饲料学课件实验三、四 饲料粗蛋白质测定
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
凯氏定氮仪测定步骤
1.试样的消化 称取0.3~0.4g试样，准确至0.0001g，放入消化管中， 加入催化剂，与试样混合均匀，再加浓硫酸12ml， 将消化管放臵在消化炉上加热，温度420 ℃ （此装臵需 安装在通风橱内），直至溶液呈透明的蓝绿色。将试样 消化液冷却，冷却后加入蒸馏水20ml稀释，摇匀，则为 试样分解液。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理Biblioteka 3. 仪器设备及试剂4. 测定步骤
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法??1、?原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
??2??2.1?—920）—1220）0.5入注入????2.7?蔗糖（HG?3—1001）：分析纯。
????2.8?硫酸铵（GB?1396）：分析纯，干燥。
????2.9?硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1?000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
???3、?仪器设备???3.1?实验室用样品粉碎机或研钵。
????3.2?分样筛：孔径0.45mm（40目）。
???3.3?分析天平：感量0.0001g。
????3.4?消煮炉或电炉。
??3.6???4、?装于密???5?6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将?凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力?（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
????5.1.2?氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。
将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。
蒸汽发生器?的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。
准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口再蒸馏氮量为盐酸标0.3mL。
????粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V）?×100?????式中：V2──?滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；?????V1──?滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；?????c──?盐酸标准溶液浓度，mol/L；?????m──?试样质量，g；?????V──?试样分解液总体积，mL；?????V──?试样分解液蒸馏用体积，mL；?????0.0140──?与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。
饲料中粗蛋白的测定(教学课件)
相当的、以g表示
样品中含氮量用以下的回归方程计算： y=9.2918x-0.2852 式中： x—为DD法测定所得到的含氮量；
y—为样品的实际含氮量。
精品 PPT
双氧水法测定
试剂 • 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 双氧水：分析纯，含量为30%； • 氢氧化钠：双氧水：分析纯，含量为40%（m/v）； • 硼酸：化学纯， 2% 水溶液（m/v）； • 混合指示剂；盐酸标准溶液； • 邻苯二甲酸氢钾法标定液； • C（HCl）=0.1mol/L、 8.3mL 盐酸（分析纯）注入 1000mL
蒸馏水中； • 蔗糖：分析纯； • 硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
精品 PPT
仪器
实验室用样品粉碎机或研钵; 分样筛孔径 0.45mm（40 目）; 分析天平（感量 0.0001g）; 消煮炉或电炉; 10mL、25mL 酸式滴定管；250mL 消化管；150mL ； 250mL 锥形瓶 ；定氮仪（以凯氏原理制造 的各类型半自动蛋白质测定仪）。
精品 PPT
试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
精品 PPT
蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。
•
16、业余生活要有意义，不要越轨。2020年10月18日星期 日8时9分52秒20:09:5218 October 2020
饲料学课件实验三、四 饲料粗蛋白质测定
7. 滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸 标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色 或灰红色时即为滴定终点。
8. 结果计算：
粗蛋白质(%) = (V2－V1 )×N×0.014×6.25 ×100 W×V’/V
蓝色
灰白或灰红色
二、主要仪器
凯氏微量定氮蒸馏仪
凯氏半微量定氮蒸馏仪(改良式)
三、测定步骤
1. 试样的消化： 1)准确称取试样0.5-1gபைடு நூலகம்含N 5-80mg)，无损地放入凯氏
烧瓶或消煮管中； 2)加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钠15g，并与试样混合均
匀；加入浓硫酸25ml(勿混摇)； 3)在消煮炉上先用小火小心加热(约180℃)，待样品焦
化、泡沫消失后，再加强火力360-410℃消化，直至 溶液变澄清(天蓝色)后，再继续加热消化1.5hr-2hr；
4. 先关闭加样口，加入饱和NaOH溶液5~10ml；小心打 开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用 少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；
5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需 补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏4~5min， 然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量 蒸馏水冲洗冷凝管末端。
实验三、(1)饲料粗蛋白质测定(消化)
一、原 理
RCHCOOH+
H2SO4
无水Na2SO4
CuSO4 ∆
(NH4)2SO4
+SO2↑+CO2↑+H2O
NH2
(NH4)2SO4+ NaOH(饱和) ∆ NH3↑+ Na2SO4+ H2O
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
饲料粗蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握饲料粗蛋白测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解饲料粗蛋白含量的重要性及其对动物营养的影响。
二、实验原理饲料粗蛋白是指饲料样品中含氮物质的总量，包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物。
测定饲料粗蛋白含量，可以了解饲料的营养价值，为动物饲料配方提供依据。
凯氏定氮法是测定饲料粗蛋白的常用方法，其原理如下：1. 将饲料样品与浓硫酸、无水碳酸钠混合，加热消化，使蛋白质和氨态氮转化为硫酸铵；2. 消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵；3. 用盐酸标准溶液滴定，求出氨的含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即得出试样中粗蛋白的含量。
三、实验材料1. 饲料样品：玉米粉、豆粕、鱼粉等；2. 试剂：浓硫酸、无水碳酸钠、氢氧化钠、硼酸、盐酸标准溶液、甲基红-溴甲酚绿指示剂等；3. 仪器：凯氏瓶、消化炉、冷凝管、滴定管、分析天平等。
四、实验步骤1. 样品消化（1）称取0.5-1g饲料样品，置于凯氏瓶中；（2）加入0.4g无水硫酸铜、6g无水碳酸钠，与试样混合均匀；（3）加入10ml浓硫酸，摇匀；（4）将凯氏瓶置于消化炉上，加热消化，直至溶液呈透明蓝绿色。
2. 滴定（1）将消化液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容；（2）取25ml消化液于锥形瓶中，加入5ml氢氧化钠溶液、5ml硼酸溶液、1滴甲基红-溴甲酚绿指示剂；（3）用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝绿色变为灰绿色；（4）记录盐酸标准溶液的消耗体积。
3. 计算（1）根据滴定结果，计算氨的物质的量；（2）乘以换算系数（6.25），得出饲料样品中粗蛋白的含量。
五、实验结果与分析1. 实验数据样品名称 | 样品质量（g） | 盐酸标准溶液消耗体积（ml） | 粗蛋白含量（%）------- | -------- | ------------------- | --------玉米粉 | 0.5 | 25.00 | 9.20豆粕 | 0.5 | 30.00 | 38.40鱼粉 | 0.5 | 35.00 | 58.002. 结果分析通过实验，我们得到了玉米粉、豆粕、鱼粉的粗蛋白含量分别为9.20%、38.40%、58.00%。
饲料中粗蛋白质的测定课件(共25张PPT)《畜禽营养与饲料》
单元二 饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
二、测定原理
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破 坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨 逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘 以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
三、所需试剂
1、硫酸（GB 625） 2、混合催化剂 3、氢氧化钠（GB 629） 4、硼酸（GB 628） 5、混合指示剂 6、0.02mol/l盐酸标准溶液 7、蔗糖（HG 3—1001） 8、硫酸铵（GB 1396） 9、硼酸吸收液
六、分析步骤
（1）试样的消毒： 称取试样0.5~1g(含氮量5~80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均 匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360~410℃ ) 直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
取蔗糖 0.5g，代替试样，按以上步骤进行空白测定，消耗 0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过 0.3ml。
（三）分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
混合催化剂氧化钠溶液
蒸馏水
四、仪器设备
电子天平
滴定筒
牧医工程学院精品在线课程
通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶
容量瓶
凯氏烧瓶
洗瓶
刻度吸管
移液管
饲料中粗蛋白测定
• 9 标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02mol/L时(除0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠、 氯化锌标准滴定溶液外),应于临用前将浓度高的标准滴定溶液用煮沸并冷却的水稀释 (不含非水溶剂的标准滴定溶液),必要时重新标定。当需用本标准规定浓度以外的标 准滴定溶液时,可参考本标准中相应标准滴定溶液的制备方法进行配制和标定。 • 10 贮存: • a) 除另有规定外,标准滴定溶液在10℃~30 ℃下,密封保存时间一般不超过6个月;碘 标准滴定溶液、亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]密封保存时间为4个 月;高氯酸标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液、硫酸铁(Ⅲ)铵标准滴定溶液 密封保存时间为2个月。超过保存时间的标准滴定溶液进行复标定后可以继续使用。 • b) 标准滴定溶液在10℃~30℃下,开封使用过的标准滴定溶液保存时间一般不超过2 个月(倾出溶液后立即盖紧);碘标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液一般不超 过1个月;亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]一般不超过15d;高氯酸标准 滴定溶液开封后当天使用。
• NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3
仪器设备：
• 分析天平：感量0.0001g
• 消煮炉或电炉
• 酸式或通用滴定管：25mL，50mL
• 消化管或者凯氏烧瓶：250mL
• 开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式 • 三角瓶：150mL，250mL • 容量瓶：100mL • 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测 定仪。
测定原理：
• ① 样品消化 • ② 氮的蒸馏
浓硫酸的脱水 性与强氧化性
• 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
饲料中粗蛋白质的测定
饲料中粗蛋白质的测定一、目的掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并测定饲料中粗蛋白质的含量。
二、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在还原性催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都变为NH４＋，NH４＋立即被浓H2SO4吸收成为(NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合指示剂作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据不同饲料再乘以一定的换算系数(通常用6.25计算)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：2.(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO43.H3BO３+NH3→NH4H2BO34.NH4H2BO3+HCL→NH4CL+H3BO3三、仪器设备1.实验室用样品粉碎机：40目网筛。
2.分析天平：感量0.0001。
3.电子天平: 感量0.001。
4. 六联电炉: 6×1000W。
5.改良式半微量凯氏定氮仪(图1)。
6.酸式滴定管:25ml。
7.凯氏烧瓶:100ml。
8.烧杯:250ml。
9.三角瓶:150ml。
10.容量瓶:100ml。
11.移液管:10ml。
12.量筒: 10ml 。
13.量筒:25ml。
四、试剂1.浓H2SO4：化学纯,含量为98%，无氮。
2.混合催化剂：CuSO4:Na2SO4=1:10 化学纯。
3.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，阴凉处保存期不超过三个月。
此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。
在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。
4.2%硼酸吸收液：溶2g化学纯硼酸于100ml蒸馏水中，加甲基红—溴甲酚绿混合批示剂0.4ml。
饲料中粗蛋白的测定(精)
饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。
二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。
（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。
（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。
（5）混合指标剂：甲基红%乙醇溶液，溴甲酚绿%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；① L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
② L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
（7）蔗糖：分析纯。
（8）硫酸铵：分析纯，干燥。
（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。
五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。
（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。
（3）分析天平：感量0.0001g。
（4）消煮炉或电炉。
（5）滴定管：酸式，10、25mL。
（6）凯氏烧瓶：250mL。
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。
（8）锥形瓶：150、250mL。
（9）容量瓶：100mL。
（10）消煮管：250mL。
（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
六、分析步骤试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
（1）仲裁法①试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
动物营养学实验
动物营养学实验
袁颖版
目录
第一章饲料营养成分分析
第一节饲料样品的采集与制备
实验一样品的采集
实验二样品的制备
第二节饲料中营养成分的常规分析
实验三饲料中水分的测定
实验四饲料中粗蛋白质的测定
实验五饲料中粗脂肪的测定
实验六饲料中纤维物质的测定
实验七饲料中粗灰分的测定
实验八饲料中无氮浸出物的计算
第三节饲料中部分纯养分的分析
实验九饲料中钙的测定
实验十饲料中总磷的测定
实验十一饲料中水溶性氯化物的测定
实验十二饲料中氨基酸的测定
第四节饲料热能的测定
实验十三饲料总能的测定
第二章畜禽的消化代谢实验
第一节体内消化代谢实验
实验十四饲料中某养分消化率的测定
实验十五饲料中某养分代谢率的测定
实验十六饲料中钙、磷的代谢试验
实验十七瘤胃内饲料营养物质降解率的测定（尼龙袋法）第二节体外消化实验
实验十八饲料中粗蛋白质体外消化率的测定（胃蛋白酶法）第三章畜禽饲养试验设计
实验十九畜禽饲养试验设计
附录1 国际原子量表
附录2 常用酸碱指示剂
附录3 混合酸碱指示剂
附录4 普通酸碱溶液的配制
附录5 容量分析基准物质的干燥条件
附录6 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备
参考文献。
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理 3. 仪器设备及试剂
4. 测定步骤
5. 影响因素分析
适用范围
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
43饲料中粗蛋白的测定知识课件知识讲稿
二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸 作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。
H2SO4＋2NH3 ＝ (NH4)2SO4
2/3/2022
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
1. 原理
② 蒸馏
2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O 2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液 将发生倒吸！
2/3/2022
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第二步 氨的蒸馏
注意事项：
凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪各导 管间的连接处是否密闭，以免产生泄露；
测定样品前应清洗蒸馏装置，即用蒸馏水空蒸一次或数次；
空白试验：取与处 理样品相同量的硫 酸铜，硫酸钾，硫 酸按同一方法作试 剂空白试验。
2/3/2022
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第一步 样品消化
硫酸铜/无水硫酸钾（或无水硫酸钠）的作用？（大家想想！）
（1）K2SO4或Na2SO4的作用：提高溶液的沸点而加快有机物的分解；
K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
何计算出来的？）
2/3/2022
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
5. 方法的评价
✓ 凯氏法的优点是适用范围广，可用于
动植物的各种组织，器官、各种饲料 等成组复杂样品的测定，只要细心操 作都能得到较准确的结果，至今仍被 作为标准检验方法。但此法灵敏度低， 适用于0.2-1.0mg 氮，操作比较复杂， 所需时间长。
4.7饲料中粗蛋白质含量测定 课件(共23张PPT)《动物营养与饲料》同步教学(中国农业出版社)
饲料中粗蛋白质含量测定
1 检测分析依据 2 检测分析原理 3 检测试剂材料 4 检测仪器设备 5 检测分析步骤 6 检测数据处理 7 检测清场工作
规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法
GB/T 6432-2018
适用范围
适用于饲料原料及饲料产品中粗蛋白质 的测定
方法广泛应用于粗蛋白质的检测
试样在催化剂的作用下，经硫酸消解，含氮 化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼 酸吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含 量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量。
硫酸铜的作用
（1）催化作用：加速有机物的氧化分解。 硫酸铜的作用机理如下： C+ 2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4+2Ｈ2SO4 =2CuSO4 +SO2+2H2O
（2）消化终点指示剂：蓝绿色澄清透明 （3）做蒸馏时碱性指示剂
分析纯试剂 水：符合GB/T6682中规定的三级水
粉碎机
0.42mm孔径分析筛
吸量管 移液管
容量瓶
烧杯
1ml 3支
2ml 1支
5ml 2支
10ml 1支
20ml 1支
10ml 大肚移液管 1支
50ml 8个
100ml 2个
1000ml 2个 （透明棕色各一）
50ml 1个 500ml 4个 2000ml 1个
4-2-3饲料中粗蛋白的测定 课件《动物营养与饲料》同步教学(中国农业出版社)
允许相对偏差为≤2%； • 当粗蛋白质含量在10%以下时，允
许相对偏差为≤3%。
*
第五步：结果计算 （3）测定步骤的检验 称取0.2g硫酸铵，准确至0.0001g， 代替试样，按测定步骤进行操作，并 按上述公式计算（不乘系数6.25）， 测得硫酸含氮量为（21.19±0.20） %为合格，否则应检查加碱量、蒸馏 和滴定等步骤是否正确。
自动定氮定仪 蒸馏和自动滴定混合一起，蒸馏和滴 定过程只需3-4分钟，也减少了人为 误差。
第五步：结果计算 （1）计算公式
粗蛋白质%
N%
6.25
V1
V0
C
Wቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
00140 V '
6
25
100
V
粗蛋白质% V1 V0 C 875
W
*
第五步：结果计算 （2）重复性 • 当粗蛋白质的含量在25%以上时，
药品 • 酸性溶液：盐酸1∶1 水溶液；硝
酸；硫酸1∶3水溶液；高氯酸；硼 酸，2g溶于100ml蒸馏水配成2% 溶液。 • 碱性溶液：氨水；草酸铵； • 混合指示剂：甲基红指示剂； 0.05mol/L高锰酸钾标准溶液。
*
第一步：消化
第二步：蒸馏
第三步：滴定
第四步：空白测定
凯氏定氮法 • 实验费用低 • 操作繁琐 • 蒸馏容易倒吸
实验原理 用强酸将试样中的有机物破坏，钙变 成溶于水的离子，用过量草酸铵使 Ca2+全部生成草酸钙沉淀，再以氨 水洗去游离的草酸根，最后用高锰酸 钾滴定与钙结合的草酸根，从而间接 测定钙的含量。
材料与工具 • 实验室用样品粉碎机或研钵 • 分样筛，孔径0.45mm(40目) • 分析天平，感量0.0001g • 瓷坩埚，Φ30mm • 容量瓶，100ml • 玻璃漏斗Φ60mm • 滴定管，酸式，25 ml • 移液管，10ml • 锥形瓶，250ml • 定量滤纸
最新43饲料中粗蛋白的测定
—样品在强碱溶液中消煮，使蛋白质中的不稳定氮素以氨的形式释放出来，在 一定条件下，所释放的氨和样品中的含氮量成正比且有很好的相关性，建立 不稳定氮量与全氮量之间的回归方程。 ～20分钟
➢ 纳氏试剂比色法
10/12/2020 12:22 AM
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
19世纪（1883）建立的经典方法，结果可靠（最常用 的标准方法），凯氏定氮法由于具有测定总有机氮量准 确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被 公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋 白质含量的标准分析方法。
2H2SO4 ＋C ＝2SO2＋ 2H2O ＋CO2
二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸 作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。
H2SO4＋2NH3 ＝ (NH4)2SO4
10/12/2020
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
1. 原理
② 蒸馏
2NaOH＋ (NH4)2SO4＝ 2NH3↓＋ Na2SO4 ＋ 2H2O 2NH3 + 4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起已生 成的铵盐发生热分解而造成损失。
10/12/2020
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第一步 样品消化
硫酸铜/无水硫酸钾（或无水硫酸钠）的作用？（大家想想！）
（2）CuSO4的作用 ① 催化剂，加速氧化分解；
2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑ Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑ 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色）生成，溶 液呈现清澈的蓝绿色。 ② 可以指示消化终点的到达； ③ 下一步蒸馏时作为碱性反应（加入碱量）的指示剂。
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粗蛋白质(%) = (V2－V1 )×N×0.014×6.25 ×100 W×V’/V
实验三、(1)饲料粗蛋白质测定(消化)
一、原 理
RCHCOOH+
H2SO4
无水Na2SO4
CuSO4 ∆
(NH4)2SO4
+SO2↑+CO2↑+H2O
NH2
(NH4)2SO4+ NaOH(饱和) ∆ NH3↑+ Na2SO4+ H2O
NH3↑+ H3BO3
(NH4)2B4O7
(NH4)2B4O7 + HCl (标准) 指示剂 NH4Cl + H3BO3
5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需 补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏4~5min， 然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量 蒸馏水冲洗冷凝管末端。
6. 蒸馏结束，排净反应废液，洗净蒸馏室，开始新的蒸 馏过程。
7. 滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸 标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色 或灰红色时即为滴定终点。
蓝色
灰白或灰红色
4)试样分解液制备：待试样消煮液稍冷却，慢 慢加入蒸馏水25-30ml、混匀，无损地转移至 200或250ml容量瓶中、混匀(勿倒置混)；
5) 待试样液冷却后，加蒸馏水至容量瓶刻度， 充分混匀，即为试样分解液。
实验四、饲料粗蛋白质测定(蒸馏)
1. 凯氏蒸馏仪安装、调试：气密性检查、清洗；蒸汽 发生瓶的蒸馏水中应加入甲基红指示剂数滴和硫酸 数滴，并保持此液为红色；
2. 取2%硼酸溶液20ml放入三角烧瓶，加入混合指示 剂1滴(显淡紫红色)，接至蒸馏仪的冷凝管末端，并 打开蒸气旁路开关；
3. 准确吸取试样分解液10~20ml(视含N量而定)，加入 蒸馏仪反应室中，并用少量蒸馏水冲洗加样口；
4. 先关闭加样口，加入饱和NaOH溶液5~10ml；小心打 开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用 少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；