竹叶黄酮的提取和测定研究进展

定依据主要是黄酮类化合物的 结构和性质 ,以及其颜色反应 。定量测定方法主 要有比色法 、高效液相色谱法 、液相色谱 - 质谱法 等 ,各种方法均有自身的优缺点 。 311 黄酮类化合物的定性 [ 14, 16 ]
黄酮类化合物在其基本碳架上含有碱性氧原 子 ,而绝大多数都是带有酚性羟基的衍生物 ,因而 能与某些金属离子产生络合反应和与某些较强的 还原剂发生颜色反应 。因此可以黄酮类化合物的 这一特性对其进行定性鉴定 。
刘江雏等 [ 19 ]对硝酸铝 - 亚硝酸钠比色法进行 了改进 ,采用过滤法 ,将提取液中含有的絮状杂质 滤除 ,并对滤纸的吸附进行了校核 ,提高了测量的 稳定性 、准确度和重现性 。奚奇辉等 [ 17 ]也对比色 法进行了改进 ,用聚酰胺柱对提取液进行纯化 ,减 小了显色反应的干扰 ,使测得的总黄酮含量准确 可靠 。
许钢等 [ 15 ]对影响测量结果的几个因素进行了 研究 ,结果表明 : 比色溶液显色后 4h 内吸光度变 化不大 ,加入亚硝酸 、硝酸铝 、氢氧化钠的量分别 在 013 019mL、013 019mL、1 7mL 之间吸光 度基本不变 ,杂质对测定的影响不会超过 7%。
此外 ,还有人 [ 18 ]用简化的氯化铝比色法对样
竹叶黄酮的提取和测定研究进展
陈伟 1 ,陈惠 2 ,刘晓燕 2 ,徐宏楠 2
(1. 烟台经济技术开发区卫生防疫站 ,烟台 264006; 2. 烟台新时代健康产业有限公司 ,烟台 264006)
摘 要 :竹叶黄酮具有许多生物学功效 ,应用广泛 ;就竹叶黄酮的提取溶剂 、提取方法 、定性 、含量测定等的 研究进展进行了综述 。
取 1mL 样品乙醇提取液置于试管中 ,分别加 入不同试剂 , 摇匀后静置一段时间 , 观察颜色反 应 : ①加入三氯化铁呈墨绿色 ; ②加入中性醋酸铅 溶液有黄色粒状沉淀 ; ③加入浓硫酸溶液颜色由 深黄色转至橙红色 ; ④加入碳酸钠溶液呈亮黄色 ; ⑤加入硼酸 ( +草酸 )呈亮黄色 ; ⑥依次加入镁粉 、 数滴浓盐酸 (1次加入 ) ,在泡沫处呈紫红色 。 312 比色法
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显 ,且乙醇提取液的过滤 、溶剂回收 、干燥等过程 容易进行 。 212 提取方法的选择
竹叶黄酮的提取方法主要有索氏提取法 、热 回流提取法 、乙醇超声提取法 、微波浸提法等 。不 同的研究者分别采用不同的提取方式对竹叶黄酮 进行了提取 。王自军等 [ 7, 8, 12 ] 选用乙醇作为提取 剂 ,利用索氏提取装置 ,其中部分人还采用正交试 验对影响竹叶黄酮提取的因素进行了优化 ,影响 因素主要有乙醇浓度 、料液比 、提取时间 、提取次 数 、提取温 度等 。陈彦 等 [ 4, 9, 10, 13, 14, 16 ] 以 水或 乙醇 水溶液为提取剂 ,利用磨口三角瓶 ,上接冷凝管 , 对影响提取率的因素进行了优化 。李瑶等 [ 5, 11 ]选 用乙醇为提取剂 ,利用超声提取装置 ,选用正交试 验对影响竹叶黄酮提取的因素进行了优化 ,影响 因素主要有乙醇浓度 、料液比 、超声提取时间 、提 取次数 、提取温度等 。高梦祥等 [ 6, 18 ]在单因素试验 的基础上 ,采用正交试验 ,利用微波提取装置 ,确 定了微波提取的最佳条件 。
CHEN W e i1 , CHEN Hu i2 , L IU X iao2yan2 , XU Hong2nan2
(1. Yantai Ecnom ic Technoic Development Zoon Hygiene & Ep idem ic Station, Yantai 264006; 2. Yantai New Era. Healthy Industry Co. , LTD. , Yantai 264006)
竹叶黄酮类化合物的有效成分主要是黄酮糖 苷和香豆素类内酯 [ 1 ] 。张英等研究了竹叶黄酮中
的荭草苷 、异荭草苷 、牡荆苷和异牡荆苷等四类竹 叶碳苷黄酮 , 并对它们的结构进行了详细介绍 。 从构效关系上看 ,竹叶总黄酮的生理活性超过银 杏叶总黄酮 ,有类似 SOD 和 GSH - Px的作用 [ 1 ] , 具有优良的抗氧化 、抗衰老 、抗突变 、抗菌 、消炎 、 镇静 、清热解毒 、降压 、利尿 、防癌 、抑制脂肪酶 、保 护心脑血管等生物学功效 [ 2 ] 。竹叶提取物可以用 于化妆品的生产 ,还可作为天然甜味剂 、天然抗氧 化剂 、天 然 风 味 增 强 剂 、天 然 色 素 等 食 品 添 加 剂 [1, 3 ] 。
许钢等 [ 15 ]以丙酮作为提取剂对竹叶黄酮进行 提取 。丙酮极性小 ,提取率比热水提取法高 ,结果 较理想 ,但价格昂贵 ,对操作者 、环境也有一些不 良影响 。
黄锁义等 [ 16 ]采用索氏提取法 ,用沸水进行粗 提 ,乙醇溶液纯化 。用热水浸提虽然成本低 ,但提 取率也低 ,奚奇辉等 [ 17 ]在用热水进行竹叶黄酮提 取时 ,加入纤维素酶作为催化剂 ,对热水回流提取 法进行了改进 ,使竹叶黄酮的提取率有了很大的 提高 。
×VV×总m
式中 : E—样 品 光 密 度 ; V总 —样 品 总 溶 液 量 mL; V —吸取的样液量 mL; m —样品质量 g。
313 高效液相色谱法
张廷之等 [ 20 ]采用高效液相色谱法对毛竹样品
中总黄酮进行测定 。方法以 RP - C8柱为固定相 , 甲醇 - 水 - 冰乙酸 ( 40 ∶60 ∶2 )为流动相 ,流速
收稿日期 : 2007 - 02 - 08 作者简介 :陈伟 (1978 - ) ,男 ,主要从事食品 、水质理化分析与检测 。
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2 竹叶黄酮的提取
211 提取剂的选择 根据相似相溶原理 ,按竹叶黄酮的极性 ,以及
其在植物体内的结合状态选择提取剂 ,所以提取 剂呈多元化 ,常见的提取剂主要有乙醇 、甲醇 、丙 酮 、热水 。
定量 ,对 10种竹子的叶 、枝中的黄酮类化合物进行
了测量 。
邹耀洪 [ 22 ]用高效液相色谱法对箬竹中黄酮类
化合物进行了分析 。方法先用 Spheriso rb - C6 H6 柱对样品提取液进行纯化 , 然后以 μ - Bondapak
phenyl色谱柱为固定相 ,甲醇 - 水 ( 30 ∶70 )为流
动相 ,流速 1mL /m in,检测波长 340nm ,也辅以二极
管阵列检测技术 。
314 液相色谱 - 质谱法
陈彦等 [ 4 - 14 ]采用单因素或多因素多水平正交 法选定乙醇作为提取剂 ,并对乙醇的浓度分别进 行了优化 。由于提取方法不完全一致以及样品的 不同 ,所得到最佳的乙醇浓度也不完全相同 ,常见 的有 50%、60%、70%、75%、80%。
彭秧锡等 [ 9 ] 采用单因素试验 ,试验了在不同 温度下不同浓度的甲醇溶液对竹叶黄酮的提取情 况 ,由于甲醇的熔点较低 ,一定温度范围内随着温 度的升高 ,竹叶黄酮的提取率反而下降 ,当温度大 于 70℃度后 ,提取率严重降低 , 效果并不是很理 想。
关键词 :竹叶黄酮 ;提取 ;测定 中图分类号 : TS20114 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 - 2513 (2007) 04 - 0073 - 04
Re sea rch and deve lopm ent of extrac tion and de te rm ina tion of bam boo flavone
比色法测定总黄酮的原理 :黄酮类化合物与 铝离子在碱性与亚硝酸根存在条件下形成黄酮的 铝络合物 ,生产稳定的黄色 。在一定范围内黄色 的深浅与黄酮含量呈一定的比例关系 ,以芦丁 (对 照品 ) 作标准 ,于最大吸收波长处比色定量测 定 [ 16 ] 。
具体操作 :取芦丁对照品的乙醇溶液系列 ,用 乙醇溶液补充至一定体积 (常见的乙醇溶液体积 分数有 30%、60%、80% ) ,加入亚硝酸钠 ,摇匀 ,放 置一定时间后加入硝酸铝或氯化铝 ,一定时间后 再加入氢氧化钠溶液 ,混匀 ,用乙醇溶液稀释至刻 度 ,一定时间 (一般是 10m in)后在 510nm (也有在 509nm[ 8 ] 、274nm[ 4, 10 ] )处测定吸光度 。
类黄酮是一种人体需要 ,但有不能自身合成 的具有许多功效的植物活性成分 。竹叶黄酮是其 中的一种 ,是竹叶提取物的主要活性成分 。近十 多年来关于竹叶黄酮的研究颇为活跃 ,特别是日 本 、德国和美国 ,我国起步稍晚些 。本文就目前国 内关于竹叶黄酮的提取测定研究情况进行了详细 的综述 。
1 竹叶黄酮简介
高梦祥等 [ 6, 9, 12 ]通过试验分别比较了热水 、甲 醇 、乙醇 、丙酮等作为提取剂的优缺点 ,结果表明 在相同情况下乙醇的提取效果较甲醇 、丙酮 、热水 理想 。甲醇沸点低 ,易挥发 ,不易操作 ,导致温度 上升到一定程度 ( > 70℃) ,提取率反而下降 。热 水的极性大 ,作溶剂时 ,易把蛋白质 、糖类 、鞣质等 易溶于水的成分提出来 ,提取物易霉变 。随温度 上升水浸提总黄酮提取率有所提高 ,但提取率仍 较低 (与其它溶剂相比 ) ,增加提取时间提取率亦 提高不多 。乙醇 、丙酮克服了水提取法提取物存 放易腐败变质的缺点 ,丙酮极性小 ,提取率比水提 法高 ,后继的过滤等操作较容易 ,但价格昂贵 。乙 醇极性较小 ,含有羟基 , 80%乙醇水溶液既可提取 黄酮苷元又能提取黄酮苷 ,故提取率高 ,随温度上 升提取率有所提高 ,但 80℃以后提取率上升不明
主要颜色反应有 :
取样品提取液点在滤纸上 ,在一定条件下会 有不同的反应 : ①在可见光下呈淡黄色 ,在紫外光 下呈淡蓝色并有荧光斑点 ; ②将滤纸在氨水上方 熏 015m in,立即在紫外光下观察 ,呈极明显的黄褐 色荧光斑点 ; ③滴加 1%三氯化铝乙醇溶液 ,吹干 。 在可见光下呈灰黄色 ,在紫外光下呈黄色荧光斑 点 ; ④滴加 1%乙酸镁甲醇溶液 ,吹干 ,紫外光下呈 黄色斑点 。
品进行测定 ,吸取供试液 015mL ,加 1%氯化铝溶
液至 10mL ,摇匀 , 10m in后 ,以 1%氯化铝溶液为空