粪大肠菌群数测定原始记录
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大肠菌群检验原始记录-平板计数法-2016版-5样
3.培养
将以上VRBA平板倒置于36.0±1.°C,培养18h~24h（//时〜/_/时）并
分别计数可疑和典型菌落。
4.平板菌落数选择
选取菌落数在15~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
5.证实试验（接种BG1.B）
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BG1.B肉汤管内，36°C±1°C培养24h~48h,（//时〜/_/时）观察产气
大肠菌群检验原始记录（平板计数法）
检验单位
检验员
检验日期
至
环境条件
温度℃,相对湿度%
检验依据
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法
样品名称
产品批号
仪器设备及耗材：
电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器
培养基及试剂：
结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：m1.配制日期：
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品4
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品
5
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CFU∕m1.□CFU∕g□
2.接种VRBA
选择适宜的2~3个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取Im1.于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1m1.生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及时将15~20m1.融化并恒温至46℃的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加3~4m1.VRBA覆盖平板表层。同时再以只加VRBA的平皿，作为VRBA的空白对照。将平板翻转，培养。
将以上VRBA平板倒置于36.0±1.°C,培养18h~24h（//时〜/_/时）并
分别计数可疑和典型菌落。
4.平板菌落数选择
选取菌落数在15~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
5.证实试验（接种BG1.B）
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BG1.B肉汤管内，36°C±1°C培养24h~48h,（//时〜/_/时）观察产气
大肠菌群检验原始记录（平板计数法）
检验单位
检验员
检验日期
至
环境条件
温度℃,相对湿度%
检验依据
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法
样品名称
产品批号
仪器设备及耗材：
电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器
培养基及试剂：
结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：m1.配制日期：
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品4
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品
5
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CFU∕m1.□CFU∕g□
2.接种VRBA
选择适宜的2~3个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取Im1.于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1m1.生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及时将15~20m1.融化并恒温至46℃的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加3~4m1.VRBA覆盖平板表层。同时再以只加VRBA的平皿，作为VRBA的空白对照。将平板翻转，培养。
大肠菌群测定原始记录
大肠菌群测定原始记录
时间：检验地点：本厂化验室
检测样品名称：来源：
生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。
1.取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，
取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。
2.LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，
取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试Байду номын сангаас中，
5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：
24h产气管数：
48h产气管数：
6．BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。
倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。
放入灭菌锅灭菌15min.
以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：
压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。
培养起始时间：
48h产气管数：
7.检索MPN表结论：
备注：
3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；
从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;
4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，
取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，
时间：检验地点：本厂化验室
检测样品名称：来源：
生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。
1.取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，
取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。
2.LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，
取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试Байду номын сангаас中，
5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：
24h产气管数：
48h产气管数：
6．BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。
倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。
放入灭菌锅灭菌15min.
以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：
压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。
培养起始时间：
48h产气管数：
7.检索MPN表结论：
备注：
3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；
从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;
4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，
取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，
大肠菌群原始记录
检验员：审核员：
样品编号
LST肉汤初发酵试验培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，接种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，培养观察。
样
品
编
号
BGLB肉汤复发酵试验
培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
结果报告
MPN/mL
备注：+：阳性-：阴性
绥芬河出入境检验检疫局综合技术中心密山实验室
ZJ-03-107大肠菌群检验原始记录
样品名称：样品号：
检验日期：验讫日期：标准物质Biblioteka 号检验依据设备编号
大肠菌群计数
第一法大肠菌群MPN计数法：取检样25g(ml)+225ml，用均质器均质1min，制成1:10的样品匀液。按10倍递增稀释，选取6个适宜的稀释倍数，接种LST肉汤管，每个稀释度接种三管，培养观察。
样品编号
LST肉汤初发酵试验培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，接种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，培养观察。
样
品
编
号
BGLB肉汤复发酵试验
培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
结果报告
MPN/mL
备注：+：阳性-：阴性
绥芬河出入境检验检疫局综合技术中心密山实验室
ZJ-03-107大肠菌群检验原始记录
样品名称：样品号：
检验日期：验讫日期：标准物质Biblioteka 号检验依据设备编号
大肠菌群计数
第一法大肠菌群MPN计数法：取检样25g(ml)+225ml，用均质器均质1min，制成1:10的样品匀液。按10倍递增稀释，选取6个适宜的稀释倍数，接种LST肉汤管，每个稀释度接种三管，培养观察。
大肠菌群计数平板法检验原始记录
食品中大肠菌群平板计数检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰 箱□冰 箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员： 审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰 箱□冰 箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员： 审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；
20-6.大肠菌群检验原始记录
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
滤膜法测定原始记录
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：检测地点：环境温度与湿度：
分析方法：仪器设备（管理编号）：
培养条件：
样品编号Байду номын сангаас
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
C1-滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000-将过滤体积的单位由ml转换为L
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录表（续表）
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：
样品编号
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：检测地点：环境温度与湿度：
分析方法：仪器设备（管理编号）：
培养条件：
样品编号Байду номын сангаас
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
C1-滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000-将过滤体积的单位由ml转换为L
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录表（续表）
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：
样品编号
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
大肠菌群测定原始记录
培养
要求：初发酵试验：36℃±1℃；24h±2h或48h±2h。复发酵试验：36℃±1℃；48h±2h。
初发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时；复发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时。
稀释度
管号
接种量
（ml）
初次发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
复发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
大肠菌群最有可能数（MPN/100g）
LST肉汤
BGLB肉汤
大肠菌群测定原始记录
编号：
样品名称
规格型号
生产批次
抽样数量
检验标准
GB4789.3-2010
生产日期
检验日期
样品
处理
无菌操作取检样25g，加225ml无菌生理盐水，均质处理得1:10稀释液，再用灭菌生理盐水按梯度稀释，得1:100、1:1000稀释液，选择三个连续的适宜稀释度接种发酵管，双料发酵管接种稀释液10ml，单料发酵管接种稀释液1ml。
备注：
检验员：年月日校核员：年月日
1:10
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:100
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:1000
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
要求：初发酵试验：36℃±1℃；24h±2h或48h±2h。复发酵试验：36℃±1℃；48h±2h。
初发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时；复发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时。
稀释度
管号
接种量
（ml）
初次发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
复发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
大肠菌群最有可能数（MPN/100g）
LST肉汤
BGLB肉汤
大肠菌群测定原始记录
编号：
样品名称
规格型号
生产批次
抽样数量
检验标准
GB4789.3-2010
生产日期
检验日期
样品
处理
无菌操作取检样25g，加225ml无菌生理盐水，均质处理得1:10稀释液，再用灭菌生理盐水按梯度稀释，得1:100、1:1000稀释液，选择三个连续的适宜稀释度接种发酵管，双料发酵管接种稀释液10ml，单料发酵管接种稀释液1ml。
备注：
检验员：年月日校核员：年月日
1:10
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:100
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:1000
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
大肠菌群检验原始记录
四、根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告大肠菌群的最可能数。
初发酵（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，）支）
产气管数（支）
复发酵(煌绿乳糖胆盐
肉汤，
37℃，,48h)
产气管数（支）
10-1
10-2
10-3
检验结果
（MPN/100g）
检验人：复核人：
大肠菌群检验检验原始记录
样品名称
明胶
样品编号
样品状态
生产日期
检验依据
GB4789.3-2010
检验日期
大肠菌群检验过程：
1、称取样品25g样品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
2、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。
初发酵（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，）支）
产气管数（支）
复发酵(煌绿乳糖胆盐
肉汤，
37℃，,48h)
产气管数（支）
10-1
10-2
10-3
检验结果
（MPN/100g）
检验人：复核人：
大肠菌群检验检验原始记录
样品名称
明胶
样品编号
样品状态
生产日期
检验依据
GB4789.3-2010
检验日期
大肠菌群检验过程：
1、称取样品25g样品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
2、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。
大肠菌群检验原始记录-MPN法
大肠菌群检验原始记录（MPN法，2016版）
检验单位
xxxx公司 检验室
检验员
张xx
检验日期
2022-xx-xx至2022-xx-xx
环境条件
温度xx℃，相对湿度（RH）xx%
检验依据
GB4789.2-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数》第一法
检验编号
20220606xxx
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材：
天平：(xxxx)洁净工作台: (xxxx)培养箱:ຫໍສະໝຸດ (xxxx)培养基及试剂：
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）：xxxx配制日期2022/xx/xx
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）：xxxx配制日期2022/xx/xx
磷酸盐缓冲液：xxxx配制日期2022/xx/xx
-
阴性
报告人
报告日期
复核人
复核日期
将以上 LST置于 36.0 ±1℃，培养24h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），观察导气管内是否有气泡产生。如产气，进行证实实验，如未产气继续培养至48h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），产气，进行复发酵实验，不产气报告结果为阴性。
4.证实试验（接种BGLB）
实验过程：
1.样品处理和稀释：
1.1如需要，使用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将样品调整pH在6.5~7.5之间。
1.2 制备样品稀释液
无菌操作，称取/吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混匀），制成 1:10 样品匀液。吸取1:10样品匀液1mL，沿试管壁注入盛有9mL无菌磷酸盐缓冲液的试管中， 涡旋混匀，制成1:100的样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。
检验单位
xxxx公司 检验室
检验员
张xx
检验日期
2022-xx-xx至2022-xx-xx
环境条件
温度xx℃，相对湿度（RH）xx%
检验依据
GB4789.2-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数》第一法
检验编号
20220606xxx
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材：
天平：(xxxx)洁净工作台: (xxxx)培养箱:ຫໍສະໝຸດ (xxxx)培养基及试剂：
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）：xxxx配制日期2022/xx/xx
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）：xxxx配制日期2022/xx/xx
磷酸盐缓冲液：xxxx配制日期2022/xx/xx
-
阴性
报告人
报告日期
复核人
复核日期
将以上 LST置于 36.0 ±1℃，培养24h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），观察导气管内是否有气泡产生。如产气，进行证实实验，如未产气继续培养至48h±2h（2022/xx/xxxx时~2022/xx/xxxx时），产气，进行复发酵实验，不产气报告结果为阴性。
4.证实试验（接种BGLB）
实验过程：
1.样品处理和稀释：
1.1如需要，使用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将样品调整pH在6.5~7.5之间。
1.2 制备样品稀释液
无菌操作，称取/吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混匀），制成 1:10 样品匀液。吸取1:10样品匀液1mL，沿试管壁注入盛有9mL无菌磷酸盐缓冲液的试管中， 涡旋混匀，制成1:100的样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。
大肠菌群检验原始记录(平板计数法)
XX公司
食品微生物检验记录
检品编号：检品名称：
【大肠菌群】按GB 4789.3-2010第二法平板计数法进行检验
环境条件：温度：湿度：
仪器设备：超净工作台编号：；培养箱（36℃±1℃）编号：
电子天平编号：
培养基与试剂：（配制日期：年月日）
①结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；②无菌生理盐水；③煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
样品操作
取 5 份独立包装的样品，分别取（）、、、、做为测试样品，按如下述操作，测得结果；
每份测试样品加入225 mL无菌生理盐水，均质，制成1:10样品均液（调节pH值为6.5~7.5），吸取 1 mL（1:10）样品均液至9 mL灭菌生理盐水中做10倍递增稀释。
选、和稀释液检测，培养基为结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），℃，培养h（从月日: 到月日: ）,
挑选10个不同类型典型和可疑菌落，接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管，℃培养h（从月日: 到月日: ）。
标准规定：（标准号：）
n=5 c= m= CFU/g（mL）M= CFU/g（mL）结论：□符合规定□不符合规定
检验者：复核者：检验日期：。
大肠菌群检验原始记录-平板计数法5样
10-1
24 26 10
10-2
3
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
6
稀释度
第一稀释度 第二稀释度 第三稀释度
样
品 VRBA 疑似大肠菌群菌落数
5
接种 BGLB 管数
10-1
20 22 10
10-2
1
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
7
VRBA 空白（仅 VRBA）
-
-
空 白
稀释液空白（稀释液+VRBA）
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材： 天平：( xxxx) 培养箱: ( xxxx)
洁净工作台: (xxxx)
培养基及试剂： 结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）： xxxx 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）： xxxx 磷酸盐缓冲液：xxxx 0.1mol/L 氢氧化钠：
配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期：2022/xx/xx
实验过程： 1.样品处理和稀释： 1.1 如需要，使用 0.1mol/L 氢氧化钠或 0.1mol/L 盐酸将样品调整 pH 在 6.5~7.5 之间。 1.2 制备样品稀释液
根据样品状态，无菌操作，称取/吸管吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混 匀），制成 1:10 样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。 2.接种 VRBA
-
-
BGLB 空白（仅 BGLB）
-
-
菌落总数、大肠菌群原始检验记录
产品名称： 生产批号：
大肠菌群检验原始记录
规格：
生产数量：
样品状态：
完好
异常
检验日期：
检验环境： 温度： ℃
湿度：RH
%
检验依据：《食品安全国家标准 蜜饯CB14884-2016》
检验方法：GB4789.3-2016（第二法）
操作过程： （1）吸取1ml样液于VRBA平板36℃培养24小时后，是否有沉淀环的紫红色菌落生产； （2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）； （3）BGLB肉汤证实试验阳性管数。
样品序号
1 2 3 4 5 空白对照 典型和可疑菌落
稀释倍数
10-1
10-2
无 有
1
2
3
4
典型和可疑菌落
证实试验
最终结果 结论判定 检验员：
10-3
空白对照 数量
5
6
结果计算 （Cห้องสมุดไป่ตู้G/g）
备注
CFU/ml
7
8
9
10
复核员：
大肠菌群检验原始记录
规格：
生产数量：
样品状态：
完好
异常
检验日期：
检验环境： 温度： ℃
湿度：RH
%
检验依据：《食品安全国家标准 蜜饯CB14884-2016》
检验方法：GB4789.3-2016（第二法）
操作过程： （1）吸取1ml样液于VRBA平板36℃培养24小时后，是否有沉淀环的紫红色菌落生产； （2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）； （3）BGLB肉汤证实试验阳性管数。
样品序号
1 2 3 4 5 空白对照 典型和可疑菌落
稀释倍数
10-1
10-2
无 有
1
2
3
4
典型和可疑菌落
证实试验
最终结果 结论判定 检验员：
10-3
空白对照 数量
5
6
结果计算 （Cห้องสมุดไป่ตู้G/g）
备注
CFU/ml
7
8
9
10
复核员：
大肠菌群计数原始记录
检测起止日期
检 测 依 据 □GB 4789.3-2010 第一法
□GB 4789.3-2010 第二法 □GB14934-94 次/秒 时间□1min□2min□3min mL □BGLB mL □VRBA □生化培养箱 36±1℃
检 测 仪 器 □电子天平 □拍击式无菌均质器 培 养 基
□LST（双料） mL □LST（单料）
大肠菌群计数原始记录
样 品 名 称 样 品 状 态 检 测 环 境 检 测 地 点
□常温 □冷藏 □ 第1页
样 品 编 号 样 品 数 量 接 样 日 期
月 250g 年 日～ 月 月 日 日
温度（T） ： □净化室 1
℃ ；相对湿度（RH） ：
□净化室 2 □BSL-2
检验 结果
样品中大肠菌群计数结果为：
纸片颜色及结果 均匀紫色 未检出 黄色背景上红点或红晕 检出
。
餐 饮 具
检测者： 日 期：
可以结果确证（发酵法） 异常颜色反应 需确证 未检出 检 出
复核者： 日 期：
审核者： 日 期：
mL □测试纸片
固体和半固体样品：无菌称取 25g，放入盛有 225ml□生理盐水/□磷酸盐缓冲液的无菌均质袋内，进 行均质处理。 液体样品：吸取 25ml 样品置盛有 225ml□生理盐水/□磷酸盐缓冲液的无菌丝口试剂瓶（含适量无菌 玻璃珠）中，混匀。 样 品 制 备 液体样品：直接吸混匀后的原液检验。 冷冻样品：45℃， min 解冻。 调节 pH。 餐饮具 检样量
10
1
0.1
0.01
0.001
0.0001
第 一 法
初发酵
阳性管数目 （24h） 阳性管数目 （48h） 阳性管数目
347.2粪大肠菌群数分析原始记录
报告编号
粪大肠菌落分析原始记录（续表）
样品编号
稀释
倍数
D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100mL
空白测定MPN/L
报告值
（MPN/L）
平均值
（MPN/L）
水样接种量（mL）/接种管数
Hale Waihona Puke mL× 5管mL× 5管mL× 5管
mL×5管
mL×5管
mL×5管
（4）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
样品编号
稀释倍数D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100ml
空白测定
(MPN/L)
报告值
(MPN/L)
平均值
(MPN/L)
水样接种量（mL）/接种管数
mL× 5管
mL× 5管
mL× 5管
mL×5管
mL× 5管
mL× 5管
（1）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
报告编号
粪大肠菌群数分析原始记录
检测项目
粪大肠菌群
检测依据
水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-2018
环境条件
温度：℃；相对湿度：%
检测起止时间
初发酵：年月日时到日时温度℃
复发酵：年月日时到日时温度℃
试剂和培养基及生产批号
仪器设备
样品预处理
样品充分混匀后，选取3个适宜的稀释度，按无菌操作要求加入相应的样品量。
（2）接种15份样品时，查HJ347.2-2018附录A中表A.2得到MPN值，再按公式（1）换算样品中粪大肠菌群数（MPN/L）：
粪大肠菌落分析原始记录（续表）
样品编号
稀释
倍数
D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100mL
空白测定MPN/L
报告值
（MPN/L）
平均值
（MPN/L）
水样接种量（mL）/接种管数
Hale Waihona Puke mL× 5管mL× 5管mL× 5管
mL×5管
mL×5管
mL×5管
（4）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
样品编号
稀释倍数D
初发酵阳性管数
复发酵阳性管数
MPN/100ml
空白测定
(MPN/L)
报告值
(MPN/L)
平均值
(MPN/L)
水样接种量（mL）/接种管数
mL× 5管
mL× 5管
mL× 5管
mL×5管
mL× 5管
mL× 5管
（1）备注：方法检出限为：20 MPN/L，当检测结果低于方法检出限时，用“ND”表示 。
报告编号
粪大肠菌群数分析原始记录
检测项目
粪大肠菌群
检测依据
水质粪大肠菌群的测定多管发酵法HJ 347.2-2018
环境条件
温度：℃；相对湿度：%
检测起止时间
初发酵：年月日时到日时温度℃
复发酵：年月日时到日时温度℃
试剂和培养基及生产批号
仪器设备
样品预处理
样品充分混匀后，选取3个适宜的稀释度，按无菌操作要求加入相应的样品量。
（2）接种15份样品时，查HJ347.2-2018附录A中表A.2得到MPN值，再按公式（1）换算样品中粪大肠菌群数（MPN/L）：
大肠菌群检测原始记录表(多管发酵法)
项目名称 送样日期 检测依据 检测地点 检验仪器 检测试剂 样品制备
检验程序
样品编号
大肠菌群检测原始记录表（多管发酵法）
项目编号
检测日期
检测方法
多管发酵法
检测环境
温度： ℃，相对湿度： %
生化培养箱 菌落计数仪 生物安全柜 超净台 电子秤
固体和半固体样品：无菌称取 10g±1g，剪碎后加入到 200mL 无菌生理盐水中，充分混匀。 □涂抹样品：将采样后棉拭子的试管充分振摇后，吸原液检验。 □液体样品：直接吸原液检验。
1 10g 样品+200mL 稀释液混匀（或原液直接检验）；
2
乳糖胆盐发酵试验：将试样 ml 倒入 乳糖胆盐发酵管中 35℃±2℃培养 24h 观察：是否产酸产气，如有进行下步
3
分离培养，将产酸产气发酵管转种伊红美蓝琼脂平板，于 35℃±2℃培养 24h 观察菌落形态。
4 挑选可疑菌落进行革兰氏镜检，阴性（-），阳性（+）。
5
证实试验，上述镜检阴性菌接种乳糖蛋白胨培养液，置 35℃±2℃培养 24h观察：是否产酸产气 Nhomakorabea6 结果报告
样品接种量 （ml）
第一次发酵
检测结果
EM 平板生长情 况
革兰氏染色
第二次发酵
结果报告
“-”表示不产酸也不产气；“+”表示只产酸不产气，培养基变黄色；“ ”表示产酸又产气，培养基变黄，并有气泡
检测人：
复核人：
审核人;
检验程序
样品编号
大肠菌群检测原始记录表（多管发酵法）
项目编号
检测日期
检测方法
多管发酵法
检测环境
温度： ℃，相对湿度： %
生化培养箱 菌落计数仪 生物安全柜 超净台 电子秤
固体和半固体样品：无菌称取 10g±1g，剪碎后加入到 200mL 无菌生理盐水中，充分混匀。 □涂抹样品：将采样后棉拭子的试管充分振摇后，吸原液检验。 □液体样品：直接吸原液检验。
1 10g 样品+200mL 稀释液混匀（或原液直接检验）；
2
乳糖胆盐发酵试验：将试样 ml 倒入 乳糖胆盐发酵管中 35℃±2℃培养 24h 观察：是否产酸产气，如有进行下步
3
分离培养，将产酸产气发酵管转种伊红美蓝琼脂平板，于 35℃±2℃培养 24h 观察菌落形态。
4 挑选可疑菌落进行革兰氏镜检，阴性（-），阳性（+）。
5
证实试验，上述镜检阴性菌接种乳糖蛋白胨培养液，置 35℃±2℃培养 24h观察：是否产酸产气 Nhomakorabea6 结果报告
样品接种量 （ml）
第一次发酵
检测结果
EM 平板生长情 况
革兰氏染色
第二次发酵
结果报告
“-”表示不产酸也不产气；“+”表示只产酸不产气，培养基变黄色；“ ”表示产酸又产气，培养基变黄，并有气泡
检测人：
复核人：
审核人;
海水粪大肠菌群分析原始记录
粪大肠菌群分析原始记录
样品来源：
使用仪器名称：生化培养箱 仪器型号： 仪器编号：
手提式压力蒸汽灭菌器 仪器型号： 仪器编号：
分析方法
海洋监测规范第7部分：近海污染生态调查和生物监测GB 17378.7-2007 9粪大肠菌群检测9.1发酵法
样品处理
初发酵：以无菌操作方法，等量吸取经充分摇匀的水样，分别加入5支各盛有已灭菌的三倍乳糖浓缩蛋白胨培养液试管（内有倒管）等量吸取水样分别加入5支盛有已灭菌的普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）；
吸取水样注入盛有已灭菌清洁海水试管中，摇匀。另换一吸量管等量吸取此种稀释水样分别加入5支盛有已灭菌的普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）。大肠菌群的检验应按照无菌操作的要求进行，同时应作平行样的测定。
复发酵：经培养h后，将产酸（培养液变成黄色）产气（倒管上端积有起泡）及只产酸的发酵管，用一无菌环（3mm直径）或木压舌板转接入EC培养液中，摇匀后置℃恒温箱中培养h。
样品状态
液态
接样日期
检出限
盐度
pH值
样品编号
初发酵试管培养温度时间
复发酵试管培养温度时间
粪大肠菌群数（个/100ml）
报告值（个/L）
第一接种量mL*5管的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ性管数
第二接种量mL*5管的阳性管数
第三接种量mL*5管的阳性管数
第一接种量
的阳性管数量
第二接种量
的阳性管数量
第三接种量
的阳性管数量
备注
注：＋：产酸或产气；－：不产酸不产气
检测人:校核人：审核人:检测日期：
样品来源：
使用仪器名称：生化培养箱 仪器型号： 仪器编号：
手提式压力蒸汽灭菌器 仪器型号： 仪器编号：
分析方法
海洋监测规范第7部分：近海污染生态调查和生物监测GB 17378.7-2007 9粪大肠菌群检测9.1发酵法
样品处理
初发酵：以无菌操作方法，等量吸取经充分摇匀的水样，分别加入5支各盛有已灭菌的三倍乳糖浓缩蛋白胨培养液试管（内有倒管）等量吸取水样分别加入5支盛有已灭菌的普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）；
吸取水样注入盛有已灭菌清洁海水试管中，摇匀。另换一吸量管等量吸取此种稀释水样分别加入5支盛有已灭菌的普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）。大肠菌群的检验应按照无菌操作的要求进行，同时应作平行样的测定。
复发酵：经培养h后，将产酸（培养液变成黄色）产气（倒管上端积有起泡）及只产酸的发酵管，用一无菌环（3mm直径）或木压舌板转接入EC培养液中，摇匀后置℃恒温箱中培养h。
样品状态
液态
接样日期
检出限
盐度
pH值
样品编号
初发酵试管培养温度时间
复发酵试管培养温度时间
粪大肠菌群数（个/100ml）
报告值（个/L）
第一接种量mL*5管的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ性管数
第二接种量mL*5管的阳性管数
第三接种量mL*5管的阳性管数
第一接种量
的阳性管数量
第二接种量
的阳性管数量
第三接种量
的阳性管数量
备注
注：＋：产酸或产气；－：不产酸不产气
检测人:校核人：审核人:检测日期：
大肠菌群检验原始记录(第二法)
原始记录
共页；第页项目名称大肠菌群样品编号
使用设备名称电热恒温培养箱手提式压力蒸汽消毒器
试验方法标准GB 4789.3-2010(第二
法)
环境条件温度℃，相对湿度 %
以无菌操作将检样25g置于225mL灭菌生理盐水中，混匀后，做成检验所用稀释液：分别将待检样品稀释液接种于2个VRBA平板混匀，待琼脂凝固后，再加3mL-4mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36℃±1℃温箱内，培养18h-24，计数典型和可疑菌落。
选取典型菌落或可疑菌落进行证实试验，观察产气情况。
稀释度
典型菌落总数cfu/ml n 1
n 2
n 3
n 4
n 5
证实试验从VRBA平板上挑取10个典型菌落或可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管，36℃±1℃温箱内，培养24h-48h.凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
检测结果
备注n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数；m为致病菌指标可接受水平的限量值;M为致病菌指标的最高安全限量值
检验人员校核人员检验日期校核日期。
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