胚胎培养胚胎培养.
胚胎培养
胚胎培养一、胚胎培养的概念1.胚胎：植物在受精后，受精卵形成合子，随即进行第一次分裂，进而形成分生组织和幼胚，再发育成成熟胚。
2.胚胎培养：胚胎培养是植物组织培养的一个主要领域。
植物胚胎培养是指对植物的胚（种胚）及胚器官（如子房，胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
二、胚胎培养的种类以及方法1.胚培养⑴幼胚培养①定义：将子叶期以前的具胚结构的幼小胚从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下使其进一步生长发育形成幼苗的技术。
②特点：幼胚培养完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。
附：以下几种发育方式：a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形成胚或不定芽⑵成熟胚培养①特点：成熟胚培养是自养的，培养基需要简单。
②主要目的：a、研究胚发育过程的形态建成b、生长调节物质的作用c、胚与胚乳相互关系和营养要求③培养方法：将受精后成熟或未成熟种子或果实，用70%-75%酒精表面消毒几分钟；用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消毒10min，无菌水反复冲洗；无菌操作台上，直接或在解剖镜下剥取胚接种在培养基上。
2、胚乳培养⑴定义：指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。
⑵胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子结合而成的3倍体组织。
由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。
不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。
胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变化，形成多倍体、非整倍体等。
⑶培养的方法：取授粉4-8d后的幼果，常规消毒；无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳；接种在培养基上（MS、White等培养基，附加2，4-D或NAA 0.5～2.0，BA0.1～1.0。
），在25-270C和黑暗条件或散光下培养想成愈伤组织；转到分化培养基（MS培养基附加0.5～3.0 mg/l的BA及少量的NAA。
植物胚胎培养
（二） 子房培养 1、子房培养的意义 、
★有效地挽救杂种胚的败育 ★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法 、
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。 在无菌条件下直接剥取子房接种。 子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。 成果实，并含成熟种子。
（一） 胚珠培养
1、胚珠培养的意义 、
有利于合子和早期原胚的培养 胚分化不全的种子的胚培养 获得杂交后代和优良品种 离体授粉的需要 获得无病毒苗
2、胚珠培养的方法 、
长度小于3mm的胚珠， 的胚珠， 长度小于 的胚珠 难与直接解剖， 难与直接解剖，可先接 种于液体培养基中， 种于液体培养基中，根 据培养情况采取相应培 养条件。 养条件。
培养方法： （三） 培养方法： A、取授粉 、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 后的幼果， 后的幼果 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 、无菌条件下切开果实，取出种子， C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射 、接种在培养基上， ℃ 光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下 、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后， 不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养 、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长 ， 出白色的不定根
二、胚胎培养的应用
1、克服远缘杂交的不育性，获稀有杂种植物 、克服远缘杂交的不育性， 2、打破种子休眠，提早结实，缩短育种年限 、打破种子休眠，提早结实， 3、使生活力低下或无生活力的种子萌发 、 4、使柑橘类植物合子胚正常发育 、 5、测定种子生活力 、 6、获三倍体或单倍体植株 、 7、快速繁殖特殊植物 、 8、用于理论研究 、
胚胎体外培养及胚胎评估的培训PPT
培养基的选择与优化。针对不同来源的卵子和胚胎，选择适合的培养基至关重要 。科研人员需不断探索和改进培养基成分，以满足胚胎发育过程中对营养物质的 需求，提高胚胎质量。
06
未来展望与研究方向
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
胚胎体外培养技术的发展趋势
优化培养环境
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW ERA
04
胚胎体外培养及胚胎评估的实际操作
胚胎体外培养的操作流程
0102Βιβλιοθήκη 0304准备培养环境
确保培养箱温度、湿度、气体 浓度等参数适宜，准备好所需
的培养液和细胞。
细胞接种
将胚胎细胞分散并接种到培养 皿或培养瓶中，确保细胞贴壁
良好。
胚胎评估技术的改进方向
高分辨率成像技术
利用高分辨率显微镜和成像技术 ，对胚胎形态、细胞结构和染色 体等进行更精确的观察和评估。
多参数联合评估
结合胚胎的形态、代谢和分子生物 学等多方面参数进行综合评估，提 高评估的准确性和可靠性。
无损检测技术
开发无创、无损的检测方法，减少 对胚胎的损伤，提高评估的安全性 。
胚胎体外培养及胚胎评估
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
的培训
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 胚胎体外培养技术概述 • 胚胎体外培养技术的基本原理 • 胚胎评估的方法与标准 • 胚胎体外培养及胚胎评估的实际操作 • 案例分析与实践经验分享 • 未来展望与研究方向
综合评估
结合胚胎的形态学和遗传学检 测结果，进行综合评估，为患 者提供合适的胚胎移植建议。
第4章-胚胎培养PPT演示课件
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复习思考题：
1、植物胚胎培养分为哪些类型？各有何种特点 和要求？
2、胚胎培养有何意义？
3.花器官培养通常指花的哪些部分培养?常用的 基本培养基是什么?
4.在进行幼胚培养时，由于幼胚过小而分离困 难，可采取什么途径解决?
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温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生
长
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原胚(幼胚)的培养的条件
➢ 无机氮：
包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；
➢ 渗透压：
蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一 样，初期高（WHY）。因为自然条件下，原 胚被一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ高渗液体包围着。
➢ 复杂的天然提取物：
椰乳 CM有促进幼胚生长和分化的作用
4.培养：
加入生长素和CTK，诱 导形成愈伤组织或胚状 体，再分化成植株。
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•52
二、种子培养
优点： 1.植株分化容易，无菌操作方便，
打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
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种子结构
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培养方法：
1.种子消毒：
◇种皮厚或不饱满的用0.1%升汞浸10-20min， 或用10%次氯酸钠浸15-20min。
（2N）
•8
一.培养类型
1、离体胚培养时期 A.异养期 B.自养期
A.异养期，完全依赖于周围细胞中的代谢，而 且依赖于周围胚乳消耗的养料。B.自养期，胚 能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代 谢作用合成其生长所必需的物质。
•9
2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养
•10
2、离体胚培养类型
完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前， 必须借助于原位胚的萌发，使其活化。
植物胚胎培养121111111111111111
③培养条件的控制
剥离出来的幼胚要立即接种到培养基上进行培养。 在培养之前必须对所培养的对象在自然发育条件 下的特性充分了解，比如胚的休眠问题、是否需 要春化作用、胚萌发的温度等。
2、幼胚的分离及培养 ①幼胚的剥离 ②幼胚的培养 胚胎发育过程分为两个时期： 1）异养期（heterotrophy period），即在胚发育早期， 幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。 2）自养期(autotrophy period) ，胚在代谢上已经能在 基本的无机盐和蔗糖的合成培养基上生长，在营养上已相 当独立。
子房由子房壁和胚珠组成
授粉子房的培养 类型 未授粉子房的培养
子房 的 结 构
子房
子房胚珠 受精极核 胚乳 受精卵
胚
未授精子房
授精子房
性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细 胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株；
体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤 组织----二倍体植株；
胚培养
胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠 中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步 生长发育，以至形成幼苗的过程。
一、培养类型
1、幼胚培养 2、成熟胚培养
胚的类型
合子胚：由受精卵形成的胚
体细胞胚： 在离体或活体条件下由除合子
之外的孢子体细胞形成的胚
非合子胚
孤雌胚：
由未受精卵形成的胚
孤雄胚： 由小孢子或花粉粒形成的胚 不定胚：由植物组织或器官直接产生的体细胞胚。
对培养条件要求宽松。
2、成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例
1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在含无菌湿润滤纸的培 养皿中培育6h。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼 苗。 玉米成熟胚的培养
《胚胎培养》复习题及参考答案
第4章《胚胎培养》复习题参考答案一、填空：1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。
2、离体胚的培养分为二种类型：成熟胚培养和幼胚培养。
3、幼胚培养时，其发育过程有三种方式：胚性发育、早熟萌发、产生愈伤组织。
4、由胚乳培养得到的植株，除少数是三倍体外，多数是由各种倍性细胞组成的嵌合体。
5、胚珠培养分二类：受精胚乳的培养和未受精胚珠的培养。
受精胚珠培养的目的：一是用来打破种子的休眠，二是挽救胚的发育，以获得杂交种。
未受精胚珠培养的目的是获得单倍体植株。
6、子房培养分授粉子房培养和未授粉子房的培养。
前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是获得单倍体植株。
二、名词解释：1、胚胎培养（embryo culture）：是指将植物的胚胎与母体分离，培养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。
2、胚性发育(embryonal development)：植物幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
3、早熟萌发(early mature sprouting): 幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。
4、胚培养（embryo culture）：是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
5、胚乳培养（endosperm culture）：是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。
6、胚珠培养（ovule culture）：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
7、子房培养（ovary culture）：是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
动物胚胎培育技术的操作指南
动物胚胎培育技术的操作指南随着科学技术的不断发展，动物胚胎培育技术在畜牧业和生物医学领域扮演着重要的角色。
胚胎培育技术可以帮助我们研究生殖生物学、改良家畜品种，甚至是克隆动物。
在这篇文章中，我们将介绍动物胚胎培育技术的操作指南，以帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
胚胎培育技术主要包括体外受精（IVF）和胚胎移植两个步骤。
在体外受精阶段，首先需要从母体动物中收集卵子和精子。
对于较大的动物，如牛、猪和马，可以通过超声波引导下的卵巢穿刺采集卵子。
对于较小的动物，如小鼠或小鸟，可以通过解剖手术或通过特殊仪器采集卵子。
精子可以通过自然排出或通过人工方式采集。
采集到卵子和精子后，需要进行体外受精。
首先，将卵子和精子放入含有适当培养液的离心管中。
然后，通过离心或通过特殊仪器的帮助，使卵子和精子接触，促进受精的发生。
接下来，将受精卵转移到培养皿中，并将其置于恒温灭菌的培养箱中。
培养皿中的培养液需要定期更换，以提供所需的营养物质和生长因子。
胚胎培养的下一步是胚胎移植。
胚胎移植是将成熟的胚胎植入到母体动物的子宫内，使其继续发育。
在进行胚胎移植前，需要将母体动物的子宫内膜准备好，以提供适宜的环境供胚胎着床。
这可以通过激素治疗或手术操作来实现。
在胚胎移植过程中，需要将培养的胚胎转移到母体动物的子宫内。
这可以通过经阴道插管或腹腔手术来完成。
移植后，需要密切观察胚胎在母体内的发育情况。
一些胚胎可能无法成功着床或在早期发展阶段产生问题，这是正常现象。
但一旦胚胎着床成功并进一步发育，将会带来新生仔动物。
动物胚胎培育技术的操作需要具备一定的专业知识和技能。
操作时，需要注意保持手术场所的清洁和无菌，以避免感染。
培养液的配制和保存也需要严格按照制定的方案进行。
此外，在胚胎移植过程中，要小心处理胚胎，以防止对其造成损伤。
动物胚胎培育技术的应用十分广泛。
不仅可以帮助畜牧业提高品种质量和数量，还可以为生物医学领域提供重要的研究工具和资源。
植物胚胎培养
幼胚培养时，其发育过程有以下几种 发育方式： a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗 b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱 c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形 成胚或不定芽
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
大麦：授粉后10 ~ 20 d
玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d
一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低， 甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱 导产生callus
B、培养基和激素的影响 培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要
成熟胚
700（最 大极限）
四、胚乳培养
胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子 结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3 倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。
不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植 体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。
胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变 化，形成多倍体、非整倍体等。
培养方法： A、将受精后成熟或未成熟种子或果实， 用70%—75%酒精表面消毒消毒几分钟 B、用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消 毒10min，无菌水反复冲洗 C、无菌操作台上，直接或在解剖镜下剥 取胚接种在培养基上
荠菜不同发育时期胚培养的营养需要
胚龄 早球形胚 后球形胚 心形胚 鱼雷胚 胚长度 （μ m） 20~60 61~80 81~450 451~700 营养需要（培养基营养） 小于40μ m长的胚所需营养尚不清楚 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2%、 IAA0.1mg/L+KT0.01mg/L 大量元素、微量元素、VB1、VB6、烟酸、糖2% Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、 MgSO463mg/L、KH2PO442mg/L、VB1、VB6、烟酸、 糖2% Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、 MgSO463mg/L、糖2%
胚的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握胚胎培养的基本原理和操作步骤。
2. 学习在体外条件下模拟胚胎发育过程，观察胚胎的形态变化和生长情况。
3. 探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
二、实验原理胚胎培养是指将受精卵或早期胚胎置于体外的人工培养系统中，模拟体内环境，使其继续发育和生长。
通过胚胎培养，可以研究胚胎发育的规律，筛选优良胚胎，以及进行胚胎基因编辑等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 受精卵或早期胚胎- 培养基：DMEM/F12、KSR、Hams F12- 胎牛血清（FBS）- 促性腺激素（如hCG）- 透明质酸酶- 胚胎培养皿- 显微镜- CO2培养箱- 移液器- 计时器2. 实验仪器：- 超净工作台- 恒温箱- 高压灭菌器- 电子天平四、实验步骤1. 准备培养基：- 将DMEM/F12、KSR、Hams F12培养基按照说明书比例配制，并加入胎牛血清（FBS）。
- 将培养基在无菌条件下过滤除菌，并分装于培养皿中，备用。
2. 胚胎处理：- 将受精卵或早期胚胎置于超净工作台中，用消毒后的移液器吸取一定量的透明质酸酶，轻轻涂抹在胚胎表面。
- 适当放置一段时间，使透明质酸酶作用于胚胎表面，使其分散成单个细胞。
3. 胚胎培养：- 将处理后的胚胎放入装有培养基的培养皿中，放入CO2培养箱中培养。
- 每天观察胚胎的生长情况，记录胚胎的形态变化和细胞分裂情况。
4. 不同培养条件实验：- 将胚胎分别置于不同浓度的胎牛血清（FBS）培养基中培养，观察胚胎的生长情况。
- 将胚胎置于不同温度、pH值、氧气浓度等条件下培养，观察胚胎的生长情况。
5. 结果记录与分析：- 记录不同培养条件下胚胎的形态变化、细胞分裂情况以及生长速度。
- 对实验结果进行统计分析，探讨不同培养条件对胚胎发育的影响。
五、实验结果1. 正常培养条件下：- 胚胎在正常培养条件下能够正常发育，细胞分裂速度较快，形态变化明显。
2. 不同胎牛血清（FBS）浓度条件下：- 随着胎牛血清（FBS）浓度的增加，胚胎的生长速度和细胞分裂速度逐渐加快。
胚胎培养——离体授粉与离体受精
80年代，人工受精的显微操作以及受精作 用的体外模拟的产生。 90年代，用电融合法成功地进行了玉米雌 雄配子体外融合，并将受精产生的“人工 合子”培养成再生植株，这才是严格意义 上的离体受精。
基本操作技术
（一）离体授粉技术
将未授粉的离体胚珠（带胎座或不带 胎座）或子房接种在培养基上，然后在试 管内撒播花粉。花粉发芽后，花粉管长入 胚珠内受精。受精后的胚珠进一步发育成 种子。
当前热点问题
利用离体受精系统研究受精与早期胚胎发 生过程中的基因表达，是本领域研究由细胞 水平进入分子水平的新趋技术（ Microinjection ） 来将外源基因导入卵和合子的实验。
Thank you!
3、授粉
将花粉在无菌条件下授予培养的胚珠、 胎座或雌蕊的柱头上。具体方法如下:
（1）子房试管授粉
1）直接引入法 在无菌条件下，用锋利 刀片将子房壁或顶端切开一个小口，把花 粉悬浮液直接滴入切口后进行培养。 2）注射法 用无菌注射器吸取花粉悬浮 液，从子房基部或上端切口注入子房（基 部切口可用凡士林封口），然后接种于培 养基上。
பைடு நூலகம்
影响因素
1、材料的选择及处理
子房较大胚珠较多，一般应切除柱头和花柱。
2、培养基
一般采用MS、Nitsch或B5培养基。
3、培养条件
研究意义
为受精生物学的重要理论问题的探索与解 决开辟了新的途径；
用于遗传育种中可以克服自交不亲和性， 进行作物改良。离体受精所能克服的是那 些以花粉—柱头或花粉—花柱相互作用为 基础的不亲和障碍，并不是万能的。
（2）胚珠试管授粉
1）哺育法 将胚珠表面蘸满有助于花粉 萌发的培养基后进行接种培养，然后在胚 珠上撒播花粉使之受精。 2）接近法 将花粉预先撒于培养基上培 养使之萌发或不萌发，然后接种胚珠或子 房培养。
第02章-胚胎培养
第二章胚胎培养金晓丽12第一节胚培养第二节胚珠和子房培养第三节胚乳培养第一节胚培养含义：采用人工的方法将胚及具胚的器官（例如子房、胚珠等）分Array离出来，在离体无菌条件下，发育成幼苗的技术。
培养对象：胚胎发生过程中的不同发育时期的胚和具胚的器官。
如：成熟胚、幼胚、胚珠培养、子房培养。
34一、胚培养的意义克服远缘杂交不亲和性和杂种不育性，获得种间或属杂种：种间和属间杂交中，受精作用能正常完成，胚也能进行早期的发育，但由于胚乳发育不良，杂种胚最终将会夭折，因而不能形成有发芽能力的种子。
研究合子胚的胚胎发育：离体培养的胚胎发育主要与三个因素有关：接种时胚体的大小、培养基的成分、接种前在胚珠中停留的长短。
如果接种的是球形胚，就会形成很多不正常胚，因为胚越小，对培养基的成分越敏感；如果接种的是心形或心形期以后的胚，胚的发育与体内发育相似。
克服种子休眠，提早结实：植物休眠影响育种和繁育工作胚培养常常可以克服这一类种子发育上的障碍，促进胚的生长发育。
通过胚的离体培养，可使休眠期缩短。
56获得单倍体植株：栽培大麦与球茎大麦进行杂交，部分染色体被淘汰，剩余为大麦单倍体。
由于只有大麦染色体的单倍体胚生长相当缓慢，且受精后2~5天胚乳逐渐解体，自然条件下难于获得大麦单倍体。
为此，必须把幼胚剥离出来培养。
缩短育种周期，提高育种效率：蔷薇属植物的栽培品种常需1年才能开花。
从离体培养胚获得的幼苗只需2~3个月即可开花，而利用这种花作父本，1年内可产生2个世代，大大地提高育种进程。
7稀有植物的繁殖：果实成熟初期，胚尚未发育成熟，种子不能萌发，利用胚培养可对这些不育种子进行培养。
例如：Makapuno椰子、焦核龙眼。
种子生活力的快速测定：萌发试验测定休眠的种子生活力所需时间很长，必须要预先进行后熟处理，后熟的种子和后熟的种子的胚在离体培养条件下的发芽速度相同。
8诱导胚性愈伤组织：胚是人工诱导胚性愈伤组织的优良外植体。
转基因技术在基础研究和育种中的应用越来越广泛，植物的转化再生体系是基因遗传转化的一个关键技术。
植物的胚胎培养
养。
分为两种类型：授粉胚珠培养
未授粉胚珠培养
（1）胚珠培养的意义:
➢ 防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；也为拯救 心型期胚或心型期以前的胚胎提供了新的途径。
➢ 授粉前胚珠培养，可作为试管受精的基础； ➢ 未授粉胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于
单倍体育种。
（2）胚珠培养方法: A、材料的选择和灭菌： 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚 时期有利于胚的发育。 灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后， 后取出胚珠培养。
越小，糖浓度要求越高，成熟胚，2%；而幼胚，4％甚至 更高浓度的蔗糖。如曼陀罗的前心形期胚培养要求8%的蔗 糖含量，而鱼雷期要降到%～0.5%。
氨基酸：谷氨酰胺是促进离体胚生长最有效的氨基酸； 酪蛋白水解物（CH），不同物种的离体胚对
CH的浓度要求不同 。 胚乳提取物。一般认为，八分成熟的椰乳对幼胚培养作
成小植株，因此，培养基相对简单，一般只需要大 量元素和糖即可，有些培养为了打破种子休眠也加 入一些植物激素。
水稻成熟胚培养
观赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特性
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特性 （种皮与未完成 后熟的原因）
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
(3) 克服种子休眠
有些植物种子休眠期很长，如鸢尾（lris），一
般种子成熟后要休眠2～3年才能萌发，在培养基 上几天内种子就能萌发。 植物种子休眠的原因可能来自胚乳，因为离体胚 如果带着胚乳培养，胚的生长就受到抑制。具有 休眠特性的种子，其胚离体培养时，在培养基中 加入1～2 mg/L的赤霉素，对打破种子休眠有显 著作用。
植物的胚胎培养
表8-1 荠菜胚胎不同发育时期对营养旳需求（引自Torrey，19
胚发育时期 胚长（μm）营养要求
球形胚早期 22-60 球形胚晚期 61-80
心形胚期 81-450
不不小于40 μm旳胚对营养旳需求不详
基本培养基（大量元素①+微量元素②+维生 素③+2%蔗糖）+IAA（0.1 mg/L）+KT （0.001 mg/L）+硫胺腺嘌呤（0.001 mg/L）
植物旳胚胎培养是指对植物旳胚、子房、胚珠和胚 乳等胚胎组织进行离体培养，使其发育成完整植株 或者离体研究植物胚胎发生机理旳生物技术。
胚乳
胚 子房 胚珠
8.1 离体胚培养 8.2 植物胚珠和子房培养 8.3 离体授粉、受精与合子培养 8.4 胚乳培养
8. 1.1 离体胚培养旳概念 离体胚培养（embryo culture）指从植物种子中分
离体胚培养还可用于许多重大理论问题旳研 究，如胚胎发育过程，影响胚发育旳多种原因， 胚乳作用以及与胚发育有关旳代谢和生理变化等。
(7) 脱分化与再分化培养
以幼胚或成熟胚为外植体诱导愈伤组织，建 立胚性无性系，不但能够应用于研究体细胞胚胎 发生、分离原生质体，还可应用于植物体细胞遗 传饰变和转基因技术旳研究等。
水稻成熟胚培养
欣赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特征
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特征 （种皮与未完毕 后熟旳原因）
牡丹成熟胚旳离体培养与迅速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
8.1.3 幼胚培养（immature embryo culture） 是指对发育早期胚或未成熟胚旳培养，即供给一
胚胎工程的操作方法
胚胎工程的操作方法胚胎工程是一种生物技术，旨在使用体外受精和体外培养的方法，以及分子生物学和遗传学技术，对胚胎进行操作和研究。
胚胎工程包括胚胎克隆、胚胎干细胞提取、基因编辑等技术，并用于生物学研究、治疗疾病等领域。
胚胎工程涉及的主要操作方法如下：一、体外受精：体外受精是胚胎工程的起点，即将精子和卵子在体外结合形成受精卵。
首先，从男性提取精子样本，然后从女性提取卵子样本。
通过实验室条件下的体外受精，将精子与卵子结合，形成受精卵。
二、胚胎培养：受精卵形成后，需要进行胚胎培养。
最常用的培养方式是将受精卵置于试管中，提供适宜的培养基，维持胚胎所需的生长条件，如温度、湿度、氧气浓度等。
通过培养，可以让胚胎继续发育，达到特定的发育阶段。
三、胚胎克隆：胚胎克隆是指将一个成熟的细胞核（核提取自器官细胞等成熟细胞）植入去核卵细胞中，形成新的胚胎。
胚胎克隆可以用于研究动物的遗传疾病、生物学发育等方面。
典型的胚胎克隆方法是核移植，即将所需细胞核提取出来，然后植入去核卵细胞内。
四、胚胎干细胞提取：胚胎在早期发育中的细胞称为胚胎干细胞（ES细胞）。
这些细胞具有多能性，可以发育成人体的各种组织和器官。
为了提取胚胎干细胞，通常从培育到一定的时点后，将胚胎的内细胞团或一部分细胞移植至体外环境，培养并分离出胚胎干细胞。
五、基因编辑：胚胎工程还包括基因编辑技术，用于改变胚胎的遗传信息。
例如，通过CRISPR-Cas9技术，可以精确地编辑胚胎的基因，纠正一些遗传缺陷或特定基因突变。
总的来说，胚胎工程涉及到体外受精、胚胎培养、胚胎克隆、胚胎干细胞提取和基因编辑等操作方法。
这些操作方法为研究生物学的发展、治疗疾病等提供了技术手段，但同样也存在着伦理和道德等方面的争议和限制。
因此，在进行胚胎工程研究时，需要遵循相关的伦理规范与法律法规，确保其在合理和可控的范围内进行。
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第4章
胚胎培养
本章教学目的与要求
(1)掌握胚培养和胚乳培养的操作步骤； (2)了解胚珠培养和子房培养的操作步骤。
第4章
胚胎培养
胚胎培养的意义：
①克服远缘杂种的不育性， ②使胚胎发育不完全的植株获得后代， (兰天麻) ③缩短育种年限，提高育种效率。
第4章
胚胎培养
胚的发育
种子的结构
第4章
胚胎培养
取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 幼胚的发育方式： 1）胚性发育； 2）早熟发育； 3）产生愈伤组织
第一节、胚培养
2、成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例
1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在无菌湿润的含滤纸的 培养皿中培育6hr。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成 幼苗。 玉米成熟胚的培养
（一）子房培养的培养过程
1、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房 或幼花，消毒 2、子房培养：固体或液体培养均可
（二）培养基:N6,MS
第三节 胚珠和子房培养
（三）培养子房的发育：
性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细 胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株；
4）培养方式： 幼胚培养适于液体培养， 成熟胚适于固体培养
第一节、胚培养
四、胚培养的应用
1)在远缘杂交育种中:克服杂种胚不能正常发育 2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率 3)缩短育种周期 4)测定休眠种子的萌发率 5)理论研究中的应用
第4章
胚胎培养
第二节、胚乳培养
胚乳培养是指将胚乳从母体上 分离出来，在无菌的环境条件 下培养，使其生长发育形成幼 苗的过程。
A 受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织 B 未受精胚珠：形成单倍体植株。
第三节 胚珠和子房培养
雌蕊与子房的类型
第三节 胚珠和子房培养
二、子房培养
定义：子房培养是指将子房从 母体上分离出来，在无菌的 人工环境条件下培养，使其 生长发育形成幼苗的过程。 授粉子房的培养
类型
未授粉子房的培养
第三节 胚珠和子房培养
第二节、胚乳培养
胚乳植株染色体数目的检查
取根尖、幼叶或愈伤组织 0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在25℃浸泡4-8hr 流水冲洗5-10min 卡诺氏液或FAA液固定 1mol/L盐酸，60 ℃水浴8-10min 染色、压片、镜检、计数
第二节、胚乳培养
二、培养基与培养条件
可用MS、White等，加入2，4-D或NAA0.5～2.0mg/L， BA 0.1～1.0mg／L。 在25～27℃和黑暗条件或散射光下培养，约6～l0d胚 乳开始膨大，再培养形成愈伤组织．这时应转到分化培 养基上培养，分化培养基可加入0.5～3.0mg／L的BA 及少量的NAA。待愈伤组织长出芽后，切下不定芽， 插人生根培养基中，光下培养10～15d，切口处可长出 白色的不定根。
第一节、胚培养
三、培养基与培养条件
1、培养基
常用的培养基有Tukey，MS，B5，Nitsch培养基，其中前 者适于成熟胚培养，其他适于未成熟胚和幼胚培养
2、培养条件： 1）糖类：幼胚需求较多 2）附加成分：椰乳 3）光照：光照可以促进某些植物胚的转绿，利于胚芽生长，而
黑暗则利于胚根生长。因此以光暗交替培养较为有利。
第二节、胚乳培养
三、胚乳再生植株的染色体倍数
稳定型：三倍体 畸变型：除少数是三倍体，多数是由多种倍性 细胞组成的嵌合体
第二节、胚乳培养
四、胚乳培养的应用
1、胚乳培养可得到三倍体植株，产生无籽果 实。或加倍形成六倍体植株进行育种。 2、胚乳培养可得到倍性不同的愈伤组织，可 分离和筛选各种类型的非整倍体植株。
第4章
胚胎培养
2、成熟胚培养
成熟胚一般指子叶期后至发育完全的胚,培养较易成功 将成熟或未成熟种子用70％酒精进行几秒钟的表面消 毒，再用无菌水冲洗3-4次，然后在无菌条件下进行 解剖，取出胚并接种在适当的培养基上培养。
第一节、胚培养
二、培养过程：
1、幼胚培养过程：
第一节、胚培养
胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠 中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步 生长发育，以至形成幼苗的过程。 一、培养类型 1、幼胚培养 2、成熟胚培养
第4章
胚胎培养
1、幼胚培养
幼胚是指子叶期以前的幼小胚 远缘杂交育种 现在可使心形期胚或更早期的长度仅0.1～0.2mm的 胚生长发育成植株 由于胚越小就越难培养。所以，尽可能采用较大的胚 进行胚养 现在幼胚培养成功的有大麦、荠莱、甘蔗、甜菜、胡 萝卜等。
植物组织培养
第4章 胚胎培养
大 家 好 ！
第4章
胚胎ห้องสมุดไป่ตู้养
第4章 胚胎培养
胚胎培养是指将植物的胚胎与母体分离，培 养在人工的培养基上形成幼苗的过程，包括 幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培 养以及子房培养。 胚培养 本章内容
胚乳培养
胚珠和子房培养
第4章
胚胎培养
1904年的Haning最早成功地培养了萝卜和辣 椒的胚，并萌发形成小苗 30年代成功地把兰科植物的胚培养成小植株。 40年代在苹果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、 马铃薯、甘蓝与大白菜的种间杂种的胚胎培养、 胚乳培养及子房与胚珠培养均取得了不同程度 的进展。
第4章
胚胎培养
第三节 胚珠和子房培养
一、胚珠培养
定义：是指将胚珠从母体上 分离出来，在无菌的人工环 境条件下培养，使其生长发 育形成幼苗的过程。
倒生胚珠
第三节 胚珠和子房培养
胚珠培养类型：
1、受精胚珠的培养
2、未受精胚珠的培养
示胚珠的位置
第三节 胚珠和子房培养
（一）、胚珠培养的基本过程：
（二）、培养基：White,Nitsch,MS （三）、胚珠的发育：
第二节、胚乳培养
一、胚乳培养过程
胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳 培养:White或MS诱导培养基---25-27℃--暗或弱 光 发育:诱导形成愈伤组织----再分化形成胚状体或 不定芽---生根培养----植株。
第二节、胚乳培养
胚乳培养过程
胚乳 愈伤组织 形态发生 胚状体发育成苗 不定芽苗