小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良作者：陈思怀李德龙高继业来源：《安徽农业科学》2021年第11期摘要為了克服小鼠组织器官传统石蜡切片制作方法存在组织易碎、结构不完整的缺点，对传统石蜡切片制作进行了改良。
将浸蜡前的透明步骤改为异硬脂醇与石蜡混合液处理，替代苯类透明剂制作空肠、脾脏2种器官的石蜡切片，并以切片机切片时蜡带质量和HE染色后镜下质量为切片制作效果的评定指标。
结果表明，2种器官在切片机上均能切出完整、较长的蜡带，组织块无硬化、不碎裂，展片平整;HE染色过程中不掉片，染色后光镜下细胞质与细胞核染色对比清晰，器官组织结构完整。
就脾脏和空肠而言，应用异硬脂醇与石蜡混合液替代苯类透明剂能制作出优良的石蜡切片。
关键词石蜡切片;异硬脂醇;透明剂;小鼠中图分类号 R-361.2 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）11-0094-02doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.025开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Improvement of Preparation Method of Paraffin Sections of Some Tissues and Organs in MiceCHEN Si-huai，LI De-long，GAO Ji-ye（College of Veterinary Medicine，Southwest University， Chongqing 402460）Abstract In order to overcome the defects of fragile tissue and incomplete structure in the traditional paraffin section preparation method of mice tissues and organs， the traditional preparation method of paraffin section was improved.Paraffin sections about jejunum and spleen were made with the mixed solution of isostearin and paraffin instead of benzene transparent agents.The quality of ribbon and microscopic observation after HE staining were selected as judgment indices .The results showed that two kinds of representative organs could be cut into long and complete wax bandes on the microtome， and flatten out with no hardening or non-fragmentation.After HE staining， the cytoplasm and nucleus were stained clearly， and the structures of organs and tissues were intact.As for jejunum and spleen，the mixture of isostearic alcohol and paraffin could be used to treat the tissues instead of benzene transparent agents to make good paraffin sections.Key words Paraffin section;Isostearic alcohol;Transparent agent;Mice小鼠作为实验动物，其组织器官在大小、质地等方面不同于成年畜禽，如小肠壁薄、肝细胞脂类丰富、脾脏小等。
病理切片制作
将各实验组的小鼠进行拉颈脱臼处死后，解剖取出肝脏置于4℃生理盐水中，
然后用薄刀片切取大小约为10 mm×10 mm×2 mm的组织块，放入10%甲醛溶液
中固定48h以上。
然后按以下程序进行切片制作：
脱水
（于50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各1h，
放入95%、100%乙醇中各两次，每次40min）
透明
（先于95%酒精、二甲苯等量混合液20min，然后二
甲苯30min，须换一次二甲苯）
浸蜡
（先将各熔点石蜡进行融化，待凝固后再融化一次，以
便赶走气泡；再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ、石蜡Ⅲ透蜡各
40分钟）
包埋
（经过透蜡的组织用镊子夹出置于容器内，加入含蜂蜡
的石蜡Ⅲ，然后投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块）
切片
（已固定和修好的蜡块粘于台木并固定在切片机夹物
台上，调节切片厚度为5 μm）
展片
（切好的蜡片置于40℃水浴锅中进行充分舒展）
粘片
（滴一滴赖氨酸于清洁的玻片中央，涂抹成均匀薄层，
然后插入水浴锅中捞片，使蜡片贴附于玻片上；一昼夜
干燥后待染）
脱蜡复水
（石蜡切片经二甲苯脱蜡两次各10min，然后放入100%、
95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液和蒸馏水中各
10min）
染色
（复水后的切片按试剂盒操作说明进行染色）封片
（滴一滴中性树胶于已染组织上进行封片）显微观察。
小鼠石蜡切片实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉小鼠组织石蜡切片的制作方法。
2. 掌握石蜡切片的染色、封片等操作技巧。
3. 了解石蜡切片在病理学、生物学研究中的应用。
二、实验原理石蜡切片是一种常用的组织切片技术，通过将组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤，制作出可以观察的组织切片。
石蜡切片具有切片厚薄均匀、保存时间长、染色效果好等优点，广泛应用于病理学、生物学等领域。
三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠2. 试剂：中性甲醛固定液、酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液、伊红酒精溶液、盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、中性树胶、卡诺固定液等3. 仪器：切片机、恒温箱、蜡杯、酒精灯、解剖剪、培养皿、镊子、单面刀片、包埋盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、显微镜、温度计、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取健康小鼠组织，用中性甲醛固定液固定24小时以上。
2. 脱水：将固定好的组织从固定液中取出，依次放入70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%乙醇中，各浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中，各浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将脱水后的组织放入二甲苯中浸泡5-10分钟，重复2次。
4. 浸蜡：将透明后的组织放入石蜡中浸泡4小时，然后放入蜡I、蜡II、蜡III 中，各浸泡1小时。
5. 包埋：将浸蜡后的组织取出，放入融化的石蜡中，迅速包埋，待石蜡凝固后取出蜡块。
6. 切片：将包埋好的蜡块置于切片机上，切片厚度为4微米。
7. 水化：将切片放入水中，用镊子将切片取出，放入载玻片上。
8. 染色：将切片放入苏木精染液中染色5分钟，然后用盐酸酒精溶液分化，再放入伊红酒精溶液中复染2分钟。
9. 封片：将染好的切片用中性树胶封片，待封片干燥后即可观察。
五、实验结果通过以上步骤，成功制作出小鼠组织石蜡切片，切片厚度均匀，染色效果良好，可以观察到组织细胞的形态和结构。
六、实验讨论1. 实验过程中，脱水、透明、浸蜡等步骤是制作石蜡切片的关键环节，需要严格控制时间和温度，以保证切片质量。
27617970_制作高质量小鼠胃组织石蜡切片的方法优化
DOI:10.19694/ki.issn2095-2457.2022.19.12【摘要】目的:探讨胃组织石蜡切片制作方法及质量改进。
方法:取30只健康小鼠,小鼠随机分为对照组1,实验组2和常规组,每组各10只,进行胃组织石蜡切片制作。
实验组采用Heidenhain Susa固定液固定、四氢呋喃透明和蜡带展片法,对照组采用传统石蜡切片制作方法。
结果:实验组A、B,优质片84张(70%)、中等片36张(30%)、没有次等片和不合格片;对照组无优良等级切片,中等级切片12张(20.04%),次等级切片28张(46.71%),不合格切片20张(33.33%)。
实验组切片,结构完整,着色优于对照组。
结论:改良后的石蜡切片质量有所提高,最大限度保持与活体组织结构相近完整。
缩短实验时间,避免人为因素和其他因素,提高了石蜡切片的质量稳定性,值得推广应用。
【关键词】胃组织;石蜡切片;质量改进0引言胃（stomach）呈囊状膨大，空虚时呈收缩状态，内面可见纵行的皱襞。
进食后，由于肌组织舒张，胃腔扩张，皱襞消失，可暂时贮存食物[1]。
由于胃组织结构致密层次多，有较强的柔韧性和硬度，在制作高质量的石蜡切片过程中常见腺体结构不完整，黏膜各层次间隙大组织结构不清晰，平滑肌层肌束分离以及皱襞收缩脆裂较严重等现象。
笔者在工作中通过多次试验有效解决了这些问题，通过在制片方法上进行一些改进，获得了良好的成像效果。
采用健康C57BL/6小鼠胃部组织进行实验操作（其和人类的胃在层次结构和组织学特点上都相似），Heidenhain Susa固定液固定，切片时蜡带直接展片，最后四氢呋喃透明、脱蜡，苏木素染色液和伊红染液滴染。
改进后的胃组织切片最大限度保持与活体组织相近的完整结构，核质着色均匀，制片时间缩短，值得推广，现报道如下。
1材料1.1实验动物购买健康C57BL/6小鼠30只，3月龄，体质量量收稿日期:2022-01-10※基金项目:湛江市科技攻关计划项目(2021B01121)广东医科大学科研基金立项资助(GDMUM2019035);广东医科大学校级大学生创新创业训练计划项目立项(GDMU2019204)。
石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤
石蜡切片操作流程及步骤：1、样品4℃过夜[1,2]。
2、清洗水槽及过滤网[3]。
3、打开机器开关，调节水池温度21℃、展片水池温度45℃、烘片温度55℃[4]。
4、固定包埋组织块[5]。
5、调节出水水流大小[6]。
6、调节切片厚度5um、10 um[7]。
7、将包埋组织块下调至与刀片位置同一平面，前后距离使其与刀片距离恰好接触[8]。
8、开始切片带出现完整的组织切横切面将其随水流传送至水池中[9-13]。
9、选择较好的切片，用载玻片将其从21℃水池中捞出。
每个石蜡取5-6张片子[14-15]。
10、放到展片水池中展开、载玻片编号[16]。
11、55℃烘干，无水滴后可收片。
心得体会及注意事项：1、包埋组织块冻存温度过低会冻坏，不冻存石蜡粘性大不容易切片。
2、操作期间应放入冰中储存，自备冰块。
3、水槽中石蜡会堵塞上水滤网影响出水速度。
4、展片水池水要在展片前达到预设温度。
5、要固定牢固，固定不牢切片时容易破坏样品。
6、以中间水柱恰好达到刀片位置最佳，水流过小切片不易冲下，水流过大会导致切片破坏。
7、5 um染色效果更佳，根据不同组织染色要求调节切片厚度。
8、若前后位置调节不精确可使距离稍大，随后手动摇轮慢慢靠近，每次前进距离为提前设定距离5um或10 um。
9、切片期间不出现严重的黏附，粘连，裂片，不要轻易停止，切片要匀速.10、切片过薄会迅速升温从0℃升至21℃或更高，若随意停止，石蜡黏附性增加会导致粘刀片等问题影响继续操作。
11、若一个样本操作时间过长应取下放入冰块一段时间再继续操作。
12、原则没有大问题匀速不要随意停。
13、换新刀片（刀片上有黏附石蜡会导致切片裂开，最好换至新刀片）。
14、尽量清理水池多余无用切片及碎石蜡，但是要小心不要碰坏样品切片。
15、每个载玻片取2-3个组织最佳。
16、展片不足会有褶皱影响染色结果，展片时间过长会导致组织裂开。
小鼠创伤愈合新生皮肤组织切片的制备
小鼠用 ｌ％的水 合氯醛按０ ０３ ／ ０ ．０ｍＬ
ｇ 剂量 麻醉 后 ， 在脊 拄右 侧胸 廓上方 做 一 大小 ０ ５×０５ｍ ． ．ｃ 的手 术切 Ｌｌ ， 达 筋膜 。术后 伤 口消 毒 ， ］＿ 深 ｌ 无菌 纱布 覆盖 。在 清 洁笼 内饲 养 ， 给清 洁饮水 Hale Waihona Puke 自由取 食 ， 图ｌ 尢 几 。
程。 在科 研和 教学 中经 常碰 到制 做皮肤 组织 石蜡 切片 ， 常皮 肤组 织 正
切片 的制做 并不 困难 ， 而做 好伤 口愈合后 新生 的皮肤组织 切片 并不 容 易。 为此经 过摸索探 索 出一套行之 有效 的制作小 鼠创伤 愈合新 生皮肤 组 织切片过 程 ， 方法如 下。
广东广 州
５００ ） １００
【 摘要 】 目的 探 索 有效 的小 鼠创 伤愈合 新 生皮肤 石蜡 组 织切 片制 作方 法 。方法 控 制 ｌ ｉ 织切 片制作 中关键 步骤 时 间来对比 不 ｅ组 同方 法之 间的 制 片效果 。 结果 采 用 ４ ％多聚 甲醛 中加 ｏ ｏ％戊 二醛 固定 。中性 Ｐ Ｓ 冲洗 组织切 片 １ｍｎ７％酒精过 夜 ，ｏ ０％ ．４ Ｂ液 ０ ｉ，ｏ ８％、 ｏ ， ０％ ５ 酒精脱 水各 ２ ， ｈ 无水 乙醇脱 水 ｌ ， 二 甲苯 中透 明共 Ｉｍ ｎ４ ｈ在 ｉ ，步浸蜡 法 制作 出的组 织 切 片形态完 整 ， ５ 质量较 好 。结 论 摸 索 的新方 法较一般 常规组 织切 片制作 方法不仅 节省时 间 ， 更重要 的是克服 了一般 常规方 法制作 出的新生皮肤 组织切 片组 织破 碎的 问题 ， 复性 且重
过摸 索 ， 按照第 Ⅵ组的方法 制作出的组织切 片效率最高 ， 一般组织切 较
的 修复是 皮 肤全 层愈 合 、 上皮 化的关 键部 分 ， 细胞迁 移 则在表 再 角朊
HE染色步骤
1、用颈椎脱臼法处死小鼠，75%的酒精浸泡2-3分钟，减少毛发所造成的污染。
2、将小鼠移入超净工作台内，无菌条件下，以仰卧位固定在解剖盘上。
3、用眼科镊子夹起腹股沟中线处皮肤，用眼科剪做一横切口。
用镊子捏住切口两端的皮肤朝着小鼠的尾部和头部纵向撕开皮肤，暴露腹腔膜壁，用乙醇消毒。
4、切开腹腔壁膜，用镊子夹住脾脏，并用剪子剪去与其相连的组织。
HE染色石蜡切片制作的基本过程作者：未知来源：生物秀时间：2007-12-71、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。
切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
5、脱蜡染色：常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。
苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
石蜡切片和免疫组化 步骤整理
一：步骤石蜡切片（骨组织）1：PFA固定，4℃冰箱过夜后，用10%的EDTA脱钙，时间3-5周，鉴定脱钙完成的标志是：用细针可以刺进骨头。
脱钙完成后开始做实验前需要把骨头放到70%的酒精24h。
2：脱水：70％酒精（1h）→ 80％酒精（30min）→ 95％酒精Ⅰ（20min）→无水乙醇Ⅰ（15min）→无水乙醇Ⅱ（15min）。
3：透明：二甲苯（15min）（如果组织小（例如小鼠和大鼠的组织）就15min，如果透明时间过长组织易脆，如果组织大（例如兔子、人、狗等)时间就可以稍微长一些。
4：浸蜡：恒温56℃～58℃（不超过60℃）。
→石蜡Ⅰ（1-2h）→石蜡Ⅱ（1-2h）。
（如果组织大浸蜡时间可以延长，可以达6-8h。
）5：包埋：待石蜡稍微凝固以后放到4℃冰箱过夜。
6：切片与展片：切片的时候要保持包埋好的蜡块的硬度，如果蜡块软的话切片的时候组织就会碎，所以要把蜡块放在冰上。
在42℃温水中展片（如果组织太脆，就先把组织浸泡在甘油中，几分钟？后在把组织放在冰块上，一段时间后再取出来重新切片。
）7：捞片：捞片时，载玻片45°倾斜，然后将片置于载玻片2/3处。
8：收片子，37℃保存。
HE染色1：脱蜡和脱水：二甲苯，10min×3（不常换，脱蜡用），酒精5min（100%Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ；95%；70%），蒸馏水Ⅰ，Ⅱ5min（如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。
如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长）2：染色：苏木精-2-3min3：蒸馏水冲洗（起反蓝的作用）：大概1h-2h4：伊红染色-2min4:脱水 70%→80%→95%Ⅰ→100%ⅠⅡ、Ⅲ酒精各一分钟5：二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各3min（脱水用，最好是用一次换一次，脱水用的二甲苯要透明干净，质量才好）6：封片用树胶∶二甲苯=3:1（1∶1，3∶2）{现配现用}，树胶多一些，用铅笔或者其他工具赶气泡。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
小鼠角膜组织石蜡切片制作方法的探讨
小鼠角膜组织石蜡切片制作方法的探讨张胜男;夏丽坤;胡媛【摘要】目的探讨一种效果较好的小鼠角膜石蜡切片制作方法. 方法取30只BALB/C小鼠取出眼球后,A组20只眼球,用固定液l(体积分数10%中性甲醛10 mL、体积分数95%乙醇85 mL、冰醋酸5 mL混合)固定;B组20只眼球,用固定液2(多聚甲醛4 g,加入0.1 mol·L-1磷酸缓冲液80 mL,加热至60℃左右,持续搅拌,使粉末完全溶解,加少许1mol·L-1 NaOH澄清.待冷却后,加冰醋酸5 mL、丙酮10 mL,用0.1 mol·L-1磷酸缓冲液补足至100 mL)固定;C组20只眼球,用固定液3(无水乙醇60 mL、体积分数10%中性甲醛10 mL、冰醋酸10 mL、氯仿20 mL 混匀)固定.所有眼球标本固定2 h后,显微镜下去除巩膜、虹膜、晶状体,完整保留角膜.固定24 h后,分别做HE染色和免疫组织化学染色,显微镜下观察其差异. 结果大体观察:A组部分角膜皱缩变形;B组、C组角膜外形均无明显变化,无皱缩和凹陷变形,能保持原有的形态.HE染色示A组标本染色鲜明,角膜各层结构清楚,但是角膜基质层出现明显脱水现象;B组标本未见明显脱水现象,但角膜结构过度压缩,出现明显的脱片现象;C组标本可观察到角膜各层组织结构完整,无明显结构改变,未见脱片及基质层脱水现象,角膜各层组织结构清晰无裂隙.免疫组织化学染色3组均显示HVEM阳性,但C组标本染色效果优于A组、B组,且脱片程度低,固定液3适用于角膜组织的固定. 结论固定液3固定角膜组织,效果优于其他两种固定液.【期刊名称】《眼科新进展》【年(卷),期】2011(031)003【总页数】3页(P208-210)【关键词】小鼠角膜;组织固定;石蜡切片【作者】张胜男;夏丽坤;胡媛【作者单位】110004,辽宁省沈阳市,中国医科大学附属盛京医院眼科;110004,辽宁省沈阳市,中国医科大学附属盛京医院眼科;110004,辽宁省沈阳市,中国医科大学附属盛京医院眼科【正文语种】中文【中图分类】Q959.836;R772.2在小鼠角膜石蜡标本制作过程中,由于角膜组织的特殊性,是较为致密的组织,并且角膜每一层之间的连接不是非常紧密,这就使得石蜡切片的制作存在一定的问题。
石蜡切片、HE、免疫组化步骤
石蜡切片、HE、免疫组化实验一：取材及石蜡切片的制作（本次取材为小肠、膀胱、子宫、宫颈）①取材：小鼠脱颈处死后，应立即找到自己所需的组织器官，用一张滤纸将所需器官放在其上（可以加一些生理盐水在上面，防止干了），修去多余的脂肪、系膜等不要的组织，根据不同器官切成合适大小的形状（如小肠应切成1cm长度的长柱形）。
将切好的组织装于冻存管中，加入4%的PFA（PFA的作用是保护蛋白，防止蛋白降解）固定过夜（固定时间不能超过24h，如果24h后不能完成脱水工作，可以先50%、70%酒精脱水后，置于4℃冰箱保存。
）②脱水（目的是为了使组织从水相置换到有机相）（根据不同的组织，脱水时间不同）：将PFA中的组织取出，放入组织盒（组织盒子应尽量选择小格子，防止组织脱水过程中掉出来），一个组织盒可以放4~8个组织小块，切一张与格子大小合适的纸条一并装入，做好标签，防止后期辨认不出具体组织（只能用铅笔写，中性笔会被酒精脱去）。
使用自动脱水机进行脱水，设定程序为：酒精50%、70%、80%、90%（各20min）、无水乙醇（30min/次，两次）、酒精二甲苯混合物（1：1）20min、二甲苯20min（两次）、二甲苯石蜡混合物（1：1）30min、石蜡Ⅰ1h；脱水结束后，取出组织盒，置于石蜡Ⅱ中1h（石蜡应提前融化，且不能凝固，放在70℃烘箱中）。
③包埋：用4X6cm的小纸条根据小木块形状，叠成盒子（盒子最好四边叠平，不要左右不平，便于放融化的蜡进去后能得到比较好的形状，最好不要漏），取一个盒子，将融化的石蜡Ⅱ倒入，在其快要凝固的时候，将组织按照所需的形状，摆正（如小肠切成的小柱子应立起来，便于后面切片的时候，可以切到所需的形状），再用做好标记的长纸条贴着盒子壁固定（为了包埋后识别组织，且不能将纸条放在蜡块中央，后期不好取出，会损坏刀片），倒蜡之前，可以将盒子放在铁皮或小铁块上（能够让石蜡更快凝固。
），每次用镊子拿组织或摆正组织之前，先烧一下（能够更好摆正组织块，可以随时调整组织位置）。
小鼠肺组织石蜡切片步骤_概述说明以及解释
小鼠肺组织石蜡切片步骤概述说明以及解释1. 引言1.1 概述小鼠肺组织石蜡切片步骤是一种常用的实验技术，旨在将小鼠肺组织制备成薄片，以便于后续的观察和分析。
该技术通常涉及到一系列操作，包括采集样本、固定与包埋处理、切片制备以及切片后的染色方法等。
这些步骤的正确执行对于获取高质量的切片非常重要，并且有助于研究人员深入了解小鼠肺组织的结构与功能。
1.2 文章结构本文将详细介绍小鼠肺组织石蜡切片步骤的概述、说明以及解释。
首先，在第2部分中，我们将从实验背景、石蜡切片的重要性与应用以及切片前准备工作等方面全面概述小鼠肺组织石蜡切片技术。
然后，在第3部分中，我们将详解该技术的具体步骤，包括采集小鼠肺组织样本、组织固定与包埋处理、石蜡切片制备流程等内容。
第4部分将介绍切片后的处理与染色方法，包括制备玻璃载玻片和染色剂溶液以及常用的染色方法介绍等。
最后，在第5部分中，我们将总结本文的主要内容并展望未来该技术的发展方向。
1.3 目的本文的目的是提供一个详细而清晰的指南，帮助读者全面了解小鼠肺组织石蜡切片步骤及其重要性。
通过阐述每个步骤的操作要点和注意事项，我们旨在帮助读者掌握该技术并正确应用于小鼠肺组织研究中。
同时，我们也将讨论当前该技术存在的局限性，并对未来可能的改进方向进行展望。
通过阅读本文，读者将能够更好地理解小鼠肺组织石蜡切片步骤，并为其相关领域的研究提供参考和指导。
2. 小鼠肺组织石蜡切片步骤概述：2.1 实验背景：小鼠肺组织石蜡切片是一种常见的实验技术，在肺部疾病研究和病理学诊断中得到广泛应用。
通过制备小鼠肺组织的石蜡切片，可以观察和分析肺部结构、形态及病理变化，揭示肺部疾病的发生机制。
2.2 石蜡切片的重要性与应用：小鼠肺组织的石蜡切片是进行光镜下观察和分析的基础。
它可以为进一步深入研究提供有关肺部组织结构、损伤程度、血管密度、免疫反应等方面的信息。
该技术在呼吸系统相关疾病（如肺癌、支气管哮喘等）的预防、诊断和治疗策略制定中起着重要作用。
小鼠脏器he染色实验步骤
小鼠脏器he染色实验报告一、实验目的本实验旨在通过组织石蜡切片技术，对小鼠的脏器进行he染色，观察其组织结构和细胞形态，为进一步研究小鼠生理机制提供形态学依据。
二、实验原理he染色是一种常用的组织学染色方法，利用苏木精和伊红两种染料对组织进行染色，能够清晰地显示出细胞形态和组织结构。
其中，苏木精能够使细胞核呈蓝色，而伊红能够使细胞质呈红色，从而实现对细胞进行定位和鉴别。
三、实验步骤1. 组织取材：选取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器，用预冷的生理盐水冲洗干净，用滤纸吸干水分。
2. 组织固定：将组织块置于4%甲醛溶液中固定24小时，使其形态固定不变。
3. 组织脱水：将固定后的组织块依次置于50%、70%、80%、90%的酒精溶液中脱水，每次1小时。
4. 透明和浸蜡：将脱水后的组织块置于二甲苯溶液中透明2次，每次15分钟，然后将其置于石蜡溶液中浸蜡2次，每次1小时。
5. 切片与贴片：将浸蜡后的组织块进行石蜡切片，厚度为5μm，将切片置于烘片架上烘干。
6. he染色：将切片置于he染色液中染色10分钟，然后用水冲洗掉残余的染液。
7. 封片与观察：将染色后的切片用中性树胶封片，然后用光学显微镜观察并记录结果。
四、实验结果通过he染色，我们得到了小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器的石蜡切片，并观察到了各个脏器的组织结构和细胞形态。
其中，心脏的肌纤维呈束状排列，肝细胞的细胞核呈圆形或卵圆形，脾脏的淋巴细胞和巨噬细胞分布较为密集，肺泡上皮细胞呈扁平状排列在肺泡腔内，肾脏的肾小球和肾小管结构清晰可见。
五、结果分析通过he染色实验结果可以看出，小鼠的各个脏器具有不同的组织结构和细胞形态。
这些形态学特征反映了各个脏器的生理功能和特点。
例如，心脏的肌纤维呈束状排列，有利于心脏的收缩和舒张；肝细胞具有圆形或卵圆形的细胞核，表明肝脏具有强大的代谢功能；脾脏中分布着大量的淋巴细胞和巨噬细胞，提示脾脏在免疫系统中具有重要作用；肺泡上皮细胞呈扁平状排列在肺泡腔内，有利于气体交换；肾脏的肾小球和肾小管结构清晰可见，表明肾脏具有滤过功能。
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
小鼠脂肪组织石蜡切片制作方法
小 鼠脂 肪 组 织 石 蜡 切 片制 作 方 法
董 学 易 ， 孙 慧蕊 ， 赵 秀兰 ， 赵
关键词 ： 脂 肪组织 ； 石蜡 制片 ； Ｈ Ｅ染色 中图分类 号 ： Ｒ ３ ６ 文献标志码 ： Ｂ
文章 编 号 ： １ ０ ０ １— ７ ３ ９ ９ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ５— ０ ５ ８ ４— ０ ２
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ ３ ３ １ ５ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｃ ｊ ｃ ｅ ｐ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ５片机购 自德 国。
１ ． ２ 方 法
迈 新 ＝＝ 技 术 交 琉
１ ． ２ ． １ 石蜡 包埋脂肪组 织 正常昆明系小 鼠的脂肪 组织标 本１ Ｏ块 ， 大小均为 １ ． ５ ａ ｍ×１ ｃ ｍ ｘ ０ ． ２ ａ ｍ， 实验组和对照组 各 ５块 ， １ ０块脂肪组织 均用 １ ０ ％中性福尔马林 固定 ３ ６ ｈ ， 对 照组采用常规制 片程序进行处 理 ， 实验组采用特 殊处 理制片 程序进行处理 。具体程序 处理时间详见 表 １ ， 浸蜡温 度均为
表 １ 脂肪组织特殊处理与常规处理程序表
肪组织切片存在 困难 。我们在 日常工作 中对 小 鼠的脂肪
组织进行多次实验 ， 获得 较为满 意的脂 肪组织 切 片 ， 现 报 道
如下 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材料 与试 剂
昆明系小 鼠正 常脂肪 组织 标本 ， １ ０ ％ 中
性 福 尔 马林 、 ９ ５ ％乙醇 、 无 水 乙醇 、 二 甲苯 ， 均 购 白天 津 致 远
公 司。苏木精 、 伊 红 染液 均 购 自北 京 中杉金 桥 公 司。石蜡
（ 熔点 ６ ０ —６ ５℃ ） 购 自 Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ公 司 。 Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ Ｒ Ｍ ２ ２ ３ ５ 型 轮
小白鼠组织石蜡切片制备法的探讨
小白鼠组织石蜡切片制备法的探讨［摘要］目的探讨小白鼠全身主要组织器官石蜡切片制备。
方法将固定好的各类组织按脱水透明的时间分为五个实验组分别进行脱水透明实验，得到最适合每种每种组织器官最脱水透明时间与方法。
结果：小白鼠组织块的最佳脱水时间是在浓度梯度分别 60 %、75 %、80%、95 %Ⅰ、95 %Ⅱ的各级乙醇中脑、肺为30min，肝、脾为 40min，心、肾 60 min，皮肤为75min，在浓度100 %Ⅰ、100 %Ⅱ乙醇中各 30 min。
透明时间脑、肺在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各20min,肝、脾在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各30min，心、肾在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各40min，皮肤在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中50min。
结论：按本实验得出的各组织器官最佳脱水透明时间所制备的小白鼠组织切片蜡带连续，切片平整均匀，经HE染色后观察组织形态完整，染色对比鲜明，很好的满足科研工作的需要。
［关键词］石蜡切片脱水透明浸蜡［中图分类号］ R 331 ［文献标识码］A ［文章编号］小白鼠是最常使用的实验动物之一，其作为实验载体广泛应用于医药和生命科学领域，但因为其组织结构柔软小，纤维组织又较少，所以使用常规方法制作的切片往往达不到很好的效果，本课题组通过对制片过程中的关键步骤--脱水透明处理时间上的反复实践与摸索，得到适合小白鼠全身主要组织器官切片的制备方法。
[1]1材料与方法：1.1材料与仪器：（1)实验动物：清洁级健康雄鼠40只，鼠龄在4-6个月，体重290-350克，由井冈山大学动物实验室提供。
（2）试剂：10%福尔马林液(北京雷根生物有限公司），无水乙醇（无锡佳妮化工有限公司）、二甲苯（天津致远化学试剂有限公司），切片石蜡，旋转式切片机（德国莱卡），苏木素-伊红（HE）染色液(北京雷根生物有限公司）。
1.2方法; 小白鼠用颈椎脱臼法处死，取其大脑，肝脏，脾脏，心脏，肺脏，肾脏，皮肤等七种组织，切取的组织块厚度一般为 0.4 cm -0.8 cm，大小 1.0 cm-1.5 cm。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
小鼠眼球标本石蜡切片技术的探索与改进1
小鼠眼球标本石蜡切片技术的探索与改进目的眼球组织结构特殊，从眼球壁各层组织到晶状体、玻璃体，软硬程度各不相同，连接性差，如果采用普通的石蜡切片步骤，会造成各层分离，尤其是视网膜的脱离，难以制作出完整的眼球石蜡切片。
而且动物标本与人的标本存在一定程度的差异，动物的组织比人的组织柔软，含水量多，在石蜡制片过程中操作不当容易出现组织块变脆，影响切片，因此小鼠的石蜡切片不能完全按照人的石蜡切片程序来进行。
我们实验室通过对小鼠石蜡切片制作方法的多次探索，总结出一些特别用于小鼠眼球的石蜡切片技术改进方法。
方法BALB/c小鼠20只，拉颈处死，无菌条件下手术摘除眼球并做好标记。
与普通组织标本不同的是，小鼠眼球石蜡切片的第一步是固定，小鼠眼球离体以后，由于质地太软，不能立即进行取材，否则会造成眼球各部分变形和眼内容物的脱出。
所以需要先经过固定液的固定。
经过对各种固定液的尝试，我们认为采用冰醋酸、甲醛、生理盐水和75%乙醇按照1:2:7:10的比例混合而成的固定液对于制片效果较好。
固定时间为24小时。
固定后进行取材。
将眼球标本置于水平方位，沿视神经的上方和下方，从眼球后壁向角膜分别剖开。
组织脱水采用乙醇脱水：将标本分别经过70%、80%、90%、95%、95%、100%和100%的乙醇，每一步骤脱水1小时，透明采用二甲苯：每步1小时，重复3缸。
浸蜡采用熔点为58℃的石蜡，每缸1小时，重复3缸。
包埋过程中需要注意的是，浸完蜡的标本可以先放于熔化的石蜡中等待包埋；包埋过程中动作一定要迅速，时间太久石蜡会凝固，导致切片时组织和石蜡的分离。
切片我们采用4μm的厚度，经过对烤片时间的摸索，烤片时间太短切片染色时容易脱落，烤片应该为60℃，3~4个小时。
结果经过我们对小鼠眼球石蜡切片技术方法的一些改进，切片染色效果很好，眼球壁各层次分明，细胞排列整齐，染色颜色鲜艳，特别是不再出现视网膜脱离的现象（图1）。
结论综上所述，我们对小鼠眼球石蜡切片技术方法的一系列改进方法操作简单，易于实现，耗费较小，为今后动物眼球石蜡切片技术的创新和改进提供了一定的依据。
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小鼠部分组织的石蜡切片制作
一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包
埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其
组织结构。
二、材料与用具
1 •材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2 •用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤
1 .取材及固定
取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组
织块。
用先用0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污
物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀
或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是
管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 ,
固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2 .冲洗
固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3 .脱水和硬化
经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换
出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：
30%> 5C%> 7%> 80%> 9%> 95%> 10（% （I ）> 10（% （n ）
组织块在各级较低浓酒精（小于70% ）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过
0.5立方厘米的组织块脱水时间为6〜12 hr，在高浓度酒精中（大于70%）脱水时间为3 hr
左右。
组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。
由于无水酒精有使组织变脆
的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15〜30 min左右。
在脱水瓶中酒
精的量与组织块之比约为50:1。
简化步骤如下：
70% （一夜）——80% （1 hr）——90% （30 分）——95% （30 分）——100% （15 分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分）
4 .透明
透明是石蜡切片法切片前必经的一步。
其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒
精，以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中，故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。
经
过透明剂处理的组织块用肉眼对光观察呈透明现象，所以这个过程称为透明。
常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯等，这些都是穿透力强易使组织变脆的透明剂， 因此透明
的时间宜短，一般在 20 min 即可。
透明时组织块由无水酒精中取出，先放入二甲苯和无水酒精等量混合的溶剂中 然后取出放入纯二甲苯中
20 min 即可。
5 .浸渗
浸渗过程是使包埋组织用的物质深入到所有的组织间隙中， 然后再通过各种方法使这种物质
凝固，而将组织材料包埋其中。
石蜡切片法和火棉胶切片法都需要浸渗过程。
石蜡切片法是将加热的石蜡渗到组织中而火棉 胶切片法
是使火棉胶渗到组织间隙中去。
在浸渗前要先将选好的石蜡分别以容器装好放在恒温箱中，
使其杂质沉淀。
石蜡最好选用软 蜡和硬蜡两种，软蜡熔点为 45〜50C 之间，硬蜡熔点为 56〜58C 之间，60〜62C 的硬蜡很 少用。
冬天室温较低时多用软蜡，夏天室温较高时多用硬蜡。
浸渗应在自动恒温箱中进行。
组织块在各个蜡杯中浸蜡的时间如下： 软蜡1 30mi n 软蜡2 30min 硬蜡1 30〜60min 硬蜡2
60〜120min
这一时间不是固定不变的，应视组织块的种类及大小而相应延长或缩短浸蜡时间。
浸蜡的总
时间一般为：0.5立方厘米的组织块时间为 6〜8 hr ; 0.2〜0.3立方厘米的组织块时间为
3〜5
hr ； 0.1〜0.2立方厘米的组织块时间为 2〜3 hr 。
当发现蜡杯中有灰尘或组织碎块时应使其沉
淀或过滤后再使用。
浸蜡不透包埋后会出现白色不透明部分，此时需要在浸蜡一次。
6 .包埋
包埋就是将已经浸渗好的组织块包埋于浸渗剂中，石蜡包埋法如下。
浸蜡终了时，将预先预热好的和第四杯石蜡相同熔点的石蜡倒入折好的蜡槽内， 然后从第四 个蜡杯中取出组织块，放入蜡槽内， 摆好位置，注意组织切面的摆放方向。
自然冷却，也可以放入冷水中直接冷却。
7 .修块和切片
取已经包埋好的蜡块， 将纸盒拆下，用加热的刀片或解剖刀将其分成若干块 （每块组织占 块）,用解剖刀将组织块周围多余的石蜡切去，注意不要切到组织。
把有组织的蜡块修成正 方形或梯形。
在进行塑型时一定要注意组织块切面的方向。
蜡块塑好后将其粘在小木块上。
注意要粘牢。
最后在木块侧面用铅笔记上组织块名称、编号。
切片时采用手摇连续切片机。
使用切片机进行切片时，将蜡块固定在切片机上，调好距离和 所要求的切片厚度，然后用右手摇动手柄，即可进行切片了。
一般来讲生物切片的厚度在 5〜 10微米。
对于切下的切片不要用手去取，
因为体温可以使蜡片粘到手上，
正确的做法是用毛笔或牙签
挑取，然后放在载玻片上进行展片和粘片。
&展片和粘片
切下的组织蜡片往往带有皱褶，所以在染色前必须进行蜡片的展片和粘片， 即把切好的蜡片
平整的粘在载玻片上。
展片的温度因石蜡熔点的不同而的不同，一般的
56〜58C 的石蜡切
片C 的温水进行展片，48〜52 C 的石蜡切片用35 C 的温水进行展片。
等到蜡片充分展平后， 取一清洁载玻片，载玻片上涂一薄层蛋白甘油，然后在水中捞取蜡片，捞完后将蜡片摆正， 放到格盘内，置 38C 温箱中烘干，然后即可进行染色。
展片和粘片比较简单容易做， 但是如果处理不好则无法进行染色，
即使能染上色，组织切片
内部的结构也往往被破坏。
1 hr 左右,
放好组织后可以
9 .染色和封固采用苏木精伊红对染法（HE）染色结果是细胞核为紫色，细胞质为粉红色；苏木精伊红染色法整个染色过程如下：
取已经干燥的切片，放于盛有二甲苯的染缸内脱蜡10min左右，这个过程称为脱蜡。
脱完
蜡后的切片即可进行染色，具体染色过程和时间如下：
(1)100 %酒精洗去二甲苯2〜5min。
(2)95%酒精2 〜5min。
(3)90%酒精2 〜5min。
(4)80%酒精2 〜5min。
(5)70%酒精2 〜5min。
(6)50%酒精2 〜5min。
(7)蒸馏水洗2〜5min。
(8)苏木精染液10〜20min。
(9 )普通水洗1min。
(10)盐酸酒精分色数秒〜半min (70 %酒精100 mL+盐酸1 mL),分色到切片为带粉红色后立即取出。
(11)自来水冲洗数h r。
镜检切片呈清朗的蓝色，细胞核非常明显。
(12 )蒸馏水洗1min。
(13)50%酒精2 〜5min。
(14)70%酒精2 〜5min。
(15)80%酒精2 〜5min。
(16 )伊红酒精溶液对比染色2〜5min (95%酒精+ 0.5g伊红)。
(17) 95%酒精2 〜5min。
(18 )无水酒精I 3min。
(19 )无水酒精n 3min。
(20)无水酒精加等量二甲苯2min。
(21 )二甲苯数min到透明为止。
(22)自二甲苯中取出切片，放在格板内，滴少量的树胶于组织片中央。
(23)取一盖玻片，轻轻以盖玻片的一边接近载玻片，然后迅速放下盖玻片，树胶即迅速扩张到四周，校正好盖玻片方向。
将封好的切片放置在恒温箱中干燥。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染
色方法、固定方法、年月日。
四、显微摄影
封片完全凝固后，放在显微镜下观察，选择较好的切片在尼康显微镜下进行拍摄，图像保存为jpg格式文件。
五、实验结果
在观察到的小鼠肝组织中，细胞核被染为蓝色，细胞质被染为红色。