第二十七章人类白细胞抗原分型
《人类白细胞抗原》课件
人类白细胞抗原（HLA） 在肿瘤免疫中的作用
HLA与肿瘤抗原的相互作 用
HLA与肿瘤免疫逃逸的关 系
HLA与肿瘤免疫治疗的研 究进展
PART SIX
检测方法：流式细胞术、PCR技术、ELISA等 检测意义：了解个体免疫系统状况，评估疾病风险 临床应用：器官移植、疾病诊断、疫苗研发等 检测结果解读：根据检测结果，评估个体免疫系统状况，制定治疗方案
的应用
人工智能与生 物信息学：利 用人工智能和 生物信息学方 法分析人类白 细胞抗原数据
免疫疗法：人 类白细胞抗原 在免疫疗法中
的应用，如 CAR-T细胞疗
法等
疾病诊断和治 疗：人类白细 胞抗原在疾病 诊断和治疗中 的应用，如肿 瘤免疫治疗等
免疫治疗：用于治疗癌症、自 身免疫性疾病等
疫苗研发：用于开发新型疫苗， 提高疫苗效果
检测方法：流式细胞术、PCR技术 等
诊断价值：确定移植供体与受体的 匹配程度，辅助诊断感染性疾病和 自身免疫性疾病
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
临床应用：移植排斥反应、感染性 疾病、自身免疫性疾病等
局限性：检测结果受多种因素影响， 需要结合其他检测方法进行综合判 断
应用领域：器官移植、肿瘤 免疫治疗、传染病防控等
预防疾病：通过检测HLA抗 原，预测器官移植排斥反应
治疗疾病：通过HLA抗原匹 配，提高肿瘤免疫治疗效果
检测方法：流式细胞术、 PCR技术等
传染病防控：通过检测HLA抗 原，预测传染病易感性和疫苗
效果
PART SEVEN
重要性：人类白细胞抗原是免疫系统的重要组成部分，研究其功能有助于理解免疫系统的工 作机制，为疾病治疗提供新的思路和方法。
人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准
人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准在当今社会，随着医学技术的不断发展和进步，人们对于个体化医疗的需求正在不断增长。
而作为个体化医疗的基础，基因检测技术的重要性也越发凸显出来。
在基因检测技术中，人类白细胞抗原（HLA）基因分型的检测系统技术标准，是至关重要的一环。
本文将深入探讨人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准，以期为读者提供全面、深入的了解。
一、人类白细胞抗原基因分型检测系统简介1. 人类白细胞抗原人类白细胞抗原是细胞表面的特异性抗原，能够诱导免疫反应，并在移植排斥反应中扮演着至关重要的角色。
它在器官移植、疾病易感性、自身免疫性疾病等方面具有重要的生物学功能。
2. 基因分型检测系统基因分型检测系统是通过不同的技术手段，对人类白细胞抗原的基因型进行分析和检测，以期得出准确的结果。
目前，常见的技术手段主要包括PCR法、序列特异引物法、序列基因分型法等。
二、人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准的重要性1. 个体化医疗需求随着医学技术的不断发展，人们对于个体化医疗的需求日益增长。
而人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准的制定，可以为个体化医疗提供强有力的支撑。
2. 移植排斥反应在器官移植过程中，人类白细胞抗原的匹配程度直接影响移植排斥反应的发生。
准确的基因分型检测系统技术标准对于移植手术的成功至关重要。
3. 疾病易感性某些疾病与人类白细胞抗原的基因型相关，因此基因分型检测系统技术标准可以用于评估个体对于某些疾病的易感性，从而为疾病的预防和治疗提供依据。
三、人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准的优化方向1. 技术标准的规范化在制定人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准时，需要充分考虑各种技术手段的特点和优劣势，以期制定出规范、全面的技术标准。
2. 数据比对与验证基因分型检测系统技术标准的优化还需要侧重于数据比对与验证。
只有准确的数据才能够保证基因分型检测系统的准确性和可靠性。
3. 多层次的标准体系针对不同的应用场景，可以建立多层次的人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准体系，以满足不同领域的需求。
白细胞分化抗原(共57张PPT)
功能：
（1） CD4 +T细胞活化的辅助受体： T细胞通过CD4与APC表面MHCⅡ类分子结合，为
CD4 +T细胞活化的辅助受体
（2）信号转导作用： CD4的胞浆内与PTK p56lck相连接。
（3）T细胞的分化发育：胸腺中的阴阳性选择。 （4）HIV的主要受体： CD4分子胞外第1个结构域是
2014），可大致划分为14个组。
CD分子的分类
白细胞分化抗原的主要生物学作用
表面标志 1、代表不同谱系 2、不同分化阶段 3、活化阶段 参与机体重要的生理、病理过程
（1）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免 疫细胞识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功 能的发挥； （2）参与造血细胞的分化和造血过程的调控； （3）参与炎症的发生； （4）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。
功能：
（1）参与B细胞活化和信号转导：
辅助受体复合物在B细胞活化及信号转导中起辅助 受体的作用。
（2）促进B细胞增殖分化：
B细胞激活后，CD21可传递增生信号，介导B细胞进
入细胞周期
（3）参与B细胞免疫记忆：
带有C3d的抗原抗体复合物可与DCs表面的CD21结
合，定位于生发中心，在诱导免疫记忆中起重要作 用。
桥联在一起，由CD19分子转导的信号加强了由
BCR复合物转导的信号，提高了B细胞对抗原刺 激的敏感性。
B细胞的活化、增殖、分化
TH细胞与B细胞相互作用，提供B细胞活化的双信号： 第 一 信 号 （ 抗 原 刺 激 信 号 ） ： BCR 复 合 物 与 抗 原 的 结 合 ;
CD19/CD21/CD81辅助受体使B细胞对抗原刺激的敏感性提高 第二信号（协同刺激信号）：CD40/CD40L等协同刺激信号分子的
《人类白细胞抗原》课件
HLA-Ⅲ类抗原
定义
HLA-Ⅲ类抗原主要包括一些血清蛋白和补体成分，如C4、 C2、Bf等。
功能
HLA-Ⅲ类抗原参与补体系统的活化，与免疫应答和炎症反应 等有关。
HLA在人体内的分布
HLA分子广泛分布于人体有核细 胞的表面，其中以白细胞表面的
密度最高。
在不同细胞类型中，HLA的表达 水平存在差异，专职抗原提呈细 胞表面的HLA分子表达密度最高
03
HLA与感染性疾病的关联机制涉及免疫应答的调节、抗原提呈等。了解这些机 制有助于为感染性疾病的预防、诊断和治疗提供新的策略和方法。
05
人类白细胞抗原的 检测与诊断
HLA基因检测技术
HLA基因分型技术
通过基因检测确定个体的HLA等位基 因型别，用于器官移植配型、遗传疾 病研究等。
高通量测序技术
01
感染性疾病是由病原体（如细菌、病毒、真菌等）引起的疾病。HLA不仅与自 身免疫性疾病和移植免疫有关，还与感染性疾病的发病和预后有关。
02
HLA通过影响免疫细胞对病原体的识别和反应，参与感染性疾病的发生和发展 。研究发现，某些HLA类型与对特定病原体的易感性或抵抗力存在关联，如 HLA-B57与HIV感染的保护作用等。
与自身免疫性疾病的关系
自身免疫性疾病是指机体对自身 抗原发生免疫反应而导致自身组 织损害所引起的疾病。人类白细 胞抗原（HLA）是影响自身免疫 性疾病发病的重要因素之一。
HLA通过影响免疫细胞的反应和 调节，参与自身免疫性疾病的发 生和发展。研究发现，某些HLA 类型与特定的自身免疫性疾病风 险存在关联，如HLA-DR3与 Graves病、HLA-B27与强直性脊 柱炎等。
特性
HLA基因位于人类的6号染色体上 ，对人类的免疫应答和移植排斥 反应等生理过程发挥重要作用。
MHCHLA检测及应用
A/B
C/D
A/C
A/D
A/C
B/C
E/F
B/F
2.HLA与人类学研究
HLA某些抗原的频率在不同民族和地区间 有所差别 研究这些差别的分布和趋势，可以了解不 同民族和地区人群的亲缘关系和迁徙情况 如我国南方人群的HLA-A11，B46高于北 方人群，而HLA-A1却低高于北方人群，提 示我国有两个主要群体
3.HLA与父权关系认定
细胞表面的HLA分子终身不变 HLA的遗传方式明确 如果可疑生父不具有子代的单倍
型，即可排除其为生父的可能
?
A/B D/C 可能
?
E/F 排除
A/C
类 位点 结构 分布 Ⅰ A,B,C α 有核细胞 Ⅱ D,DR,DQ,DP α,β B，mo， 巨噬细胞 提呈功能 细胞内 细胞外
HLA-I
类 分 子
HLA-II
类 分 子
(三).HLA功能
移植抗原 参与提呈抗原,
MHC限制性
参与T细胞的成熟:胸腺内的选择
参与免疫调节：作为KIR的配体
SBT 标记引物 / 标记的序 列末端 PCR / 测序
等位基因
等位基因
(五)HLA分型的应用
基础免疫学研究:MHC限制性
器官移植:
排斥反应 与疾病相关性：B27与AS 与输血的关系：发热，血小板输注无效 人类学研究 亲子认定
1.HLA与疾病的相关性
家系研究: 观察有病者是否具特殊的单倍 型 群体研究: 对比病人组和非病人组HLA 各个抗原频率的高低。计算相对危险性 （RR =P+/P- × C-/C+ ）。 如强直性脊柱炎和HLA-B27相关。RR可 达90-300
人类白细胞抗原(HLA)系统
组织抗原 ( tissue antigen )。
组织相容性抗原：引起移植物排斥反应的抗原。
主要组织相容性抗原 （major Histocompatibility antigen ） 次要组织相容性抗原 （minor Histocompatibility antigen ）
主要组织相容性系统 ：
-- Mac抗原。 1962年 Van Rood 建立了 HLA 抗血清集群分析
方法，成功地检出 HLA-BW4和 HLA-BW6
白细胞抗原，开拓了白细胞血型分型的 道路。
混合淋巴细胞反应 （mixed lymphocyte reaction ,MLR ) 混合淋巴细胞培养分型 （mixed lymphocyte culture, MLC ) 预致敏淋巴细胞分型 （primed lymphocyte typing ,PLT ) 细胞介导的淋巴细胞毒反应 （cell-mediated lymphotoxicity ,CML )
A分子的主要生物功能
参与对抗原处理、运输及抗原递呈
MHC的限制作用
参与对免疫应答的遗传控制 诱导自身或同种淋巴细胞反应 参与T细胞分化过程 参与T细胞应答
HLA的临床实际应用
HLA 系统与输血
HLA 检测与器官移植
HLA 与肿瘤的关系
HLA 与疾病的关联 HLA 与亲子鉴定和个体识别的关系 HLA 与人类研究
连锁不平衡（linkage disequilibrium）
指单倍型基因呈非随机分布的现象，即某些基因总是经 常在一起出现，其单倍型频率（实际检测数值）比理论数值 （各种等位基因频率的乘积）要显著增高，而另一些基因又较 少出现在一起，这种非自由组合现象称为连锁不平衡
白细胞分化抗原
CD19
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即B7-1/B7-2，静止单核细 胞和树突状细胞CD80↓、CD86↑，活化T、 B和单核细胞表达均高。CD80/86与 CD28结合为T细胞的活化提供重要的协 同刺激信号（co-stimulating signal） CD40 表达于成熟B细胞、某些上皮细胞 和内皮细胞、淋巴样并指细胞、滤泡树 突状细胞以及活化的单核细胞。CD40LCD40结合诱导B细胞再次免疫应答和生 发中心的形成。
免疫球蛋白Fc段的受体有关CD分子
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（三）免疫球蛋白Fc段受体
CD64
FcγRI，表达于单核-巨噬细胞及 树突状细胞。是高亲和力IgGFc受体。介 导ADCC、IC清除、调理吞噬和促进吞 噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α等介质。 CD32 FcγRII， 分布广泛，为是低亲和 力IgGFc受体。介导中性粒细胞和单核巨 噬细胞的吞噬作用和氧化性爆发。 FcγRII-B介导免疫抑制。
CD2
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又称LFA3，主要表达在APC或靶细 胞上。与CD2分子黏附，促进T细胞识别 抗原的功能。 CD28 是由二硫键相连的同源二聚体， CD28分子的胞浆区可与多种信号分子相连。 CD28分布：CD4+T细胞、50% CD8+ T细 胞、浆细胞和部分活化的B细胞。CD28的 配体是B7-1和B7-2。B7主要分布于B细胞 和APC细胞表面
人类白细胞抗原(HLA)系统
连锁不平衡（linkage disequilibrium）
指单倍型基因呈非随机分布的现象，即某些基因总是经 常在一起出现，其单倍型频率（实际检测数值）比理论数值 （各种等位基因频率的乘积）要显著增高，而另一些基因又较 少出现在一起，这种非自由组合现象称为连锁不平衡
基因频率
是指某一特定等位基因与该基因座位中全部等位基因 总和的比例。
组织抗原 ( tissue antigen )。
组织相容性抗原：引起移植物排斥反应的抗原。
主要组织相容性抗原 （major Histocompatibility antigen ） 次要组织相容性抗原 （minor Histocompatibility antigen ）
主要组基因区 DR 亚区
DQ 亚区
DP
亚区
DNA 亚区
DOB 亚区 DM 亚区
HLA分子分布
经典HLA-Ⅰ类分子 有核细胞表面
HLA-Ⅱ 类抗原分子 抗原递呈细胞 （antigen presenting cell ，APC）
HLA的遗传特点
有关名称的含义 HLA单倍型 （HLA haplotype） 连锁在一条染色体上的HLA各位点的基因组合 称为HLA单倍型。
HLA基因型 （HLA genotype） HLA基因在体细胞两条染色体上的组合称为 HLA基因型，即该个体内两条染色体上的HLA等位 基因组合格局。 HLA表型 （HLA phenotype） 某一个体HLA抗原特异性型别称为HLA表型。
HLA的遗传特点 单体型遗传 由于HLA是一组紧密连锁的基因群，这些连锁在一条染 色体上的等位基因很少发生同源染色体之间的交换。当亲代 的遗传信息传给子代时，HLA单体型作为一个完整的遗传单 位由亲代传给子代。 多态性遗传 多态性（polymorphism ）是指在一随机婚配的群体中 中，染色体同一基因座位有两种以上基因型，即可编码两种 以上的产物。 共显性遗传 每对等位基因所编码的抗原都表达于细胞膜上，无隐性 基因，也无等位基因排斥现象。 复等位基因 在同一基因位点存在两个以上的基因。 由于各个座位上等位基因是随机组合的，故人群的基因 型可达108
HLA分型
HLA分型HLA (HUMAN LEUCOCYTE ANTIGEN，即人类白细胞抗原)是一个由一系列紧密连锁的基因座位所组成的具有高度多态性的复合体。
中文名：HLA分型外文名：HUMAN LEUCOCYTE ANTIGEN含义：人类白细胞抗原类型：高度多态性的复合体简单介绍位于第六号染色体的短臂6P21.31区，长3600KB，根据功能和产物结构的不同，分成3组：经典HLA基因、免疫功能相关基因和免疫无关基因。
其中经典HLA基因与输血和移植急性排斥反应密切关联。
因此，对于经典的HLA基因进行分型在临床上有重要意义。
人类的疾病和基因密切相关。
随着医学的发展像白血病、地中海贫血、肾衰等都能用最新的基因技术进行分型检测，再寻找合适的供体进行移植治疗。
HLA共分为4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，广泛存在与各种组织细胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B细胞、巨噬细胞和活化T细胞中；III型分子为补体系统，包括C2和C4位点，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴细胞、某些细胞毒性T细胞和白细胞中。
技术发展HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究；90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。
HLA分型技术同样走过了这一历程。
建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。
1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA 的DNA分型方法，随着测序技术的突飞猛进，基于DNA序列的分型方法已经取代了传统的血清学及细胞学分型方法。
现DNA分型方法主要分为两种：基于核酸序列识别的方法和基于序列分子构型的方法。
基于核酸序列识别的方法主要有：PCR-RFLP,PCR-SSO,PCR-SSP和PCR-SBT。
其中PCR-SBT测序方法是现世界卫生组织（WHO）推荐的HLA分型方法的“金标准”。
白细胞分化抗原的分类
CD37 HD28,HH1 Bm,(T,M) gp40～52 ？
CD38 Leu17,T16,OKT10 PC,Ta,Thy, p45 ？
CD39 AC2,G28-10 Bm,(M),FDC gp70～100 ？
CD32 CIKM5,41H16(FcγRⅡ) Mac,G,B,Eo gp40 凝聚IgG FcR，吞噬，ADCC
CD33 MY9,H153,L4F3 M,BM gp67 ？
CD34 MY10,ICH3 BM gp105～120 生长因子受体？调控早期造血
CD35 TO5,E11,(CR1) G,M,B,NKsub,RBC p160～260 结合C3b，调理吞噬
（2）凡CD中带有w的抗原或抗体发CDw108、CDw109尚需继续进行全面鉴定。
（3）有些CD抗原又可进一步划分为不同的成员，一般用小写英文字母表示，但情况有所不同：1）如CD1可分为CD1a、CD1b和CD1c，这三种不同分子是分别由三个不同的、高度同源的基因所编码；2）CD45至少可分为CD45R、CD45RA、CD45RB和CD45RO，它们是同一基因的不同异型（isoform);3)CD2和CD2R是识别同一个分子上不同的表位；4）CD49已进一步划分为CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e和CD49f，它们的基因定位于不同的染色体上，但具有较高的同源性。
粘附分子 CD11a-CD11c、CD15s、CD18、CD29、CD43、CD44、CD44R、CD48、CD49a-CD49f、CD50、CD51/CD61、CD54、CD55、CD58、CD59、CD62E、CD62L、CD62P、CD102-CD104、CDw108
人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准
人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准《人类白细胞抗原基因分型检测系统技术标准》一、引言在人类免疫系统中，白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen, HLA）扮演着至关重要的角色。
它们作为一种复杂的蛋白质，帮助人体识别和抵御外来的病原体，防止各种感染和疾病的发生。
对HLA基因的分型检测系统技术标准的研究和制定，对于医学诊断、器官移植、疾病治疗等领域具有重要意义。
二、HLA基因及其重要性1. 什么是HLA基因HLA基因是编码HLA分子的一组基因，位于人类染色体的短臂上。
它们在人体免疫系统中扮演着识别外源性抗原和调节免疫应答的重要作用。
2. HLA基因的重要性HLA分子能够识别宿主细胞和外源性抗原，从而启动和调节免疫应答。
HLA基因与免疫相关疾病、器官移植排斥反应等密切相关。
对HLA基因进行准确分型有助于提高器官移植的成功率，指导个体化治疗方案，预防和治疗免疫相关疾病。
三、HLA基因分型检测技术标准1. 技术原理当前，HLA基因分型的技术主要包括PCR-SSP、PCR-SSO、HLA测序分型等。
这些技术能够准确快速地分型HLA基因，为临床诊断和治疗提供有力的支持。
2. 技术标准的重要性制定HLA基因分型检测技术标准，能够规范和统一HLA检测的过程和结果解读，保证检测结果的准确性和可靠性。
这对于临床诊断、器官移植配型、疾病预防和治疗等方面具有重要意义。
四、HLA基因分型检测系统技术标准的应用1. 在器官移植中的应用HLA分子在器官移植中起着决定性的作用。
通过HLA基因分型，可以为器官捐献者和受体进行配型，减少器官移植的排斥反应，提高移植成功率。
2. 在疾病预防和治疗中的应用许多免疫相关疾病如自身免疫性疾病、感染性疾病等与HLA基因密切相关。
通过分型检测，可以预测个体对疾病的易感性，制定个体化的预防和治疗方案。
五、对技术标准的个人观点和理解个人认为，HLA基因分型检测系统技术标准的制定和应用对于推动个体化医学的发展具有重要意义。
第二十七章人类白细胞抗原分型
第二十七章人类白细胞抗原分型Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing第一部分教学内容和要求一、目的要求·掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途；熟悉：基因分型技术的方法类型、原理和用途；了解：HLA血清学分型的技术要点。
二、教学内容1．血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。
2．细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。
3．基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法，PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。
第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题）1.微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为A．豚鼠血清 B．兔血清 C．羊血清 D．马血清 E．人血清2．HLA-Ⅰ类抗原血清学分型主要应用的试验A．微量补体依赖的细胞毒试验 B．T淋巴细胞增殖试验 C．T细胞介导的细胞毒试验D．溶血空斑试验 E．混合淋巴细胞培养3．不表达HLAⅠ类抗原的细胞是A．淋巴细胞B．成熟红细胞C．血小板D．脾细胞E．粒细胞4．编码HLA -I类分子的基因位点有A．HLA—A、B位点B．HLA—A、B、C位点C．HLA—DR位点D．HLA—DR、DP、DQ位点E．C4、C2、TNF位点5. 最容易发现HLA新基因的方法是A．CDC试验B．MLR C．PCR-SSP D．PCR-SSO E．PCR-测序6. CDC试验观察结果用A．分光光度计B．酶标仪C．光学显微镜D．相差显微镜E．倒置相差显微镜（二）多项选择题（X型题）1.HLA-I类抗原分布于如下细胞A.T细胞B.B细胞C.巨噬细胞D. 血小板E.红细胞2．HLA-Ⅱ类抗原包括的抗原有A．HLA-A B．HLA-D C．HLA-DP D．HLA-DQ E．HLA-DR3. HLA-Ⅱ类抗原主要表达于如下细胞A.B淋巴细胞B. 巨噬细胞C. 抗原提呈细胞D.红细胞E.T淋巴细胞4．HLA抗体可来自A．健康人血清 B．产妇血清 C．接受移植者血清 D．单克隆抗体 E．兔抗HLA血清5．HLA血清学分型技术可用于检测A．HLA-A抗原 B．HLA-DP抗原 C．HLA-DR抗原 D．HLA-B抗原 E．HLA-C抗原6．可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有A．HLA-A B．HLA-B C．HLA-DP D．HLA-DR E．HLA-D7．下述哪些分子生物学方法可用作HLA定型A．PCR B．PCR-SSP C．PCR-RFLP D． PCR-SSO E．PCR-测序8．下述哪些是MLC阴性定型法的特征A．用已知的HTC作应答者B．用已知HTC作刺激者D．需培养6天D．仅需培养2天E．具有相同抗原时cpm不增高.9．血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于A．HLA分型（供移植前配型、疾病相关研究、人类亲缘研究等）B．抗体筛选C．鉴定和交叉配合试验D．测定T细胞免疫功能E．B细胞免疫功能10．PCR-SSP(序列特异性引物)用于HLA分型具有的特点A．分辨度高B．特异性强C．扩增后处理过程简单D．只需借助琼脂糖凝胶电泳E．依据是否出现特异性条带判断结果二、填空题1．检测HLA抗原的基本方法有___________分型法、___________ 分型法和___________分型法。
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第二十七章人类白细胞抗原分型
Chapter 27 Human Leukocyte Antigen Typing
第一部分教学内容和要求
一、目的要求
·掌握：HLA血清学分型和细胞学分型的方法类型、原理和用途；熟悉：基因分型技术的方法类型、原理和用途；了解：HLA血清学分型的技术要点。
二、教学内容
1．血清学分型法：原理，实验流程与结果判断，技术要点，方法评价。
2．细胞分型法：阴性分型法，阳性分型法。
3．基因分型技术：PCR-序列特异性引物分型法，PCR-序列特异性寡核苷酸探针杂交法，PCR-序列测定法，PCR-限制性片段长度多态性分析法。
第二部分测试题
一、选择题
（一）单项选择题（A型题）
1.微量补体依赖的细胞毒试验中所用的补体为
A．豚鼠血清 B．兔血清 C．羊血清 D．马血清 E．人血清
2．HLA-Ⅰ类抗原血清学分型主要应用的试验
A．微量补体依赖的细胞毒试验 B．T淋巴细胞增殖试验 C．T细胞介导的细胞毒试验
D．溶血空斑试验 E．混合淋巴细胞培养
3．不表达HLAⅠ类抗原的细胞是
A．淋巴细胞B．成熟红细胞C．血小板D．脾细胞E．粒细胞
4．编码HLA -I类分子的基因位点有
A．HLA—A、B位点B．HLA—A、B、C位点C．HLA—DR位点
D．HLA—DR、DP、DQ位点E．C4、C2、TNF位点
5. 最容易发现HLA新基因的方法是
A．CDC试验B．MLR C．PCR-SSP D．PCR-SSO E．PCR-测序
6. CDC试验观察结果用
A．分光光度计B．酶标仪C．光学显微镜D．相差显微镜E．倒置相差显微镜
（二）多项选择题（X型题）
1.HLA-I类抗原分布于如下细胞
A.T细胞
B.B细胞
C.巨噬细胞
D. 血小板
E.红细胞
2．HLA-Ⅱ类抗原包括的抗原有
A．HLA-A B．HLA-D C．HLA-DP D．HLA-DQ E．HLA-DR
3. HLA-Ⅱ类抗原主要表达于如下细胞
A.B淋巴细胞
B. 巨噬细胞
C. 抗原提呈细胞
D.红细胞
E.T淋巴细胞
4．HLA抗体可来自
A．健康人血清 B．产妇血清 C．接受移植者血清 D．单克隆抗体 E．兔抗HLA血清
5．HLA血清学分型技术可用于检测
A．HLA-A抗原 B．HLA-DP抗原 C．HLA-DR抗原 D．HLA-B抗原 E．HLA-C抗原
6．可用混合淋巴细胞培养分型方法进行检测的位点有
A．HLA-A B．HLA-B C．HLA-DP D．HLA-DR E．HLA-D
7．下述哪些分子生物学方法可用作HLA定型
A．PCR B．PCR-SSP C．PCR-RFLP D． PCR-SSO E．PCR-测序
8．下述哪些是MLC阴性定型法的特征
A．用已知的HTC作应答者B．用已知HTC作刺激者D．需培养6天
D．仅需培养2天E．具有相同抗原时cpm不增高.
9．血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)临上可应用于
A．HLA分型（供移植前配型、疾病相关研究、人类亲缘研究等）B．抗体筛选
C．鉴定和交叉配合试验D．测定T细胞免疫功能E．B细胞免疫功能
10．PCR-SSP(序列特异性引物)用于HLA分型具有的特点
A．分辨度高B．特异性强C．扩增后处理过程简单
D．只需借助琼脂糖凝胶电泳E．依据是否出现特异性条带判断结果
二、填空题
1．检测HLA抗原的基本方法有___________分型法、___________ 分型法和___________分型法。
2．CDC试验的分型血清可来自__________或____________。
3．CDC试验阳性时，抗原细胞应___________。
4．检测HLA-Ι类抗原时可用___________细胞或___________细胞，检测HLAⅡ类抗原时需用___________细胞。
5．检测HLAⅡ类抗原时，抗血清需用___________吸收除去HLA___类抗体。
6．PCR-SSP分型法是目前最常用于___________类基因分型
三．名词解释
1．PCR-序列特异引物分型技术（PCR-polymerase chain reaction with sequence specific primer，PCR-SSP ）2
．
同
种
免
疫
血
清
(
i
s
o
t
y
p
e
-
i
m
m
u
n
o
s
e
r
u
m
)
3
．混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，M
L
C
）
四．问答题
1．检测HLA血清学分型法(微量补体依赖的细胞毒试验，CDC test)的原理
2．用血清学分型法检测HLA-Ⅱ类抗原时，和检测Ⅰ类抗原比较有哪些主要的不同点？
3．CDC试验中兔补体为何需用多只兔的混合血清？
4．如何获取B淋巴细胞?
5．PCR-SSP用于HLA分型的原理
第三部分参考答案与题解
一、选择题
（一）单项选择题（A型题）
1．B 2.A 3．B 4．B 5．E 6．E
（二）多项选择题（X型题）
1.ABCD
2.BCDE
3.ABC4．BCD 5.ACDE 6. CE 7 .BCDE
8.BCE 9.ABC 10.ABCDE
二、填空题
1．血清学、细胞学、分子生物学。
2．同种免疫血清、单克隆抗体。
3．死亡。
4．单个核、 T淋巴、 B淋巴。
5．混合血小板、Ⅰ。
6.HLA-Ⅱ。
三．名词解释
1．PCR -SSP：编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同,可用相应的序列特异性引物进行扩增。
借助琼脂糖凝胶电泳观察是否存在特异性产物的电泳条带进行HLA基因分析。
2．同
种
免
疫
血
清
：
存在于同种不同个体间的抗原免疫所诱导生成的抗体。
如HLA抗体。
3．混合淋巴细胞培养：两个体淋巴细胞在一起培养，若HLA-D,HLA-DP抗原不同，可刺激发生淋巴细胞转化现象。
用于HLA定型有阳性和阴性定型法。
四．问答题
1。
HLA分型采用微量补体依赖的细胞毒试验，其原理是HLA抗体与淋巴细胞表面的相应抗原结合后激活补体，导致细胞膜损伤，通透性增强，染料进入细胞，在倒置相差显微镜或倒置荧光显微镜下观察，着染的细胞为死亡细胞，视野下死亡细胞超过40%试验为阳性。
如淋巴细胞膜上无相应的抗原，则不发生反应，为阴性，从而将HLA分型。
2。
要用B 淋巴细胞，抗体要用混合血小板吸收除去Ⅰ类抗体或用单克隆抗体，孵育时间需延长。
3。
避免因个别兔的补体缺陷造成误差。
4。
用尼龙毛法，E花环分离法，免疫磁珠分离法等从单个核细胞悬液中进行分离。
5.PCR-SSP方法的原理是编码各种HLA抗原表型的等位基因不尽相同, 均可用相应的序列特异性引物（sequence specific primer，SSP）进行扩增，通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因特异片段，对扩增的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，根据是否出现特异性产物的电泳条带读取结果。
本技术尚设有内对照以控制质量。
(费櫻刘若英)。