生活饮用水微生物指标检验演示文稿优秀课件

过滤 培养 24h
报告 阴性
无典型细菌
乳糖
G -无 芽 孢 杆 菌
蛋白 胨培
养液
3 6 ±1 ℃培
无产酸产气
养
24h
证实 试验
24h
产酸产气
结果报告
酶底物法
Enzyme Substrate Test
常用的色原和荧光底物
• 色原（荧光）糖苷结合物 糖苷酶 • 色原（荧光）氨基酸结合物 氨基肽酶
• 常用呈色的色原有：α、β萘酚，邻位或对 位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基 苯等，如ONPG(邻硝基酚-B-D半乳糖苷 )
计数
总大肠菌群
• 检测方法 • 多管发酵法 • 滤膜法 • 酶底物法
多管发酵法
• 定义：
•
总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳
糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性
无芽孢杆菌。
• 培养基：
• 乳糖蛋白胨培养液
• 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
• 伊红美蓝培养基
• 设备：
• 显微镜
10ml水样
24h
滤膜法
• 定义：
用孔径为0.45μｍ的滤膜过滤水样，细菌被阻留 在膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，44.5℃培养 24h能形成蓝色菌落的细菌为耐热大肠菌群。
• 培养基：
1. MFC培养基 2. EC培养基
• 设备：
• 过滤设备
耐热大肠菌群滤膜法检测步骤
• 常用的荧光物有：4-甲基伞形酮（4MU）， 7氨基4甲基伞形酮香豆素 如MUG(四甲基伞形酮-B-D-葡萄糖苷 )
总大肠菌群酶底物法
• 定义：
在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶（β-Dgalactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenylβ-D-galactopyranoside）使培养基呈黄色的细菌 群组 。
总大肠菌群酶底物法检测步骤
培养基
100mL水 样
检 索 MPN 表
黄色产生
36±1℃ 培 养 24h
无颜色反应
报告 未检出
24h-28h
结果报告
总大肠菌群酶底物法 检测示意图
耐热大肠菌群
• 检测方法
• 多管发酵法 • 滤膜法
多管发酵法
• 定义：
用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌 群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生 长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。
• 培养基 1. 品红亚硫酸钠培养基 2. 乳糖蛋白胨培养液
• 设备：
• 显微镜，过滤设备
检测步骤
• 过滤水样：过滤设备 • 显色培养，染色镜检：24h • 复发酵：阳性接种，24h
滤膜法检测步骤
100mL水 样
过滤
革兰氏染色 显微镜检
典型菌落
3 6 ±1 ℃ 培 养 24h
无典型菌落
报告 未检出
阴性
革兰氏染色 显微镜检
G -无 芽 孢 杆 菌
无典型细菌
报告 阴性
无产酸产气
报告 未检出
乳糖 蛋白 胨培 养液 3 6 ±1 ℃培
养 24h
阳性
结果报告
M PN表
乳糖发 酵试验
24h
证实 试验 24h
滤膜法
• 定义：
是指用孔径为0.45μｍ的微孔滤膜过滤水样，将 滤膜贴在选择性品红亚硫酸钠培养基上37℃培养 24h，能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼 性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
15管法检测步骤
1ml水样
0.1ml水样
10ml双料乳糖蛋白 10ml单料乳糖蛋白
胨培养液
胨培养液
在36℃下培 养 24h
10ml单料乳糖蛋 白胨培养液
都 不 产 酸 产 气 判阴性
产 酸 产 气 管 EMB
染色 革兰氏阴性
镜检
无芽孢杆菌
乳糖蛋白胨
培养液 产酸产气
判总大肠菌群存在
多管发酵法结果
大肠菌群在伊红美蓝培养 基上的典型菌落特征
大肠菌群革兰氏染色显微 镜下的形态
分离 培养
24h
15管 法 检 测 步 骤
10m L
二倍 乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
水样
10倍 稀 释
1m L
1m L
乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
报告 阴性
报告 阴性
EM B 3 6 ±1 ℃ 培 养 24h
无
典 菌
型 落
阳性
3 6 ±1 ℃ 培 养 24h
• 培养基：
1. EC培养基 2. 伊红美蓝琼脂
• 设备：
• 无特殊设备
检测步骤
• 初发酵（同总大肠菌群），24h • 耐热培养：阳性管接种，24h • 显色培养：阳性管接种，24h
多管发酵法检测步骤
耐热 培养 24h
证实 试验 24h
产气
不产气
报告 阴性
EC 培 养液 4 4 .5 ℃培 养 24
h
EM B 3 6 ±1 ℃ 培 养 24h
10m L
乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
水样
10倍 稀 释
1m L
1m L
乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
二倍 乳糖 蛋白 胨培 养液
×5 管
阳性
3 6 ±1 ℃ 培 养 24h
阴性
无典型菌落
报告 阴性
有典型菌落
检 索 M PN表
报告 未检出
结果报告
乳糖 发酵 试验
菌落总数
• 定义：
•
是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养
48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 。
• 培养基： • 营养琼脂
• 设备： • 放大镜/菌落计数器
菌落总数平板计数法
1m L 饮 用 水 水 样
平行样 空白样
平皿
1m L 水 源 水 水 样
10倍 系列稀释
50℃ 营养琼脂
3 6 ±1 ℃ 培 养 48h
100 <1 <1
说明 一般性污染 指示粪便污染 指示粪便污染 一般性污染
肠道原虫 肠道原虫
微生物指标常规检验流程
水样
总大肠菌群
菌落总数
报告
报告
耐热大肠菌群 或大肠埃希氏菌
报告
实验前准备
1、灭菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分别包好，160℃干烤2h灭 菌
2、9mL灭菌生理盐水 3、相应的灭菌培养基 4、检验前 ，无菌室用紫外线灯照射30min
生活饮用水微生物指标检 验演示文稿
生活饮用水中微生物指标
项目 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌
菌落总数 贾第鞭毛虫
隐孢子虫
单位
MPN/100mL或 CFU/100mL
MPN/10百度文库mL或 CFU/100mL
MPN/100mL或 CFU/100mL
CFU/mL
个/10 L
个/10 L
限值 不得检出 不得检出 不得检出
• 培养基：
MMO-MUG培养基
• 设备：
• 压膜机
检测步骤
• 加样：干粉培养基加入到100mL水样中
• 压膜：专用压膜机分装
• 培养：36±1℃的培养24h
• 结果判读： • 24h培养后颜色变成黄色判断为阳性反应； • 培养24h后判读，为可疑阳性，可延长培养到28h判读，
超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果 。