
丙二醛MDA的简介
第一章
丙二醛的性质和作用
丙二醛是一种有机化合物，是衡量机体氧化应激水平的重要指标。 丙二醛在体内主要由脂质过氧化产生，可以反映机体细胞的氧化应激状况。 丙二醛可以与蛋白质、核酸等大分子物质发生交联，影响细胞的结构和功能。 丙二醛在某些条件下可以激活细胞的信号转导途径，参与细胞凋亡和坏死等过程。
感谢您的观看
汇报人：XX
MDA含量的生物学意义
丙二醛（MDA）是生物体内自由基反应的 产物，可以反映细胞膜脂质过氧化的程度。
MDA含量可以作为评估氧化应激状态的指 标，对于研究抗氧化和抗衰老等领域具有 重要意义。
MDA含量的变化可以反映某些疾病的发生 和发展过程，例如糖尿病、动脉粥样硬化 等。
通过测定MDA含量，可以为临床诊断和 预防提供参考，例如通过抗氧化剂的补 充来降低MDA含量，从而延缓衰老和预 防疾病。
监测水体污染： 通过测定水体中 丙二醛MDA含量， 评估水体污染程 度和来源。
监测土壤污染： 通过测定土壤中 丙二醛MDA含量， 评估土壤污染状 况和来源。
监测大气污染： 通过测定大气中 丙二醛MDA含量， 评估大气污染状 况和来源。
监测生物体污染： 通过测定生物体 内丙二醛MDA含 量，评估生物体 受到的污染和危 害程度。
注意事项：丙二醛含量测定结果的解读需结合其他指标和临床表现进行综合分析，不能单纯依 靠丙二醛含量判断病情
异常值的原因及分析
仪器故障或操作 失误
试剂污染或失效
样本不均一或处 理不当
实验环境不佳， 如温度、湿度 等不稳定
结பைடு நூலகம்解读的注意事项
正确使用标准曲线 避免仪器故障和操作失误 考虑样品的代表性 注意样品的保存和运输
植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)
植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA在内的复杂化合物，此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对植物组织(根、茎、叶、种子等)MDA进行检测，是专门用于植物脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测的试剂盒，不适用于动物组织、细胞、血液等。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在有最大吸收，该复合物的吸光系数为155mmol/(L.cm)，并且在长处有最小吸收。
植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰，我们总结出经验公式，以消除这一干扰。
亦可以通过比标准品进行比较，进行含量检测。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、植物根茎、叶子等2、剪刀3、离心管、小试管或96孔板4、分光光度计或酶标仪5、水浴锅或恒温箱6、离心机操作步骤(仅供参考)：编号名称TO102350TTO1023100TStorage试剂(A): 组织匀浆液250ml 500ml RT 避光试剂(A): TBA 0.35g 0.7g RT 避光试剂(C): 抗氧化剂0.5ml 1ml 4℃试剂(D): MDA标准品(1mmol/L) 0.5ml 1ml -20℃避光使用说明书1、样本处理：①制备提取液：取适量的植物根、茎、叶子、种子等，称量后剪碎，按每植物样品加入的比例加入组织匀浆液，充分匀浆(一般取0.4～1g植物样品即可)。
脂质过氧化产物——丙二醛的简便测定
丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是脂质过氧化的产物，测定其含量可以反映体内脂质过氧化的程度，间接评价细胞损伤的程度。
以下是测定丙二醛的简便方法：
1. 试剂配制：0.6%硫代巴比妥、5%三氯乙酸、0.05%考马斯亮蓝。
2. 步骤：取血清或组织液，加入5%三氯乙酸200ul，混匀后于4℃冰箱静置1小时，离心取上清液；在上清液中加入0.6%硫代巴比妥200ul，摇匀后置40℃水浴30分钟，此时溶液由无色变为红色；再加入0.05%考马斯亮蓝200ul，摇匀后置室温15分钟，此时溶液由红色变为蓝紫色，于530nm波长处比色，记录OD值。
3. 计算：OD值=测定管OD值-空白管OD值；丙二醛浓度(umol/L)=(OD值/斜率)x25；脂质过氧化物浓度(umol/L)=丙二醛浓度(umol/L)x2。
请注意，此方法仅供参考，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。
同时，为了确保结果的准确性，建议进行适当的质控。
如有需要，可以寻求专业人员的帮助。
丙二醛MDA含量的测定
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石 英砂和2 mL 0.05 mol ·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol ·L-1磷酸 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中 出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产 物之一。植物在逆境下遭受伤害与活 性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切 相关。
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
计算结果
Vt MDA mmol g FW = 6.452 D532 D600 0.559 源自 D450 V W s-1
实验7-2丙二醛含量测定
实验7-2丙二醛含量测定实验7-2 丙二醛（MDA）含量测定【实验目的】1、掌握植物组织中丙二醛含量测定的原理和方法。
2、了解丙二醛含量测定的意义。
【实验原理】植物器官在衰老或逆境胁迫时，会发生脂质过氧化作用，丙二醛（MDA）是其终产物之一，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。
在高温和酸性条件下，丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮（三甲川），在532nm 处有最大吸收波长。
植物在胁迫条件下可溶性糖增加，而糖与硫代巴比妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最大吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙二醛含量时需排除可溶性糖的干扰。
采用双组分分光光度法可分别求出丙二醛和可溶性糖的含量。
蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙二醛与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出二元一次方程：A450=C1×85.4A532- A600=C1×7.4+ C2×155000解此方程得：C1（mmol/L）=11.71 A450C2（μmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度C2——丙二醛的浓度A450、 A532、A600分别表示450、532和600nm波长下的吸光值。
【实验器材与试剂】1、实验材料受逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官、正常植物叶片或器官2、实验试剂 10%的三氯乙酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏水稀释定容至100mL）、石英砂、0.6%的硫代巴比妥酸（称取0.6克硫代巴比妥酸先用少量1mol/L氢氧化钠溶解，再用10%三氯乙酸定容至100mL）3、实验仪器分光光度计、离心机、研钵、电炉、试管、量筒、天平、移液管等【实验步骤】1、MDA的提取称取材料1g，剪碎，先加入2mL10%的三氯乙酸和少量石英砂研磨，再加入8mL10%的三氯乙酸充分研磨后，4000r/min离心10min，上清液即为样品提取液。
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA荧光法)
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA 在内的复杂化合物，此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过荧光比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，MDA-TBA 加合物在处有最大吸收，以为激发光，据此可以通过荧光比色法进行检测。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管、小试管或96孔板3、 荧光分光光度计或荧光酶标仪4、 水浴锅或恒温箱5、 离心机操作步骤(仅供参考)：1、 样本处理：①血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血。
取待编号 名称TO1015 50T TO1015 100T Storage试剂(A): TBA 0.4g 0.8g RT 避光 试剂(B): TBA 稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(C): 抗氧化剂2.5ml 5ml 4℃ 试剂(D): MDA 标准品(1mmol/L) 0.2ml0.4ml-20℃ 避光使用说明书说明书测液体样本，加入MDA沉淀，混匀，室温静置，离心，弃上清。
丙二醛检测试剂盒(TBA荧光法)
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA 在内的复杂化合物，此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过荧光比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，MDA-TBA 加合物在处有最大吸收，以为激发光，据此可以通过荧光比色法进行检测。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管、小试管或96孔板3、 荧光分光光度计或荧光酶标仪4、 水浴锅或恒温箱5、 离心机操作步骤(仅供参考)：1、 样本处理：①血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血。
取待编号 名称TO1015 50T TO1015 100T Storage试剂(A): TBA 0.4g 0.8g RT 避光 试剂(B): TBA 稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(C): 抗氧化剂2.5ml 5ml 4℃ 试剂(D): MDA 标准品(1mmol/L) 0.2ml0.4ml-20℃ 避光使用说明书说明书测液体样本l，加入MDA沉淀液l，混匀，室温静置，离心，弃上清。
MDA测定方法
丙二醛(MDA)的测定方法一、实验原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。
其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。
根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
二、仪器设备紫外可见分光光度计；离心机；电子天平；研钵；恒温水浴锅；试管；剪刀。
三、主要试剂1、10%三氯乙酸（TCA）2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；3、石英砂。
四、实验材料正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片五、实验步骤1. 取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。
2. 称取叶片切断0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入2 ml 10％TCA 和少量石英砂，研磨至匀浆，4. 然后在 4℃，12, 000 g 离心 15 min，取上清。
5. 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 ml 10％ TCA），加同体积 0.5% TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应30 min，迅速冷却后再离心。
6. 取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。
六、计算含量根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：MDA浓度(μmol L-1) = 6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450MDA含量(μmol/g FW）= (MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml)) / 植物组织鲜重(g)七、注意事项1. MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30 min之内。
丙二醛（MDA）测试盒说明书
无损害的测试方法。
通过测试可反映出血清（浆）、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞、培养细胞以及各种动植物的细胞水平及亚细胞水平的脂质过氧化物的量。
一、丙二醛（MDA）测定的临床意义：机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，（polyunsaturated fatty acid，PUFA）引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。
脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。
因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。
氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。
因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。
MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。
二、本试剂盒测试原理：过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。
三、测试所需仪器设备：可见光分光光度计，恒温水浴箱（或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿孔数十个，以便水的进入），离心机。
四、100人份试剂盒组成与配制：（1）、试剂一：液体6ml×2瓶，室温保存。
（天冷时会凝固，每次测试前适当加温以加速溶解,直至透明方可应用）。
（2）、试剂二：液体6ml×2瓶，用时每瓶加170ml双蒸水混匀（注意不要碰到皮肤上）。
S0131 脂质氧化_MDA_检测试剂盒 说明书
脂质氧化(MDA)检测试剂盒产品简介：碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。
动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。
此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，相应的反应原理图如下：MDA TBA MDA-TBA AdductMDA-TBA加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。
另外，MDA-TBA 加合物也可以在535nm 被激发产生最大发射波长553nm ，据此也可以进行荧光检测。
特点：本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA ，使检测更加准确。
同时本检测试剂盒在检测过程中可以把部分MDA 天然形成的聚丙二醛分解成MDA ，使对脂质氧化的测定更加准确。
本试剂盒可以检测低达1μM 的MDA 。
血浆、血清样品中的MDA 含量通常在约2-4μM ，尿液中的MDA 含量通常在约5-30μM ，在本试剂盒的检测范围内，可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。
s0131 脂质氧化mda检测试剂盒 说明书
脂质氧化(MDA)检测试剂盒产品简介：碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。
动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。
此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，相应的反应原理图如下：MDA TBA MDA-TBA AdductMDA-TBA加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。
另外，MDA-TBA 加合物也可以在535nm 被激发产生最大发射波长553nm ，据此也可以进行荧光检测。
特点：本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA ，使检测更加准确。
同时本检测试剂盒在检测过程中可以把部分MDA 天然形成的聚丙二醛分解成MDA ，使对脂质氧化的测定更加准确。
本试剂盒可以检测低达1μM 的MDA 。
血浆、血清样品中的MDA 含量通常在约2-4μM ，尿液中的MDA 含量通常在约5-30μM ，在本试剂盒的检测范围内，可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。
丙二醛(MDA)含量的测定
• 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应， 当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最 终浓度为0.5 nmol · L-1）
精品课件
计算结果
M D A m m o lg -1 F W = 6 .4 5 2 D 5 3 2 D 6 0 0 0 .5 5 9 D 4 5 0 V s V tW
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）；
•
Vs：测定用提取液体积（ml）；
•
FW：样品鲜重（g）。
精品课件
注意事项
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最 好使用低温离心机离心。
精品课件
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
精品课件
O
O
OH
HN 2
OO
+
100 O C HN
N
H
H
S NO H
HS N H
O HO N H
S
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
精品课件
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
精品课件
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解
精品课件
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑
丙二醛(MDA)含量的测定
丙二醛（MDA ）含量的测定丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。
植物在逆境下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
一：原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（MDA ：Malondialdehyde ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA ）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm 处有一吸收高峰，并且在660n m 处有较小光吸收。
根据其532 nm 的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm 处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
硫代巴比妥酸 丙二醛 3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）仪器设备1. 分光光度计；2. 研钵；3. 剪刀；4. 恒温水浴；5. 试管：20 mL ×46. 离心机。
二：试剂1. 5 %三氯醋酸；2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；3. 0.05 mol · L –1磷酸缓冲液， pH 7.8。
+100 C O HNS N HO O O H H HN HS NH OO HO OH N N H S 2O三：方法与步骤1．取三裂叶蟛蜞菊叶片4片（每株1片），洗净擦干，剪成0.5 cm 长的小段，混匀。
2．称取叶片切段0.1g ，放入冰浴的研钵中，加入1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
将匀浆转移到试管中，再用1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，分2次冲洗研钵，合并提取液。
3．在提取液中加入2 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号：QS1401 规格：50管/48样丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。
通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：
MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配置：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；
注意事项：
临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。
MDA提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、吸取0.6mL 试剂一于1.5mL离心管中，再加入0.2mL样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心10min。
3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中，测定532nm和600nm处的吸光度，记为A532和A600，ΔA= A532-A600。
MDA含量计算：
1、血清（浆）中MDA含量的计算：
MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样=25.8×ΔA
2、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样)=25.8×ΔA ÷Cpr
第1页，共2页
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按照样品质量计算
MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)=25.8×ΔA ÷W (3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V样÷V样总)=0.0516×ΔA
V反总：反应体系总体积， 8×10-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.2 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
第2页，共2页。