磁珠分选步骤
Pan T磁珠分选标准操作规程
1. 目的为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。
2. 范围适用于T细胞分选生产的操作过程。
3. 职责3.1 生产部负责操作和清场。
3.2 质量管理部QA负责监督。
4. 仪器、试剂和耗材4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS) 4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清；4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管；5. 标准操作程序5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。
5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰箱预冷。
全程保持低温。
5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。
将分离器平行贴到支撑架的垂直面上，移动分离器调整高度。
取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。
5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。
5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。
5.6 按照每107细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。
5.7 每107细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。
5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。
5.9 每107细胞加30ul 缓冲液。
5.10每107细胞加20ul Pan T Cell Microbead。
5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。
5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。
5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。
5.14 把细胞悬液加入到柱子中。
收集流出的T细胞。
5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。
与5.14的合并。
5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。
5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞是一种基于磁珠与细胞表面标记物相互作用的技术，用于对混合细胞群进行分离和纯化。
其原理主要包括细胞表面标记物选择、磁珠标记和磁力分选三个步骤。
在细胞表面标记物选择步骤中，研究人员会根据所需的细胞类型特异性表面标记物，选取相应的抗体、抗原或配体等标记物。
这些标记物能够特异性地与目标细胞的表面蛋白、糖基或其他分子结合。
磁珠标记步骤是将磁性珠子表面修饰上与选择的细胞表面标记物相对应的配体。
一般来说，这些配体可以是与标记物相互作用的抗体、配体或其他分子。
磁珠表面的配体与目标细胞的表面标记物结合后，形成磁珠-细胞复合物。
磁力分选是将磁珠-细胞复合物与外部磁场相互作用，利用磁
力将目标细胞从混合细胞群中分离出来。
外部磁场可以通过磁力分选仪或其他磁场控制装置来产生。
在磁力作用下，磁珠-
细胞复合物会被聚集在一定位置，而非标记的细胞则被排除在外。
通过改变磁场的强度、方向和时间等参数，可以实现对目标细胞的精确控制和分离。
总之，磁珠分选细胞利用磁珠与细胞表面标记物的相互作用，通过磁力分选实现对目标细胞的分离和纯化。
这一技术在生物医学研究、临床诊断和细胞治疗等领域具有广泛的应用前景。
磁珠分选说明书
磁珠分选说明书磁珠分选是一种利用磁性原理进行分选的方法，通常用于分离微小颗粒或细胞等。
下面是一份磁珠分选的简单说明书：一、原理磁珠分选基于磁性原理，通过磁场作用将磁珠与目标颗粒或细胞结合，再利用磁力的差异将磁珠与目标物分离，从而实现分选。
二、操作步骤1. 准备所需试剂和磁珠：根据实验需求准备相应的缓冲液、抗体或特异性配体，以及磁珠。
确保磁珠经过充分混匀。
2. 磁珠与目标物的结合：将磁珠与目标物（如抗体、核酸或其他配体）混合，使其充分结合。
通常需要在适当的缓冲液中进行孵育。
3. 磁力分选：将结合了目标物的磁珠转移到磁场中进行分离。
通常需要将磁珠与目标物混合物加入到特制的分离柱或管中，然后施加磁场。
4. 洗涤：为了去除未结合的目标物和其他杂质，进行洗涤操作。
将磁珠从磁场中取出，用缓冲液冲洗。
5. 洗脱和收集：最后，通过改变磁场或加入特定的洗脱液，将目标物从磁珠上洗脱下来并收集。
三、注意事项1. 确保所有操作在适当的缓冲液中进行，以维持磁珠和目标物的稳定性。
2. 根据实验需求选择合适的磁珠和特异性配体，以确保最佳的结合效果。
3. 注意磁力分选时的操作，避免磁珠吸附到容器壁或其他杂质上。
4. 在进行洗涤和洗脱时，要确保操作步骤准确，避免损失目标物。
5. 保持操作环境的清洁，避免污染。
四、应用领域磁珠分选广泛应用于生物医学研究、药物筛选、基因测序等领域，尤其在单细胞分析、蛋白质组学和核酸研究中发挥着重要作用。
以上是一份简单的磁珠分选说明书，具体操作步骤和细节可能因实验需求和试剂而有所不同。
在进行实验前，建议仔细阅读相关文献和试剂说明书，并遵循实验室安全规范。
磁珠分选步骤
磁性标记和分选步骤：1.制备无菌Buffers,冰上放置。
细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。
1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。
2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。
然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除细胞簇和组织碎片。
用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。
3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。
4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞添加0.25μg，然后冰浴15min.5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell EnrichmentCocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去所有上清液。
7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。
8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。
10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。
CD90磁珠分选protocol
CD90磁珠分选protocol
1.吸去培养基，PBS吹洗一遍
2.加入1-2ml胰酶，消化5-10分钟后加入2ml培养液中和后吸至15ml离心管
3.300g，5min，弃上清
4.加入500μl MACS buffer,重悬后离心，300g，10min，弃上清
5.加入500μl MACS buffer,重悬，吸取20μl计数，其余的悬液300g，10min
离心后弃上清，每107细胞加入20μl beads，80μl MACS buffer，混匀
6.计数选择对角线的四个方格，总数除以4乘以2，单位为104个
7.放入冰箱（2-8℃）15min，每隔5min震荡混匀一次
8.加入500μl MACS buffer，过磁柱，加入500μl buffer 于15ml离心管内洗2
遍
9.15ml离心管里的为CD90-OF（总体积1.5ml），留在磁柱上的为CD90+细胞，
加入1ml buffer冲洗至15ml离心管。
10.每管悬液离心后弃上清，加入4ml 培养液后，铺至2个10cm培养皿；。
磁珠分选流程
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磁珠分选
1、取材：将两只C57\BL6成鼠处死，剖开腹腔，取脾，用HBSS（含10％FCS）研磨（注射器），300目滤布过滤用10mlHBSS（10％FCS）清洗细胞一次，离心200g×10min4℃加入4mlACK，室温作用10min，漩涡震荡，加入8mlPBS（细胞培养用）终止，离心，200g×10min，4℃2ml1×MagCellect Plus Buffer重悬，细胞计数，使用1×MagCellect Plus Buffer调整细胞浓度至100×10（6）\ml2、细胞分选步骤：配制2.5mlMagCellect Plus Buffer（250μl，10×MagCellect Plus Buffer＋2.25ml无菌去离子水）以重悬50×10（6）个细胞（4℃保存至多24h）制备小鼠淋巴细胞悬液，细胞分选前必须用冷的1×MagCellect Plus Buffer调整浓度至100×10（6）／ml）将50×10（6）个细胞（0.5ml）转移至5mlEP管中，加入50μl ×MagCellect Mouse NK Cell Biotinylated Antibody Cocktail轻轻混匀，避免产生气泡，4℃冰箱孵育15min向细胞悬液中加入100μl MvtaagCellect Streptavidin Ferrofluid轻轻混匀，4℃冰箱孵育15min孵育结束后加入1.35ml1×MagCellect Plus Buffer使体积到2ml，轻轻充分混匀，确保所有反应被重悬将反应管放入磁铁中，室温孵育6min，磁珠标记的细胞将会被吸附到磁铁上（非须细胞），细胞悬液剩余的目标细胞为NK细胞当反应管置于磁铁中时，轻轻取出细胞悬液，转移至另一个EP 管中，将磁铁中含有磁珠标记的EP管取出，弃掉重复6-7步骤一次，将细胞悬液转移至一新5mlEP管中，细胞计数，此为小鼠NK细胞。
免疫磁珠分选步骤
免疫磁珠分选步骤1.样品准备：首先需要收集并准备需要分选的样品，可以是细胞悬液、组织片断或血液等。
样品需要经过前处理，如细胞离心、组织切片等，以获得适合进行免疫磁珠分选的样品。
2.抗体偶联磁珠：在准备好的样品中加入特异性抗体偶联的磁珠。
这些磁珠通常是通过共价结合或吸附等方法将抗体固定在磁珠表面。
抗体的选择通常是根据目标细胞表面的特定抗原来确定的。
3.细胞偶联和分离：将抗体偶联的磁珠与样品进行充分混合，使磁珠与目标细胞表面的特定抗原发生特异性结合。
这一步骤通常在低温下进行，以增加抗体与抗原之间的结合效率。
在结合完成后，通过外加磁力或离心等方法将磁珠与目标细胞分离。
4.磁力分选：在细胞与磁珠分离后，将样品置于磁力分选器中。
磁感应部分会产生强磁场吸引磁珠，使磁珠沉积在磁架上，从而将目标细胞与磁珠分离出来。
通过调整磁力分选器的磁力强度和施加时间，可以选择性地分离出特定的细胞群体。
5.洗涤和分离：经过磁力分选后，需要对磁珠和分离出的细胞进行洗涤，以去除非特异性结合的细胞和其他杂质。
洗涤通常使用缓冲液，如PBS等。
洗涤步骤可以重复多次，以提高样品的纯度。
6. 目标细胞的收集和后续处理：经过洗涤后，分离出的目标细胞可用于进一步的实验或临床分析。
可以使用细胞培养、PCR、Westernblotting等方法对目标细胞进行进一步的研究和分析。
总之，免疫磁珠分选是一种基于抗体介导的细胞分选技术，通过特异性抗体与目标细胞表面抗原的结合，利用磁力分选技术分离目标细胞。
其步骤主要包括样品准备、抗体偶联磁珠、细胞偶联和分离、磁力分选、洗涤和分离等。
这一技术在细胞生物学研究、免疫学研究和临床诊断等领域具有重要的应用价值。
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞（Magnetic-beads sorting cells）是一项技术，用于从特定悬液中
分离指定类型的细胞，它结合了生物学分离技术和磁性材料两大技术，可对分离样本进行高通量和准确率的分选。
磁珠分选细胞有三步：首先，将样本悬液振荡均匀，使得西伯利亚磁珠和细胞之间形成相容性；然后，将悬液中的西伯利亚磁珠充满磁场，使得细胞和磁珠之间形成共晶；最后，释放磁场，使得细胞脱离磁珠，而磁珠保持在原位不动，最后通过质量测定仪对细胞和磁珠进行分析。
相比其他细胞分选方法，磁珠分选细胞具有许多优势。
首先，其分选速度极快，在分选过程中每秒钟都能快速分选大量细胞，可以大大缩短分子生物学分离时间；其次，它可以准确的分选目标细胞，而不受到其它外来样品的干扰，有效抑制对分离样本的混杂；最后，磁珠分选细胞仪可以根据磁性粒子的位置来估计分选的准确性和精度，提高分析的可靠性。
综上所述，磁珠分选细胞具有高效率、准确、高可靠性等特点，可以为分子生物学和其他相关生物技术提供更多有用的工具，为基础研究和药物开发等提供新的可能性。
CD138磁珠分选SOP
骨髓CD138MACS操作步骤1.抽取2-5mL骨髓，骨髓转移至锥形管（50mL）中，管内含等体积的细胞培养基（HEPES缓冲液调配）2.滤膜过滤细胞悬液（孔径大小100μm），去除骨碎片或细胞团块。
滤膜使用前须用分选缓冲液（autoMACS running buffer）打湿。
3.20℃，445g离心10min。
4.弃上清，勿激起细胞沉淀，加入分选缓冲液稀释沉淀至初始体积。
5.进行磁珠标记实验，加磁珠。
每1mL抗凝全血或骨髓加50μL 全血CD138微磁珠。
6.混匀，置于冰箱（2-8 ℃）孵育，15min。
7.洗涤细胞。
每1mL抗凝全血或骨髓加入2-5mL分选缓冲液，室温445g离心10min。
8.弃上清，勿激起细胞沉淀，保留一定的上清，避免细胞丢失。
分选缓冲液稀释悬液至1mL。
9.全血分选柱（Whole Blood Column）预处理：从柱顶端加入3mL分选缓冲液，使缓冲液完全流过分选住，去除流出物。
10.将细胞悬液转移到预处理后的分选柱上，收集流出的未标记细胞。
11.再用3×3mL分选缓冲液清洗，收集未标记的细胞片段，与上步收集的流出物混合。
12.卸下全血分选柱，置于收集管上。
13.加入5mL洗脱缓冲液（全血分选柱），向下推挤柱塞，同时收集洗脱流出物。
此流出物即为磁珠标记细胞。
注意：1.本实验选用直接磁珠标记法，实验操作尽量快速、保证细胞的低温环境、使用预冷溶液。
高温、时间太久导致非特异性细胞被标记，影响实验效果。
2.本实验选用全血分选柱（Whole Blood Column）进行磁珠分选。
3.为了增加磁珠标记成分的纯度，可将洗脱成分通过MS/LS分选柱，重新富集。
(完整word版)MACS磁珠分选
MACS磁珠分选免疫磁珠法分离细胞原理免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。
一、磁性细胞标记方式应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。
要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。
有两种基本的磁性标记方式：直接标记和间接标记。
1、直接磁性细胞标记（Direct magnetic cell labeling）（磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞）直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。
目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、间接磁性细胞标记（Indirect magnetic cell labeling）（磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞）间接磁性细胞标记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS间标微珠。
未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。
几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。
间接标记主要在如下情况时选用：当没有直标磁珠时；需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞；间接标记有放大作用，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用；使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。
（一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。
）二、MACS分选策略有两种基本的分选策略阳性分选和去除分选。
复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。
1、阳性分选策略（Positive selection strategy）阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。
磁珠分选柱式-概述说明以及解释
磁珠分选柱式-概述说明以及解释1.引言1.1 概述磁珠分选柱式是一种新兴的生物分离技术，其基本原理是利用磁珠在外加磁场作用下，实现对靶分子的高效快速分离。
相比传统的分离方法，磁珠分选柱式具有操作简便、高灵敏度、高选择性和高通量等优势，因此在生物领域的应用越来越广泛。
本文将对磁珠分选柱式的技术介绍、工作原理和优势进行详细阐述，并展望其未来的发展前景。
在磁珠分选技术介绍部分，我们将介绍磁珠分选柱式的历史背景和发展现状。
磁珠分选技术是一种利用磁性颗粒将目标分子与其他杂质分离的方法。
随着生物医学和生物化学研究的深入，对快速、高效的生物分离技术的需求日益增长，磁珠分选技术应运而生。
柱式磁珠分选原理部分将介绍磁珠分选柱式的基本原理和分离过程。
磁珠分选柱式主要由磁珠分选柱和磁场系统组成。
当样品通过磁珠分选柱时，靶分子与磁珠之间的特异性结合使得靶分子被捕获在柱内，而其他杂质被洗脱。
通过改变磁场的强度和方向，可以控制磁珠的运动，实现对靶分子的分离。
磁珠分选柱式的优势将在第三部分进行详细阐述。
相比传统的分离方法，磁珠分选柱式具有操作简便、高灵敏度、高选择性和高通量等优点。
其操作步骤简单，只需将样品投入磁珠分选柱内，经过磁场作用即可实现分离。
同时，磁珠具有较高的灵敏度和选择性，能够快速而准确地捕获目标分子。
此外，磁珠分选柱式的高通量特性使其适用于大规模的生物分离需求。
结合上述内容，本文旨在全面介绍磁珠分选柱式的概念、原理和优势。
通过对该技术的深入了解，我们可以更好地掌握和应用磁珠分选柱式技术，为生物领域的科研和实验提供有力的支持。
更重要的是，我们对磁珠分选柱式技术的未来发展进行展望，旨在为生物分离技术的持续创新和进步做出贡献。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将分为三个部分，分别为引言、正文和结论。
引言部分将提供一个对磁珠分选柱式的概述，介绍文章的目的，并对文章的结构进行简要说明。
正文部分将详细介绍磁珠分选技术的基本原理、柱式磁珠分选的工作原理，以及磁珠分选柱式相对于其他分选方法的优势。
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞原理
磁珠分选技术是一种利用磁珠对细胞进行分选的生物学技术，它基于细胞表面
特异性标记物与磁珠上特异性抗体的结合，通过外加磁场来实现对细胞的快速、高效分选。
磁珠分选技术在细胞生物学、免疫学、临床诊断等领域有着广泛的应用，成为细胞分选领域的重要技术手段之一。
磁珠分选细胞的原理主要包括磁珠标记、磁场作用和分选过程三个方面。
首先，磁珠标记是磁珠分选技术的关键步骤之一。
通过将磁珠与特异性抗体结合，使其能够与目标细胞表面的特异性标记物结合。
这些特异性标记物可以是细胞表面的蛋白质、抗原、受体等，通过与这些标记物的结合，磁珠能够实现对目标细胞的选择性识别和结合。
其次，磁场作用是磁珠分选技术实现细胞分选的关键环节。
当磁珠与目标细胞
结合后，外加磁场能够使磁珠与细胞一起受力，从而实现对细胞的快速、高效分选。
在外加磁场的作用下，未结合的细胞会被迅速排除，而与磁珠结合的目标细胞则会被集中分选，从而实现对目标细胞的高效分选。
最后，分选过程是磁珠分选技术的最终实现步骤。
在外加磁场的作用下，磁珠
与目标细胞结合的复合物会被快速、高效地分选出来，从而实现对目标细胞的选择性富集和纯化。
通过这一过程，磁珠分选技术能够实现对细胞的快速、高效分选，为细胞生物学和临床诊断等领域的研究提供了重要的技术支持。
总的来说，磁珠分选技术是一种基于磁珠与细胞特异性标记物的结合，利用外
加磁场实现对细胞的快速、高效分选的生物学技术。
通过磁珠标记、磁场作用和分选过程三个步骤，磁珠分选技术能够实现对细胞的选择性富集和纯化，为细胞生物学、免疫学、临床诊断等领域的研究提供了重要的技术支持，具有广阔的应用前景和发展空间。
mdsc磁珠分选方案
mdsc磁珠分选方案
MDSC磁珠分选是一种基于磁珠技术的细胞或细胞亚群分选方法，主要用于分离、富集或纯化特定细胞群体。
以下是一种常用的MDSC磁珠分选方案：
1. 细胞预处理：将样品中的细胞进行预处理，如红细胞溶解、细胞裂解或细胞培养等，以获得单个细胞悬浮液。
2. 磁珠标记：选择适当的磁珠，将其与目标细胞特异性抗体或其他分子标记物结合。
磁珠通常具有磁性，可以通过外部磁场实现对其的控制。
3. 细胞与磁珠结合：将磁珠与细胞悬浮液混合，使其充分接触和结合。
标记物结合的细胞将与磁珠形成复合物。
4. 磁场应用：将磁珠-细胞复合物置于磁场中，通过磁力使磁珠-细胞复合物沉降至底部或特定位置。
未结合的细胞将保持在液相中。
5. 分离和收集：从磁场中移除磁力，使磁珠-细胞复合物解离。
通过离心或其他手段，将目标细胞从磁珠分离并收集。
6. 细胞后处理：对分离的细胞进行后处理，如洗涤、培养或进一步分析等。
值得注意的是，具体的MDSC磁珠分选方案可能会因实验目的、细胞类型和磁珠选择等因素而有所不同。
因此，在进行MDSC磁珠分
选实验前，应根据具体情况设计和优化实验方案。
免疫磁珠方法分选细胞
免疫磁珠方法分选细胞2007-12-17内容快照：用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。
原理是已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。
磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。
本节介绍超微磁珠间接标记、用分离柱阳性分选细胞的方法。
Protocal：1.离心收集待分离细胞，用少量PBE孵育液(0.5％BSA、0.08％EDTA PH7.2 PBS，真空抽滤除菌及液体内气体)充分混悬细胞(0.5ml/1×108细胞)，加入一抗(10~20μg/ml终浓度)，4° C孵育30分钟。
2.用20倍体积PBE洗细胞一次，再加P BE(0.3ml/1×108细胞)充分混悬细胞后，加入相应二抗包被的超微磁珠，混匀后置8~15° C孵育10~15分钟。
3.将分离柱安装入磁场中，加入0.5ml PBE，在重力作用下自然流尽，以预处理分离柱。
4.将孵育完的细胞悬液加到分离柱中，自然流尽。
5.以0.5ml的PBE加到分离柱中，自然流尽，洗柱两次。
6.从磁场中取下分离柱，插在试管口，加1-2ml的PBE，用针芯推尽液体，冲出阳性结合的细胞，用培养基洗一次，待用。
注：1.如果分离细胞用作培养，全过程在超净台中完成。
2.超微磁珠及微小磁场系统适合于少量细胞分离(如106-107)，通常已适用于大多数实验研究；此外各公司尚有大磁珠及大磁场供应，可用于更大量细胞的分选；除分离柱外，也有试管及其它设备用于分选；根据我们应用的经验，分离柱由于提供了较大的接触面，在细胞分选上具有较多优点。
磁场也可以自制，用一般的磁铁即可做成简易磁场，可提供足够的磁力。
3.磁珠分离系统分离的细胞纯度可以达到80~99％，得率在60~90％左右，仅次或相当于流式细胞仪（FACS）的分选效率，与FACS 相比，MACS设备简单，耗时极短，故而应用广泛。
免疫磁珠分选步骤
免疫磁珠分选步骤
准备工作
1：用pH=7.2的P-8读BS配置0.5%的BSA和2mMEDTA,用以稀释分选缓冲液（1:20）
2：准备碎冰，让所有操作均在4-8℃完成
样本制备
1：制备单细胞悬液（用30um的尼龙网过滤，避免堵塞柱子）（过滤前先用缓冲液湿化过滤器）
2：加入缓冲液清洗细胞，并离心(300g,10min)( 4-8℃)
3:加入缓冲液重选细胞单细胞悬液，
4：再次用30um的尼龙网过滤，避免堵塞柱子）（过滤前先用缓冲液湿化过滤器）
5：细胞计数
6：离心(300g,10min)( 4-8℃)后去掉上清
9：加入80ul/107个细胞的缓冲液
10：加入20ul/107个细胞的CD117
11：4-8℃混匀放置15分钟
12：加入1ml/107个细胞的缓冲液清洗细胞并离心(300g,10min，4-8℃)
13：重选细胞加入500ul/108个细胞的缓冲液
14：准备好分离柱，并用缓冲液清洗MS用500ul.
15:把细胞悬液倒入柱子中
16：用500ul的缓冲液冲洗柱子，（每次液体无残留时再加入新的液体）共三次
17：将柱子移开磁场到一合适的容器中，用1mL缓冲液稍用力冲洗，。
免疫磁珠分选原理
免疫磁珠分选原理在生物学研究中，确定细胞表面分子的组成和生物分子的相互作用，对于理解生命体系的结构和功能至关重要。
对于细胞细胞表面蛋白的研究，由于细胞表面蛋白在细胞功能的调节和信号传导中发挥了重要作用，所以具有特异性和高敏感性的免疫磁珠分选技术就被广泛地应用于生物工程和生物医学领域。
免疫磁珠分选技术是一种利用磁性珠子与特定抗体结合的方法在复杂混合物中特异性捕获细胞表面受体的技术，该技术操作简单，具有良好的筛选效果，而且可以在没有破坏受体结构和功能的前提下，充分保持其生物活性和空间结构。
免疫磁珠分选技术的应用可以挖掘出被掩盖的生物信息，对于研究细胞膜蛋白、细胞膜和细胞-细胞相互作用提供了良好的技术支持。
免疫磁珠分选技术可以根据分子大小以及电性进行分选。
这是基于免疫磁珠技术的长处，因为该技术可以利用抗原与血清中抗体的免疫反应，或利用与靶分子有亲和力的特异性结合试剂，对不同细胞表面上的抗原进行特异性分选，最终获得清洁的样品并快速纯化出兴趣蛋白。
免疫磁珠分选技术一般可以分为三个步骤，即磁性珠子的制备、抗原或特异性结合试剂的与磁珠结合和磁珠与样品的混合、分离和检测。
值得一提的是，免疫磁珠分选技术通过控制磁性珠子的大小和磁力来实现选择性捕捉，可以快速分离纯化，降低混杂，从而提高分离纯化效率和目标物质的含量。
免疫磁珠分选技术的原理是利用磁性珠子的特殊性质，在外磁场下进行快速分离纯化，同时也可以在不影响受体的结构和功能的情况下，实现对特异性分子的快速分离、纯化和定量分析。
此外，由于磁性选择特异性强、具有高度灵敏度和特异性，因此可以较好地处理不同菌落、不同生长阶段的单代和混合菌株、不同组织和不同阶段的生物样品等。
总之，免疫磁珠分选技术为生物医学领域提供重要的技术手段，可以在较短时间内从复杂的样品中准确、快速地捕获到目标分子，是生命科学研究的重要组成部分。
随着这一技术的不断发展，免疫磁珠分选技术必将更好地满足生物学研究的需求，为生物研究领域的发展和进步带来更多的机会和挑战。
磁珠分选淋巴细胞步骤
磁珠分选淋巴细胞步骤磁珠分选淋巴细胞，这个名字听上去是不是特别像某种高科技实验？简单来说，就是利用一种叫做磁珠的小东西，帮我们从一堆复杂的细胞中，筛选出我们需要的淋巴细胞。
你可以想象成，你在海滩上捡贝壳，而这些磁珠就像一把小网，把海滩上的贝壳一个个捞出来。
你想要的是那些特定的贝壳，磁珠帮你把它们挑选出来，剩下的就留在沙滩上，跟你无关了。
好啦，咱们就一步步走过来。
得准备一堆血样，或者其他含有细胞的液体。
这些液体中包含各种各样的细胞，像是淋巴细胞、红细胞、单核细胞啥的，你可以把它们想象成一个大杂烩。
我们的目标是从这些杂烩里挑出淋巴细胞。
咱们要找的淋巴细胞，得是特定的类型，不是随便什么淋巴细胞都行。
就好像你去市场买菜，要买的是西红柿，结果摊位上有一堆其他菜，西红柿得从里面找出来。
接下来呢，咱们要把这些淋巴细胞“标记”出来。
怎么标记呢？就是通过磁珠啦。
这些磁珠上面会有一些特殊的抗体，抗体能够识别淋巴细胞的表面标志物。
你可以把它想象成每个细胞都有一张身份证，磁珠就像警察，能够凭身份证把淋巴细胞从一群无关紧要的细胞中挑出来。
这个过程就叫做“磁珠标记”。
有了这些磁珠，咱们的淋巴细胞就和其他细胞不一样了。
简单点说，就像你带了个特别亮的胸卡，大家都知道你是谁。
然后，咱们就要进行“磁性分选”了。
想象一下，你拿着一块大铁板，那个铁板上有一个强力的磁场，哗啦啦的，所有带着磁珠的淋巴细胞都被吸了过来。
其他不带磁珠的细胞呢，就留在原地，完全不受影响。
就像你拿着一个巨大的吸铁石，把那些带磁珠的淋巴细胞“吸”到一起，剩下的细胞继续待在原地，啥也不管。
这个步骤很神奇，像魔术一样。
等磁性分选完成后，咱们就能从混杂的细胞群里，成功把那些需要的淋巴细胞挑出来了。
它们就像经过了一场“选秀”，被挑选出来成为了明星，其他不合格的细胞就被“淘汰”了，剩下的都清清爽爽，准备好了进入下一步的实验了。
但，磁珠分选也不是完全不出问题的。
就像捡贝壳有时候会捡到破的或者不合适的，磁珠分选有时也会分选不完全或者分选出了一些不太纯净的细胞。
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磁性标记和分选步骤：
1.制备无菌Buffers,冰上放置。
细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。
1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有
0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。
2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。
然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除
细胞簇和组织碎片。
用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。
3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x
106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。
4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体
2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞
添加0.25μg，然后冰浴15min.
5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell Enrichment
Cocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.
6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去
所有上清液。
7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。
8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.
9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。
10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。
把这个
positive-fraction 管放到BD IMagnet™(水平位置)8min。
对于较大体积，可把细胞转移到17 x 100 mm圆底试管，添加的最大的体积不超过
3.0ml。
把这个positive-fraction 管放到BD IMagnet™(垂直位置)8min。
11.当管在BD IMagnet™上时，用无菌巴斯德吸管轻轻的吸取上清至一个新的无菌管内。
12.从BD IMagnet™取出positive-fraction 管，添加1X BD IMag™ buffer到与步骤8相同的
体积。
上下吹打10-15次，重悬positive fraction well，并重置于BD IMagnet™上6-8min.
对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。
13.用一个新的巴斯德吸管轻轻吸上清和步骤10中的enriched fraction。
混合。
14.把含有结合enriched fraction的管再置于BD IMagnet™6-8min。
对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。
15.轻轻吸出上清并置于一个新的无菌管内。
两次enriched fraction不含有bound antibodies
和磁性粒子。
细胞可用后续应用。
16.留在原管内的正选细胞可用适当的缓冲液或培养基重悬以备后续应用，包括流式细胞系
检测。
17.未分离的细胞悬浮液样品和正选富集positive and enriched fractions的样品，应用流式细
胞仪评估细胞分离效率。