隐丹参酮单剂量和多剂量给药在大鼠体内药代动力学研究

隐丹参酮单剂量和多剂量给药在大鼠体内药代动力学研究曾金;王猛猛;沈淑娇;张志荣;蒋健;裘福荣

【摘要】目的评价单剂量和多剂量灌胃隐丹参酮(Cryptotanshinone,CTS)的药动学特征.方法将20只SD雄性大鼠随机分为单剂量组(隐丹参酮10 mg/kg,1d)、多剂量组(隐丹参酮10 mg/kg,每天1次,连续10 d)给予灌胃后,用LC-MS/MS法测定血浆中隐丹参酮的浓度.血药浓度数据用DAS 2.0药代动力学软件处理,按两室模型拟合并求算药代动力学参数.结果隐丹参酮单剂量给药后,Cmax为

(12.16±14.11)ng/mL,Tmax为(2.88±2.56)h,T1/2为(3.70±3.50)h,MRT为(6.69±0.54)h,AUC0-24为(58.40±25.73)ng·h/mL;多剂量给药后,Cav为

(1.95±0.61)ng/mL,Tmax为(3.20±2.08)h,T1/2为(7.12±5.06)h,AUCss为(46.74±14.51)ng·h/mL,DF为2.42±0.28.单剂量和多剂量的AUC0-24、Tmax、T1/2差异无统计学意义.结论隐丹参酮长期给药后无蓄积风险.

【期刊名称】《湖南中医药大学学报》

【年(卷),期】2015(035)004

【总页数】5页(P1-5)

【关键词】隐丹参酮;单剂量和多剂量;药代动力学;LC-MS/MS

【作者】曾金;王猛猛;沈淑娇;张志荣;蒋健;裘福荣

【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中

医药大学附属曙光医院临床药理科,上海201203;上海中医药大学附属曙光医院临

床药理科,上海201203

【正文语种】中文

【中图分类】R285.5;R969.1

目前临床上许多药物长期使用会产生蓄积或耐药现象，有特殊用途的药物如抗肿瘤药、抗病毒药等出现蓄积现象提高药物在体内的血药浓度，加大临床药物运用的危险性；耐药将会降低患者体内的药物浓度，使药物的治疗作用降低甚至消失。纵观临床上发生耐药现象，究其原因可能是长期服药后造成体内药物代谢酶发生变化，进而影响药物在体内的吸收、代谢、排泄等过程，加速药物排出体外；而蓄积效应的原因则更需要研究，以便更有效的保证临床用药的安全可靠。

隐丹参酮（Cryptotanshinone，CTS）是中药丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）的脂溶性成分之一。丹参味苦，微寒，归心、肝经，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈等功效。CTS是二萜醌类化合物，是从丹参中提取出的脂溶性

混合物丹参酮成分之一，这类化合物在骨架上大多具有三元或四元碳环的邻醌或对醌结构，其特殊结构使其具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗菌等活性。在众多实验及临床研究中发现，CTS单体在抑制细菌生长[1]、改善组织炎症[2-3]、抑制肿瘤增殖[4]、改善脑缺血损伤[5]、治疗多囊卵巢综合征[6]等发面发挥了有效的作用，含有CTS的中成药如丹参酮胶囊、妇炎康片、丹蒌片等在临床中得到广泛的运用。

有关CTS的单用以及合并用药等研究已有报道，然而其剂量研究却未见实验报道。本研究通过灌胃SD大鼠CTS，评价单剂量和多剂量给药后CTS在健康SD大鼠

的药动学特性，探讨单剂量多剂量给药方式之间是否存在差异，为该药进一步在临床应用提供依据。

1.1 仪器

日本岛津LC-20A超高速液相色谱仪 (日本岛津公司)：配置二元泵、系统控制器、自动进样器、柱温箱；API 4000-QTRAP型质谱仪(美国ABI/SCIEX公司)：配有

电喷雾离子化源(ESI)、大气压化学离子化接口、三重四极杆质量分析器以及Analyst 1.5.2数据处理软件；XS-105型十万分之一电子天平 (瑞士 Mettler Toledo公司)；AS20500A型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；Millipore纯水系统 (美国Millipore公司)；Thermo超低温冰箱 (美国Thermo

公司)；WH-3微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

1.2 药品及试剂

CTS，批号 110852-200305，规格 20 mg，纯度98%，购自中国药品生物制品

检定所；内标（IS）：地西泮（DZP），批号115-9302，规格20 mg，纯度100%，购自中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈均为色谱纯(美国TEDIA公司)；甲酸、吐温-80、乙酸铵、无水乙醇等均为分析纯，购自中国医药集团总公司；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。

2.1 色谱及质谱条件

液相条件：色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5μm，美国Agilent Technologies公司）；流动相4 mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈(15∶85，v/v)，流速1 mL/min；等度洗脱5 min；进样量20μL；柱温30℃；进样器温度4℃。

质谱条件：离子检测方式多重反应监测（MRM）；离子极性正离子（Positive）；离子化方式电喷雾离子化（ESI）；离子对CTS m/z 297.3→251.2；内标m/z 285.2→193.1；传输电压103 V（CTS）、98 V（IS）；碰撞能量33 eV（CTS）、43 eV（IS）；干燥气温度350℃；干燥气流速10 L/min；雾化室压力50 psi；

毛细管电压5 000 V。

2.2 对照品溶液的配置

精密称取CTS对照品5.0 mg，置于10 mL棕色容量瓶内，加乙腈溶解并稀释至

刻度，摇匀，即得0.49 mg/mL的CTS储备液，取储备液适量，依次稀释至所需浓度。精密称取内标2.5 mg，加乙腈溶于10 mL棕色容量瓶内，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.25 mg/mL的内标储备液，取适量储备液用乙酸

乙酯配置成0.4 ng/mL的溶液，作为内标溶液备用。

2.3 血浆处理方法

将血浆从-80℃取出，37℃解冻，振荡5 min，用移液枪精密吸取血浆样品100μL 加入1.5 mL EP管中，并加入含 0.4 ng/mL内标的乙酸乙酯800μL，涡旋混匀3 min，静置10 min，4℃ 12 000 r/min高速离心10 min，吸700μL上清，于60℃氮气挥干，加100μL乙腈复溶，涡旋混匀，12 000 r/min离心10 min，吸

取上清，进行LC-MS/MS分析。

2.4 动物实验方案

2.4.1 实验动物 6～8周龄SPF级SD雄性大鼠20只，体质量（220±20）g，由

上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2014-0002，饲养于上海中医药大学实验动物中心，自由饮水、饮食。

2.4.2 实验用药配制精密称取CTS标准品适量，吐温-80、超声振荡器超声助溶，用生理盐水溶解并定容至浓度为2 mg/mL的混悬液，置4℃冰箱中保存，备用。2.4.3 动物分组及给药将20只SD大鼠随机分为单剂量组、多剂量组两组，每组10只。

单剂量组：前9天每天予生理盐水（含10%吐温-80）灌胃，灌胃剂量为5

mL/kg（剂量换算与灌胃CTS体积相当），第10天以10 mg/kg灌胃含有CTS

的生理盐水混悬液，每天每只大鼠给药量不超过2 mL。末次给药前空腹取血后再灌胃，并按如下时间点进行采血取样：0、10、20、30、45 min，1、1.5、2、3、4、8、12、24 h。至大鼠眼底静脉窦取血0.3 mL，肝素钠100μL抗凝，放置片