生化实验--血糖的测定(课堂PPT)

• 葡萄糖标准工作液：5mmol/L
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实验操作
加入物 血清(ml) 葡萄糖标准液(ml)
B
S
T
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0.01
－
0.01
－
蒸馏水(ml) 工作液(ml)
0.01
－
－
1.0
1.0
1.0
• 混匀，置 37 ℃水浴保温 15分钟，每管加蒸馏水0.5 ml，在 510nm波长处比色，以空白管（B管）调零，读取各管吸光度。 根据各管吸光度计算其血糖浓度。
• 糖尿病诊断标准？
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糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫 功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、 精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰 岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白 质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合 征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可 出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三 多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好 会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭 病变，且无法治愈。
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血糖测定方法特点
葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄 糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。
Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样 的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原
物质，故该法其参考值较其他方法略高。 邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测 ，且邻甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性，临床和科研上已很少采用。
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无机化学法：Folin-Wu法
• 原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色 的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖 的含量
• 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖 还原物质的影响。
• 空腹正常血糖参考值 4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL
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酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase, GOD）
• 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧 化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
• 过氧化氢在过氧化物酶 (peroxidase，POD)作用下，分解为水
和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的 醌类化合物。 • 红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长 处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。
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• 如果调节失衡，结果是什么？高血糖 或者低血糖。
• 低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。
• 高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于 8.89 mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖： 糖尿病。
• 糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病 因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。
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THE END
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糖尿病的类型
Ⅰ型糖尿病 又叫青年发病型糖 尿病或胰岛素依耐 型糖尿病。
原因：胰腺产生胰 岛素的细胞已经彻 底损坏,从而完全失 去了产生胰岛素的 功能. 治疗：依赖胰岛素 治疗。
Ⅱ型糖尿病 又叫非胰岛素依耐 型糖尿病。
原因：自身能够产 生胰岛素，但细胞 无法对其作出反应， 使胰岛素无法发挥 作用。
服糖后半小时，1小时，2小时，3小时
各抽血一次，作血糖定量检测。于采血同
时，每隔1小时留取尿液作尿糖试验，整个
过程不可吸烟，喝咖啡，喝茶或进食。ຫໍສະໝຸດ 2020/3/2513
• 测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空 腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然 后成人口服75 g无水葡萄糖，溶于250 ml水 中，5~10分钟内饮完。饮后2小时抽静脉血 ，测静脉血浆葡萄糖。
血糖的测定
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正常人空腹血糖浓度是多少？ 为何能保持恒定？ 糖尿病
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• 正常人空腹血糖浓度(fasting plasma glucose,FPG)为 3.89-6.11 mmol/L。
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• 血糖如何维持稳定？关键酶调节 关键酶如何调节：激素调节。
• 有何临床意义？
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• 口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）是一种口服 葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食 葡萄糖后的血糖调节能力。
• 通过OGTT试验，可以早期发现糖代谢异 常，早期诊断糖尿病(Diabetes Mellitus, DM) ，是一种简单、快捷的 诊断方法。
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实验误差分析：
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反 应式中可知第一步是特异反应，第二 步特异性较差。误差往往发生在反应 的第二步。一些还原性物质如尿酸、 维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可 与色原性物质竞争过氧化氢，从而消 耗反应过程中所产生的过氧化氢，产 生竞争性抑制，使测定结果偏低。但 是对测定结果无显著影响。
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注意事项
• 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的 葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡 萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等 干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物 酶反应，造成结果假性偏低。
• 对于血液样品需及时分离红细胞。因 为红细胞的酵解将会导致测定结果偏 低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为 抗凝剂以抑制糖酵解。
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• IFG 和IGT可以说是一种正常人向糖尿 病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是 糖尿病， 但是将来发生2型糖尿病的危险 性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据 有关研究报道，每年5-8%的IGT者将发展 成为2型糖尿病。
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OGTT的适应症
• 无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常
• 无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿
• 常见的升高血糖的激素：胰高血 糖素、糖皮质激素和肾上腺素。
• 降低血糖的激素：胰岛素
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胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的 主要激素
对糖代谢的调节：胰岛素促进组织、 细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速 葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌 肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖 转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织， 导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时， 血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿 中将出现糖，引起糖尿病。
中的2020蛋/4/7白质，因此该实验的特异性较高。
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酶法：己糖激酶法（Hexokinase, HK）
原理：
NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。
评价：
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分 析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。
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IFG 与 IGT • 空腹血糖损伤(Impaired Fasting Glucose, IFG)
：空腹血糖≥6.1mmol/L,但＜7.0mmol/L
• 糖耐量受损(Impaired Glucose Tolerance, IGT) ：餐后2h血糖＞7.8mmol/L,但＜11.1mmol/L
• 酶试剂 取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶于磷 酸缓冲液80ml中，定容至100ml，置4℃保存
• 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中， 用棕色瓶贮存。
• 酶酚混合试剂 将酶试剂和酚试剂等量混合，4 ℃下 可存放1个月。
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OGTT方法：WTO标准化
实验前三天，受试者每日食物中糖含
量不应低于150g，且维持正常活动，影响
试验的药物应在三天前停用，受试前应空
腹10-15h。
空腹取血后，5分钟内饮入250ml含
75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇女用量为
100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过
75g。
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注意事项
• 严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液 ，然后在进行测定。
• 酶酚混合液一般现用现配。
• 葡萄糖氧化酶对 β - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡 萄糖约 36% 为 α 型， 64% 为 β 型。葡萄糖的完全氧 化需要 α 型到 β 型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可 加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋 过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 α 型，故须放 置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
治疗：需要胰岛素 单独或与口服药联 合应用的治疗
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• 一般正常人进食后血糖都会暂时性升高， 进食后30分种或60分种可升到最高峰，但 血糖一般不超过8.9 mmol/L；进食2小时后 又会回到空腹水平，这就是人体对糖的耐 受现象。
• 什么是口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）？
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葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
葡萄糖氧化酶
（1）葡萄糖＋O2＋H2O （GOD） 葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反应
相对血糖浓度
光吸收法测定
505nm