生物制药综合性实验实验报告
生物制药毕业综合实训报告
一、实训背景与目的随着生物技术的飞速发展,生物制药行业在我国得到了广泛的关注和发展。
为了提升毕业生的实践能力和就业竞争力,我校生物制药专业特开展了毕业综合实训。
本次实训旨在通过实际操作,使学生对生物制药的基本原理、工艺流程和实验技能有更深入的了解,培养学生的创新思维和团队协作精神。
二、实训内容与过程1. 实训内容本次实训主要包括以下几个方面:(1)生物制药基本原理:学习生物制药的基本概念、发展历程、应用领域等。
(2)生物制药工艺流程:了解生物制药的生产工艺、质量控制、设备操作等。
(3)实验技能培训:掌握生物制药实验的基本操作,如细胞培养、发酵、提取、纯化等。
(4)团队协作与沟通:通过分组合作完成实验项目,提高团队协作能力和沟通能力。
2. 实训过程(1)前期准备:实训开始前,学生需完成实训计划、实训报告等准备工作。
(2)理论培训:邀请生物制药行业专家进行理论授课,使学生掌握生物制药的基本知识和技能。
(3)实验操作:在实验室进行生物制药实验,包括细胞培养、发酵、提取、纯化等。
(4)项目实施:分组合作完成实验项目,如生物药物的开发、生产等。
(5)成果展示:各小组进行实验成果展示,分享实验经验,互相学习。
三、实训成果与收获1. 实训成果通过本次实训,学生取得了以下成果:(1)掌握了生物制药的基本原理、工艺流程和实验技能。
(2)提高了团队协作能力和沟通能力。
(3)培养了创新思维和解决问题的能力。
(4)完成了实验项目,积累了实践经验。
2. 实训收获(1)提高了自身综合素质,为就业打下坚实基础。
(2)了解了生物制药行业的发展趋势,明确了职业规划。
(3)结识了志同道合的朋友,拓展了人际关系。
(4)学会了如何将理论知识应用于实践,提高了动手能力。
四、实训总结与反思1. 总结本次生物制药毕业综合实训取得了圆满成功,达到了预期目标。
通过实训,学生不仅掌握了生物制药的基本知识和技能,还提高了综合素质,为今后的学习和工作打下了坚实基础。
制药工程生物实验报告
实验名称:重组人干扰素α2b的表达与纯化实验日期:2023年4月10日实验目的:1. 掌握重组蛋白的表达方法。
2. 学习重组蛋白的纯化技术。
3. 了解生物工程在制药领域的应用。
实验原理:重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的生物活性蛋白。
本实验采用原核表达系统,将rhIFNα2b基因构建到表达载体中,转化大肠杆菌,通过诱导表达、离心分离、离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,实现对rhIFNα2b的纯化。
实验材料:1. 基因组DNA2. 质粒载体3. 大肠杆菌DH5α4. 重组表达载体5. IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)6. 诱导剂(如甘油、葡萄糖等)7. 离心机8. 层析柱9. 超纯水10. 透析袋11. 紫外分光光度计12. 纯化试剂盒实验步骤:1. 基因克隆:将rhIFNα2b基因从基因组DNA中扩增,连接到质粒载体上,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。
2. 表达载体构建:将阳性克隆的质粒提取,进行PCR鉴定,确认目的基因的正确插入。
3. 重组表达菌株的诱导表达:将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆,在含有IPTG的培养基中诱导表达。
4. 离心分离:收集诱导表达后的菌体,离心分离菌体和上清液。
5. 粗蛋白提取:将上清液用硫酸铵进行盐析,收集沉淀,复溶于超纯水中。
6. 离子交换层析:将粗蛋白溶液上样至离子交换层析柱,用不同浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱,收集目标蛋白峰。
7. 凝胶过滤层析:将离子交换层析后的蛋白溶液上样至凝胶过滤层析柱,收集目标蛋白峰。
8. 蛋白纯度鉴定:利用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度计等方法鉴定蛋白纯度。
实验结果:1. 成功构建了rhIFNα2b基因的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达得到目标蛋白。
2. 通过离子交换层析和凝胶过滤层析,成功纯化了rhIFNα2b蛋白,纯度达到95%以上。
生物制药的实习报告
实习报告一、实习背景与目的随着生物技术的飞速发展,生物制药作为一个新兴行业,在我国得到了广泛的关注和快速的发展。
作为一名生物制药专业的学生,为了更好地将理论知识与实践相结合,提高自己的实际操作能力和综合素质,我利用暑假期间,前往某生物制药公司进行了为期一个月的实习。
二、实习时间与地点实习时间:2021年7月1日至2021年7月31日实习地点:某生物制药公司研发部三、实习单位与指导老师实习单位:某生物制药公司指导老师:张博士四、实习内容在实习期间,我主要参与了以下几个方面的内容:1. 文献查阅:通过查阅相关文献,了解生物制药领域的最新研究动态和发展趋势,为后续实验提供理论支持。
2. 实验操作:在指导下,参与实验室的日常实验操作,包括细胞培养、酶联免疫吸附实验(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)等,熟悉各种实验仪器的使用方法和操作技巧。
3. 数据分析:对实验数据进行整理和分析,运用统计学方法对实验结果进行验证,确保实验数据的准确性。
4. 团队协作:与实验室的其他成员共同完成实验项目,提高团队协作能力和沟通技巧。
五、实习总结与体会1. 实习使我深刻认识到理论知识与实践操作的重要性。
在实习过程中,我将所学的生物制药知识运用到实际操作中,不仅提高了自己的实践能力,也对理论知识有了更深刻的理解。
2. 实习让我体验到了生物制药行业的魅力。
通过参与实验,我见证了生物制药技术在疾病诊断、治疗和预防等方面的重要作用,对未来的职业发展充满信心。
3. 实习过程中的团队协作,使我更加懂得如何与人沟通、协作。
这对于我今后在职场中的人际交往和团队协作具有重要意义。
4. 实习使我认识到自身的不足,激发了我继续学习的动力。
在实践中,我发现自己在专业知识和技能方面还有很多不足,需要继续努力提高。
六、致谢感谢某生物制药公司为我提供这次宝贵的实习机会,让我在实践中学习和成长。
同时,感谢实习期间张博士的悉心指导,使我受益匪浅。
在今后的工作中,我将继续努力,为生物制药行业的发展贡献自己的力量。
生物制药专业实训报告
一、实训背景随着我国生物制药行业的快速发展,生物制药专业人才需求日益增长。
为了提高学生的实践能力和专业技能,我校生物制药专业组织了一次为期两周的实训活动。
本次实训旨在让学生深入了解生物制药行业现状,掌握生物制药生产过程中的关键技术,为将来从事生物制药相关工作打下坚实基础。
二、实训内容1. 实训单位介绍本次实训我们选择了我国一家知名生物制药企业——XX生物制药有限公司。
该公司成立于2005年,主要从事生物制品的研发、生产和销售,拥有完善的生产线和先进的技术设备。
2. 实训项目(1)参观生产车间在实训期间,我们参观了XX生物制药有限公司的生产车间,了解了生产流程、设备运行情况以及生产环境。
通过实地观察,我们对生物制药生产过程有了直观的认识。
(2)学习生物制药关键技术在实训过程中,我们学习了生物制药关键技术,包括细胞培养、发酵工程、生物分离纯化、生物制品检测等。
通过实际操作,我们掌握了相关技术的基本原理和操作方法。
(3)微生物实验室实训在微生物实验室,我们学习了微生物的分离、纯化、鉴定和培养技术。
通过实验,我们了解了微生物在生物制药中的应用,以及如何进行微生物质量控制。
(4)药品生产过程模拟为了让学生更加深入地了解药品生产过程,我们进行了药品生产过程模拟实训。
通过模拟实际生产过程,我们掌握了生产过程中的关键环节和注意事项。
三、实训收获1. 提高了实践能力通过本次实训,我们掌握了生物制药生产过程中的关键技术,提高了自己的实践能力。
在实际操作中,我们学会了如何运用所学知识解决实际问题。
2. 拓宽了知识面在实训过程中,我们接触到了许多生物制药领域的最新技术和发展动态,拓宽了知识面。
3. 增强了团队协作能力在实训过程中,我们与同学们共同完成各项任务,培养了团队协作精神。
4. 增进了对生物制药行业的了解通过参观企业、学习关键技术,我们对生物制药行业有了更深入的了解,为将来从事相关工作打下了基础。
四、实训总结本次生物制药专业实训活动取得了圆满成功。
生物制药实习报告(优秀范文五篇)
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第一篇:药厂实习报告一、药业企业概况;始建于20XX年,通化药业股份有限公司前身系通化白山制药八厂,厂区座落在风景秀丽、群山环抱的长白山脚下―省通化县黎明工业园区。
公司占地面积5万平方米,建筑面积2万平方米拥有中药前处理提取、片剂、胶囊剂、颗粒剂等等四条生产线和设施齐全、仪器先进的质量检验中心。
其中专业技术人员128人,公司现有员工560人。
具有中级以上各类专业技术职称人员占职工总数比例30%药业现已成为集科研、开发、生产、销售于一体的现代化制药企业。
相关领域深入研究、专业创新、专业服务经营理念:集中所有资源。
二、实习任务然后被调换到化验室,刚刚开始是生产车间。
主要学习如何鉴别药品,检验药品的合格与否,以及微生物限度检查。
三、实习内容1.制备硅胶板。
将一份固定相和三份水在研钵中研磨混匀,倒入涂布器上,玻璃板上平稳的移动涂布器进行涂布,晒干,105%活化30分钟,备用。
2.使用崩解仪测定药品的崩解时限。
电子天平等。
3.测定药品的干燥失重称取药品1克。
置于称量瓶中,105摄氏度干燥至恒重,减失的重量不得超过10%.4.微生物限度检察1)对所有器具进行消毒。
将吸管,平皿用牛皮纸包好,165摄氏度,高温灭菌4小时,取出,备用。
2)制备供试样ph7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
取磷酸氢二钾,磷酸氢二钠,氯化钠,蛋白胨,液体样需90毫升固体样需100毫升。
培养基,营养琼脂培养基,虎红琼脂培养基,每个平皿约放入15毫升。
当配置完成后,将其放入灭菌器中,进行灭菌,121摄氏度,15分钟。
放入冰箱中,冷冻保存。
3)做实验之前。
应用苏尔消毒液对操作台进行消毒,通风,紫外灭菌用洗手液洗手后,将所需物品通过传递窗放进菌检室,进行实验,操作时要穿洁净服,戴口罩及手套,每个样品至少制备两个平皿以上。
生物制药实习报告范文2篇
生物制药实习报告范文生物制药实习报告范文精选2篇(一)标题:生物制药实习报告一、实习单位概况我所在的实习单位是一家生物制药公司,专注于研发和生产生物药品。
公司位于市中心的高科技园区,占地面积约5000平方米,拥有现代化的研发实验室、生产车间和质量检验中心。
二、实习目的和任务我参加这次实习的主要目的是了解生物制药行业的运作方式,熟悉生物药品的生产流程,并运用所学知识进行实践操作。
在实习期间,我承担了以下任务:1. 参与药品生产过程中的核心环节,如菌种培养、发酵、纯化等;2. 负责执行质量控制测试,确保药品符合规定的质量标准;3. 参与研发项目的实验设计和数据分析,为新药的开发做出贡献;4. 学习并掌握生物制药相关的实验技术和设备操作。
三、实习经历和收获在实习期间,我主要参与了一项新药研发项目的实验工作。
通过在实验室中进行菌种培养、发酵和纯化等环节,我逐渐熟悉了生物制药的生产流程,并了解了每个环节的重要性和操作技巧。
同时,我也学习了许多生物制药的相关知识,如药品的工艺流程、质量控制标准、生物反应器的操作原理等。
通过与实验室的研发人员和技术人员的交流,我不仅加深了对知识的理解,还掌握了一些实用的实验技术和数据分析方法。
通过实习,我还意识到了生物制药行业的挑战和机遇。
生物制药技术的不断发展,为新药的研发和生产提供了更多的可能性,但也带来了更高的要求和风险。
在未来的工作中,我将更加注重实践能力和创新思维的培养,努力为生物制药行业的发展做出贡献。
四、实习总结和建议通过这次实习,我收获了许多宝贵的经验和知识,对生物制药行业有了更深入的了解。
同时,我也发现了自己在实践能力、团队合作和创新思维方面的不足之处,需要进一步提升。
针对这些问题,我提出以下建议:1. 加强实践能力的培养:通过更多的实验操作和项目参与,提高自己的实践能力和解决问题的能力。
2. 多参与团队合作:在实习期间,我发现团队合作对于解决问题和推动项目的进展非常重要。
生物制药实习报告
生物制药实习报告实习目的本次实习的目的是让我们了解和掌握基本的生物制药生产方法,学习实验操作技能以及正确使用相关仪器设备的方法和注意事项。
实习内容1. 培养微生物我们首先需要培养出我们需要的微生物。
首先,要准备好培养基,选用适合微生物生长的基质,并给予适宜的温度和气氛。
我与同组同学负责培养大肠杆菌。
我们首先按照配方将培养基制作好后,使用无菌技术将培养基装到培养皿中。
目的是避免细菌的污染。
接下来,我们将微生物接种到培养皿里,并将培养皿置于恒温培养箱内,控制温度和气氛使其生长。
2. 粗提材料制备粗提材料制备是整个生物制药生产过程中至关重要的一步。
我们需要通过对微生物的培养,并进行后续处理得到目标生物分子的混合液体,即粗提材料。
我的小组负责大肠杆菌的培养和粗提材料的制备。
在得到足够量的菌体后,我们使用离心机将培养液离心。
通过离心的方式使菌体集中在一起。
接下来,我们将离心分离出的细菌在蠕动的匀浆器内不断打破,使细胞内部的目标分子释放出来。
这样处理后,我们得到了粗提材料。
3. 粗提材料的纯化为了得到高纯度的目标分子,我们需要对粗提材料进行纯化。
纯化的原理是根据生物分子的特性,分离出我们需要的目标物。
我们的组负责的是进一步的纯化。
我们使用了层析技术,将粗提材料加入到指定的层析柱中,并通过电泳等手段,使其物质在层析柱中发生分离。
最后,我们得到了较高纯度的目标生物分子。
4. 生物药物制剂的研究生物药物制剂的研究是针对我们得到的高纯度的目标分子进行的。
我们要对目标分子进行进一步的研究,以制定出合适的剂量和制剂方式。
我的组负责的是研究大肠杆菌所产生的胰岛素类生物药物制剂。
我们的主要任务是根据制剂要求,设计出不同的制剂,并进行对比实验,确定制剂方式和适宜的剂量。
实习体会在这次实习中,我学习了生物制药生产的基本流程和技巧,了解了生物药物制剂的研究过程。
同时,我也深刻体会到,生物制药的生产过程需要高度的精细和耐心,并且需要更高的无菌实验技能,更严格的信息管理技巧,每一个环节都需要严格、细致的操作和态度。
生物制药综合性实验实验报告
广东药学院基因工程(跨课程)综合性实验论文姓名班级学号指导教师广东药学院生命科学与生物制药学院生物制药研究所目录摘要 (2)前言 (3)一、材料与方法 (3)1.1 材料 (3)1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3)1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3)1.2 方法 (4)1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4)1.2.1.1 工程菌构建(已由老师完成) (4)1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6)1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8)1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8)1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8)1.2.1.6 表达进程分析 (9)1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9)1.2.1.8 发酵工艺(观摩) (9)1.2.2 重组DNA药物单元 (9)1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9)1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10)1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11)1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12)二、结果与讨论 (12)2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12)2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12)2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14)2.1.3表达影响因素试验 (15)2.1.4 表达进程试验 (16)2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18)2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18)2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19)2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20)2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20)2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21)2.2.6 TCR转染体内试验 (23)三、小结 (25)致谢 (25)摘要:本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。
重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例,全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。
生物制药工艺实验报告单
实验名称:生物制药工艺实验实验日期: 2023年X月X日实验地点:生物制药实验室实验指导老师: [老师姓名]实验学生: [学生姓名]一、实验目的1. 了解生物制药的基本工艺流程。
2. 掌握微生物发酵的基本操作技术。
3. 学习生物反应器的基本原理及操作方法。
4. 熟悉生物制药产品的纯化与分离技术。
二、实验原理生物制药是利用生物技术手段,从生物体中提取、分离、纯化和改造具有生物活性的物质,用于预防和治疗疾病的药物。
生物制药工艺主要包括微生物发酵、生物反应器、纯化与分离等步骤。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 菌种:大肠杆菌- 培养基:LB培养基- 药品:葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等- 试管、烧杯、锥形瓶、培养皿等2. 实验仪器:- 生物反应器:发酵罐- 分光光度计- 超速离心机- 薄层色谱仪- 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 菌种培养:- 将大肠杆菌接种于LB培养基中,37℃培养过夜。
- 取适量培养液,按1:100的比例转接至新的LB培养基中,37℃培养4-6小时。
2. 发酵:- 将菌种培养液按1:100的比例接种于发酵罐中,加入葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等营养物质。
- 调节pH值至7.0,设置发酵温度为37℃,通气量为1L/min。
- 发酵过程中,每隔一定时间取样,测定菌体浓度、产物浓度等指标。
3. 产物分离与纯化:- 将发酵液离心分离,收集上清液。
- 使用薄层色谱法对上清液进行初步分离。
- 对分离得到的产物进行紫外-可见分光光度测定,确定其纯度。
4. 产物鉴定:- 使用紫外-可见分光光度计测定产物的最大吸收波长。
- 将产物与标准品进行比对,确定其结构。
五、实验结果与分析1. 菌体浓度:在发酵过程中,菌体浓度逐渐增加,发酵4小时后达到最大值,随后逐渐下降。
2. 产物浓度:在发酵过程中,产物浓度逐渐增加,发酵4小时后达到最大值,随后逐渐下降。
3. 产物纯度:通过薄层色谱法初步分离产物,发现产物斑点较纯,纯度较高。
生物制药实习报告模板
生物制药实习报告模板一、实习背景此次实习是我在大学期间的一次实习,实习地点为某生物制药公司,实习时间为两个月。
二、实习目的此次实习目的有以下几点:1.了解生物制药工厂的生产流程及相关法规要求。
2.学习并掌握生物制药生产设备的使用和维护。
3.观察和学习各生产环节中质量控制及安全管理措施。
4.掌握实验室中基础生物技术操作技能。
三、实习内容3.1 了解生产流程及相关法规要求进入生产车间后,我对整个生产流程进行了详细的了解,包括培养基的制备、细胞的培养、发酵、提纯、灭菌等环节。
同时,公司要求每个员工必须遵守公司相关的GMP、SOP等法规要求,以确保产品的质量与安全。
3.2 学习并掌握生物制药生产设备的使用和维护在生产流程中,我学习了如何正确使用细胞培养箱、发酵罐、洗瓶机、填充机等生产设备,并了解了各项设备的日常维护保养内容。
3.3 观察和学习各生产环节中质量控制及安全管理措施质量和安全是生物制药工厂极为重要的管理要素。
我在实习中参与了生产过程中的质量控制及安全管理工作,并对严格的质量控制流程和安全管理措施有了深入的了解。
3.4 掌握实验室中基础生物技术操作技能实验室中是生物制药产品研发的重要环节。
在实习期间,我参与了基础生物技术实验,如PCR、电泳、细胞培养等,掌握了实验室中基础生物技术的操作技能。
四、实习体会这次实习让我深刻认识到,生物制药工艺复杂,产出的产品非常精细,对生产环节的每一步操作都要求严谨、规范,生产流程的每一环节都涉及到严格的规章制度。
同时,生物制药工艺的不断创新,也为行业发展带来了新的机遇和挑战。
此次实习对我的职业发展及个人成长都有重要的促进作用。
我对生物制药产业的深入了解,有助于我今后对这一领域的职业发展有更加清晰的规划。
通过参与实习中的操作和项目,我逐渐养成了细致、认真、负责任的工作态度。
五、总结通过这次实习,我深刻认识到生物制药行业对员工的专业要求非常高,对每一个细节都要求精益求精,这也使我更加珍惜所学的知识和技能。
生物制药实训报告万能
一、实训目的通过本次生物制药实训,旨在使我对生物制药的基本原理、工艺流程以及相关设备有更深入的了解,提高实际操作能力,培养严谨的科学态度和团队协作精神。
二、实训环境实训地点:生物制药实验室实训设备:发酵罐、离心机、层析柱、培养箱、显微镜等实训材料:微生物菌种、培养基、生物制品原料等三、实训原理生物制药是指利用生物技术手段,从生物体中提取或合成具有生物活性的物质,用于治疗、预防和诊断疾病的药物。
本次实训主要涉及微生物发酵、提取和纯化等工艺。
四、实训过程1. 微生物发酵(1)接种:将微生物菌种接种到培养基中,培养至对数生长期。
(2)发酵:将培养好的菌种转移到发酵罐中,控制适宜的温度、pH、溶解氧等条件,使菌种大量繁殖。
(3)产物的提取:发酵结束后,通过离心、过滤等手段将产物从菌体中分离出来。
2. 提取(1)溶剂选择:根据目标产物的性质,选择合适的溶剂进行提取。
(2)提取方法:采用萃取、渗滤、吸附等方法进行提取。
3. 纯化(1)层析:采用柱层析、薄层层析等方法对提取物进行初步纯化。
(2)结晶:通过改变溶剂、温度等条件,使目标产物结晶析出。
4. 质量检测对纯化后的生物制品进行理化性质、生物活性、安全性等方面的检测,确保产品质量。
五、实训结果通过本次实训,我掌握了以下知识和技能:1. 生物制药的基本原理和工艺流程。
2. 微生物发酵、提取和纯化等操作方法。
3. 生物制品的质量检测方法。
4. 团队协作和沟通能力。
六、实训总结1. 在实训过程中,我深刻体会到生物制药的严谨性和复杂性,对生物制药产生了浓厚的兴趣。
2. 通过实际操作,我掌握了生物制药的基本技能,为今后的学习和工作打下了基础。
3. 在实训过程中,我学会了与团队成员密切配合,共同完成实验任务,提高了团队协作能力。
4. 针对实训过程中遇到的问题,我积极向老师请教,学会了如何解决实际问题。
七、改进建议1. 增加实训设备的种类和数量,提高实训效果。
2. 加强实训指导,提高学生的实际操作能力。
2023年生物制药专业实践报告
2023年生物制药专业实践报告生物制药是一种利用细胞工程技术、蛋白质工程技术及生物反应器技术等手段,以生命科学为基础,从微生物、真菌、植物、动物等生物制剂中开发,生产出多种可治疗多种疾病的药品的一种制药方式。
本文以实践的方式来介绍生物制药的相关技术和应用。
一、实验目的1.了解生物药物和生物制药学的基本概念和理论知识;2.掌握蛋白质的提取、浓缩和分离技术;3.掌握不同类型的柱色谱技术;4.学习药品质量标准及相关法规;5.体验生物制药的应用。
二、实验原理1.蛋白质的提取、浓缩和分离技术:蛋白质在提取、浓缩和分离时,根据不同的性质和用途,可以选择不同的方法。
蛋白质的提取可选择以下方法:离心、超声波处理、非离子性清洗剂等。
浓缩方面可以选择透析或浓缩法,具体包括沙漏、阴离子或阳离子交换柱、凝胶和透析操作等。
分离方面包括离子交换、逆流色谱、凝胶过滤、亲和层析等。
2.柱色谱技术:柱色谱是一种分离和纯化蛋白质的有效技术,基于物质与介质之间的互作用(包括离子交换、亲和性、大小等作用)。
柱色谱由包括色谱柱、介质、洗脱剂等组成。
根据不同的分离原理,分别选择离子交换柱、氢氧化铝柱、凝胶过滤柱和亲和柱。
3.药品质量标准及相关法规:药品质量标准是衡量药品质量的重要指标,制药企业应密切关注并严格遵守相关法规和标准,包括中华人民共和国药典、药监局要求、FDA要求等。
三、实验步骤1.蛋白质的提取、浓缩和分离:1)样品准备:准备充足样品并放入离心管中;2)离心:离心后将液体拍打到离心管壁,并保留上清液;3)蛋白质定量:通过吸光度法或蛋白质试剂盒定量蛋白质;4)沙漏法浓缩:用于样品蛋白质含量较低时;5)离子交换层析柱分离:将适量的样品应用到离子交换层析柱,在适当pH和盐浓度条件下,蛋白质可以被分离和纯化。
2.柱色谱技术:1)酸碱度分布法(离子交换法):通过酸碱度不同而分离的分离技术;2)亲和性:根据不同的化学性质通过分离技术,如亲和氧化还原、亲和滤膜/颗粒、亲和性融合、亲和性离析等。
实践报告生物制药技术(2篇)
第1篇一、前言随着生物科学的飞速发展,生物制药技术已成为当今医药领域的研究热点。
生物制药技术是指利用生物技术手段,从生物体中提取、分离、纯化生物活性物质,进而用于治疗疾病的过程。
本次实践报告将针对生物制药技术进行探讨,分析其原理、应用和发展趋势。
二、生物制药技术的原理1. 基因工程基因工程是生物制药技术的基础,通过对生物体基因进行改造,实现目的蛋白的表达。
基因工程主要包括以下步骤:(1)目的基因的获取:从生物体中提取目的基因,或通过化学合成方法制备。
(2)基因克隆:将目的基因插入载体,构建重组质粒。
(3)转化:将重组质粒导入宿主细胞,实现目的蛋白的表达。
2. 细胞培养细胞培养是生物制药技术中的重要环节,主要包括以下步骤:(1)细胞分离:从生物体中分离出所需的细胞。
(2)细胞培养:在适宜的培养条件下,使细胞生长、繁殖。
(3)细胞纯化:通过筛选、分离等手段,获得高纯度的细胞。
3. 蛋白质工程蛋白质工程是通过改造蛋白质的氨基酸序列,提高蛋白质的活性、稳定性等性能。
蛋白质工程主要包括以下步骤:(1)蛋白质结构分析:研究蛋白质的三维结构,了解其功能。
(2)氨基酸序列改造:根据蛋白质结构,设计改造方案。
(3)蛋白质表达与纯化:表达改造后的蛋白质,进行纯化。
4. 分子标记技术分子标记技术是生物制药技术中的重要手段,通过检测生物体中的特定基因或蛋白质,实现对生物体的鉴定、分类等。
分子标记技术主要包括以下方法:(1)PCR技术:通过扩增目的基因,实现对生物体的鉴定。
(2)测序技术:对生物体的基因进行测序,了解其遗传信息。
(3)蛋白质组学:分析生物体中蛋白质的种类、数量等,了解其功能。
三、生物制药技术的应用1. 疫苗研发利用生物制药技术,可以制备各种疫苗,如乙肝疫苗、流感疫苗等。
疫苗的研发过程主要包括:(1)抗原筛选:从病原体中筛选出具有免疫原性的抗原。
(2)抗原表达:通过基因工程等方法,表达抗原蛋白。
(3)疫苗制备:将抗原蛋白与佐剂等物质混合,制备疫苗。
生物技术制药综合实验报告
生物技术制药实验报告人表皮生长因子(hEGF)在大肠杆菌中的表达与纯化生物与制药工程学院罗飞2016年7月2日目录第一节引言 (4)1.1表皮生长因子(EGF)概述 (4)1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质 (4)1.3 EGF的生物学效应及应用 (5)1.4 本实验课程设计的目的与内容 (6)第二节EGF基因的合成与转化表达 (7)2.1.实验原理 (7)2.2实验材料与方法 (8)2.2.1 试剂材料及试剂 (8)2.2.2 仪器设备 (8)2.3 实验方法 (9)2.3.1 试剂及培养基配制方法 (9)第三节、实验前的准备 (9)3.1目的基因hEGF的设计与合成 (9)3.2载体选择 (11)3.2.1载体选择主要考虑下述3点: (11)3.3酶切位点设计 (12)3.3.1载体的结构 (12)3.2.2酶切位点设计注意以下 (13)3.2.3 酶切位点的确定 (13)3.3 引物设计 (14)3.3.1 PCR引物设计的基本原则 (14)3.3.2 引物设计 (15)第四节、实验篇 (16)4.1整体实验过程 (16)4.1.1实验整体流程: (16)4.1.2 简化后的并行流程 (16)4.2、小组结果展示 (17)4.2.1大肠杆菌转化实验结果 (17)4.2.2 XL10质粒电泳结果显示 (18)4.2.3 单酶切实验结果显示 (18)4.2.4 PCR结果显示 (19)4.2.5 SDS-page 电泳结果展示 (20)4.3、个人负责实验模块 (20)4.3.1 提取重组质粒 (20)4.3.2 电泳检测质粒DNA (21)4.3.3 双酶切并检测 (21)4.3.4 EGF基因的PCR扩增验证 (21)五、小组讨论篇 (23)5.1 质粒电泳检测讨论 (23)5.2 酶切条件讨论 (24)5.3 PCR体系的讨论 (26)5.4 SDS-page电泳讨论 (28)六、实验总结 (29)6.1 理论与技能收获 (29)6.1.1理论收获 (29)6.1.2 实验技能的收获 (30)6.2 科学兴趣的向往 (31)第一节引言1.1表皮生长因子(EGF)概述生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用,它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合,参与细胞的各种生命活动。
生物制药实习报告
生物制药实习报告一、实习背景作为一名生物技术专业的学生,我一直对生物制药领域充满兴趣。
在大三的暑假,我通过学校安排的实习项目,获得了一次难得的生物制药实习机会。
实习期间,我所在的实验室主要研究方向为重组蛋白药物的开发与制备。
通过这次实习,我对生物制药的原理、流程和技术有了更深入的了解。
二、实习内容1. 熟悉实验室设备和操作流程在实习初期,导师带领我参观了实验室,并对实验室的各种设备和仪器进行了介绍。
我了解到,生物制药实验室主要包括发酵室、细胞培养室、纯化室和分析室等。
在导师的指导下,我学会了使用这些设备和仪器,并熟悉了相关的操作流程。
2. 参与重组蛋白的表达与纯化在实习过程中,我参与了重组蛋白的表达与纯化工作。
首先,我学会了如何设计引物、构建表达载体,并将目的基因插入到质粒中。
随后,我将重组质粒转化到大肠杆菌中,通过发酵培养获得大量的菌体。
接下来,我学会了如何对菌体进行超声破碎,释放出重组蛋白。
最后,我参与了重组蛋白的纯化工作,使用了凝胶过滤、离子交换和亲和层析等方法,最终获得了高纯度的重组蛋白。
3. 参与细胞培养和转染实验除了重组蛋白的表达与纯化,我还参与了细胞培养和转染实验。
在细胞培养室,我学会了如何培养细胞、换液、传代等基本操作。
在转染实验中,我学会了如何将目的基因导入到细胞中,并使用了脂质体、电穿孔等方法。
通过这些实验,我了解了细胞生物学的基本原理,并为后续的药物研发奠定了基础。
4. 参与药物筛选与评价在实习后期,我参与了药物筛选与评价工作。
我学会了如何设计药物筛选实验,并使用了不同的筛选方法,如酶活性抑制实验、细胞增殖抑制实验等。
在评价药物的安全性时,我了解了动物体内外实验的基本原理和方法,并参与了药物毒理学实验。
这些实验让我对药物研发有了更全面的了解。
三、实习收获通过这次生物制药实习,我收获颇丰。
首先,我掌握了生物制药的基本原理和流程,为今后的学术研究和就业方向奠定了基础。
其次,我在实验操作方面取得了很大进步,学会了使用各种设备和仪器,并提高了自己的动手能力。
生物制药检测实训总结报告
一、引言随着生物技术的快速发展,生物制药已成为医药领域的重要分支。
为了提高生物制药产品的质量和安全性,生物制药检测技术显得尤为重要。
本次实训旨在通过一系列的实操训练,使学生掌握生物制药检测的基本原理、方法和技能,为今后的工作打下坚实基础。
以下是本次实训的总结报告。
二、实训内容1. 实训一:生物制药无菌检测实训目的:掌握无菌检测的基本原理和方法,确保生物制药产品的无菌性。
实训内容:(1)无菌检测原理:通过在适宜的培养基上接种待测样品,观察是否有菌落生长,从而判断样品是否无菌。
(2)实训操作:学习无菌操作技术,包括无菌操作环境的准备、无菌物品的灭菌、无菌接种等。
(3)实训结果:通过对不同生物制药样品的无菌检测,验证实训效果。
2. 实训二:生物制药含量测定实训目的:掌握生物制药含量测定的基本原理和方法,确保产品质量。
实训内容:(1)含量测定原理:学习紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法等常用含量测定方法。
(2)实训操作:学习样品前处理、仪器操作、数据采集与分析等。
(3)实训结果:通过对生物制药样品的含量测定,验证实训效果。
3. 实训三:生物制药纯度检测实训目的:掌握生物制药纯度检测的基本原理和方法,确保产品质量。
实训内容:(1)纯度检测原理:学习高效液相色谱法、薄层色谱法等常用纯度检测方法。
(2)实训操作:学习样品前处理、色谱柱选择、数据分析等。
(3)实训结果:通过对生物制药样品的纯度检测,验证实训效果。
4. 实训四:生物制药稳定性检测实训目的:掌握生物制药稳定性检测的基本原理和方法,确保产品质量。
实训内容:(1)稳定性检测原理:学习加速试验、长期试验等稳定性检测方法。
(2)实训操作:学习样品制备、实验条件控制、数据采集与分析等。
(3)实训结果:通过对生物制药样品的稳定性检测,验证实训效果。
三、实训总结1. 实训成果通过本次实训,学生们掌握了生物制药检测的基本原理、方法和技能,为今后的工作打下了坚实基础。
生物制药实习报告2600字
生物制药实习报告2600字通过制药厂实习,我充分的运用学校中所学习的知识,提高了自身的技能,刚刚毕业的学生与在岗就业许多年的老职员相比,无论是在技能上,还是在经验上都远远逊色于他们,我认为,书本上的知识固然重要,但学校应该让学生多接触一些实践。
下面是小编为大家整理的几篇生物制药实习报告范文,希望对大家有所帮助,仅供参考!生物制药实习报告1本人是届__学院的毕业生,专业是生物科学,大学里主要学习了生物学和教育学相关的知识,自己对心理学也很感兴趣,对书法和一些球类都很着迷,自身条件方面觉得自己很有耐心,办事也很细心。
自从在中学实习当教师之后,对教师这个职业乃至教育都有了更深层次的理解,我觉得当老师最为重要莫过于一颗爱心了。
一年的实习期马上就要结束了,通过一年的工作和学习,本人积累了丰富的经验,为不断提升自己的专业技能,打下了夯实的基础。
通过向同事们请教学习,通过和学生逐步深入的接触,不断的体会到从事教育工作的重要意义,以一颗热爱教育事业的心,把自己的激情倾注于光荣的教育事业。
在这个过程当中,本人不断的提高自己的职业修养,加强自身的师德建设,树立起良好的教师的形象,通过自己的言谈举止,在潜移默化当中,让自己的学生受到教育,让学生懂得自己的责任。
不但要提高师德的水平,同时还要让自己的职业道德在教育工作中发挥重要的作用,用自身的道德水平去影响学生。
同时在和学生的接触过程中,不断的反思自己工作的得失,注意发现自身存在的不足,针对自己的这些缺点,不断的加强自己的职业道德修养,提高自身素质水平,在将来的工作中,取得更加优异的成绩。
在工作中,本人积极的和同事交流,充分利用自己的时间多去听经验丰富的老教师的课,在听课中不断的向老教师学习请教,提高自身的素养,把教学理论在实际中灵活应用,不断的在工作中积累经验。
在这一年的工作当中,和同学的感情是越来越深,工作开展的也是非常顺利,同时在各项活动中取得了不菲的成绩,这是和同学们的努力和其他老师的大力支持和帮助是分不开的。
生物制药大实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解生物制药的基本原理和实验流程。
2. 掌握生物制药过程中常用设备和仪器的操作方法。
3. 通过实验,了解蛋白质工程、基因工程和细胞培养等生物制药技术。
4. 学习生物制药产品的制备、纯化和检测方法。
二、实验原理生物制药是利用生物技术手段,从生物体或生物体细胞中提取、制备具有药理活性的物质,或通过基因工程、蛋白质工程等方法生产新型药物。
本实验主要涉及以下几个方面:1. 蛋白质工程:通过基因修饰或蛋白质改造,提高蛋白质的活性、稳定性或选择性。
2. 基因工程:利用分子生物学技术,将目的基因导入宿主细胞,使其表达具有特定功能的蛋白质。
3. 细胞培养:在无菌条件下,利用培养基和生物反应器培养细胞,为生物制药提供原材料。
4. 生物制药产品的制备、纯化和检测:通过生物反应器、离心、层析、电泳等手段,制备、纯化和检测生物制药产品。
三、实验材料与仪器1. 材料:重组蛋白表达菌株、质粒、培养基、生物反应器、细胞、酶、指示剂等。
2. 仪器:离心机、层析柱、电泳仪、生物反应器、显微镜、分光光度计等。
四、实验步骤1. 重组蛋白表达:将目的基因克隆到表达载体中,转化宿主细胞,培养表达菌株,提取重组蛋白。
2. 细胞培养:在生物反应器中培养细胞,进行细胞扩增和诱导表达。
3. 生物制药产品的制备:利用生物反应器生产生物制药产品。
4. 生物制药产品的纯化:通过层析、电泳等方法,对生物制药产品进行纯化。
5. 生物制药产品的检测:利用分光光度计、质谱等仪器,对生物制药产品进行检测。
五、实验结果与分析1. 重组蛋白表达:实验成功获得了重组蛋白,其表达水平与对照菌株相比显著提高。
2. 细胞培养:细胞生长良好,生物反应器中细胞密度达到预期水平。
3. 生物制药产品的制备:生物反应器中成功制备了生物制药产品。
4. 生物制药产品的纯化:通过层析、电泳等方法,纯化了生物制药产品,纯度达到预期要求。
5. 生物制药产品的检测:生物制药产品的活性、纯度和质量符合要求。
生物制药专业实习实训报告
一、实习背景随着生物科技产业的快速发展,生物制药专业人才需求日益增长。
为了提高我们的实践能力和综合素质,学校安排了为期一个月的生物制药专业实习实训。
本次实习实训旨在让我们深入了解生物制药行业,掌握生物制药的基本工艺流程,提高我们的动手操作能力和团队协作精神。
二、实习单位及时间实习单位:XX生物制药有限公司实习时间:2023年3月1日至2023年3月31日三、实习内容1. 参观企业及了解企业文化实习初期,我们参观了XX生物制药有限公司的生产车间、研发中心、质检中心等部门,了解了企业的生产规模、产品线、研发实力以及企业文化。
通过参观,我们对生物制药行业有了初步的认识。
2. 学习生物制药基本工艺流程在实习过程中,我们重点学习了生物制药的基本工艺流程,包括原料处理、发酵、提取、纯化、制剂等环节。
通过实地操作,我们掌握了发酵罐、提取设备、纯化柱等常用设备的操作方法。
3. 参与实验室研究项目在实习期间,我们参与了实验室的一个研究项目,负责进行细胞培养、基因工程菌构建、发酵条件优化等工作。
通过实际操作,我们提高了实验技能,加深了对生物制药相关理论知识的理解。
4. 学习质量管理体系及法规实习期间,我们还学习了生物制药行业的相关法规和质量管理体系,了解了药品生产过程中的质量控制要点。
这为我们今后的职业发展打下了坚实的基础。
四、实习体会1. 理论知识与实践相结合通过本次实习实训,我们深刻体会到理论知识与实践操作相结合的重要性。
在实际操作过程中,我们不仅巩固了课堂所学知识,还学到了很多书本上没有的内容。
2. 提高动手操作能力在实习过程中,我们学会了如何正确操作实验设备,掌握了实验技能。
这为我们今后从事生物制药相关工作奠定了基础。
3. 培养团队协作精神实习期间,我们与同事们共同完成了多个项目,锻炼了我们的团队协作能力。
在团队中,我们学会了如何沟通、协调,共同解决问题。
4. 增强职业素养通过实习,我们了解了生物制药行业的现状和发展趋势,明确了职业发展方向。
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广东药学院基因工程(跨课程)综合性实验论文姓名班级学号指导教师广东药学院生命科学与生物制药学院生物制药研究所目录摘要 (2)前言 (3)一、材料与方法 (3)1.1 材料 (3)1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3)1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3)1.2 方法 (4)1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4)1.2.1.1 工程菌构建(已由老师完成) (4)1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6)1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8)1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8)1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8)1.2.1.6 表达进程分析 (9)1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9)1.2.1.8 发酵工艺(观摩) (9)1.2.2 重组DNA药物单元 (9)1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9)1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10)1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11)1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12)二、结果与讨论 (12)2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12)2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12)2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14)2.1.3表达影响因素试验 (15)2.1.4 表达进程试验 (16)2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18)2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18)2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19)2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20)2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20)2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21)2.2.6 TCR转染体内试验 (23)三、小结 (25)致谢 (25)摘要:本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。
重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例,全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。
“重组DNA药物”单元以质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP为例,介绍质粒DNA大规模制备、阳离子脂质体与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检测、体内给药试验等。
关键词重组蛋白药物; hIL-18 ; 重组DNA药物 ; 阳离子脂质体与质粒DNA复合物Abtract:The comprehensive experiments are divided into two units ,which is " Recombinant Protein Drugs" and "Recombinant DNA Drugs". The unit ,Recombinant protein drugs ,takes example for hIL-18 in E. coli expression system.It comprehensively introducted the most usual technology and process of R & D and production practice of the genetic engineering drugs , such as the construction of engineering bacteria, expression screening, glycerol kind of preparation, growth and Expression Analysis, fermentation process unit operation and the purification of expression product.The unit of "Recombinant DNA drug" taked plasmid TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP as example.It introducted the large-scale preparation of plasmid DNA, Preparation of cationic liposomes- plasmid DNA complex, in vitro Transfection of T cells, expression and in vitro activity assaying of the target gene of transfected T cells and undertaking the test in vivo.Key words Recombinant Protein drugs ; hIL-18 ; Recombinant DNA drugs ; cationic liposomes-plasmid DNA complex前言生命科学与生物技术的最主要任务之一是利用其理论与技术研究成果为人类的健康服务,生物技术制药则是其最主要的应用领域,且在重大传染性疾病、恶性肿瘤及其它疑难杂症防治方面具有巨大的潜力。
药品的研究开发是一项庞大的系统工程,实验室研究发现的任何候选药物要开发成新药都需要经过生产工艺和质量控制研究、有效性评价和安全性评价等过程。
需要特别指出的是,生产工艺和质量控制研究的内容和任务还会始终贯穿于产品投产上市的过程中,相应的技术手段也是作为企业生产或质量控制人员必备的技能。
因此,作为生命科学与生物制药学院的本科生,了解生物技术药物研究、开发和生产的过程、掌握与生产工艺和质量控制研究密切相关的技术手段是非常必要的。
以蛋白质为基础的基因工程药物和基因工程抗体是当今最主要的生物技术药物形式,以DNA为基础的基因治疗制剂和DNA疫苗是未来生物制药的主要发展方向之一。
一、材料与方法1.1 材料1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料1.1.1.1 仪器超净工作台、移液枪(量程:10—100,0—1000)、灭菌枪头、标记笔、无菌牙签、带塞试管、恒温摇床、恒温培养箱、带塞三角瓶(500mL)、EP管(1.5mL)、可见分光光度计、电泳仪、垂直电泳装置、水浴锅、离心机、台式高速离心机、培养皿、冰箱(-20℃,-80℃,4℃)、烧杯、凝胶成像系统1.1.1.2 试剂氨苄青霉素、LB培养基、pBV220—hIL-18转化平板、GST工程菌平板、2×上样缓冲液、10×电泳缓冲液、10%APS、30%胶母液、10%SDS、TEMED、分离胶缓冲液(pH8.8)、浓缩胶缓冲液(pH6.8)、考马斯亮蓝染色液、脱色液、10%甘油、去离子水、IPTG1.1.2重组DNA药物单元的实验材料1.1.2.1 仪器高速冷冻离心机、台式高速离心机、离心机、离心杯、离心管、水浴锅、4℃冰箱、超净工作台、移液枪、灭菌枪头、500mL 三角瓶、常压层析系统、烧杯、水平电泳装置、电泳仪、紫外检测仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计、1.5mLEP 管、恒温培养箱、灭菌玻璃滴管、12孔培养板、细胞计数板、电子显微镜、培养瓶、荧光显微镜、一次性1mL 注射器、冰盒1.1.2.2 试剂STE 、碱裂解溶液Ⅰ((高压灭菌):50mmol/L 葡萄糖、 25mmol/L Tris -Cl (pH8.0))、碱裂解溶液Ⅱ(0.2M NaOH 、 1%(m/V )SDS (高压灭菌))、碱裂解溶液Ⅲ(5 mol/L 乙酸钾、冰乙酸、H 2O )、异丙醇、70%乙醇、TE 、0.02MNaCl 的TE 溶液、0.3M NaCl的TE 溶液、1.0M NaCl 的TE 溶液、0.5M NaOH 、RNA 酶、双蒸水、生理盐水、1.0MnaCl 、20%乙醇、琼脂糖、TAE 、EB 、电泳缓冲液、Marker 、Buffer 、质粒TCRV α12.2-V β7.1-EYFP 、脂质体、肿瘤细胞BEL-7402、胰酶、完全培养基、4%苯酚溶液、1640培养基、胎牛血清、IL-2、双抗(青霉素、链霉素)1.2 方法1.2.1 重组蛋白质药物单元1.2.1.1 工程菌构建(已由老师完成)(1)pBV220-hIL-18表达载体和工程菌构建在本综合性实验中目的基因的表达载体为pBV220,该载体的物理图谱见图1。
该载体有一个氨苄青霉素抗性基因,在多克隆位点的上游为λ噬菌体的P L 和P R 启动子,P L 和P R 启动子受λ噬菌体CI 基因的负调控。
CI 阻遏蛋白是温度敏感蛋白,在28-37℃培养时,CI 产生抑制作用,在温度升至42℃时,CI 被破坏,这样就解除了对启动子的封闭,使P L 和P R 启动子开始下游基因转录。
目的基因为hIL-18的编码序列(cDNA ),采用RT-PCR 技术从外周血细胞中获得。
首先据Genebank 报道序列设计引物,并在引物的5’端引入EcoR I 位点和启始密码子ATG ,在3’端引入Hind Ⅲ位点。
IL-18基因的RT-PCR 扩增产物经EcoR I 和Hind Ⅲ双酶切插入表达载体pBV220的相同位点即得hIL-18的表达载体pBV220-hIL-18。
构建的表达载体pBV220-hIL-18按常规方法转化大肠杆菌DH5α株后即得“重组hIL-18”的工程菌。
图 1 pBV220物理图谱(2)pGEX-GST表达载体和工程菌构建pGEX-GST为商品化融合表达载体,主要用于外源基因的可溶性融合表达。
GST (谷胱甘肽转移酶)为大肠杆菌宿主细胞的天然高效、可溶性表达的蛋白。
以其作为融合表达“标签”有二点优势:a) GST可以促进二硫键的形成,使目的基因融合表达产物能正确折叠,因而常以可溶的表达产物存在;b)GST属于大肠杆菌高效表达的天然产物,其mRNA的5‘端具有最适的结构,有利于融合基因mRNA的翻译,因此可大大提高融合基因表达水平。
在pGEX-GST中,GST处于复合启动子Tac的控制之下,因此可采用IPTG诱导。
其载体如图2所示,图中所示载体中还有一个特殊设计,即GST与目的蛋白的融合位点位PreScission蛋白酶识别位点,融合蛋白可在4℃下进行酶切反应,可避免其它蛋白酶类37℃那样的高温条件对目的产物的破坏。
本综合实验中采取的是无外源基因的载体,即只表达GST,主要用于给同学们展示与pVB220-hIL-18不同的另一种启动子和表达诱导方式(PL/PR vs Tac;温控vs IPTG诱导),并便于“表达进程分析”。