植物叶绿素含量测定_丙酮乙醇混合液法

2、wenku.baidu.comO2注入系统
1). CO2浓度是通过把精确控制的纯CO2注 入到已过滤了CO2的空气中来得到的。 2).可以确保高浓度CO2条件下的测量, 生 成完整的标准A-Ci曲线. 3).在系统软件控制下,设定所需CO2浓度, 或者使用AutoPrograms(自动程序模式) 自动测量一系列不同浓度的数据. 4).可以提供8小时高达2000 µmol mol-1 的CO2气体
7.空气缓冲气瓶 “Li-6400光合作用测定仪”是通过测量参 比室和样品室的气体浓度差异来测量光合速率和 蒸腾速率的。外界空气中CO2浓度的自然波动(尤 其是人为干扰比较大的情况下)必然造成参比室和 样品室浓度的差异，需采用气体缓冲瓶来尽可能 降低这一波动所造成的误差。一般空气缓冲气瓶 应放在远离人群、远离交通的通风之处。如在室 内或温室做实验需更大的缓冲，但不能采取把进 气管放在室外而机器在室内进行实验。
（一）硬件部分
控制器 主机
电缆线
外置光量子传感器
IRGA（红外分析器）或叶室
（二）实验室配置
叶 室 配 置
标准叶室
土壤叶室
荧光叶室
附 件
CO2注入系统
LED红／蓝光源
1、LED红／蓝光源
1）.可以提供0～2000µmol·m-2 ·-1之间的任意光照 s 强度
2）.产热极少，基本不对测量叶片的环境条件产生影 响。 3）.LED红/蓝光源不仅提供红色光（影 响光合作用的最主要光照），也提供蓝 色光（控制气孔开放的最主要光）。红 色光的波长为665nm，蓝色光的波长为 470nm。蓝色光是研究气孔动力学的关键。
第一章 植物光合与荧光生理指标的测定
本章的主要内容
（一）园艺植物光合指标的测定 （二）园艺植物荧光指标的测定
1、植物光合作用原理及常规测定方法 2、LI-6400光合作用系统构成原理及测定内容
3、LI-6400光合作用系统在测定过程中常见问题及解 决方法
实验一 使用LI-6400光合作用系统测定园艺作物光合 生理指标 实验二 使用LI-6400光合作用系统进行园艺作物光合 CO2响应曲线的测定
氧电极法
• 氧电极法是一种实验室常用的测氧技术。 氧电极由嵌在绝缘棒上的铂和银所构成， 以氯化钾为电解质，外覆聚乙烯薄膜，两 极间加0.6～0.8v的极化电压，溶氧可透过 薄膜在阴极上还原，同时在极间产生扩散 电流。此电流与溶解氧浓度成正比，电极 输出的记号，可在自动记录仪上记录下来。 叶片在进行光合作用时如光合速率高，则 放氧量多，溶解氧也多，叶片光合作用的 放氧量，可以作为测定光合速率的指标。
现代园艺实验技术
授课教师：
董文轩 齐明芳 陈俊琴
本课程主要目的和目标
本课程的主要目的 本课程的目的是使学生掌握园艺作物成分检测与分析 方法的基础上，侧重培养学生对现代仪器分析方法的原理 理解和具体应用能力。 本课程的主要目标 通过学习现代实验技术在园艺作物上的应用理论基础， 以及系统性综合实验的操作，提高学生的实验操作技能， 同时在掌握方法的基础上，增强综合运用、实验设计及观 察分析能力，提高学生的科研兴趣及解决实际问题的综合 素质与能力。
3.触样 尽量不要触摸所测量的叶片，更不要触摸 所测部位的叶表面。
4.测定时夹样品 上样时要叶面朝上轻铺到叶室中，叶片不 能有折叠或褶皱。 另一方面，叶片要夹在 叶室的有效部分，即3×2cm的标准叶室内， 防止叶室漏气而测量不准。
5.数据记录 当样品室CO2的浓度稳定时记录数据；也可观察△CO2的值， 稳定时记录数据。（通常一棵健康植株叶片的Gs值应在 0.1～1.0之间。超出此范围，即不正确。） 6.叶室位置 叶室要固定，与太阳光的位置要依据是否用自带光源而 定。当用自然光时，叶室要垂直太阳光放置；若用仪器自 带光源，叶室最好平放。因为这样，外界光量子传感器的 位置与植物叶子在植株上长的一样，垂直向上，外界光量 子参数也有用。
8.LED光源
LED光源即红蓝光源，是“Li一6400光合作 用测定仪”的配件之一。天气晴朗时可不用LED 光源，直接利用自然光测定自然状态下的光合速 率。LED光源虽能模拟一天的日变化，并迅速测 完，但与自然条件下植物光合速率的日变化相差 很远。如果测光补偿点或在阴天或多云的日子测 定时，LED光源是不可缺少的。
红外气体分析法
• 由于 CO2对红外线有较强的吸收能力， CO2含量的微小变化即可灵敏地反映在检测 仪上。 • 红外气体分析法是根据光合过程中吸收 CO2的多少，直接计算出光合速率大小的一 种测量方法，具有省时、省力、测量参数 多等优点，更重要的是此法重复性好、数 据稳定、准确，是目前最常用的一种方法。
半叶法
• 植物进行光合作用形成有机物，而有机物的积 累可使叶片单位面积的干物重增加，但是，叶片 在光下积累光合产物的同时，还会通过输导组织 将同化物运出，从而使测得的干重积累值偏低。 为了消除这一偏差，必须将待测叶片的一半遮黑， 测量相同时间内叶片被遮黑的一侧单位面积干重 的减少值，作为同化物输出量（和呼吸消耗量） 的估测值。这就是经典的“半叶法”测定光合速 率的基本原理。测定时须选择对称性良好、厚薄 均匀一致的两组叶片，一组叶片用于测量干重的 初始值，另一组（半叶遮黑的）叶片用于测定干 重的终了值，不但手续烦琐，而且误差较大。
主要内容
一、园艺植物光合作用分析技术
二、园艺植物与土壤中痕量元素的测定－原子吸收分析法三、
园艺植物与土壤中氮磷的测定－连续流动分析法差异四、园 艺植物芳香物质分析－气相色谱、质谱分析技术 五、糖类（激素）分析技术－液相色谱分析法 六、蛋白质分离纯化－柱层析分析技术 七、蛋白质分离鉴定－双向电泳分析技术 八、园艺植物组织切片与显微观察技术
9.环境控制 环境条件控制包括流量控制、 CO2浓度控制、 温度控制、光照控制等指标。一般情况下，流量 控制意义不大，在外界自然条件下测量流量为 500μmol／s，温室中测定流量为300μmol／s， 并最好控制温度和光强等因子。光曲线的测定需 要进行光照控制，CO2浓度控制对于 ACI曲线的 研究非常重要。一般不做温度控制，除非进行温 度曲线的测量。
CO2 + H2O → （CH2O） + O2
可见，测定公式中任一反应物的消耗速率或 产物的生成速率（包括物质的交换和能量的贮 藏）都可以用来计算净光合速率（Pn）。
净光合速率（Pn）的测定方法
（1）根据有机物的积累速率，主要有半叶法、植物 生长分析法； （2）根据CO2 及O2 体积的变化，主要有微量定积 检压法； （3）根据O2 浓度的变化，主要有氧电极法； （4）根据CO2浓度的变化：酸度法、碱吸收法、14C 标记法、红外气体分析法、微气象法。 目前，最常见的方法是红外气体分析法。
1. 测定时间的选择 选择晴天无云的上午9：30～11：30 测定较理想。除非设计测量阴天或夜间的 光合情况，以及日变化测量。
注意：不同生育期一般测1-2次， 天气情况要统一
2.选样 叶位要统一 代表性：选择最能代表叶色的植株 叶子的状态应选无病，完整，生 长健壮，向阳的功能叶片。 包括处理的代表性，温室或露地不 同栽培位置等的代表性。
二、LI-6400光合作用测量系统
LI-6400是美国LI-COR公司的第三代气体交换测量系统 主要特点： （1）开路式系统，保证了叶室内外环境条件的一致与同步变 化，同时保证了被测量叶片的环境因子的稳定； （2）CO2/H2O 分析器位于传感器的头部，消除了气体交换测 量的时滞； （3）可自动或手动控制叶室内部的环境条件（CO2浓度、光 照强度、相对湿度、温度等），方便地进行环境条件控制 下光合速率的测定以及响应曲线的测定。 （4）具有多个自动测量程序，如光响应曲线、CO2 响应曲线、 光诱导曲线、光呼吸曲线、荧光CO2 响应曲线、荧光光响 应曲线、荧光动力学曲线、荧光循环曲线等。 （5）叶室小，结构简单，操作方便。
（三）工作原理
LI-6400是气体交换测定系统。 光合作用与蒸腾作用的测量是 基于流经叶室的气流中CO2和H2O差异。
开放式气路系统是以气泵为动力，空气流经同 化室后排出，由于叶片光合气体中的CO2被部分 吸收，用IRGA测量进入同化室和流出同化室的空 气中CO2浓度差，并按下式计算出光合速率： Pn=F×△C/S
式中：Pn-光合速率；F-气体流量；△C-同化 室进气口与出气口CO2浓度差；S-叶片面积。
（四）LI-6400便携式光合作用仪功能
测 量 参 数 和 计 算 参 数
可计算光合作用指标
表观量子效率（AQY）：指200 mol.m-2.s-1低光强下光 －光合作用最初直线方程的斜率。 羧化效率（CE）：又称叶肉导度，是在CO2浓度低于 250 mol.m-2.s-1以下时测算出CO2 －光合直线方程的斜率。 气孔限制值（Ls）： Ls＝1－Ci/Ca 光呼吸速率： 2％O2、340μmol.mol-1 CO2低氧气体下 的呼吸速率。 CO2利用率（CUE）： CUE＝（Pnet×Tl － Rdark×Td）/ （Pgross×Tl） Tl和Td分别为光期和暗期（以小时计） Pgross和Pnet分别为粗、净Pn Rdark代表暗呼吸速率
1、植物光合荧光作用原理及常规测定方法 2、LI-6400荧光系统测定作物荧光指标的方法 3、影响作物荧光的因素及测定中的注意事项
实验三 使用LI-6400荧光系统测定作物光化学效率 实验四 使用LI-6400荧光系统测定作物电子传递速率 与光化学猝灭
一、光合作用测量的理论基础
绿色植物吸收阳光的能量，同化CO2 和H2O， 制造有机物并释放氧的过程，称为光合作用。 光合作用所产生的有机物质主要是糖类，贮藏 着能量。
可进行的自动测量
光响应曲线：根据拟合曲线得出光饱和 点、光补偿点、表观量子效率等参数。 CO2 响应曲线：主要研究CO2饱和点、 CO2补偿点和羧化效率 荧光CO2 响应曲线 荧光光响应曲线 荧光动力学曲线 荧光循环曲线等。
三、测量中的注意事项
植物的光合作用和其它的生命现象一 样，也经常受着外因和内因的影响而不断 地发生变化。影响光合速率的外部因素有： 光照、C02、温度、矿质元素、水分、氧、 日变化等内部因素有种间差异、品种间差 异、叶片性状、果实的存在等。因此时间 的选择对测量的准确性至关重要。
3、传导（Ci）低或为负值 排除植物本身或所选测量叶片的生长状态不 佳和外界环境（如，低温，或弱光）的因素外， 一可能是在水分调零时间短，以湿空气调零。解 决的办法是，水分调零应调的时间长些，百分位 上的数波动时，才算稳定。 二可能是干燥剂使用时间太长，需更换药品。
4、如果光合作用值太高,Ci将太低。其主要的起 因:IRGA匹配不良。 5、"IRGAs Not Ready"信息，电源 （1）IRGA接头未插紧,电缆不好,IRGA电路板保 险丝烧断。 （2）IRGA不起作用 如果电源接到IRGA,但它仍不起作用,可能是导光 轮电机停转。 （3）光照暗 样本室积垢太多,光学元件积尘,或者红外光源或 探测器失效。
使用中仪器常见问题
1、如果参考室浓度（CO2 R _µml值）显得稳定,而 样本室浓度（CO2S_µml值）不稳定,这将提示传 感器头某处漏气。如果两室都不稳定,则是主机漏 气，应检查可能发生漏气的地方。
2、进行光合作用时，样本室的CO2浓度 （CO2S_µml值）不变化，可能的原因： 检查传感器头部的风扇是否在旋转？如是， 请按照清洁光学通道的步骤清洁风扇。