内毒素与真菌葡聚糖检测的临床意义精品课件
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(医学课件)G试验及内毒素检测的临床意义PPT演示课件
传统方法 实验方法 性质 结果判读 凝胶法 定性 肉眼观察 MB-80方法 动态比浊法 定量 准确数值，打印检测报告
时间
培养时间长
快速，1-2小时出结果
.
内毒素临床相关疾病
急性 胰腺 炎 局部性细菌感 染:肺炎、胆 囊炎、烧伤合 并感染、穿孔 性腹膜炎、化 脓性胆管炎、 肝脓肿、肾盂 炎等。
内毒素血症 通常导致： 致死性感染 性休克、全 身炎症综合 症， DIC,MODS 等，病死率 极高。
甘露糖蛋白
1,6 葡聚糖 磷脂 双分 子层
1,3葡聚糖 合成酶
几丁质 麦角固醇
.
(1-3)-β-D-葡聚糖特性
1 2 3
对热极为稳定， 高压121℃并不 能使其灭活。 在念珠菌和曲 霉菌细胞壁中 含量较多，对G 试验灵敏。
当真菌进入人体血 液或深部组织后， 经吞噬细胞的吞噬、 消化等处理后，(13)-β-D-葡聚糖可从 胞壁中释放出来， 从而使血液及其它 体液中含量增高。 当真菌在体内含量 减少时，机体免疫 系统可将其清除。
侵袭性真菌感染（IFI） 现状
IFI发生率不断增加
IFI感染病死率很高
IFI诊断困难及漏诊情况严重
.
IFI诊断困难及漏诊情况严重
●尸检研究发现：
北京真菌感染 85例，其中生前明确真菌感染诊断者仅5例，占5.9％，漏诊率 高达94.1％。
要的指标，不仅可用于感染类别的鉴别诊断，
也可用于感染控制和病情转归的判定。内毒素 水平的检测应是一系列连续动态的检测过程。
.
MB-80系统
1.系统组成：
1）仪器 MB-80主机 （MB-80(E)、MB-80(D)、MB-80(S)、MB-80(V)、MB-80(M)） 2）MB-80软件系统
时间
培养时间长
快速，1-2小时出结果
.
内毒素临床相关疾病
急性 胰腺 炎 局部性细菌感 染:肺炎、胆 囊炎、烧伤合 并感染、穿孔 性腹膜炎、化 脓性胆管炎、 肝脓肿、肾盂 炎等。
内毒素血症 通常导致： 致死性感染 性休克、全 身炎症综合 症， DIC,MODS 等，病死率 极高。
甘露糖蛋白
1,6 葡聚糖 磷脂 双分 子层
1,3葡聚糖 合成酶
几丁质 麦角固醇
.
(1-3)-β-D-葡聚糖特性
1 2 3
对热极为稳定， 高压121℃并不 能使其灭活。 在念珠菌和曲 霉菌细胞壁中 含量较多，对G 试验灵敏。
当真菌进入人体血 液或深部组织后， 经吞噬细胞的吞噬、 消化等处理后，(13)-β-D-葡聚糖可从 胞壁中释放出来， 从而使血液及其它 体液中含量增高。 当真菌在体内含量 减少时，机体免疫 系统可将其清除。
侵袭性真菌感染（IFI） 现状
IFI发生率不断增加
IFI感染病死率很高
IFI诊断困难及漏诊情况严重
.
IFI诊断困难及漏诊情况严重
●尸检研究发现：
北京真菌感染 85例，其中生前明确真菌感染诊断者仅5例，占5.9％，漏诊率 高达94.1％。
要的指标，不仅可用于感染类别的鉴别诊断，
也可用于感染控制和病情转归的判定。内毒素 水平的检测应是一系列连续动态的检测过程。
.
MB-80系统
1.系统组成：
1）仪器 MB-80主机 （MB-80(E)、MB-80(D)、MB-80(S)、MB-80(V)、MB-80(M)） 2）MB-80软件系统
葡聚糖的应用PPT课件
➢ 1,3-β-D-葡聚糖与IgG亚型相结合检测可提高阳性预测值，有效指导 早期抗真菌药物治疗 .
N.Kondori, L.Edebo,etc. CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY,Mar.227004
例5
血浆1,3-β-D葡聚糖检测对血液病患者侵袭性 真菌感染的诊断价值
光度（显色） 法
动态显色法 终点显色法
18
G试验的基本原理
1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎的变形细胞裂解物 中的G因子，引起裂解物发生颜色变化，故称G试验。
试验反应机理图：
（1-3）b-D-Glucan TAL-RM(鲎试验非内毒素反应物 )
凝固酶原
活化G因子 凝固酶
G因子
显色寡肽
寡肽+显色基团（黄色） （光度法测定）
➢本研究收集疑为IFI的血液病患者血浆标本162例,其中化疗后患者85例,造血干细 胞移植后患者77例。 ➢按照欧洲癌症研究治疗组织及真菌研究组(EORTC/MSG)诊断标准,所有病例中有 确定诊断2例,临床诊断18例,拟诊75例,排除诊断67例。 ➢结果表明:以20 ng/m l为诊断界值,G试验的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和 阴性预测值(NPV)分别为75%、91%、72.4%和92.4%。
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
10
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养≥2 次分离到同种真菌
N.Kondori, L.Edebo,etc. CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY,Mar.227004
例5
血浆1,3-β-D葡聚糖检测对血液病患者侵袭性 真菌感染的诊断价值
光度（显色） 法
动态显色法 终点显色法
18
G试验的基本原理
1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎的变形细胞裂解物 中的G因子，引起裂解物发生颜色变化，故称G试验。
试验反应机理图：
（1-3）b-D-Glucan TAL-RM(鲎试验非内毒素反应物 )
凝固酶原
活化G因子 凝固酶
G因子
显色寡肽
寡肽+显色基团（黄色） （光度法测定）
➢本研究收集疑为IFI的血液病患者血浆标本162例,其中化疗后患者85例,造血干细 胞移植后患者77例。 ➢按照欧洲癌症研究治疗组织及真菌研究组(EORTC/MSG)诊断标准,所有病例中有 确定诊断2例,临床诊断18例,拟诊75例,排除诊断67例。 ➢结果表明:以20 ng/m l为诊断界值,G试验的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和 阴性预测值(NPV)分别为75%、91%、72.4%和92.4%。
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
10
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养≥2 次分离到同种真菌
内毒素及β-葡聚糖检测精品医学PPT课件
发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤
32
“G”试验
❖ 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解 物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
33
G试验检测评价
❖ BG 值 在 侵 袭 性 真 菌 感 染 临 床 表 现 出 现 之 前 就 已 经高于正常值
相关报道5例确诊IFI及3例临床诊断的IFI患者， 发现BG值升高出现在发热、咳嗽、胸痛等症状 和肺部CT检查发现以前 。
肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、 烧伤85%、急性胰腺炎90%、败血症70%、急性肝 炎37-64%、暴发性肝炎58-100%、丙肝60%、胆 石症伴急性梗阻性化脓性感染85%、多器官功能 衰竭100%。
9
内毒素检测的临床应用
1
在肝胆疾病中的应用
2
在呼吸系统感染中的应用
3
内毒素和1，3-β-D-葡 聚糖检测的临床应用
精选ppt课件最新
1
主要内容
来源及结构 生物学活性 检测的临床应用 检测方法及参考范围 标本采集及影响因素
2
内毒素
3
内毒素的生物学活性
1
发热反应
2
激活血管活性物质的释放
3
激活凝血和纤溶系统
4
激活补体
5
直接或间接损害肝脏
6
激活白三烯、前列腺素及单核巨噬系统
在胰腺疾病中的应用
4
在溃疡性结肠炎中的应用
5
在全身性细菌感染中的应用
6
在不明原因发热中的应用
10
内毒素检测在医院中的应用
1
在医院灭菌制剂检验中应用
2
对注射器、输液器等医疗器械的内毒素检测
3
32
“G”试验
❖ 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解 物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
33
G试验检测评价
❖ BG 值 在 侵 袭 性 真 菌 感 染 临 床 表 现 出 现 之 前 就 已 经高于正常值
相关报道5例确诊IFI及3例临床诊断的IFI患者， 发现BG值升高出现在发热、咳嗽、胸痛等症状 和肺部CT检查发现以前 。
肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、 烧伤85%、急性胰腺炎90%、败血症70%、急性肝 炎37-64%、暴发性肝炎58-100%、丙肝60%、胆 石症伴急性梗阻性化脓性感染85%、多器官功能 衰竭100%。
9
内毒素检测的临床应用
1
在肝胆疾病中的应用
2
在呼吸系统感染中的应用
3
内毒素和1，3-β-D-葡 聚糖检测的临床应用
精选ppt课件最新
1
主要内容
来源及结构 生物学活性 检测的临床应用 检测方法及参考范围 标本采集及影响因素
2
内毒素
3
内毒素的生物学活性
1
发热反应
2
激活血管活性物质的释放
3
激活凝血和纤溶系统
4
激活补体
5
直接或间接损害肝脏
6
激活白三烯、前列腺素及单核巨噬系统
在胰腺疾病中的应用
4
在溃疡性结肠炎中的应用
5
在全身性细菌感染中的应用
6
在不明原因发热中的应用
10
内毒素检测在医院中的应用
1
在医院灭菌制剂检验中应用
2
对注射器、输液器等医疗器械的内毒素检测
3
葡聚糖、内毒素
真菌1-3-β-D葡聚糖、内毒素检测
---初步实现深部真菌感染和败血症早期诊断
检测原理︰免疫比浊法。
检测范围︰1-3-β-D葡聚糖可以检测出无菌体液中除隐球菌、接合菌以外的所有真菌感染；
内毒素可以检测无菌体液中革兰氏阴性菌可能引起的感
染。
实验特点︰早期、快速（4小时）、定量检出患者标本的真菌及革兰氏阴性菌含量。
适用标本︰血液、脑脊液、胸腹水、穿刺液和中段尿等无菌体液标本。
结果判断︰1-3-β-D葡聚糖、内毒素＜10pg/ml 阴性
10--20pg/ml 观察
＞20g/ml 阳性
临床意义︰阴性结果即标本中无真菌及革兰氏阴性菌生长；处于观察期的患者，需要再次采取标本实行检测；阳性结果标本，
推荐连续检测2次，结果皆为阳性者结合临床具有初步
诊断意义。
注意事项︰1.由于此实验要求严格的操作技术水平，为保证检测结果的准确性，需要各科室的配合，请注意无菌操作。
2.此实验需要专用的无热原试管或尿杯，各科室如需要请
到检验科领取。
3.本实验不能报告药敏结果，故建议和培养一起进行。
4.标本采取后应立即送检，推荐科室专人送检。
5.应用纤维素膜进行血液透析、使用阿莫西林/克拉维酸、
外科使用含葡聚糖的纱布、输注入白蛋白或丙球、肠道受
损导致病原菌移位的患者标本（儿科病人），易影响结果
造成假阳性，望临床科室注意；
6.为了更快、更准确的给临床发送有效的检测结果，请各
科室于每天上午10：30前将标本送于检验科，望各科室
配合，谢谢合作！
7.本科室承诺保证结果的及时报告，网络报告和电话通知
同时进行。
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
检测微生物产物(脂多糖、细菌DNA等)。
非特异性的活化炎症标识物(PCT、IL-6)；治疗 靶目标检测(特异性介质)。
动态检测机体细胞对损伤的反应(细胞凋亡、病理 性缺氧、应激等)
（ 2001年，由五个学术团体在美国华盛顿联合召开了国际脓毒症会议）
一、细菌内毒素的临床应用
内毒素血症
内源性
1
肠道内毒素的吸收
喹诺酮类
环丙沙星， 内毒素的释 氧氟沙星等 放能力较弱
一、细菌内毒素的临床应用
3
有效的抗菌治疗后，细菌崩解
• 在选择抗生素时，应考虑抗生素的作用模式和诱导脓毒症休克的潜在可能 性 。在数种抗生素可能具有相同抗菌活性的情况下，应选择较少内毒素 释放的药物。
• 如果已选择诱导细丝样细菌形成的β－内酰胺类抗生素，对剂量的选择应 慎重。
一、细菌内毒素的临床应用
脓毒症分段诊断的PIRO系统
Predisposition 素因
希望达到的目标
炎症反应成分的基因多态性(Toll样受体、TNF、 IL-1、CD14)，提高ection/insult 感染 Response 反应
Organ dysfunction 器官功能障碍
• （4）淋巴液生成增加，腹腔淋巴管--胸导管是内毒素进 入体循环的重要替代途径。
• （5）外周血内毒素灭活功能降低。
一、细菌内毒素的临床应用
2
败血症时血中细菌的释放
• 细菌被白细胞吞噬并消化，细菌死亡释放内毒素。
• Shen等人临床观察发现，在10例革兰氏阴性菌败血 症患者中，有7例在抗生素治疗后血中内毒素明显上 升，其中2例死亡。值得注意的是，尽管死亡病例的
2
败血症时血中细菌的释放
3
有效的抗菌治疗后，细菌崩解
外源性
输入了含有细菌的 药物、血液或者体 液等。
二、细菌内毒素的临床应用
1
肠道内毒素的吸收
• （1）肠道微生物移位与内毒素摄取增多 • 肠粘膜屏障功能障碍，粘膜缺血、萎缩、破损、脱落造成
肠内微生物移位；
• 机体免疫功能受损和肠粘膜免疫屏障的破坏，内毒素移位， 进入血循环；
菌血症得到控制，但血中内毒素则明显升高。
β－内酰胺类
一、细菌内毒素的临床应用
作用于细胞壁
细胞壁的破裂
氨基糖苷类
作用于细胞膜和 影响蛋白质合成，
抑制核糖体
使膜失去稳定性
喹诺酮类
抑制DNA旋转酶 抑制核酸和成
内毒素的释放量： 头孢曲松〉头孢他啶/环丙沙星〉亚胺培南〉阿米卡星 内毒素的释放速率： 亚胺培南〉头孢他啶/环丙沙星〉阿米卡星〉头孢曲松
细菌内毒素&真菌葡聚糖 临床应用
介绍内容
➢ 细菌内毒素 ➢真菌(1-3)-β-D-葡聚糖
一、细菌内毒素的临床应用 血液感染的特点： • 主要是由革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌和真菌的入侵导致的感染； • 感染发生率高，病原菌由外源性转向内源性，条件致病菌增多，多
重耐药和泛耐药菌增多； • 发病急，病死率高，发病率从1986年的1.6%增至2006年的3.1%，年
一、细菌内毒素的临床应用
• 细菌性炎性疾病的鉴别诊断 ：在不明原因的炎性疾病中，内毒素水平升高 表明由细菌(尤其是革兰氏阴性菌)引起的可能，在非细菌性疾病中，相对 于临床的严重程度， 内毒素水平浓度是低的 ，在疾病的进一步发展中内毒 素水平浓度的升高可能是细菌重复感染或脓毒症，而在严重的病毒性疾病 中， 内毒素水平也不会升高。
• 病人本身状况对药物的选择非常重要。除考虑抗菌药物对病人的影响外, 还应考虑病人的免疫功能及对内毒素的代谢能力。
• 适时足量的使用亚胺培南是治疗革兰阴性杆菌感染的有力措施。
一、细菌内毒素的临床应用
• Sander等人的研究表明，鲎试验法检测结果预 测脓毒血症的敏感性为79％，特异性为96％。
• 脓毒症血培养的预测值仅为15％，因此用鲎试 验检测内毒素的方法对发烧病人是否发展成脓 毒血症的预测是一个非常有用的方法。
➢ 大肠杆菌（Escherichia coli） ➢ 沙门氏菌（Salmonella） ➢ 志贺氏杆菌 （Shigella） ➢ 铜绿假单胞菌 （Pseudomonas） ➢ 奈瑟氏球菌属 （Neisseria） ➢ 流感嗜血杆菌 （Haemophilus influenzae） ➢ 百日咳博德特氏菌 （Bordetella pertussis） ➢ 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）
度增长率为0.1%，病死率达21.0%~48.0%； • 从SIRS（全身炎症反应综合征）→sepsis（脓毒症）→severe
sepsis→MODS（多器官功能障碍综合症）→MOF（多器官功能衰竭） 是一个连续，进行性发展的动态变化过程。
一、基本概念——细菌内毒素
➢ 1、细菌内毒素：是革兰氏阴性 菌细胞壁外膜的一个特有成分，是 一种脂多糖 （Lipopolysaccharides LPS）和 微量蛋白（Protein）的复合物。
吴朝晖等。中国抗生素杂志，1999；24(3)：192
一、细菌内毒素的临床应用
抗生素诱导的内毒素的释放
β－内酰胺 类
氨基糖苷类
氨苄西林， 头孢噻肟， 头孢夫辛， 头孢他定， 氨曲南等
庆大，丁胺 卡那，妥布 霉素
内毒素的释 放能力最强
内毒素的释 放能力较强
大肠埃系氏 菌，铜绿假 单胞菌，肺 炎克雷伯氏 菌，流感嗜 血菌等。
一、细菌内毒素的临床应用
内毒素检测在医院中的应用
➢ 在医院灭菌制剂检验中应用； ➢ 对注射器、输液器等医疗器械的内毒素检测； ➢ 在透析站和血站中的应用； ➢ 在临床医学研究中的应用
一、细菌内毒素的临床应用
脓毒症临床特点
➢病原学：革兰氏阴性杆菌最常见，革兰氏阳性菌病情凶 猛，真菌死亡率最高。 ➢过度炎症反应，符合SIRS临床表现。 ➢二高一低：高代谢状态，氧供需失平衡，糖代谢紊乱， 蛋白分解增加，呈负氮平衡；高动力循环状态(高排低阻)。 脏器低灌注、低氧血症。 ➢常导致顽固性休克，是MODS/MOF的主要病因。
• 肠道微生态环境破坏，广谱抗生素的长期应用减少了对抗 生素敏感的厌氧菌的数量，导致革兰氏阴性菌大量繁殖。
一、细菌内毒素的临床应用
肠源性脓毒症是内外科危重患者常见的并发症, 已成为 危重患者的重要死亡原因之一
• （2）肝脏对内毒素清除功能减退，大量内毒素未经解 毒溢入体循环。
• （3）门体系统功能障碍，出现门体分流，来自肠道的 内毒素绕过肝脏，进入体循环。