液相色谱使用方法(花色苷)

一、摘要

⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多,

葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒，且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义

⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫

酸脱色法、色谱法，本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。

⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理，再测定

其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷，标定是否合格以及是否符合国家标准。

二、关键词

⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计

三、正文

引言

花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取，微波是一种频率300～300 000 MHz的电磁波。在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分

被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生，萃取的选择性较差，只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得，同时又受限于溶解能力和扩散系数，效果不够理想；微波因其能对

萃取体系中不同组分进行选择加热，因而能使目标组分直接从基体分离萃取。微

波萃取受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多。另外，微波加热则利用

分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热，避免了传统加热过程因热传导、

热辐射造成的热量损失，加热效率高、升温快速均匀，缩短了萃取时间。具有设

备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等

特点。用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷，用等度及梯

度检测花色苷的存在来判断其营养成分。

⑴、材料及方法

①仪器及试剂

材料：葡萄皮

仪器：超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相

色谱仪

试剂：甲醇、甲酸、水

②实验方法

葡萄皮花色苷提取液的制备

干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液

称取 1g 粉碎过的干葡萄皮，按 1:40（g/mL）的料液比加入酸性乙醇提取液，用超声波清洗器辅助提取。超声波辅助提取条件定为：频率 40KHZ，功率 500W，工作状态 100%。超声波辅助提取 40min 后过滤得到花色苷提取液，用722可见光分光光度计在530nm下测定吸光值，以吸光值为考察指标，确定提取效果。

在提取液乙醇浓度为 60%，提取液 pH 1.0 的条件下，于 30℃、40℃、50℃、

60℃、70℃下提取葡萄皮中的花色苷。以花色苷提取液吸光值为考察指标，研究提取温度对葡萄皮花色苷提取率的影响，选取最适提取温度。

液相色谱的使用方法（等度）

1、打开电脑，打开在线和离线分析软件

2、设置方法“文件”中点击调用方法，设置参数

（1）打开进样器设置进样量20ul

（2）设置泵的流速1ml|min，（溶剂A水B25%甲醇C乙腈D75%酸水）

（3）设置柱温为30摄氏度

（4）打开DAD检测器从不同波长中选三种波长280、250、520为

适合花色苷的波长

4、将方法保存后，打开在线文件，找出保存方法，启动泵。用D酸

水100%排气泡

5、调用方法用流动相冲洗柱子 20-30min

6、点击运行控制，核对样品信息，设置样品瓶位置，点击运行方

法 30-35min

7、待实验完成后，在离线分析中点击“数据分析”找出相应数据进

行积分，点击“积分事件”设定最小峰面积，再次积分，积分后记录

相应数据。

8、点数据分析信号选项复制-开始-程序-附件-写字板,得出

的谱图保存在固定文件夹中。

9、实验结束后用100%甲醇冲洗整个通道。

液相色谱测定花色苷（梯度）

用液相色谱分别检测葡萄酒及葡萄及的中含有的花色苷，在使用方法上与等度的一样，不同之处柱温：30℃、进样量20μL、流动相：B：25%甲醇；D：75%酸水0-20min；B：50%甲醇；D：50%酸水20-40min；B：75%甲醇；D：25%酸水40-60min；流速：1mL/min，关注波长：250nm、280nm、520nm，设置好后，保存方法。

⑵、结果与分析

等度葡萄酒

梯度葡萄汁

梯度葡萄酒

分析：

本次实验我们测定等度与梯度的葡萄皮中含有的花色苷，在时间上稍有一点

的差距，峰面积、峰高等度与梯度的葡萄皮中的花色苷是有一定的差距，等

度中花色苷峰面积有一些不稳定，出现数据大幅度的偏差，然而峰宽等度比

梯度的小，梯度的葡萄酒及葡萄汁相比较，在时间上葡萄酒所用的时间有所

缩小，分离度比较完全。

四、讨论

在本次实验中，葡萄汁的分离度不是太完善，花色苷的存在也不是太多，应

该是跟在提取的过程上出现了小幅度的偏差，或者是又其他的杂质代入，或

者葡萄皮中本身存在难以消除的农药，影响了分离度。葡萄酒中的花色苷比

较多，说明这种葡萄酒是合格葡萄酒，也符合国家标准，可以放心饮用。

五、结论

这次实训有了以前的实训经验，对实训过程不是太无头无序，

整个实训总归来说还算比较合格，学会自我统筹时间以及自我约束能力，制定相应的计划，遵循充分利用好每一天为原则，实施合理的分工，实验进行前明确每一个成员的任务和职责，选出合适的组长带着完成整个实验。每一次的实训对我都是受益匪浅的，不管是从理论基础上还是自我操作上，都能让我得到一定地步的提升，我们重新温习了液相色谱的使用方法，明白离线及在线分析操作过程，删选峰面积已达到自己想要的理想的值，以确保实验的完善。