M蛋白的鉴定及实验分析

M蛋白的鉴定及实验分析

【关键词】 M蛋白；免疫球蛋白；分析

Identify and Experimental Analysis of M Protein

Key words:M protein; Immune globin; Analysis

M蛋白(骨髓瘤蛋白)细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸顺序和蛋白质结构的免疫球蛋白(Ig)分子或其片段,临床上常见于多发性骨髓瘤(MM)、原发性巨球蛋白血症、重链病、原发性淀粉样变性、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症等淋巴细胞或浆细胞克隆增殖性疾病［1］。M蛋白是单克隆免疫球蛋白的缩写,也称副蛋白、骨髓瘤蛋白、M成份。对此病只有采取较好实验室方式与正确实验分析相结合，才能为临床提供靠得住依据。

1 血清区带电泳技术

是临床实验室对蛋白质进行的一种剖析技术。它能够对血清或其他体液中异样蛋白质进行挑选。它是以区带电泳为基础在一种适合的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的pH条件下要紧依照其所带电荷数将其分离成各类片段。

正常人血清的区带电泳结果和扫描图像

从左至右的5个区带依次为白蛋白及α一、α二、β和γ球蛋白区。有时在慢电泳时β球蛋白可分为β1球蛋白和β2球蛋白。白蛋白区的成份包括白蛋白、前白蛋白和部份α1脂蛋白;α1区包括α1抗胰酶蛋白、α1脂蛋白、Ｇc球蛋白;α2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2巨球蛋白等;β1区包括转铁蛋白、补体Ｃ3ｃ、IgＡ、血结素等;β2区包括Ｃ3ｂ、IgＡ;γ区包括IgＧ、IgＭ、CRP等。

多克隆免疫球蛋白增殖性疾病

各类Ig均增加,相应的其他区带会减少,多见于肝硬化、慢性肝炎和系统性红斑狼疮等,由于β和γ区大量增殖,致使两区之间的间隙消失,成为γβ桥,亦称γβ联,扫描时β消失,显现一高而宽的γ峰。

免疫缺点症时会显现无γ峰或低β峰。

Ｍ蛋白血症

特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在γ区高与宽的比例≥2,β区那么≥1(正常时小于此比例),其他区带明显减少。

Ｍ蛋白量少时常被其他蛋白掩盖

可用稀释血清的方式解决,在进行血清区带电泳时,有时会显现假性Ｍ蛋白条带,现在那么需要进行免疫电泳和免疫固定检测以资甄别。显现假性Ｍ蛋白条带的情形包括:当血液凝固不完全,血清中含有纤维蛋白原；血管内溶血时血清内血红蛋白结合珠蛋白含量增高;缺铁性贫血时血清转铁蛋白浓度升高；某些应急状态下α球蛋白浓度增加及先本性高脂蛋白血症;双白蛋白血症、白蛋白变异、白蛋白结合青霉素等药物后电泳行为改变。 2 免疫球蛋白检测

正常人产生免疫球蛋白的浆细胞是多克隆性质合成的免疫球蛋白除5种不同重链外，还只有κ和λ轻链，而且κ/λ比是恒定［2］，M蛋白疾病是骨髓中异样浆细胞极度增生所引发的一种恶性疾病,初期可无临床病症,起病缓慢,有的病例临床表现极不典型,易引发漏诊和误诊。因此血清免疫球蛋白也是M蛋白综合诊断的标准之一。Ig定量经常使用方式有单向(环状)免疫扩散法、速度散射浊度测定法、火箭免疫电泳法。其中以速度散射浊度测定法最为准确,且采纳自动化方式使操作方便，速度散射比浊法定量检测Ig的意义在于确信Ｍ蛋白所属Ig类别及数量，速度动态散射比浊法是抗原抗体结合反映在每一个单位时刻内的速度,持续测定各单位时刻的反映速度即为动态观看,该法具有速度快、灵敏度高、精准度高、稳固性好的优势。一样M蛋白

所属Ig含量均显著升高，其他类Ig那么正常或显著降低。

3 尿本周氏蛋白

本周氏蛋白是单克隆游离免疫球蛋白轻链,它是κ或λ轻链的合成超过重链时轻链游离于血清中,分子量为45KD,容易从尿中排出本周氏蛋白,多来源于骨髓浆细胞的恶性增生,是由于合成紊乱,在生成和分泌完整的免疫球蛋白分子时的过量轻链。本周氏蛋白又称凝溶蛋白,具有特殊的热沉淀性质,在pH 的条件下,加热至50℃~60℃时显现沉淀,继续加热至90℃后又从头溶解,再冷却时又可显现沉淀。过去检测方式中,是利用本周氏蛋白的这种特殊的热沉淀性质检测尿本周氏蛋白的。这种方式由于存在特异性和灵敏度差的缺点,其结果也受诸多因素的阻碍:例如沉淀转变需要肉眼观看,由于操作进程中人为阻碍因素较多,灵敏度较低,常致使判定有误差;尿液混浊、尿液中含有过量的其他蛋白和实验进程中受温度转变等可阻碍其结果。本实验能够看出,热沉淀反映法应再也不作为本周氏蛋白的挑选。同时也不能确信轻链的型别。

4 免疫固定

免疫固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作用于蛋白,进行抗原抗体反映,使抗原在电泳位置上被固定。免疫固定后的区带,

应为单一免疫复合物沉淀带,依照抗血清的不同,可判定未知蛋白为何种成份。在研究Ｍ蛋白时,免疫固定电泳至少要应用6种抗血清,一是抗全血清抗体,其他5类别离为γ、α、μ、κ和λ的抗血清。免疫固定电泳不只对ＭＭ分型成心义,同时还可对ＭＭ患者进行初期诊断,优于骨髓细胞检查,因为骨髓细胞形态检查往往要在ＭＭ患者中晚期多部位多次骨穿,并要瘤细胞>10%才可诊断,而免疫固定电泳可弥补这方面的不足［3］。

在实际工作中,往往需要结合几种不同的方式和技术结合，能够使绝大部份的Ｍ蛋白血症患者取得明确诊断。值得一提的是,要对M 蛋白阳性的患者做出正确的诊断,还应将Ｍ蛋白鉴定的结果与临床资料相结合。

【参考文献】

［1］Robert P,Kathy h,Judyc，et of kappa and Lamba lightchain dyrate nepbeloetry［J］.Chinchem,1986，32(6):1141.

［2］陆慧琦，屠小卿，徐铃铃. 应用综合实验诊断M蛋白病［J］. 中国免疫学杂志，2006，16（7）：387389.

［3］杨志才，高玉洁，张春明，等.多发性骨髓瘤血清蛋白电泳与免疫学分型［J］. 国外医学临床生物化学与查验学分册，2005，26（7）：143147.