SOP标准操作规程

SOP标准操作规程
血清直接胆红质（货号：OSR6111，OSR6211）
实验原理：
胆红质是血色素分解代谢的最终产物。

在肝脏中它与葡糖醛酸结合，结合形式通过胆汁分泌物排出循环系统。

直接胆红质的评估有助于肝功能紊乱的测定。

与阻塞性黄疸有关的总胆红质的增加主要原因在于直接胆红质。

在肝炎中，血清中的直接胆红质和间接胆红质都增加。

在患有溶血性黄疸和新生儿黄疸的新生儿病人中，总胆红质增加主要原因在于间接胆红质。

红细胞大量破坏，胆道阻塞，肝脏疾病及肝脏在摄取，结合和排泌胆红质方面先天性异常和生理缺陷等均可导致血中胆红质升高而引起黄疸1。

方法
奥林巴斯直接胆红质是由Van den Bergh和Mueller发展的改良的重氮法2。

直接（结合）胆红质直接和一种重氮盐，3，5-二氯苯基重氮盐（DPD）在酸性介质中发生反应，生成重氮胆红质。

血清中的直接胆红质和重氮胆红质的颜色变化成正比，在540/600nm进行测量。

一个单独的血清空白被执行以消除内生血清的干扰1。

胆红素+3，5-二氯苯基重氮盐（BF）4-------------﹥重氮胆红质
标本：
病人准备：无特殊要求。

类型：血清或肝素A血浆，标本最好不要溶血，应避光保存，尽快进行测定。

标本稳定性：暴露在直接光照条件下，标本中的胆红质会在一个小时之内减少50%。

在很好的避光保存的条件下，血清中的胆红质在2～8℃下可稳定3天，在-20℃稳定大约三个月1。

仪器与材料:
仪器：奥林巴斯640生化分析仪
材料：奥林巴斯640 直接胆红质
参与反应成份的最终浓度：
盐酸150mmol/L
3，5-二氯苯基重氮盐0.07 mmol/L
其中含有稳定剂，表面活性剂和保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

试验用试管的直径在12～16mm。

定标液：奥林巴斯胆红质定标液（Cat. No. DR0046）
试剂准备：奥林巴斯AU640的直接胆红质是即开即用的。

无需特殊准备。

执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯640直接胆红质试剂已经建立的程序。

精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法5，AU640批内精密度小于4%或SD ≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS 的规则。

方法学比较：奥林巴斯AU640 直接胆红质（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做181个病人标本。

相关系数达到0.9999，回归方程如下：
直接胆红质方法1=（直接胆红质方法2×0.996）-0.005
病人结果数值分布：0.01～10.09 mg/dL
敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化23毫吸光度为1 mg/dL。

试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。

2.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

校准：
标准液的准备：奥林巴斯胆红质定标液（Cat. No. DR0046）。

奥林巴斯胆红质定标液是即开即用的，无需特殊准备。

校准程序：每30天需要定标一次。

直接胆红质定标程序用奥林巴斯定标物，可追踪到全国科学技术学会（NIST）标准参考材料（SRM）916a。

当有以下情况时需要重新定标：
1．换试剂批号或出现质控漂移时。

2．当仪器做完保养后。

3．重要零件更换时。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061&62）作为未知标本进行分析。

操作程序（逐步地）：
AU640开机
1.确认两瓶清洗剂有足够的量。

2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。

4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。

6.如果要求输入密码，请输入密码。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。

9. ISE（电极）需要以下步骤定标：
a.在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。

b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。

c.选择F5，选定合适的定标条目。

d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。

开始分析:
1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。

2.用鼠标点击屏幕最上方的[START ANAL YZER]图标。

3.点击F2退出键，退回到主屏幕。

分析参数
空白参数
样品体积3微升稀释水0微升
试剂1体积30微升稀释水120微升
试剂2体积n/a 稀释水n/a
波长570/660 方法End
读点0/2 温度37℃
颜色参数
样品体积3微升稀释水0微升
试剂1体积30微升稀释水120微升
试剂2体积n/a 稀释水n/a
波长570/660 方法End
读点0/2 温度37℃
完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。

计算：
无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以mg/dL打印。

报告结果:
参考范围6：0.03-0.18mg/dL
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。

报告格式：
自动地打印37℃mg/dL的报告，如果以SI单位（mg/dL）报告结果，要乘以17.1。

操作过程注意事项：
操作过程的限制性：OlympusAU640 直接胆红质的线性范围是0～10 mg/dL。

样品浓度超过线性上限应稀释重做。

在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。

超范围的标本也可以在一份生理盐水中加一份血清进行手工稀释，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以2。

干扰物质：
研究结果表明直接胆红质受以下物质干扰3：
乳糜乳糜达到900mg/dL时影响小于10%
溶血血红蛋白达到20mg/dL时影响小于10%
Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献4。

参考文献：
1.Tietz,N.W.(Ed),Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition,W.B.Saunders,1987.
2.Van den Bergh,A. and Mueller,P.,Biochem Z,77:90,1916
3.NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.
4.Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,199
5.
5.NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.
6.200 blood donors from North Texas.Data on file.。