HPLC法测定艾迪注射液中紫丁香苷含量

ＨＰＬＣ法测定艾迪注射液中紫丁香苷含量
目的：建立用HPLC 测定艾迪注射液中紫丁香苷的含量。

方法：色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-四氢呋喃(8∶90∶1.5∶0.5)，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，检测波长为265 nm。

结果：紫丁香苷在2.6~26.2 μg/ml 范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8，n=6)，平均回收率为99.0%，RSD为0.3%。

结论：本方法简便、快速、准确，适用于艾迪注射液中紫丁香苷的含量测定。

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of syringin in Aidi Injection by HPLC. Methods: The chromatographic column was Symmetry C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm), the mobile phase was methanol-water-acetic acid-tetrahydrofuran(8∶90∶1.5∶0.5) with the flow rate of 1.0 ml/min, the column temperature was 30℃, the UV detection wavelength was 265 nm. Results: The linear range of concentration of syringin was 2.6~26.2 μg/ml. The average recovery was 99.0% with RSD of 0.3%. Conclusion: The method is simple, fast and accurate. It is suitable for content determination of syringin in Aidi Injection.
[Key words] HPLC; Aidi Injection; Syringin; Determination
艾迪注射液是由人参、黄芪、刺五加和斑蝥4味中药经加工制成的中药制剂，具有清热解毒、消瘀散结之功效，用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤和妇科恶性肿瘤等，也可作为癌症患者化疗的辅助用药。

4味药合用可对肿瘤进行多靶点治疗，既具有直接杀死癌细胞、促进肿瘤细胞凋亡的功能，又能通过增强机体免疫功能延长患者的寿命，提高患者的生存质量。

《中国药典》2005年版将紫丁香苷作为刺五加药材的质控成分。

在文献[1，2]的基础上，笔者采用高效液相色谱法，对艾迪注射液中紫丁香苷(syringin)的含量进行了测定。

结果表明该方法快速，准确，重复性好，现报道如下：
1仪器与试药
1.1仪器
LC-10AT高效液相色谱仪、GC-solution工作站；BS124S型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；BU3120型超声仪。

1.2试药
艾迪注射液(贵州益佰制药有限公司，批号:20020911，
20030501，20030505)；紫丁香苷(中国药品生物制品检定所提供，批号:374-8306)；甲醇、四氢呋喃、冰醋酸为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇-水-冰醋酸-四氢呋喃(8∶90∶1.5∶0.5)为流动相，检测波长为265 nm，流速1.0 ml/min，20 μl定量管进样，柱温为30℃。

2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液精密称取紫丁香苷对照品适量，加水溶解制成每1 ml约含紫丁香苷10 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取注射液１支（10 ml），0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照品溶液的制备按处方制备不含刺五加的样品，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3专属性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。

2.4线性关系的考察
精密称取紫丁香苷对照品5 mg，置于250 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取紫丁香苷对照品溶液适量，分别制成每1 ml中含紫丁香苷2.62，5.23，
10.46，15.69，20.92和26.15 μg的标准溶液，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，在上述色谱条件下进样，分析，以对照品色谱峰面积A对浓度C(μg/ml)绘制标准曲线。

结果表明，在2.6～26.2 μg/ml浓度范围内，峰面积线性关系良好，其回归方程为A=57 235C-6 543.4（r=0.999 6）。

2.5回收率测定
精密吸取艾迪注射液(批号20020911)2.5 ml，置于5 ml容量瓶中，分别精密加入一定量的紫丁香苷对照品溶液，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，在上述色谱条件下进样，分析，测得平均回收率结果见表1。

表1 紫丁香苷回收率测定结果
2.6精密度试验
取同一批样品，制备供试品溶液6份，按含量测定方法测定。

以紫丁香苷含量统计，RSD=0.8０%，精密度良好。

2.7稳定性试验
精密吸取供试品溶液20 μl，分别于0、2、4、6、8、12 h测定，结果显示12 h内，溶液中紫丁香苷面积的RSD为0.6１%(n=6)，表明该供试品溶液稳定性较好。

2.8样品含量测定
取批号20020911，20030501，20030505样品，照“2.2.2”供试液的制备，按外标法计算样品中紫丁香苷的含量(mg/g)，结果见表2。

表2 含量测定结果（n=3）
3讨论
高效液相法测定制剂中紫丁香苷含量的研究较多，多以甲醇-水和乙腈-水系统为流动相，艾迪注射液药味较多，单纯的上述流动相均难以分离测定。

文献[2]报道流动相中加入冰醋酸等酸性调节剂，研究中发现在选用的色谱条件下加酸性调节剂可以改善色谱峰的对称度，但对紫丁香苷保留时间附近的色谱峰的分离度没有达到令人满意的效果。

故作者流动相系统中加入少量的四氢呋喃，使艾迪注射液中紫丁香苷的峰形、与其他物质的分离度等达到了含量测定的要求。

该方法简单、可行，重复性好，适用于艾迪注射液中紫丁香苷的含量测定。

[参考文献]
[1]王晓辉,李清,程维明,等.HPLC法测定注射用艾迪（冻干）中紫丁香苷的含量[J].沈阳药科大学学报,2006,23(12):782-784.
[2]苗爱东,孙殿甲,彭燕,等.高效液相色谱法测定雪莲注射液中紫丁香苷的含量[J].药物分析杂志,2003,23(4):289-291.。