胚胎冻融原理及技术进展
子宫内膜异位症患者冻融胚胎移植内膜准备方案的研究进展2024(全文)
子宫内膜异位症患者冻融胚胎移植内膜准备方案的研究进展2024（全文）摘要子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是育龄女性的常见疾病，也是人类辅助生殖技术的常用指征之一。
随着玻璃化冷冻技术的发展，冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer, FET)成为体外受精技术的重要组成部分。
影响FET成功的因素包括胚胎质量、子宫内膜容受性及胚胎与内膜的同步性。
其中内膜准备是胚胎着床和活产的关键步骤。
EMS被认为是影响子宫内膜容受性的重要病因。
目前针对EMS患者FET 内膜准备方案研究较少并存在争议。
本文通过分析现有文献，对EMS患者FET内膜准备方案的妊娠结局、母婴并发症进行综述，为临床决策提供参考。
子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是育龄女性的常见疾病，不孕是其重要的临床表现之一。
体外受精－胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF E T)已广泛应用千EMS患者，其新鲜胚胎移植成功率要显著低千盆腔输卵管因素的患者[1]。
随着袭胚培养、玻璃化冷冻技术的发展与完善，冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer, FET)已得到了广泛应用。
已有多项研究证实，与接受新鲜周期胚胎移植的EMS患者相比，接受FET的患者有着更高的妊娠率和活产率[2-3]。
FET的应用不仅保存了超促排卵后的多余胚胎，增加了患者的累积妊娠率，同时，较鲜胚移植，FET患者雌激素水平相对较低，可有效改善子宫内膜容受性和降低中、重度卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome, OH SS)风险。
EMS对FET妊娠结局的影响存在争议。
Prapas等[4]将同一供体卵母细胞分别移植给有或没有EMS的女性，调整年龄和体质量指数(b ody mass index, BM I)后提示EMS组的着床率、临床妊娠率、持续妊娠率和活产率均较低。
胚胎冻融的原理
胚胎冻融的原理本文转载于兰州军区兰州总医院生殖医学中心：胚胎冻融的原理介绍很多人都不明白胚胎冻融的原理就是什么？所以在网上一直提问，就于这个问题，今天大编成给大家一起互动这个蒙蔽的答案，期望对存有疑惑的您有所帮忙，也期望能够协助您踏进疑惑！专家为我们讲解：利用冷冻技术将胚胎和配子从生理温度降至低温并贮存，需要时，再从低温状态解冻至生理温度。
为增加胚胎和配子对冻融过程的耐受，增加存活率，必须选择合适的物质作为冷冻保护剂。
专家谈至：胚胎相同与配子，所以须采用相同的冷藏保护剂和冷藏方法展开冷藏，但它们都就是活的细胞，对耐热冷藏与融化过程存有相近的机理，以下以胚胎为基准表明。
一、常用冷冻保护剂1.渗透性保护剂例如丙二醇（proh），二甲基亚砜（dmso），甘油（glycerol）等小分子化学物质，难扩散进细胞，也称作细胞内冷藏2.非渗透性保护剂包括单糖如葡萄糖、果糖，双糖如蔗糖、麦芽糖等，它们不能进入细胞，利用它增高细胞外溶液的渗透压而引起非特异保护作用，又称细胞外冷冻保护剂。
二、冷藏保护剂对胚胎的影响及机制（一）毒性作用为证明其毒性，将胚胎放在相同的冷藏保护剂一定时间，却不将其冻融，再继续观测胚胎的发育，辨认出在22℃时，逗留在proh的胚胎失活率为低于dm的，而在4℃时，曝露于此两种冷藏保护剂几乎未辨认出其对胚胎存有不良影响。
但经冻融过程后，存活率却显著上升，除其毒性促进作用外，引发冻融后胚胎失活的因素主要存有：（二）细胞内冰晶形成细胞的冷藏实际上就是一个水解过程，如果在资金投入液氮前胚胎能够充份水解，防止构成细胞内冰晶，就是胚胎冻融后能够存活的主要因素。
相信仔细看过以上讲解的您一定收益匪浅吧，希望我的分享能给您带来福音！。
[指南]辅助生殖技术
![[指南]辅助生殖技术](https://img.taocdn.com/s3/m/0aaedc2d590216fc700abb68a98271fe910eaf16.png)
辅助生殖技术辅助生育技术(artificial reproductive technology，ART)是指对配子、胚胎或者基因物质等进行操作而获得新生命的技术，它包括各种帮助不孕症患者妊娠的技术，如促排卵[yao]物治疗、人工授精(artificial insemina．tion，AH)和体外受精一胚胎移植(in vitro fertilization&emb~o transfer，IVFET)及其各项衍生技术。
目前在ART中的研究热点是IVF一ET及其各项衍生技术。
常规IVF一ET技术主要解决女性不孕问题，特别是输卵管性不孕；在该技术上结合显微操作技术、分子生物学、细胞遗传学等发展起来的衍生技术主要包括有胞浆内单精子注射(intracytoplasmie sperm injection，ICSI)和胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation geneticdiagnosis，PGD)等。
经过近20年的发展，ART已经取得了惊人的进步。
目前，我国大陆临床ART在许多方面基本上与国际水平接轨，不少中心常规IVFET的成功率已稳定在较高的水平[1]。
本文主要阐述近年IVF一ET及其衍生技术中涉及问题的研究进展。
1 常规IVF-ET常规IVF-ET是指从妇女体内取出卵子，体外培养后加入经过处理获能的精子使之受精，受精卵发育成2～8个卵裂球或囊胚后，移植入母体子宫内并使之着床。
它的适应症为女方输卵管性不孕、排卵障碍、子宫内膜异位症、免疫性不孕、男方轻度少精症、弱精症或畸精症、原因不明不孕特别是经过其他助孕方法多次失败。
主要程序包括控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation，COH)、手术取卵、体外受精、胚胎体外培养、胚胎移植等步骤。
1．1 COH方案的改进。
IVF能够获得成功的大前提是获得可以进行移植的优质胚胎，COH 的目的就是提供高质量的卵子以获得更多的优质胚胎，从而提高成功率。
胚胎冷冻原理
胚胎冷冻原理当科技进步到一定程度时，胚胎冷冻技术便应运而生。
胚胎冷冻是指将受精卵或初期胚胎置于低温环境下，储存起来，以便未来使用。
这项技术不仅帮助那些在生育时遭遇不孕不育的夫妇，更为科学界的发现提供了便捷的途径。
胚胎冷冻的整个过程可以分为以下几个步骤：第一步，收集和准备健康的卵子和精子。
在体外受精的过程中，取出卵子和精子，然后将它们培养在培养皿中，以促进受精卵的发育。
第二步，收集和冷冻受精卵。
将受精卵贴在培养皿上，按照标准程序进行操作。
在发育的早期，胚胎会被收集并放置在低温的液氮中，这会停止胚胎的发育，使其进入休眠状态。
第三步，储存和保护。
使用液氮条码系统来确保胚胎的标识和储存信息，以避免混淆和损失。
胚胎在常规下是能够存储5年，但在特定情况下或新技术和研究的发现，其保存时间或可延长。
胚胎冷冻可以帮助那些需要辅助生殖技术的夫妇。
例如，一些女性因年龄或疾病等原因而不能自然怀孕，或许可以将他们的受精卵冷冻下来，以备不时之需。
此外，对于那些必须接受放疗或化疗的患者，他们还可将备用胚胎存储在里面，用于将来他们生育孩子的可能性。
同时，胚胎冷冻也为科学研究提供了全新的方向。
有些科学研究无法在体外进行，因为某些特定的细胞只在某些发育阶段生存。
通过冷冻胚胎，科学家就可以拥有这些细胞并在适当的时间点解冻以进行研究。
然而，胚胎冷冻技术也存在一些争议，其中最主要的是胚胎的生命可形成。
有些人认为，在冷冻过程中，胚胎会被暴露在液氮所引发的极寒温度下，这可能导致损伤甚至死亡。
因此，他们反对这种技术并呼吁立即禁止它。
总之，虽然存在着一些争议，但胚胎冷冻技术仍是一项非常重要的科学技术。
它为那些需要帮助实现生育的夫妇提供了新的选择，并为科学研究提供了独特的途径。
我们需要继续关注这项技术的发展和应用，并逐步完善它。
胚胎冷冻技术
人类胚胎冷冻的应用现状
到目前为止,超低温冷冻人的体外受精(IVF)胚 胎,在国内外均获得成功。 2004年,意大利学者应用ICSI对慢速冷冻卵母 细胞与冻融睾丸精子受精后再次冻存多余胚胎,解 冻胚胎移植后分娩一健康女婴,为世界首例。 北京大学第三医院生殖医学中心应用冷冻精 液中精子、冷冻卵母细胞、冷冻胚胎即“三冻” 技术,成功获得世界第2例、我国第1例“三冻”婴 儿。并在卵母细胞冷冻技术方而,采用了与世界首 例不同的简捷的玻璃化冷冻卵母细胞的方法。
另外,从理论上讲,冷冻胚胎可长期 保存,但对于保存过程中胚胎细胞是否 发生老化的问题还缺乏直接的实践证 据;对于冷冻效果鉴定,主要采用形态学 方法鉴定冻胚质量,对其移植后的发育 潜力无法判断。
• 在多种冷冻方法中,现较多采用慢速冷 冻、快速溶解方法,但是其他方法也有 其自身优点。因此,在实验中应综合考 虑多方面因素,根据具体的胚胎情况选 择恰当的方法。
胚胎冷冻技术
发展历史
• 胚胎冷冻保存的研究起始于20世纪50年代， 当时Smith用甘油坐防冻剂，保存兔胚胎获 得成功。
• 1971年Whittingham用慢速冷冻方法获得小 鼠胚胎的成功保存。 • 1978年willadsen建立了快速冷冻方法。 1984年Takeda等采用一步冷冻方法首次冷 冻小鼠胚胎获得成功。
临床应用
应充分重视高浓度玻璃化冷冻溶液对胚 胎的毒性作用,合理选择玻璃化冷冻溶液,严 格控制胚胎和玻璃化冷冻溶液接触的总时间。 目前较简单的玻璃化溶液的组成是25%甘油、 25%PROH或25%乙二醇。 玻璃化冷冻技术正处于实验研究到临 床应用的过渡阶段,随着玻璃化冷冻方法的 逐渐成熟,有望成为程序冷冻方法外的另一 种选择。
医疗应用
• 若有剩余的质量较好的胚胎，可以冷冻保存，待 以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内， 将增加受孕的机会。 • 可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多，质量 好，不能一次全部移植，可将多余的胚胎冷冻保 存。 • 以及发生严重卵巢过度刺激综合征的患者，不宜 在治疗周期移植胚胎者，可将胚胎冷冻，待以后 的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。
胚胎冷冻保存技术
胚胎冷冻保存技术嘿，朋友们！今天咱来聊聊胚胎冷冻保存技术。
这玩意儿可神奇啦，就好像给胚胎找了个超级“冰库”，让它们能在合适的时候再出来“闪亮登场”。
你想啊，这胚胎就像是一颗小小的种子，蕴含着无限的可能。
而胚胎冷冻保存技术呢，就是给这颗种子提供了一个特殊的保护罩。
把胚胎冷冻起来，等需要的时候再解冻，让它继续成长发育，这多厉害呀！很多人可能会问，为啥要搞这个胚胎冷冻保存呀？那用处可大了去啦！比如说，有些夫妻想要孩子的时候，身体条件不太好，这时候就可以先把胚胎冷冻起来，等调理好身体了再让胚胎复苏。
这就好比把好东西先存起来，等自己有能力享受的时候再拿出来，多机智呀！还有啊，有些女性可能因为某些疾病，需要先进行治疗，但又担心以后生育受影响，这时候胚胎冷冻保存就是她们的“大救星”。
这技术操作起来也挺有意思的。
医生们就像魔法师一样，小心翼翼地把胚胎处理好，然后放进专门的冷冻设备里。
这个过程可不能马虎，稍有不慎，这颗“小种子”可能就受委屈啦！不过别担心，咱们的医生那都是专业的，他们肯定能把胚胎照顾得好好的。
冷冻后的胚胎就乖乖地在“冰库”里待着，等着被唤醒的那一天。
等时机一到，医生就会把它们解冻，让它们重新开始生长。
你说神奇不神奇？就好像它们睡了一觉，醒来后还是活力满满。
当然啦，这可不是随随便便就能做的。
在进行胚胎冷冻保存之前，医生会和患者进行详细的沟通，了解各种情况。
毕竟这是关系到一个新生命的事情，可不能马虎呀！而且，冷冻保存也不是一劳永逸的，还需要定期检查和维护，就像我们要经常保养自己的爱车一样。
说真的，胚胎冷冻保存技术给很多人带来了希望。
那些曾经因为各种原因担心不能拥有宝宝的家庭，现在有了新的选择。
这难道不是一件很棒的事情吗？总之呢，胚胎冷冻保存技术就是现代医学的一个奇迹。
它让生命有了更多的可能，让那些渴望孩子的家庭看到了希望的曙光。
咱可得好好感谢那些研究出这项技术的科学家们，是他们让这个世界变得更加美好。
冻融移植胚胎培养第7天囊胚成功获得活产1例
广"#$2020年1月第42卷第1期93病例报告冻融移植胚胎培养第%天囊胚成功获得活产1例！阮秋燕唐秀法公方强方伟芬乃东红牛向丽(广西壮族自治区计划生育研究中心生殖医学科,南宁市530021,电子邮箱:qiuyanruan@)【摘要】目的探讨冻融移植胚胎培养第7天囊胚的移植效果及妊娠结局。
方法回顾性分析1例行第2周期体外受精胚胎移植术患者的临床资料，总结其治疗过程，并分析其移植效果及妊娠结局。
结果于单精子卵胞浆注射后第3天获得9枚优质胚胎(包括10CG21枚,7CG11枚,7CG23枚,6CG24枚)，均进行囊胚培养；胚胎培养第5天胚胎为卵裂期样胚胎，第6天形成2枚融合期胚胎，第7天形成2枚3BC囊胚，进行胚胎冷冻；女方内膜准备好后，经胚胎复苏，顺利移植，最终成功获双胎妊娠，母婴结局均良好。
结论患者进行囊胚培养时，在第5~6天未形成囊胚，可视胚胎情况将胚胎延长培养至第7天，若发育成可用囊胚则可进行冻融移植，能够获得一定概率的妊娠和活产。
【关键词】冻融囊胚移植；囊胚培养；第7天囊胚；活产；病例报告【中图分类号】R321.3【文献标识码】B DOI：10.11675/j.issn.0253-4304.2020.01.26囊胚培养技术是目前评估胚胎发育潜能较为普遍的一种方法，胚胎在培养第5~7天能够形成囊胚被视为具有较高的发育潜能［I］O发育缓慢被认为是胚胎发育潜能低下的标志之一,这可能是胚胎发育异常和非整倍体率高造成的，是胚胎植入失败的危险因素［2"3］%目前，大部分生殖中心(以下简称中心)常规选择移植或冷冻胚胎培养后第5~6天的囊胚，丢弃在第6天仍未形成可用囊胚的胚胎，较少有中心观察胚胎至第7天，第7天囊胚的临床应用价值还存在较大争议。
本文报告1例冻融移植胚胎培养第7天囊胚获得活产的病例，旨在为胚胎发育缓慢、在第5~6天未获得可移植胚胎的病例提供参考。
1资料资料1.1一般资料及病史女方32岁，男方34岁，婚后10年未孕，因女方“盆腔炎性疾病后遗症”于2017年3月在我院行辅助生殖技术助孕％女方体重指数26.22kg/m2，平素身体健康，月经规律,B超监测排卵提示正常,基础性激素检查正常。
动物配子与胚胎冷冻保存原理及应用
动物配子与胚胎冷冻保存原理及应用动物配子和胚胎冷冻保存是一种通过低温保存方式，将动物种子或胚胎保存在玻璃管或冷冻盒中，以便在未来的时候将其恢复生长和繁殖的技术。
动物配子或胚胎保存可以保证物种的遗传多样性，也可以为动物的保护和培育提供重要的帮助。
近年来，该技术在畜牧业、医学研究以及保存濒危物种等领域得到了广泛的应用。
动物配子和胚胎冷冻保存的原理是通过低温抑制生命体内的活动代谢，达到延缓历程的效果。
在冷冻过程中，配子和胚胎的内部液态会转变成固体所以需要添加抗冻剂来保护细胞和避免冰晶对细胞的伤害。
当冷冻被完成后，这些细胞或组织可以存储在超低温（通常为-196℃）下，以防止它们继续生长或衰老。
当需要将它们恢复到正常生长时，需要将保存的胚胎或配子慢慢加热到它们适合的温度以使其重新开始细胞代谢。
在畜牧业中，动物配子和胚胎的冷冻保存技术被广泛应用。
通过把高质量的家畜的配子和胚胎冷冻保存，可以在未来种群扩增 or 培育需要的时候母猪、牛、马和羊的种群扩增。
生物学家利用高质量的胚胎和配子创建基因改良动物，然后将其冷冻保管。
当需要在生产中培育更多的种群，在需要时就可以于提取原料，并将它们放入深度冷冻中进行保存。
这a对于种群扩增而言是非常重要的工具。
在医学研究领域中，无论是用于治疗不育症，还是利用它来治疗人造生殖植入，动物的配子和胚胎保存技术都是非常重要的技术。
这些技术可以为什么人造受孕程序创建可靠的储备源，这些储备源可以在不必要的情况下补充供体实验。
在保护濒危动物种群和保护野生动物方面，动物配子和胚胎保存技术也有着重要的作用。
通过采集、保存和重新植入野生动物或濒危动物的配子和胚胎，可以创建并保护优良的纯种，有效地保护某些濒危物种。
总之，动物配子和胚胎保存技术为畜牧业、医学研究和濒危物种的保护提供了可靠的参考。
虽然这项技术需要高度技术，但相信经过不断学习和研究，将来它将起到越来越重要的作用。
不同细胞数的卵裂期胚胎囊胚培养及冻融后单囊胚移植结局
不同细胞数的卵裂期胚胎囊胚培养及冻融后单囊胚移植结局卵裂期胚胎是在受精后的2至3天内形成的胚胎，它们有着不同的细胞数量，包括两细胞期、四细胞期、八细胞期等。
在体外受精过程中，这些卵裂期胚胎可以经过培养和冻存，然后进行单囊胚移植，以提高试管婴儿的成功率。
今天我们将讨论不同细胞数的卵裂期胚胎在培养和冻融后单囊胚移植的结局。
一、不同细胞数的卵裂期胚胎培养和冻融在体外受精过程中，卵裂期胚胎通常会在培养皿中进行培养，以促进其发育成为囊胚。
在培养过程中，胚胎的细胞数量可以通过观察显微镜下的形态来确定。
通常情况下，我们常见到两细胞期、四细胞期、八细胞期等不同细胞数的卵裂期胚胎。
在培养结束后，卵裂期胚胎可以选择进行冻融保存，以备将来的移植使用。
冻融过程中，胚胎会被迅速冷冻，并存放在液氮中。
冻融后的胚胎可以长期保存，直到患者准备好进行移植。
二、单囊胚移植的结局单囊胚移植是指将一个单个的囊胚植入患者子宫内，以进行试管婴儿移植。
单囊胚移植的优势在于避免了多胚胎移植可能带来的孪生子宫内胎儿综合征的风险，同时也减少了多胚胎移植可能导致的并发症。
而不同细胞数的卵裂期胚胎在单囊胚移植后的结局也是不同的。
根据以往的研究和临床数据，不同细胞数的卵裂期胚胎在单囊胚移植后的着床率和妊娠率是有所差异的。
三、两细胞期胚胎的结局两细胞期的胚胎通常是受精后的第二天形成，它只有两个细胞。
由于细胞数量较少，两细胞期胚胎在进行囊胚发育时可能面临较大的困难。
两细胞期胚胎的着床率和妊娠率相对较低。
即使两细胞期胚胎的成功率较低，其仍然有可能发育成为健康的胎儿。
对于患者来说，虽然两细胞期胚胎的成功率较低，但仍然值得一试。
对于患者来说，如果有四细胞期胚胎可选择，那么进行单囊胚移植是一个较好的选择。
四细胞期胚胎的成功率较高，可以为患者带来更好的移植结局。
总结：不同细胞数的卵裂期胚胎在培养和冻融后单囊胚移植后的结局是不同的。
根据以上讨论，八细胞期胚胎的成功率是最高的，四细胞期胚胎次之，而两细胞期胚胎的成功率较低。
配子及胚胎冻融技术的研究与应用
细胞冻融 包括细 胞 的冻 结 保 存和 细 胞融 解 过 程两 个 阶 段 。细胞的冻结 和 超低 温 保存 为 细 胞 的脱 水过 程 。 当温 度 降低 时 ， 分 由细胞 内流 向细胞外 ， 胞适 度脱水 ， 水 细 当温度进
一
步 降低 ， 细胞 内液 开始 结 冰 ， 速 降 温 至 一１ 快 ９ ６℃， 冻液 未
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安徽农业科学。ｏｒａ ｏＡ ｈ ｉ ． ｃ．Ｏ７３ （８ ：４７ ４８ Ｊｕｎｌｆ ｎｕ Ａ Ｓｉ２０ ，５１ ）５５ —５５
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罗芸
责任校对பைடு நூலகம்
李菲菲
配 子及 胚 胎 冻 融 技 术 的研 究 与 应 用 予志 刘燕， 茂林， 延清 （安 学 命 学 院陕 延 １０ ｊ 宏， 、 周 李 延 大 生 科 学 ，西 安７０ ６） ０
２ 精子 的冻融
精子 的冷冻效果 受遗 传背景 、 冻保 护剂 、 冻方 法 （ 冷 冷 冷
冻速率 、 解冻温度等） 等因素的影 响。人精子在冻融后其超
微 结构 均发 生 了一定 的变化 ： 子 的质 膜 变皱 、 裂甚 至 丢 精 破
失 ， 部 出现 凹陷 ， 顶体 物质漏 出 ； 核局 并有 中段 的线粒 体肿 胀 或破 坏 ， 粒体 嵴改 变 ， 部分线 粒体 基质 密度 降低 ； 线 有 尾部 结 构形 态虽无改 变 ， 没有 冷 冻前 清 晰 ， 些模 糊 不 清 。冻 融 但 有 后 的精 子 ， 色 质基 本 完 整 。 由于 细 胞 内外 冰 晶 形成 的影 染 响 ， 子膜 产 生一 定 的损 伤 ， 对精 可导 致精 子 质膜 和顶 体 膜 的 通透 性增 加和破 坏 ， 部分 精子顶 体 内容物 的漏 失 和精 子 引起 能量代谢 降低或停 止 ， 使精子 的活动 力和 穿入 卵细 胞透 明带 的能 力 降低 。但 有 学 者 指 出 ３ 冷 冻 一复 温 过 程 不 损 伤 Ｊ ， Ｄ Ａ 冷 冻贮存 ７ 以上 的精 子 Ｄ Ａ未 发 现 有 重 要 改 变 。 Ｎ， ５周 Ｎ 经卵胞浆 内单精 子显微注 射操作证 实 ， 融精 子并 不影 响其 冻 受精能力 ， 卵 内可见 双原 核 ， 受精 卵周 隙有 ２ 极 体 ， 个 卵裂 后 同样能形 成 ４ ８ 卵裂 等 大均 质 透 明无 碎 片 的优 质 胚胎 。 ～ 个 认为精子冻 融造成 的精 子 细 胞膜 和 顶体 的 改 变并 不 完全 影 响精子 的受 精能 力 和胚 胎形 成 。冷 冻还 可 以使 一 些 劣质 精
冷冻胚胎流程
冷冻胚胎流程
冷冻胚胎是一种辅助生殖技术，它为那些无法自然怀孕的夫妇
提供了一种机会。
在冷冻胚胎流程中，胚胎被冷冻保存，以便在将
来的某个时间进行移植。
下面将介绍冷冻胚胎的整个流程。
首先，冷冻胚胎的流程通常是在体外受精（IVF）过程中完成的。
在IVF过程中，女性会接受一系列药物来刺激卵巢产生多个卵子。
这些卵子会在体外受精后形成胚胎。
在这个阶段，医生会评估胚胎
的质量，选择最有可能成功的胚胎进行冷冻保存。
接下来，医生会对选定的胚胎进行冷冻处理。
这通常涉及到将
胚胎置于特定的冷冻介质中，以确保它们在冷冻过程中不会受损。
胚胎冷冻的过程需要非常精确的控制温度和时间，以确保胚胎的质
量得到保证。
一旦胚胎冷冻完成，它们就会被存储在液氮罐中。
这些液氮罐
能够将胚胎保存在极低的温度下，以确保它们不会受到任何损害。
在这种状态下，胚胎可以被保存数年甚至数十年。
当患者准备好进行胚胎移植时，医生会开始解冻胚胎。
解冻的
过程同样需要非常精确的控制，以确保胚胎在解冻后仍然保持良好的状态。
一旦胚胎解冻完成，它们就可以被移植到女性子宫内，以进行妊娠。
在移植完成后，患者需要进行一段时间的观察和休息，以确保胚胎成功着床。
如果一切顺利，患者将会怀孕并顺利分娩。
总的来说，冷冻胚胎流程是一个复杂而精密的过程，它需要医生和患者共同合作，以确保每一个步骤都能够顺利完成。
通过冷冻胚胎技术，许多不孕不育的夫妇都能够实现他们的生育愿望，这项技术为他们带来了新的希望和可能。
人类胚胎冷冻保存技术的研究进展与应用前景_孙志宏
人类胚胎冷冻保存技术的研究进展与应用前景延安大学生命科学学院(延安716000) 孙志宏 马 莉 周茂林 综述 李延清 审校 1983年Tr ounso n等首先将胚胎的冷冻-解冻技术用于人胚,并成功妊娠[1]。
目前,世界上已普遍开展了胚胎的冷冻和复融技术。
本文就胚胎冷冻技术基本原理、研究进展与应用前景做一综述。
1 胚胎冷冻保存原理及其损伤机制1.1 胚胎冷冻保存原理 冷冻保存(cr yo peserv ation),是将体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中,以一定的冷冻速度降至零下某一温度,对其长期保存的过程[2]。
此时细胞的代谢活动被完全抑制,使细胞的生命在静止状态下保存下来,从而达到长期保存的目的。
胚胎冷冻技术是在精子冷冻保存的基础上发展起来的。
冷冻胚胎存活率是渗透压和低温损害积累结果的反映。
冷冻保护液的浓度和植冰温度之间确定最适宜的关系是保证冷冻胚胎存活的关键因素[1]。
1.2 胚胎冻存的损伤机制 胚胎的冷冻实际上是一个脱水过程,冷冻保存的关键是设法减少细胞内冰晶对胚胎造成的损伤。
正常胚胎细胞内水分含量达80%以上,在冷冻过程中,胚胎细胞中的水分将从细胞中游离出来冷冻成冰晶,一方面对胚胎细胞造成机械性损伤即冰晶损伤(ice damag e),另一方面导致未结冰的细胞内溶液渗透压急剧增高,造成蛋白质变性即溶液损伤(solutio n damag e),二者最后都导致胚胎不可逆性变化而死亡。
但是,如果在胚胎冷冻保存液中加入一定浓度的冷冻保护剂如甘油、DM SO、乙二醇等,则可大幅度减小冷冻对胚胎的损伤[3-4]。
冷冻保护剂的成分通过细胞膜进入细胞内,细胞内外冷冻保护剂和其它溶质达到平衡,同时细胞脱水形成玻璃化的凝固状态,该过程是胚胎冷冻最重要的保护机制。
解冻时,冷冻保护剂渗出细胞外,同时细胞膜必须防止水过多过快渗人细胞内,以免发生渗透性膨胀。
2 冷冻保护剂的种类极其作用机制 在胚胎冷冻和解冻过程中的适当阶段添加适当浓度的冷冻保护剂能有效地降低对细胞的损伤,科学选用冷冻保护剂在胚胎冷冻保存过程中非常重要[5]。
胚胎冷冻原理和方法
胚胎冷冻方法包括：
1、程序冷冻法：也称平衡冷冻法，是将胚胎放入冷冻液中，慢速降温至一个较低的温度，约在-35℃到-80℃的阶段，然后将它放入液氮中，是早期冷冻时主要采用的一种方法，但程序冷冻的降温过程较长，其中胚胎细胞内的水分易在此过程中形成冰晶，在解冻复温时也有形成冰晶的风险，冰晶会机械性损伤细胞膜和细胞器的膜结构，挤压细胞的骨架，对胚胎造成冷冻损伤，因此在程序冷冻过程中，细胞受到损伤的程度较大，复苏率约在70%；
2、玻璃化冷冻：近20年在程序冷冻的基础上又进一步突破，出现了新的冷冻方法，称为玻璃化冷冻，此方法主要是采用更高浓度及极其黏稠的冷冻保护剂处理胚胎，使胚胎在冷冻的过程中，从生理温度急速降温到-196℃，胚胎细胞内外液体瞬间冻结成玻璃化固体状态。
与程序冷冻法相比，玻璃化方法冷冻过程中，胚胎细胞内的液体不会形成冰晶，从而避免了冰晶对胚胎细胞的物理化学损伤，获得了较好的冷冻效果，玻璃化冷冻胚胎复苏率通常达到95%以上，若冷冻囊胚，效果则更好，复苏率可达到99%以上，显著的高于程序冷冻方法，优势也较明显，所以越来越多的中心逐步开始使用玻璃化冷冻方法，也成为现阶段胚胎冷冻的主要方法。
不同细胞数的卵裂期胚胎囊胚培养及冻融后单囊胚移植结局
不同细胞数的卵裂期胚胎囊胚培养及冻融后单囊胚移植结局卵裂期胚胎是指在受精后的2至3天内形成的胚胎，通常在这个阶段，胚胎由单核细胞分裂为双核细胞阶段。
而囊胚则是在胚胎发育的第五至第六天形成，此时胚胎会形成含有空囊的囊胚结构。
卵裂期囊胚是体外受精过程中培育的最初阶段囊胚，它们存活的几率较低，而在囊胚形成后，存活的几率则会显著提高。
不同细胞数量的卵裂期囊胚在体外受精和培育的过程中，可能会对囊胚的移植和结局产生影响。
本文旨在探讨不同细胞数的卵裂期囊胚培养及冻融后，单囊胚移植的结局差异。
在体外受精技术中，卵子和精子在实验室中结合，产生受精卵。
接着经过培养，形成囊胚，然后选择最具活力和最有可能实现妊娠的囊胚，进行移植。
而在实际操作中，卵裂期囊胚的细胞数量可能会对囊胚的质量产生影响。
通常来说，优质的卵裂期囊胚应该有适当数量的细胞，能够保证囊胚的正常发育和在移植后成功着床。
而细胞过少或者过多可能会导致囊胚的质量下降，影响着床和妊娠的实现。
有研究表明，与3-4细胞的囊胚相比，5-6细胞的卵裂期囊胚更适合进行冻融保存和移植。
这是因为在冷冻保存和解冻过程中，5-6细胞的囊胚具有更好的生存能力和更高的妊娠率。
所以，医院在进行囊胚的培育和冻融时，会更多地选择5-6细胞的囊胚。
单囊胚移植是指将单个囊胚移植到子宫内，进行试管婴儿的辅助生殖技术。
与多胚胎移植相比，单囊胚移植可以减少双胎和多胎的诱发率，降低妊娠期并发症和早产的风险。
单囊胚移植还可以提高囊胚移植成功的几率，减少多胚胎选择的困难。
在进行单囊胚移植时，囊胚的质量对移植的成功和妊娠的实现有着至关重要的影响。
关于不同细胞数的卵裂期囊胚培养及冻融后单囊胚移植结局的研究，目前尚不是很多。
但一些前期的研究结果表明，5-6细胞的囊胚移植后，妊娠率和成功率相对更高。
而3-4细胞的囊胚移植后，妊娠率和成功率可能会略低。
这些研究结果提示着卵裂期囊胚的细胞数量与移植结局之间可能存在一定的关联。
胚胎冷冻保存ppt课件
冷冻保护液常用pH7.2~7.4的磷酸盐缓冲液（PBS） 来配制，也可用生理盐水或M199来配制。 现有保存方法有3种：程序冷冻法：一步冷冻法和 玻璃化冷冻化。 在实际应用中，缓慢冷冻法经常只使用一种抗冻保 护剂；快速冷冻和玻璃化冷冻常应用多种抗冷冻保 护剂，如甘油、丙二醇和乙二醇或者乙二醇和丙二 醇，再加入葡萄糖、蔗糖或半乳糖。
非渗透型冷冻保护剂 属于细胞外冷冻保护剂，一般为高分子物质， 能够溶解于水，但不能进入细胞。 机理：非渗透型冷冻保护剂主要通过该改变 渗透压引起细胞脱水，发挥非特异性保护作 用。 常见的非渗透型冷冻保护剂包括：单糖（如 葡萄糖）、二糖（如蔗糖）、三糖（如棉子 糖）、聚乙烯吡咯烷酮等。
冷冻方法
将胚胎在含20%小妞血清的PBS溶液中清洗两次 将洗涤过的胚胎在室温条件下加入含1.4mol|L甘油 和20%小牛血清的PBS的冷冻液中平衡10min 将胚胎专一到含有10%甘油+20%小牛血清的PBS 溶液中，立即转入胚胎冷冻细管 将细管在液氮冠颈部预冷5min后投入液氮中保存 解冻时将液氮中取出细管，在空气中平衡7s，迅速 投入20℃温水中，摇动细胞管使其解冻均匀 将解冻后的胚胎移入含1.0mol|L蔗糖+20%小牛的 PBS溶液中平衡10min，出去保护剂；再用含20小 牛血清的PBS溶液洗涤2次后用于移植
抗冻保护剂 胚胎冷冻的关键是减少细胞内冰晶形成对胚 胎的损伤。对于胚胎的冷冻和解冻，一50~15℃是一个致死温度区。在这个温度区细胞 容易形成大的冰晶。加入抗冻保护剂能避免 冰晶的形成。 分类：渗透型冷冻保护剂 非渗透性冷冻保护剂来自渗透型冷冻保护剂
属于细胞内冷冻保护剂，一般小分子物质，在0℃ 以上很容易通过细胞膜进入细胞质。 机理：在进行胚胎冷冻时，保护剂使水分子从细胞 内渗透出，减少了细胞内冰晶的形成；同时保护剂 与水分子形成氢键，降低了冻结部分的电解质浓度 从而减少了冷冻过程对细胞的损伤。 常见的渗透型冷冻保护剂有：甘油、二甲基要亚砜 （DMSO）、丙二醇和乙二醇等。
胚胎冷冻保存技术
常规冷冻法
（2）植冰（诱发结冰）：
植冰的概念：在液氮中冷却后的镊子或棉签夹 住塑料细管上端（棉栓端），使抗冻液迅速 通过－6℃左右冰点，强制性地使细胞外液 形成冰晶，称之为植冰。
目的：当温度降到抗冻液冰点附近时，经植冰 迅速冻结，以防胚胎细胞内部产生冰晶，给 胚胎造成物理性的损伤，致使胚胎死亡。 将胚胎移入事先配置好抗冻液的0.25毫 升塑料细管内封口后进行冷却。当温度降至 －6℃左右时，用上述方法诱发结冰。
损伤保护
• 诱发结晶 • 使用冷冻保护剂 • 玻璃化
损伤保护
• 诱发结晶
在-7℃左右时通过人工强制诱发结晶，以避免较大冰晶的形成和剧烈 的温度变化。诱发结晶主要在降温速率较慢的冷冻方法中使用。诱发 方法有两种：①用液氮预冷过的镊子夹麦管中部含卵母细胞的冷冻液 上部；②在冷冻液中加入制冷剂晶母等。
⑵ 非渗透性：蔗糖、海藻糖、聚乙二醇、PVP和聚蔗糖等，
降低胚胎外液的冰点，减少胚胎外冰晶形成，并能促使
胚胎内部的水分外流，从而最终减少胚胎内部冰晶的形
成。
特点：分子量大，不进入细胞
损伤保护
• 诱发结晶 • 使用冷冻保护剂 • 玻璃化
玻璃化是高浓度的冷冻保护液在低温或超低温下溶液由液相变为固相 时，其内部的分子、离子分布不改变其原有的分布，不形成有规则外 表的物质形态，可有效避免冰晶形成时对卵母细胞内部骨架结构和亚 细胞器膜的牵拉断裂和尖锐刺伤。
冷冻过程
三，保存 • 常规冷冻法
• 一步冷冻法
• 玻璃化冷冻法
常规冷冻法
• 历史：1972年首先获小鼠胚胎冷冻成功； 1973年牛的胚胎冷冻后获得成功，并
产下后代。 • 操作流程：
（1）抗冻液中平衡：室温下（20-25℃），
冻融胚胎移植对子代的近、远期影响
Vol.41No.5May 2021上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)冻融胚胎移植对子代的近、远期影响秦宁馨1，2，赵文龙1，2，周志阳1，2，施炜慧1，2，吴琰婷1，2，3，黄荷凤1，2，31.上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院胚胎源性疾病研究所，上海200030；2.上海市胚胎源性疾病重点实验室，上海200030；3.复旦大学生殖与发育研究院，上海200032［摘要］冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer ，FET ）是常用辅助生殖技术之一。
由于FET 具有累积妊娠率高、卵巢过度刺激综合征发生率低等优势，通过该项技术出生的子代数量逐年增加。
多项研究提示FET 子代发生围产期早产、低出生体质量、小于胎龄儿等的风险低于新鲜胚胎移植周期出生的子代，也有证据显示FET 子代出现巨大儿、大于胎龄儿等的风险较高；同时，亦有研究针对FET 子代在儿童期及成人期的长期健康状况进行报道。
该文就FET 对子代的近、远期影响及其原因进行综述。
［关键词］辅助生殖技术；冻融胚胎移植；子代；近期影响；远期影响［DOI ］10.3969/j.issn.1674-8115.2021.05.016［中图分类号］R711.6［文献标志码］AShort -and long -term effects of frozen -thawed embryo transfer on offspringQIN Ning -xin 1,2,ZHAO Wen -long 1,2,ZHOU Zhi -yang 1,2,SHI Wei -hui 1,2,WU Yan -ting 1,2,3,HUANG He -feng 1,2,31.Institute of Embryo Original Diseases,the International Peace Maternity &Child Health Hospital,Shanghai Jiao Tong University School of Medicine,Shanghai 200030,China;2.Shanghai Key Laboratory of Embryo Original Diseases,Shanghai 200030,China;3.Institute of Reproductive and Developmental Research,Fudan University,Shanghai 200032,China[Abstract ]Frozen-thawed embryo transfer (FET)is one of the commonly used assisted reproductive technology.Because FET has the advantages ofhigh cumulative pregnancy rate and low incidence of ovarian hyperstimulation syndrome,the number of offspring born through this technology is increasing year by year.Many studies have shown that the risks of preterm delivery,low birth weight and small for gestation age of FET offspring are lower than those of the offspring born in the fresh embryo transfer cycle.There is also evidence that the risks of macrosomia and large for gestational age of FET offspring are higher.At the same time,there are also reports on the long-term health status of FET offspring in childhood and adulthood.This paper reviews the short-term and long-term effects of FET on offspring and the causes.[Key words ]assisted reproductive technology (ART);frozen-thawed embryo transfer (FET);offspring;short-term effect;long-term effect自辅助生殖技术（assisted reproductive technology ，ART ）诞生40年以来，已累计有超过800万人通过这项技术出生［1］。
胚胎冷冻保存
将胚胎在含20%小妞血清的PBS溶液中清洗两次 将洗涤过的胚胎在室温条件下加入含1.4mol|L甘油 和20%小牛血清的PBS的冷冻液中平衡10min 将胚胎专一到含有10%甘油+20%小牛血清的PBS 溶液中，立即转入胚胎冷冻细管 将细管在液氮冠颈部预冷5min后投入液氮中保存 解冻时将液氮中取出细管，在空气中平衡7s，迅速 投入20℃温水中，摇动细胞管使其解冻均匀 将解冻后的胚胎移入含1.0mol|L蔗糖+20%小牛的 PBS溶液中平衡10min，出去保护剂；再用含20小 牛血清的PBS溶液洗涤2次后用于移植
胚胎冷冻保存原理 胚胎冻存的损伤机制 抗冻保护剂 胚胎冷冻方法 人类胚胎冷冻案例
胚胎冷冻保存原理 冷冻保存,是将体外培养物悬浮在加有或小加 冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速度降 至零下某一温度，对其长期保存的过程。此 时细胞的代谢活动被完全抑制，使细胞的生 命在静比状态下保存来，从而达到长期保存 的目的。
冷冻保存技术---胚胎 冷冻保存
胚胎冷冻保存是将胚胎保存在-196℃超低温的液氮 （或其他抗冻保护剂）中做长期保存。可使胚胎移植不 受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率，长期 保存优良基因的目的。胚胎冷冻技术为建立优良品种的 胚胎库提供了条件，还可以长期保存珍贵或濒临灭绝的 动物资源。 研究和优化胚胎冷冻保存技术对胚胎工程的发展有重要 的意义。
人类胚胎冷冻案例
一. 研究对象:白2 000年1月至20 O 1年7月止，于本室进行IV F- E T治疗的患者 22例共行冷冻胚胎移植24个周期，年龄24 ~ 31岁，平均年龄(28士2. 96)岁，不 孕年限1~10年，平均不孕年限( 3. 5士2. 23)年。其中临床激素替代周期7个周期， 白然周期17个周期。 二、胚胎冷冻:22例患者按本室常规进行IVF一ET治疗。胚胎移植术后，从剩 余胚胎中选择优质胚胎分别放入含25%人血白蛋白的DPBS缓冲液5分钟、1. 5M PROH液10分钟、1. 5M PROH+0. 1M Sucrose液5分钟，然后迅速装管，总操 作时问不超过20分钟。最后将胚胎迅速放入程序冷冻仪( Cryo L一863，澳大利 亚)中进行程序冷冻，程序为:从22℃开始，以一2 0C/分钟的速度降至一6 0C,停 留5分钟，进行人工植冰，然后继续停留10分钟，再以一0. 3℃的速度降至一 37℃，以一0.6℃/分钟降至一40 ℃，然后将胚胎转移入液氮中。 22例患者共进行了24个周期的胚胎冻融移植，共获得临床妊娠5例，临床妊娠 率为27年12月在我中心进行冷冻胚胎移植患者112例，年龄 23~39岁，平均(30 88士3 72)岁。不孕年限1~17年，平均(4 79士3 24)年。其中 85例患者年龄< 35岁，27例患者年龄大于等于35岁。84例采用白然周期准备了 宫内膜，28例采用激素替代周期准备了宫内膜。 胚胎冷冻及解冻:选择胚胎移植后(取卵后第3天)剩余的优质胚胎或因卵巢过度刺 激综合征等原因未能移植的优质胚胎进行冷冻。采用慢速冷冻一快速解冻的方法 进行胚胎冷冻及解冻。 冷冻方法:冷冻保护剂为丙二醇和蔗糖。室温下，将胚胎移至含1.5 mol/L的 丙二醇和12 mg/mL人血清白蛋白的H TF-H epes( In V itro C are 美国)溶液中平 衡10 m in接着移至含1.5 m ol/L丙二醇,O.1mol/L蔗糖和12 mg/mL人血清白蛋白 的HTF-H epos溶液30 s后吸入麦管，每管装1一3个胚胎，将麦管放入Kyro lOMRV, UK型程序冷冻仪(Plan-er、英国)，以2℃/min的速率从37℃降温至一7℃ 植冰，以0.3℃/m in的速率降温至一3 0℃，再以10℃/min降至一120℃，取出麦 管浸入液氮罐保存。 解冻方法:从液氮中取出标记冷冻麦管1个，在空气中停留30s放入30℃水中 平衡30、将麦管内的胚胎移至含0.5 mol/L蔗糖和12 mg /mL人血清白蛋白的 HTF-H epes溶液中5min 移至含0.2m ol/L蔗糖和12 mg/mL人血清白蛋白的H TFH ep es溶液中5 m in,移至含12 mg/mL人血清白蛋白的HTF-Hepes。溶液中平衡 10 m in,逐步升温至37℃，最后将胚胎移入37℃、5% COz培养箱内培养。解冻 后胚胎卵裂球存活率>50%为存活胚胎。
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② 预平衡液ES：以BS为基础液配制7.5%DMSO+7.5%EG ③玻璃化冷冻液VS：以BS为基础液配制15%DMSO+15%EG+0.5MSucrose
2.从原核到囊胚阶段胚胎的玻璃化冷冻
预平衡
玻璃化
囊胚冷冻前进行人工皱缩( 对滋养细胞层进行激光穿刺，使囊胚腔内液体流出，囊胚腔 塌陷，再进行冷冻减少冰晶的产生) 后再行冷冻。
Rienzi L, Gracia C, Maggiulli R, et al. Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance. Hum Reprod Update. 2017 ;23(2):139-155.
保护剂毒性。 开放载体：交叉污染。
对细胞超微结构的影响：玻璃化冷冻时巨大 的渗透压变化及高浓度冷冻保护剂会引起滋 养细胞微绒毛数量的减少，对质膜、线粒体 和粗面内质网等细胞器都可能造成影响。 操作机械性损伤：人为技术熟练程度；激光 辅助也可能会因其热效应而影响胚胎发育。
六、胚胎解冻
4. 囊胚期细胞慢速冷冻流程
脱水程序
• 5%glycerol，10min； • 9%glycerol/0.2mol/L sucrose， 10min； • 装入含0.5ml 9%glycerol 0.2mol/L sucrose冷冻保护溶 液的冷冻管中。 • 上机。
降温程序
• 起始温度：+22℃； • 样品上机后开始降温:-2℃/min 直至-7℃； • -7℃稳定5min； • 手动植冰，停留5min； • 继续降温：-0.3℃/min直至32℃； • 样品下机，直接快速地放入液 氮中，然后转入液氮罐中保存。
2. 分裂期细胞慢速冷冻流程
脱水程序
• 0.5mol/L，PROH，5min； • 1.0mol/L，PROH，5min； • 1.5mol/L，PROH，10min；
• 1.5mol/L，PROH/ 0.1mol/L sucrose，10min； • 装入含1.5mol/L PROH 0.1mol/L sucrose冷冻保护溶液的麦管中； • 上机。
3. 玻璃化冷冻胚胎的复温
• 清洗液(WS)：mHTF+20%SPS； • 复温液(TS)：以WS为基础液配制1.0mol/L的蔗糖液； • 复苏液(DS)：以WS为基础液配制0.5mol/L的蔗糖液。
4. 玻璃化冷冻的优缺点
降温速度快(500～20 000℃/min)，无冰晶形 成； 耗时较短； 无需昂贵仪器； 复苏后存活率高。
6. 慢速冷冻缺点
•冷冻操作时间长； •需高度精确的程序化冷冻仪。
五、玻璃化冷冻技术
• 玻璃化冷冻：通过高浓度的冷冻保护剂在一定的降温
速率下，由液相直接转变成为一种玻璃状的固体状态的过 程。
1. 冷冻载体和试剂
• 冷冻载体：冷冻载杆(Cryotop)、冷冻薄膜 ( cryotop)、冷冻环(Cryoloop)、冷冻叶片 (cryoleaf)、拉细麦管(Open pulled straw)等。 • 玻璃化试剂：
降温程序
• 起始温度：+22℃； • 样品上机后开始降温:-2℃/min 直至-7℃；
• -7℃稳定5min； • 手动植冰，停留5min； • 继续降温：-3℃/min直至-32℃； • 取出样品，快速地放入液氮中， 然后转入液氮罐中保存。
3. 分裂期细胞解冻流程
• 31℃水浴1～1.5min； 快速解冻 • 将冷冻管静置于室温下5min。
胚胎冷冻技术
慢速冷冻法
快速冷冻法
玻璃化冷冻
超速冷冻
四、 慢速冷冻及解冻技术
• 依靠冷冻保护剂，慢速降温速率以及置冰 来减少和避免细胞内冰结晶的形成，以及 渗透压变化和温度变化对胚胎的打击。 • 可用于胚胎发育的各个阶段，如受精卵、 分裂期和囊胚期的胚胎。
1. 仪器及试剂
• 生物冷冻仪，麦管 • 试剂：PROH，PROH+Sucrose，glycerol
原核期时间短； 细胞较大，对冷冻技求高； 对原核期胚胎的发育潜能判断难度大。
• 卵裂期胚胎：Ⅰ-Ⅲ级
• 囊胚期胚胎：3CC 以上可利用囊胚。
囊胚冷冻优势:
囊胚期表面积与体积比大，对脱水复水造成的体积变化耐 受性好； 囊胚期细胞数多，损伤后修复能力强，少数细胞死亡后对 胚胎发育能力影响小。
5. 囊胚期细胞解冻流程
• 31℃水浴1～1.5min； 快速解冻 • 将冷冻管静置于室温下5min。
寻找胚胎
• 将溶液转入培养皿中，镜下寻找胚胎。
反脱水
• 5%glycerol/0.1mol/L sucrose，5min，室温； • 0.1mol/L sucrose，5min，室温； • 10%人血浆蛋白mHTF，5min，室温； • G2培养液中清洗4次； • 将胚胎转入G2培养液中，放进培养箱培养
胚胎冻融原理及技术进展
一、冷冻胚胎概念
• 采取特殊的保护措施和降温程序，使胚胎 在-196℃的条件下停止代谢，而升温后又不 失去代谢恢复能力的一种长期保存技术。
二、冷冻胚胎适应症
• 移植当日母体数据不达标，不适合移植； • 有多余胚胎。
缺点：冻胚复苏有可能导致降级或损失。
三、胚胎的选择
• 原核期胚胎
寻找胚胎
• 将溶液转入培养皿中，镜下寻找胚胎。
反脱水
• 1.25mol/L，PROH/0.2mol/L，sucrose，5min； • 1.0mol/L，PROH/0.2mol/L，sucrose，5min； • 0.75mol/L，PROH/0.2mol/L，sucrose，5min； • 0.5mol/L，PROH/0.2mol/L，sucrose，3min； • 0.25mol/L，PROH/0.2mol/L，sucrose，3min； • 0.2mol/L，sucrose，3min； • 6%血清培养液，清洗4次； • 转入6%血清培养液中，放进培养箱培养。
• 卵裂期胚胎存活标准：解冻2h 后有＞ 50%细胞完好透亮。 • 囊胚解冻存活标准：解冻培养后囊胚重新扩张到具有正常 内细胞团和滋养外胚层形态。
影响冻融胚胎存活的因素
• • • • 胚胎质量 冷冻保护剂 冷冻载体 冻融方法
玻璃化冷冻胚胎比程序化冷冻胚胎能获得更高的 冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率。
卵裂期胚胎与囊胚期胚胎冷冻复苏 移植
临床妊娠率没有统计学差异； 囊胚期胚胎冷冻复苏移植的胚胎种植率优于卵裂期胚胎冷冻 复苏移植，流产率要高于卵裂期胚胎冷冻复苏移植。
Zeng M, Su S, Li L. e: a meta-analysis.J Assist Reprod Genet. 2018, 35(1):127-134.