环氧乙烷灭菌生物指示剂的选择

合集下载

环氧乙烷灭菌生物指示剂的规格文件

环氧乙烷灭菌生物指示剂的规格文件导言环氧乙烷灭菌生物指示剂是一种用于验证环氧乙烷灭菌过程中灭菌效果的指示剂。

本文将围绕该产品的规格文件进行介绍，包括产品的名称、型号、规格、性能要求、使用方法和注意事项等内容。

一、产品的名称和型号环氧乙烷灭菌生物指示剂的产品名称为“环氧乙烷灭菌生物指示剂”，型号为“EBI-01”。

二、规格1. 外观：本产品为圆形片状，直径为20mm。

2. 包装：每瓶包装100片，每片单独包装。

3. 材质：本产品采用高温、高压下耐高温材质制成。

4. 贮存条件：应存放在阴凉、干燥的环境中，避免日晒和潮湿。

三、性能要求1. 灭菌效果指示：环氧乙烷灭菌生物指示剂应能够准确反映环氧乙烷灭菌的效果。

2. 生物指示剂存活率：环氧乙烷灭菌生物指示剂在灭菌过程中，存活率应低于1/1000。

3. 灭菌时间：环氧乙烷灭菌生物指示剂应能在规定的灭菌时间内达到灭菌效果。

四、使用方法1. 取出一片环氧乙烷灭菌生物指示剂，撕开包装。

2. 将指示剂放置在灭菌袋或容器中，与待灭菌物品一同进行灭菌。

3. 灭菌结束后，将指示剂拿出并观察其颜色变化。

4. 根据指示剂的颜色变化判断灭菌效果，如果指示剂变为黄色，表示灭菌效果良好；如果指示剂仍为蓝色，表示灭菌效果不理想。

五、注意事项1. 环氧乙烷灭菌生物指示剂仅供一次性使用，不得重复使用。

2. 使用过程中应避免与水或其他液体接触，以免影响灭菌效果。

3. 本产品应存放在干燥、阴凉的环境中，避免阳光直射。

4. 使用本产品时，应按照灭菌设备的操作规程进行操作，确保灭菌效果。

结语环氧乙烷灭菌生物指示剂是一种用于验证环氧乙烷灭菌效果的重要工具。

本文详细介绍了该产品的规格文件，包括名称、型号、规格、性能要求、使用方法和注意事项等内容。

希望通过本文的介绍，能够使用户更好地了解和正确使用环氧乙烷灭菌生物指示剂，确保灭菌效果的准确性和可靠性。

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。

生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281-的要求。

（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。

载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂、过滤等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。

载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。

（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。

若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数、D值和Z值。

（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。

系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。

自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。

自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。

该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。

生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。

除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。

一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。

不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物应具备以下特征：（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。

（2）菌种应无致病性。

EP 灭菌生物指示剂

5.1.2 Biological indicators of sterilization 灭菌生物指示剂01/2001: 50102 EP7.0 page 504‐505 翻译日期：2012年12月生物指示剂采取选定的微生物用标准方法制备而成，用于评估灭菌程序的有效性。

生物指示剂通常用适当的惰性载体放置一定数量的细菌孢子。

载体经过良好的覆盖能确保不受损坏或污染，而同时能使灭菌介质进入与微生物接触。

孢子混悬液可以用密封安瓿瓶放置。

生物指示剂经过适当的方法制备后，可在定义条件下储存，并给予有效期。

可采用与生物指示剂制备用细菌同物种（species）的细菌，直接接种到待灭菌的液体产品或与待灭菌产品类似的液体产品。

这种情况下，要证明液体产品对所使用的孢子，尤其是其生长，没有抑制作用，生物指示剂的性质确认通过用于对照微生物的细菌种属名称、原始收集中菌株的数量，每个载体中活孢子的数量及D值。

D值指需要将活性微生物降低到原始值1/10的灭菌（时间或吸收剂量）参数值（The D‐value is the value of a parameter of sterilization (duration or absorbed dose) required to deduce the number of viable organism to 10 percent of the original number.）D 值只有在定义的实验条件下才有意义。

只能采用明确说明的微生物。

可能会使用在同一载体上有多种细菌的生物指示剂。

需提供培养基和培养条件的信息。

建议指示剂放置在假定位置，或者如果可能，放置在经过物理测量至少能接触到灭菌介质的位置。

暴露在灭菌介质后，要采用无菌技术将孢子载体转移至培养基中，以保证不会在检查过程中造成污染。

也可以采用包装中直接放置培养基安瓿瓶以保护载体的生物指示剂。

指示剂微生物选择如下：a）检测菌株的耐受性适合某种灭菌方法，且与潜在污染产品的微生物耐受性有良好的可比性；b）检测菌株没有致病源；c）测试菌株易于培养。

环氧乙烷灭菌生物指示剂的选择

天。
检验设备无菌准备成本 100
0
菌片需要无菌设备做检验
检验耗材成本（培养基 100
0
等）
菌片需要耗用培养基等耗材
检验设备成本
200
100
自含式指示剂仅需要培
养箱，菌片需要的设备要
多得多
检验人员的成本
300
100
自含式指示剂一般人员
就可以操作，菌片需要专
门的技术人员
总的使用成本
的损失了。现在国家对于医疗伤害是越来越重视了，而且“惩罚性赔偿”原则的树立，使到医疗器材生产厂家的风险更加大了。所以，保证最后的灭菌成功，是非常重要的。终上所述，在环氧乙烷
灭菌工艺中，全部使用自含式生物指示剂是一个降低系统风险的最理想的选择。
环氧乙烷灭菌生物指示剂的选择
环氧乙烷灭菌指示剂的种类
一般分为化学指示剂和生物指示剂两大类。化学指示剂一般是胶带，不干胶或者是直接印刷在包装上面的有颜色的色块。主要的原理就是通过油墨跟环氧乙烷其他产生化学反应而变色来指示是否经过灭菌工艺的处理。生物指示剂的原理是通过检测生物指示剂中的细菌芽孢是否存活而判断产品是否达到完全灭菌的效果。
条
格
最短 2.5 分钟
2.5~4 分钟
自含式的范围更窄更严格
设备要无菌准备
无需准备
自含式的使用方便
操作比较麻烦，要进行操作简单
无菌转移
自含式的使用方便
大。暴露在外界，容易小。自含式是一个完整的密闭的系统，受到外自含式的可靠性高。
收到环境的影响。界的影响很小
7天
2天
自含式的培养时间短
结论：使用自含式指示剂可以有效的减低灭菌工艺中的灭菌失败带来的风险。

环氧乙烷

环氧乙烷(ethylene oxide,EO)在常温常压下为无色气体,4℃时冷凝为液体,沸点为10.4℃,具有高度的化学活性,易燃易爆。

环氧乙烷具有广谱高效杀菌作用,属最有效的化学冷灭菌剂之一。

环氧乙烷常被用于工业灭菌与消毒,近年来在医院怕热怕湿医疗器械灭菌中也得到广泛应用。

但环氧乙烷属于有毒气体,对许多物品具有高度的吸附性,灭菌物品必须等待残留气体完全挥发才可给病人使用。

因此,医护人员应充分掌握环氧乙烷的性质及灭菌原理和严格职业行为，这对有效监测和控制环氧乙烷灭菌及其灭菌后的物品安全试用具有重要意义。

1 环氧乙烷灭菌的应用1.1 EO的灭菌原理 EO可以杀灭各种微生物,包括细菌繁殖体、芽胞、病毒和真菌孢子,是一种广谱灭菌剂。

一般认为是由于它能与微生物的蛋白质、DNA和RNA发生非特异性烷基化作用(non2specificalkylation)。

水溶液中的EO能与蛋白质上的游离羧基(COOH基(2NH2),硫氢基(2SH)和羟基(2OH)发生烷基化作用,取代不稳定的氢原子而形成带有羟乙根(CH2CH2OH)的化合物,蛋白质上的基团被烷基化,使蛋白质失去了在基本代谢中需要的反应基,阻碍了细菌蛋白质正常的化学反应和新陈代谢,从而导致微生物死亡。

到目前为止,所有资料显示EO 杀菌作用是不可逆的,也就是说EO是杀菌剂(sterileagent)而不是消毒剂(disinfectant)。

而且根据各种临床、科研结果显示EO是所有化学消毒剂或灭菌剂中灭菌效果最好的一种化学灭菌剂。

环氧乙烷能抑制一些微生物酶的活性,包括磷酸致活酶、肽酶、胆碱化酶和胆碱脂酶。

环氧乙烷也和DNA、RNA发生烷基化作用而导致微生物的灭活。

1.2 EO灭菌的优缺点及临床适用范围1.2.1 EO灭菌的优点EO ①可用于不耐高温、不耐湿物品的灭菌。

②环氧乙烷被认为是一种灭菌效果最好的化学灭菌剂,可杀灭所有微生物包括细菌芽胞。

③穿透性强,可用以各种难通透部位的灭菌:如有些较细、较长的导管用其他低温灭菌方法很难达到灭菌效果,而只能用EO或辐照。

EO灭菌验证方案(注射器)

无菌医疗器械产品环氧乙烷灭菌工艺验证方案1 概述验证名称：无菌医疗器械产品环氧乙烷灭菌工艺验证。

容积： 6m3验证目的：通过对灭菌过程确认，确保灭菌系统和灭菌过程能持续、稳定和有效的运行，保证灭菌产品达到10-6的无菌保证水平，并且灭菌后产品和包装的性能符合预期要求。

验证时间: 2012 年 2 月至 2012 年 3 月验证项目：安装验证（IQ）、运行确认（OQ）和性能确认（PQ）。

适用产品：一次性使用吸氧管参加验证部门：研发部、质管部、生产部、设备部主要验证依据：ISO11135-1:2007 医疗保健产品灭菌环氧乙烷第1部分：医疗器械灭菌过程的开发、确认和常规控制的要求EN 1422：1997 环氧乙烷灭菌器（itd YY0503-2005）EN ISO 11737-1:2006 医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定（AC:2009）EN ISO 11607-1:2009 最终灭菌医疗器械的包装第1部分：材料、无菌屏障系统和包装系统要求EN ISO 11138-2:2009 医疗保健产品灭菌生物指示物第2部分：环氧乙烷灭菌用生物指示物EN ISO 10993-7:2008 医疗器械生物学评价第7部分环氧乙烷灭菌残留量EN ISO 11737-2:2009 医疗器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验2 验证小组的构成及人员职责根据ISO11135-1:2007标准规定，确定了从事环氧乙烷灭菌验证过程中的方案制定及实施操作、微生物检验、设备运行及计量管理工作的人员，再根据设备维护操作、计量器具检定、物理性能及微生物性能测定作了分工，见下表：3 参加验证部分人员资质确认灭菌操作人员须经专业培训合格上岗，灭菌效果验证（检验）人员应经过培训合格，建立“验证人员资质确认表”4 相关要素的确认4.1 产品定义a)适用产品名称：一次性使用吸氧管b) 主要材料： PP、PE、橡胶等。

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。

（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。

载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。

（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。

若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数和、D值和Z 。

（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。

系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。

自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。

自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。

该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。

生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。

除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。

一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。

不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。

（2）菌种应无致病性。

（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。

9207灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

9207灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。

生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。

（1）由微生物芽孢和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。

载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。

载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、及运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。

（2）芽孢悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽孢混悬于液体中。

若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽孢数和D值。

（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统，其耐受性是针对整个系统而言。

系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。

自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。

自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。

该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。

生物指示剂用微生物的基本要求除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。

一般认为含芽孢的细菌更适合用于制备生物指示剂。

不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物应具备以下特性：（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。

（2）菌种应无致病性。

（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。

冻干机灭菌程序生物指示剂挑战试验

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
实验人：实验日期：
复核人：报告日期：
验证结论及分析
三、实验内容：
1生物指示剂布置情况
验证记录
2灭菌过程的温度、湿度及压力控制记录
参数
日期
温度（℃）
湿度（%）
压力（Pa）
操作人：
验证记录
3换气次数的控制记录
参数
次数
开始时间
初始压力(Pa)
最终压力(Pa)
结束时间
第一次
第二次
第三次
第四次
操作人：
4检验结果
项目
板层
阳性对照
无菌检查
微生物限度检查
验证记录
1环氧乙烷混合气体灭菌的控制条件
温度：（55±5）℃
相对湿度：（60±10）%
10%环氧乙烷混合气：2kg
灭菌时间： 24小时
2生物指示剂
枯草黑色变种芽孢杆菌（ATCC9372）孢子量5×105-6/片
上海鸿雍生物科技有限公司生产
EO混合气体(二氧化碳90% 气体，环氧乙烷10%气体)共计5.2Kg对冷凝器冻干箱进行灭菌，灭菌时间24小时。

生物指示物选择、应用与缩短培养时间的验证

环氧乙烷灭菌生物指示物选择、应用与缩短培养时间（RIT）的验证生物指示物是指一类特定的微生物和载体结合，经过特定方法制备的生物制品，这些特定微生物比普通微生物对相应的灭菌模式具有更强的耐受性，用于指示微生物的死亡情况，以反映灭菌效果。

由于生物指示物可以真实可靠的反映灭菌过程中有关时间、温度和湿度等多个因素的关系，因此广泛应用于环氧乙烷等灭菌工艺的验证与日常监控。

验证时应确认所选择的生物指示物的抗力的适宜性，否则将影响灭菌验证的效果与可靠性。

生物指示物的原理是通过检测其中的细菌芽孢是否存活来判断产品是否达到完全灭菌的效果。

产品上的微生物无法经过肉眼观察，而且无法通过灭菌后的抽样检测来确定该批次产品是否合格，是一个特殊过程。

我们只能通过生物指示物中的细菌芽孢模拟产品上带菌的最坏的情况。

生物指示物中的细菌芽孢也是微生物的一种，而且所有对灭菌效果有影响的因素都对其有作用。

同时，由于采用环氧乙烷等最终灭菌的产品，其生产过程中初始污染菌的数量是受控的，其数量远远低于生物指示物所含的菌体数量。

BI中选择的菌株比生产过程中自然环境下所发现的菌株是更难杀灭的菌株，具有更高的抗力。

如果生物指示物中的细菌芽孢全部被杀死，就等同于产品中的微生物全部被杀死。

故此，在环氧乙烷灭菌工艺里面，要确认灭菌是否合格，必须使用生物指示物，没有可以替代的手段或方法。

但是应当注意，生物指示物并不是用来指示与证实灭菌后的物品确实无菌。

也就是说即使生物指示物培养无菌生长，并不能证实或保证灭菌物品100%无菌。

生物指示物只是用来测试某一个已确认的灭菌过程和采用的的灭菌设备的有效性，这种测试的实施原理是：按照无菌保证水平对微生物致死性进行评估，以确定灭菌物品中微生物存活的概率足够低。

1生物指示物（Biological Indicators,BI)生物指示物是一类特定微生物经过确定制备方法制造的生物试剂。

生物指示物对于某种灭菌工艺具有特定的耐受性（USPS1035《Biological indicators for Sterilization》）。

环氧乙烷灭菌原理及灭菌车间管理知识简介

环氧乙烷灭菌原理及灭菌车间管理知识简介环氧乙烷（EO）是一种光谱灭菌剂，可在常温下杀灭各种微生物，包括芽孢、结核杆菌、细菌、病毒、真菌等。

EO可以与蛋白质上的羧基（-COOH）、氨基（-NH2）、硫氢基（-SH）和羟基（-OH）发生烷基化作用，造成蛋白质失去反应基因，阻碍蛋白质的正常化学反应和新陈代谢，从而导致微生物死亡。

EO也可以抑制生物酶活性。

EO穿透性很强，可以穿透微孔，达到产品内部相应的深度，从而大大提高灭菌效果，目前医疗器械广泛采用EO进行灭菌。

环氧乙烷灭菌装置是一次性使用无菌医疗器械生产企业的关键设备，安装操作、使用管理有其特殊要求，是安全防范监管重点。

环氧乙烷是易燃易爆的有毒气体，分子式为C2H4O，具有芳香的醚味，在4°C时候相对密度为0.884，沸点为10.8°C,其密度为1.52g/cm3，在室温条件下，很容易挥发成气体，当浓度过高时可引起爆炸。

今年扬州市客乐医用器械厂环氧乙烷灭菌车间发生爆炸，造成1人死亡、1人重伤，车间严重受损。

在此，特别提醒各使用单位要高度注意环氧乙烷的安装、使用操作、贮存的安全。

环氧乙烷灭菌装置应符合IEC1010－1和1010－2及相应的标准，灭菌车间的管理应执行一次性使用无菌医疗器械产品（注、输器具）生产实施细则要求：一是制定灭菌工艺守则和环氧乙烷使用存放管理制度，专人负责，并持证上岗，操作人员应严格按照规定程序操作贮存；二是环氧乙烷的储存罐应保存在阴凉、通风、防晒处，高温季节可采用水淋降温，钢瓶充装量不得大于0、79kg/L，瓶口必须关紧，防止渗漏；三是贮存场所应有易燃、易爆、有毒警示标志，并配备消防器材；四是灭菌车间周围30-50米范围内不得有明火作业、变电设备、转动马达及其它可发生火花的设备与操作；五是消毒过程中，严禁穿有钉的鞋进入现场，严禁在操作现场抽烟，以防引起爆炸事故；六是消毒结束打开灭菌器时，必须先打开门窗及通风设备，室内环氧乙烷气味很浓时，不得开启电灯照明及手电照明（防爆灯除外）；七是对灭菌排放的环氧乙烷残留气应进行妥善处理并达到相应的环保要求；八是应具有与灭菌能力相适应的解析区域并建立解析管理制度灭菌验证,即是通过物理和生物实验的方法,证明所设定的灭菌工艺过程及参数,能够保证产品灭菌工艺要求的达到.ISO11135规定,验证必须至少每年进行一次.而且,一旦发生可能影响最终灭菌效果的改变——如更换包装,改变装载顺序等——发生时,必须进行验证.验证的过程通常牵涉企业众多部门,步骤繁多,耗时较长.简要的验证流程如下:验证前准备需要制定验证方案,并由经过培训的人员来实施整个验证.对于产品灭菌的适用性,包装,灭菌剂,加湿蒸汽,生物指示剂等的适用性均需进行验证并形成文件.安装验证：需要验证的内容包括设备的相关资料和附件是否齐全,安装场所是否符合安全要求,对主要计量器具进行校验等.计量器具的校验必须首先进行.运行验证(试运行)：设备安装后,应按操作说明书启动设备,确定设备是否能在预期的设计范围内准确的运行,并能达到各项技术指标和使用要求.对于预处理区,需验证其空载状态下的温湿度均匀性;对于灭菌柜室,需验证其空载状态下的温度均匀性.物理性能验证：在满载状态下,验证设备达到预期工艺参数的能力.对于预处理区,需验证其满载状态下的温湿度均匀性;对于灭菌柜室,需验证其满载状态下的温度均匀性.微生物性能验证：可以认为,之前的验证目的在于确保设备主体及其他辅助用品能够满足工艺要求.而微生物性能验证的目的在于,在这样的条件下,寻找并证明能够满足灭菌工艺要求——10-6无菌保证水平——的工艺参数.在选定的温度,相对湿度和环氧乙烷浓度的条件下,能将生物指示剂的存活概率降低到10-6或以下的气体作用时间,就是所需寻找的工艺参数.工业上,通常用半周期法来确定所需的灭菌时间.通过将灭菌时间依次减半,直至找到最短灭菌时间——即刚好能将生物指示剂杀灭的时间.用该时间重复两次灭菌过程,需全部阴性.由于根据《ISO11138 医疗保健产品灭菌生物指示物》的规定,用于环氧乙烷灭菌验证和监测用的生物指示剂的最小菌量需达到1.0×106,该最短灭菌时间的两倍,即为能满足灭菌要求的气体作用时间,如图2所示.需要提醒的是,半周期法虽然是最简便的方法,却并不是最可靠的.由于严格来讲,对于生物指示剂的杀灭曲线是未知的,半周期法的结果只是建立在推测的基础上.所以,有条件的企业,应该选用更严格,更可靠的存活曲线法或部分阴性法. 图2 半周期法验证时生物指示剂需摆放在整个负载最难灭菌的部位,并应达到一定的数量以全面反应灭菌柜室内各位置的灭菌效果.对于生物指示剂的摆放数量,ISO11135有如下的推荐:柜室体积达到5m3时,至少20支柜室体积5 m3-10m3时,每增加1m3,增加2支柜室体积>10m3时,每增加2m3,增加2支常规监测用于对验证后的日常灭菌过程进行监测,控制产品放行.建议使用的生物指示剂的数量通常为验证时的一半. 当前存在的问题目前在国内,由于经费的限制及认识的不足,对于工业上灭菌流程的规范,尚存在以下一些问题.验证的不科学"一招鲜"的验证方法,在国内还十分常见.所谓"一招鲜",就是只对一种产品,一台设备,一个装载方式进行验证,然后将这套灭菌工艺用于所有的产品,设备和装载方式.这主要是由于对验证的认识不足导致的.验证得到的灭菌参数只能用于该次验证的灭菌工艺,因为不同的产品,设备,装载等因素,都会对灭菌效果产生影响.对于不同的灭菌过程,没有任何一套灭菌参数是可以确保灭菌效果的.必须对任何不同的灭菌过程分别的进行验证,确定有科学依据的,可确保灭菌效果的灭菌参数.另外,有很多企业未严格遵守ISO标准规定的验证流程,文件系统的不规范,对于设备的验证不充分等问题仍然存在.常规监测的不重视对于经过验证的灭菌过程,很多企业在日常的灭菌流程上,选择了参数放行,化学监测或无菌检验的方法来放行产品.以上这些控制方式,对于工业环氧乙烷灭菌来说,都是不充分的.影响环氧乙烷灭菌效果的因素很多且相互关联,控制起来十分困难.例如,湿度就是一个多变因素.即使经过了有效的预处理,由于环境湿度的不稳定,抽真空湿度损失等原因,灭菌作用过程中分散到每个包裹的湿度仍是不可预知和不可控制的.如使用混合环氧乙烷气体,由于气体的均匀性的不稳定,实际作用在产品上的环氧乙烷浓度也是很难精确计算和控制的.另外,还有很多未知因素影响着环氧乙烷灭菌的有效性.因此,即使通过验证确定了参数,仍旧要对日常的灭菌进行常规监测,确认灭菌实际有效后才能放行.化学指示剂是通过灭菌过程对于化学物品的作用导致的化学变化,来模拟生物指示剂的灭活.然而,化学指示剂并不能代替生物指示剂的作用,最终能确定整个负载灭菌效果只有生物监测.生物指示剂的选择和用法不当用作灭菌验证和常规监测的生物指示剂,需谨慎的选择.性能符合ISO11138的规定并获得上市许可,是选择生物指示剂的基本条件.需要注意的是,如无菌产品将最终出口,所选择的生物指示剂也需满足该国的要求并获得认可.对于生物指示剂的使用,目前也存在着用量不足和用法不当等问题.在灭菌柜室中使用足够多的生物指示剂进行全面的监测是必须的.然而,出于成本的考虑,一些企业未使用足够多的生物指示剂进行验证和常规监测.其实,这样所得的结果是不够可靠的.因为无论是在验证还是常规监测时,只有全面监控整个灭菌柜室的情况,才能使所得灭菌参数真正能够保证灭菌的有效性.另有一些企业,在验证和常规监测时使用不同的生物指示剂或混用不同品牌的生物指示剂.由于不同的生物指示剂的菌量和抗力有所不同,这对于验证和常规监测的一致性是有影响的.将生物指示剂放在最难灭菌部位,也是至关重要的.PCD为灭菌过程对生物指示剂的杀灭提供最大挑战,是保证生物监测的有效性的重要手段.对PCD的可靠性,亦需进行验证.什么是核辐照技术核辐照(或放射)是γ(伽玛)幅照技术的简称。

环氧乙烷生物指示剂要求

环氧乙烷生物指示剂要求环氧乙烷（Ethylene Oxide，简称EO）是一种无色、易燃、有毒的气体。

它具有较高的化学活性，可以与许多有机物反应。

由于其广泛的应用领域，环氧乙烷的生物指示剂也备受关注。

生物指示剂是一种监测和验证灭菌过程的方法，通过使用含有生物指示剂的培养基，可以评估灭菌过程中微生物的死亡率。

环氧乙烷是一种常用的灭菌剂，因此对于使用环氧乙烷进行灭菌的场所，生物指示剂是必不可少的。

环氧乙烷的生物指示剂主要是指用于监测环氧乙烷灭菌过程中的细菌灭活情况的试剂。

常见的环氧乙烷生物指示剂包括孢子菌和细菌。

其中，芽孢菌是常用的生物指示剂，因为其具有较高的抵抗环氧乙烷灭菌的能力。

环氧乙烷生物指示剂的使用方法相对简单，一般是将生物指示剂置于灭菌器中，与被灭菌物品一同进行灭菌操作。

灭菌结束后，将生物指示剂取出，接种到含有适宜培养条件的培养基上，进行培养。

如果培养基上没有细菌生长，则说明环氧乙烷灭菌过程有效。

环氧乙烷生物指示剂的使用有一定的局限性。

首先，生物指示剂只能提供灭菌过程的结果，无法提供灭菌过程中的细节信息。

其次，生物指示剂的使用需要一定的操作技巧和培养基的准备，对于没有相关经验的人员来说可能会存在一定的难度。

尽管环氧乙烷生物指示剂具有一定的局限性，但其仍然是判断环氧乙烷灭菌效果的重要方法之一。

在医疗器械、制药、食品加工等领域，环氧乙烷灭菌被广泛应用，而生物指示剂则为这些领域提供了一种可靠的灭菌效果验证方法。

环氧乙烷生物指示剂是一种用于验证环氧乙烷灭菌过程的重要试剂。

通过监测生物指示剂的生长情况，可以评估环氧乙烷灭菌的有效性。

尽管使用生物指示剂存在一定的局限性，但其仍然是判断环氧乙烷灭菌效果的重要方法之一。

随着技术的进步，相信生物指示剂在环氧乙烷灭菌领域的应用将会得到进一步的发展和完善。

环氧乙烷灭菌生物指示剂测试方法

环氧乙烷灭菌生物指示剂测试方法环氧乙烷灭菌是一种非常常见的灭菌方法，广泛应用于医疗、制药、食品等领域。

然而，为了确保灭菌效果，常常需要使用生物指示剂进行验证。

本文将介绍环氧乙烷灭菌生物指示剂测试方法。

一、环氧乙烷灭菌原理环氧乙烷灭菌是利用环氧乙烷气体杀灭细菌、病毒等微生物的方法。

环氧乙烷具有强烈的化学反应性和渗透性，能够在较低的温度下杀灭微生物。

因此，环氧乙烷灭菌广泛应用于医疗、制药、食品等领域。

二、生物指示剂的作用生物指示剂是一种用于验证灭菌效果的工具。

它们包含一定数量的微生物，例如芽孢，这些微生物在灭菌条件下能够存活或死亡。

通过检测这些微生物的存活情况，可以判断灭菌效果是否良好。

三、生物指示剂测试方法1. 选择适当的生物指示剂生物指示剂应根据灭菌条件选择。

对于环氧乙烷灭菌，常用的生物指示剂是芽孢杆菌，例如Bacillus atrophaeus。

2. 准备生物指示剂将生物指示剂接种于培养基中，培养一段时间后取出，制成生物指示剂片。

生物指示剂片应储存于干燥、阴凉处，避免受潮。

3. 灭菌操作将生物指示剂片与需要灭菌的物品一起放入灭菌器中，按照灭菌器的要求进行灭菌。

灭菌时间和温度应根据灭菌器的要求进行调整。

4. 检测生物指示剂灭菌结束后，取出生物指示剂片，将其接种于富含营养物质的培养基中，培养一段时间后观察生长情况。

如果生物指示剂中的微生物死亡率高于一定比例，说明灭菌效果良好。

否则，需要重新进行灭菌操作。

四、注意事项1. 生物指示剂应选择与灭菌条件相适应的菌株。

2. 生物指示剂应在灭菌前进行验证，确保其质量合格。

3. 在进行灭菌操作时，应根据灭菌器的要求进行调整，确保灭菌效果良好。

4. 在进行生物指示剂测试时，应严格遵守操作规程，避免误操作。

5. 生物指示剂测试结果应记录并储存，以备日后参考。

生物指示剂是一种用于验证灭菌效果的工具，对于环氧乙烷灭菌，常用的生物指示剂是芽孢杆菌。

在进行生物指示剂测试时，需要严格遵守操作规程，并根据结果进行灭菌效果的判断。

枯草杆菌生物指示剂使用说明

枯草杆菌芽孢菌片说明及使用方法
1.使用范围：
此生物菌片用于环氧乙烷和干热灭菌的监测。

2.菌片说明：
此生物菌片是由枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢和特种滤纸片组成。

菌片含菌量为5.0×105-5.0×106CFU/片。

生物指示剂的抗力符合国际标准和国家标准的规定：环氧乙烷抗力标准，在环氧乙烷剂量为600±30mg/L作用温度54℃相对湿度60%±10%条件下，存活时间≥7.8min，死亡时间≤58 min，D10值5.8 min.干热抗力标准，160℃干热条件下存活时间≥3.9 min，杀灭时间≤19min ，D10值1.3-1.9 min.
3.使用方法：
用于环氧乙烷和干热灭菌效果监测时，将生物指示菌片置于小纸袋内，然后包入物品包内，置于适当位置，灭菌后，按菌条件取出作微生物检验。

灭菌完毕，在无菌操作下取出小纸袋中的菌片，投入无菌肉汤管内，于37℃恒温培养箱内连续培养7d，逐日观察结果。

按规定，每月至少用微生物指示菌片进行一次灭菌效果监测。

环氧乙烷生物指示剂要求

环氧乙烷生物指示剂要求环氧乙烷是一种常用的有机化合物，化学式为C2H4O。

它是一种无色、易挥发的液体，具有较高的毒性和易燃性。

环氧乙烷在工业上被广泛应用于消毒、灭菌和杀虫等领域。

然而，由于其毒性较大，使用过程中需要谨慎操作，以避免对人体和环境造成危害。

生物指示剂是一种能够反映环境中生物活性的物质。

在环氧乙烷的应用过程中，生物指示剂可以用来监测和验证环氧乙烷灭菌的效果。

常见的生物指示剂有大肠杆菌、芽孢杆菌等。

大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，广泛存在于环境中。

它具有较高的抵抗力，对环境变化的适应能力强。

因此，大肠杆菌被广泛应用于灭菌过程的监测。

在使用环氧乙烷进行消毒或灭菌时，可以将大肠杆菌作为生物指示剂，将其暴露在环氧乙烷中，然后观察大肠杆菌的存活情况，以评估环氧乙烷的灭菌效果。

芽孢杆菌也是一种常用的生物指示剂。

芽孢杆菌是一种耐热菌，具有较高的抗性和存活能力。

在环氧乙烷灭菌过程中，可以使用芽孢杆菌作为生物指示剂，将其暴露在环氧乙烷中，然后观察芽孢杆菌的存活情况，以验证环氧乙烷的杀菌效果。

使用生物指示剂进行环氧乙烷灭菌过程的监测可以提供更加准确的结果。

通过观察生物指示剂的存活情况，可以判断出环氧乙烷对细菌的杀灭效果。

如果生物指示剂存活率较低，说明环氧乙烷的灭菌效果良好；反之，则说明环氧乙烷的灭菌效果不佳，需要进行进一步的处理。

在使用生物指示剂进行环氧乙烷灭菌过程中，需要注意以下几点。

首先，选择适合的生物指示剂。

大肠杆菌和芽孢杆菌是常用的生物指示剂，但在不同的环境和实验条件下可能会有差异，因此需要根据具体情况选择适合的生物指示剂。

其次，正确操作生物指示剂。

在将生物指示剂暴露在环氧乙烷中之前，需要对生物指示剂进行预处理，以确保其在灭菌过程中的准确性和可靠性。

最后，正确解读结果。

观察生物指示剂的存活情况时，需要根据实验条件和标准进行解读，得出准确的结论。

生物指示剂在环氧乙烷灭菌过程中起到了重要的监测和验证作用。

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281的要求。

（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。

载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。

（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。

若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数和、D值和Z 。

（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。

系统中的培养基用于培养灭菌后的生物指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。

自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。

自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。

该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。

生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。

除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。

一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。

不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。

（2）菌种应无致病性。

（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。

3环氧乙烷灭菌确认

围内;
④微生物学性能鉴定必须通过对符合GB18281.1-ISO11138-1的生物指示物灭活，证明该灭菌过程适合产品灭菌。
应把这些指示物放置在整个被灭菌物品中具代表性的部位，所选的周期条件对微生物产生的杀灭力低于通常指定灭菌周期的杀灭力，达到保证无菌。
d)气体灭菌剂已经加人灭菌器室内; e)温度和湿度及其他适用参数处于灭菌过程规范规定的范围内; f)在整个作用时间内，被灭菌物品保持在规定的物理条件下;和 g)在通风过程中，被灭菌物品保持在规定的温度范围内
三、环氧乙烷灭菌方案
湿度的确定
灭菌物品的含水量、微生物本身的干燥程度和灭菌环境的相对湿度，对环氧乙烷的灭菌作用均有显著的影响。在抽真空后、加药前，此时灭菌器内的湿度应控制 30%RH至80%RH范围内。
灭菌时间的确定
采用半周期法进行微生物性能验证，在除时间外所有其他过程参数不变情况下，确定无存活菌的EO 最短有效作用时间（半周期）。灭菌工艺规定的作用时间应至少为半周期的 2倍。
四、环氧乙烷灭菌确认
灭菌确认系统图
四、环氧乙烷灭菌确认
①安装合格性确认：确认灭菌设备及其辅助系统的安装符合设备规格及设计规范
②运行合格性确认：在制定的灭菌条件下对灭菌机进行实际空罐运行，检查其性能参数的符合性。
③物理性能鉴定应证明: a)在规定预处理时间结束时，被灭菌物品处于预处理规范规定的温度和相对湿度范围内; b)加人蒸汽时湿度与压力升高的关系; c)向灭菌器室内加人灭菌剂时，被灭菌物品的温度和湿度在灭菌过程规范规定的范
好。
2、而我们选择不同品牌的生物指示剂的时候，主要选择的依据就是生物指示剂的芽孢数量和 D 值的稳定性。
Step 2

灭菌验证中关于生物指示剂

关于生物指示剂生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。

可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。

用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。

（一）制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性：①菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性；②菌种应无致病性；③菌株应稳定。

存活期长，易于保存；④易于培养。

若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。

（二）生物指示剂的制备生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）等。

菌株应用适宜的培养基进行培养。

培养物应制成悬浮液，其中孢子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。

生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在惰性的载体上，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。

生物指示剂应选用合适的材料包装，并设定有效期。

载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触。

载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。

有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体灭菌物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。

使用替代品时，应用数据证明二者的等效性。

（三）生物指示剂的应用在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但生物指示剂的被杀灭程度，则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。

可使用市售的标准生物指示剂，也可使用由日常生产污染菌监控中分离的最耐受微生物制备的孢子。

在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的耐受性，并测定孢子的纯度和数量。

验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。

环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法

环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法
编制
校对
审核
批准
环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法
一、企业一次性使用注射器、溶药器、输液器、袋式输液器、注射针、
输液针等产品灭菌均采取环氧乙烷灭菌，灭菌效果采取生物指示剂监测。

二、生物指示剂采取枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372）
三、生物指示剂应在无菌室内分装密封后按生物指示剂灭菌布点图位
置，在产品装入灭菌柜时，同时放入灭菌柜和产品同时灭菌。

四、灭菌作用时间完后，取回生物指示剂，在无菌室内用镊子在酒精
灯火焰上烧红后，将菌片接种于一般肉汤管内，于37℃下培养7天，观察统计结果。

如肉汤管清亮，无混浊，表示无菌生长，（-）阴性，为灭菌合格；如肉汤管内混浊，表示有菌生长，（+）阳性，为灭菌不合格。

每次检测时应设置3片未经灭菌对照菌片，同时接种于一般肉汤管内，在同条件下培养，观察结果，（+）阳性，对照成立。

五、营养肉汤培养基处方
牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化钠5g溶于1000ml蒸馏水中，完全溶解后用试管分装（5ml/管）压力蒸汽灭菌后备用。

环氧乙烷灭菌生物指示剂的选择

环氧乙烷灭菌生物指示剂的规格文件

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

EP 灭菌生物指示剂

环氧乙烷灭菌生物指示剂的选择

环氧乙烷

EO灭菌验证方案(注射器)

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

9207灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

冻干机灭菌程序生物指示剂挑战试验

生物指示物选择、应用与缩短培养时间的验证

环氧乙烷灭菌原理及灭菌车间管理知识简介

环氧乙烷 生物指示剂 要求

环氧乙烷灭菌生物指示剂测试方法

枯草杆菌生物指示剂使用说明

环氧乙烷 生物指示剂 要求

灭菌用生物指示剂指导原则(新增)

3环氧乙烷灭菌确认

灭菌验证中关于生物指示剂

环氧乙烷灭菌生物指示剂检测方法

环氧乙烷生物指示剂要求

环氧乙烷生物指示剂要求