食品微生物菌落总数测定方法
实验三--食品中微生物菌落总数的测定
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动
平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数Biblioteka 则计数五、菌落计数方法 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板 计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多 不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 有较大片状菌落生长者不宜采用， 若片状小于平板一半时且余部均 匀分布，则以半个平板菌落数2 倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视 为一个菌落
1、计数结果的表述
若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平 板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：
所有符合计数要求 的平板菌落数之和
菌落总数
例：10-2=232，244 10-3=33，35 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727
灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成
10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
菌落总数操作流程图
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌 移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个 平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为
空白对照
4、熔化培养基
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计
数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分
散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿
培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落
都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法引言：菌落总数是指在一定的培养条件下，菌落形成的数量。
菌落总数检测是食品微生物检验中的一个重要指标，用于评估食品中微生物的污染程度和卫生质量。
本文将介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、国标菌落总数检测方法的步骤国标菌落总数检测方法主要包括样品制备、平板计数和结果计算三个步骤。
1. 样品制备需要准备好待测样品。
样品通常是食品、水或其他物质，可以是液体或固体。
将样品称取一定的量，然后按照一定的比例与适量的生理盐水进行稀释，以降低样品中菌落的数量，使其适合于后续的菌落计数。
2. 平板计数将制备好的样品溶液均匀地倒入已经凝固的琼脂平板中，然后用无菌铲子或无菌玻璃棒将溶液均匀涂抹在琼脂平板表面。
待琼脂凝固后，将平板倒置放置在恒温培养箱中，以利于菌落的生长。
根据不同的样品特点和需求，可以选择适当的培养温度和时间。
3. 结果计算在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
在菌落形成后，使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
二、国标菌落总数检测方法的原理国标菌落总数检测方法基于微生物在适宜的培养条件下形成可见的菌落的特性进行。
其原理主要包括稀释平板法和菌落计数法。
1. 稀释平板法稀释平板法是菌落总数检测的一种常用方法。
通过将样品与一定量的生理盐水进行稀释，使菌落的数量适于计数。
然后将稀释好的样品均匀涂抹在琼脂平板上，使菌落在琼脂上生长形成可见的菌落。
根据样品的稀释倍数和计数得到的菌落数量，计算出菌落总数。
2. 菌落计数法菌落计数法是国标菌落总数检测方法的关键步骤。
在菌落生长适宜的条件下，菌落会在琼脂平板上形成。
然后使用计数器或目视观察，对菌落进行计数。
计数时需要遵循一定的规则，如避免重复计数、避免边缘菌落等。
最后，根据计数结果和样品的稀释倍数，计算出菌落总数。
三、国标菌落总数检测方法的应用国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、饮用水、药品、化妆品等领域。
食品微生物检验技术GB4789.2-2010 菌落总数测定
2. 培养 (1) 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。 (2) 如果样品中可能含有在琼脂培养基表 面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂 表面覆盖一薄层 琼脂培养基（约 4 mL）， 凝固后翻转平板，按 36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h（水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h）条件进行培养。
GB 4789.2-2010 食品安全国家标 准 食品微生物学检验 菌落总数测定
一、设备和材料 二、培养基和试剂 三、检验程序 四、操作步骤 五、结果与报告
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和 材料如下： (1) 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 (2) 冰箱：2 ℃～5 ℃。 (3) 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 (4) 天平：感量为 0.1 g。 (5) 均质器。 (6) 振荡器。 (7) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 (8) 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 (9) 无菌培养皿：直径 90 mm。 (10) pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 (11) 放大镜或/和菌落计数器。
三、 检验程序
检
样
25g(ml)样品+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液， 各取1ml分别加入无菌培养皿内 每个皿中加入15ml~20ml平板计 数琼脂培养基，混匀 培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告
四、操作步骤
1. 样品的稀释
(1) 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min~2min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击 式均 质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 (2) 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓 冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 （瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠） 中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 (3) 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管 壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的 无菌试管中（注意吸管或吸头尖 端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打 使其混 合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
食品微生物学检验菌落总数测定
食品微生物学检验菌落总数测定一、定义菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时光、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数不等同于细菌总数，有两方面的缘由：一方面，每种细菌生长时对环境条件的要求都不太一样，如厌氧菌和嗜冷菌在菌落总数测定条件下难以生长繁殖，有特别养分要求的一些细菌也受到了限制，因此，所得的结果，只反映一群在一般养分琼脂中发育的、嗜温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。
另一方面，细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上浮现的菌落可能来源于单个细胞，也可能来源于细胞块。
二、卫生学意义菌落总数是食品卫生指标中的重要项目，主要作为判定食品被污染程度的标记。
通常认为，食品中菌落总数越多，被致病菌污染的可能性越大。
菌落总数的多少在一定程度上标记着食品卫生质量的优劣，但不能单凭菌落总数一项指标来评定食品卫生质量的优劣，必需协作大肠菌群和致病菌项目的检验，才干做出比较全面精确的评价。
三、检验办法根据GB4789.2-2016举行，标准规定了食品中菌落总数(aerobic plate count)的测定办法。
菌落总数的检验程序见图4-4。
图4-4菌落总数的检验程序四、注重事项 (1)要有“无菌操作”的概念。
所用玻璃器皿必需是彻低灭菌的，剪刀、镊子等器具要举行消毒处理，假如样品有包装，应用70%在包装开口处擦拭后取样，全部操作应该在超净工作台或经过消毒处理的无菌室中举行。
(2)应注重取样的代表性，液体样品取样前须先振摇，固体样品取样时宜多采几个部位，不要集中于一点。
(3)稀释液可选用灭菌生理盐水、蒸馏水或蛋白胨水(1g/L)，蛋白胨水最为合适，由于蛋白胨水对细菌细胞有更好的庇护作用。
假如对含盐量较高的样品举行稀释，则宜采纳蒸馏水。
(4)在做10倍递增稀释时，吸管或吸头插入样品匀液内不能低于液面2.5cm，以防吸管或吸头从稀释液内取出时有过多的液体黏附于管外。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中菌落总数是指在特定条件下，通过培养基培养和统计法，对食品中细菌和真菌等微生物菌落数的测定。
食品中菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一，可以反映食品是否受到污染、保存条件是否良好等情况。
对食品中菌落总数进行准确测定和不确定度分析，对于食品卫生和质量控制至关重要。
二、食品中菌落总数的测定方法食品中菌落总数的测定方法通常采用菲尔氏杯平板法和薄膜法。
菲尔氏杯平板法是将食品样品稀释后均匀铺在富含寒天的琼脂培养基上，培养并统计菌落数；薄膜法是将食品样品均匀涂抹在琼脂培养基上，培养并统计菌落数。
三、食品中菌落总数的不确定度分析1. 采样不确定度：食品中菌落总数的测定首先要进行食品样品的采样和样品的制备，采样过程中可能会存在采样不均匀、采样器具的精密度等因素，引入采样不确定度。
2. 复现性不确定度：食品中菌落总数的测定通常需要进行多次重复测定，由于操作者、环境等因素的影响，可能会出现不一致的结果，引入复现性不确定度。
3. 实验条件不确定度：食品中菌落总数的测定受到实验条件的影响，如温度、湿度等条件会对微生物生长产生影响，引入实验条件不确定度。
4. 测量设备不确定度：食品中菌落总数的测定需要借助于培养箱、平板计数器等设备，设备的准确度和精度会影响测定结果，引入设备不确定度。
四、食品中菌落总数的不确定度评定食品中菌落总数的不确定度评定需要考虑上述不确定度因素的影响，并采用合适的方法进行计算评定。
不确定度评定的目的是为了确定测定结果的可靠性和准确性，提高测定结果的可信度。
1. 不确定度计算方法食品中菌落总数的不确定度可以采用GUM不确定度评定方法，通过不确定度传递法和不确定度组分法计算总的不确定度。
在实际计算中，需要考虑到各种不确定度来源的具体数值和权重，综合计算得出总的不确定度值。
2. 不确定度控制方法为了减小不确定度的影响，可以采取以下控制方法：（1）采样不确定度的控制：采用合适的采样方法和器具，确保样品的均匀性和代表性；（2）复现性不确定度的控制：严格控制实验条件和培养操作流程，尽量减小操作者和环境的影响；（3）实验条件不确定度的控制：控制实验条件的稳定性和准确性，进行实验前后的环境监测和校准；（4）测量设备不确定度的控制：对测量设备进行定期维护和校准，确保设备的准确度和精度。
菌落计数
食品微生物学检验菌落总数测定一、培养基和试剂1、平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基成分胰蛋白胨 5.0 g酵母浸膏 2.5 g葡萄糖 1.0 g琼脂 15.0 g蒸馏水 1000 mLpH 7.0±0.2制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
2、磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g蒸馏水 500 mLpH 7.2制法：贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L 氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌15 min。
3、无菌生理盐水成分氯化钠 8.5 g蒸馏水 1 000 mL制法：称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
二、操作步骤样品的稀释1、固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
2、液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
3、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
4、按3操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析一、引言食品中的微生物污染是导致食品质量问题的重要原因之一。
食品中菌落总数是评价食品卫生状况的指标之一，它可以反映食品中的微生物污染程度。
准确测定食品中的菌落总数并分析其不确定度，对于保证食品安全和卫生具有重要意义。
二、理论基础菌落总数是指在一定条件下生长发育的微生物形成的菌落的总数。
通常使用平皿计数法来测定食品中的菌落总数，该方法主要包括以下几个步骤：1、样品制备：将食品样品精确称重，并加入合适的培养基中。
2、培养：将加入样品的培养基倒入培养皿中，倒平并让其凝固。
3、孵育：将培养皿放入恒温箱中，在适宜的温度条件下孵育一定时间。
4、计数：取出培养皿，使用显微镜观察并计数菌落的数量。
不确定度是测量结果与所测量实际值之间的偏差的度量，通常用标准偏差表示。
计算不确定度需要考虑到样品制备、培养、孵育过程中的误差以及人为误差等因素。
三、实验方法2、制备菌落计数平皿：将无菌琼脂糖培养基熔化，并冷却到45-50℃左右，加入适量的样品，充分混合后倒入培养皿中。
3、培养和孵育：将培养皿倒平，并在无菌条件下放置一段时间，直到琼脂糖凝固。
4、计数：将培养好的平皿放置在显微镜下，使用透明计数器或格子计数器对菌落进行计数，并记录结果。
四、结果分析根据平皿计数法所测得的菌落总数结果，计算菌落总数的平均值、标准偏差和不确定度。
标准偏差的计算公式为：s = \sqrt{\frac{\Sigma(x_i-\overline{x})^2}{n-1}}x_i为单次测量结果，\overline{x}为平均值，n为测量次数，\Sigma表示求和。
不确定度的计算公式为：U = k \times sU为不确定度，k为覆盖因子，可以参考标准不确定度表格进行选择。
五、结论通过实验测定了食品中的菌落总数，并对测量结果进行了不确定度分析。
根据实验结果，可以评估食品中的微生物污染程度，为食品安全和卫生提供科学依据。
测定结果的不确定度分析可以评价测量结果的可靠性，并为后续食品质量控制提供参考。
菌落总数
6ml(加24m1L灭菌水) 120 6g(加24mL灭菌水) 30g 30g 30g 150 150 150 150 150
鲜蛋、糟蛋、皮蛋 30g
注：煌绿应在临用时加入肉汤中,煌绿浓度系以检样和肉汤的总量计算。
13
(4)水产食品检验：
鱼类：采取检样的部位为背肌。先用流水将鱼体体表冲净,去鳞,再用 75%酒精棉球擦净鱼背,待干后用灭菌刀在鱼背部沿脊椎切开5cm,再切 开两端使两块背肌分别向两侧翻开,然后用无菌剪子剪取肉25g,放入灭 菌乳钵内，用灭菌剪子剪碎，加灭菌海砂或玻璃砂研磨(有条件情况下 可用均质器),检样磨碎后加入225mL灭菌生理盐水,混匀成稀释液。 注:剪取肉样时,勿触破及沾上鱼皮。鱼糜制品和熟制品应放乳钵内 进一步捣碎后，再加生理盐水混匀成稀释液。 虾类：采取检样的部位为腹节内的肌肉。将虾体在流水下冲净,摘去头 胸节，用灭菌剪子剪除腹节与头胸节连接处的肌肉,然后挤出腹节内的 肌肉，称取25g放入灭菌乳钵内，以后操作同鱼类检样处理。 蟹类：采取检样的部位为胸部肌肉.将蟹体在流水下冲净,剥去壳盖和 腹脐,再去除鳃条,复臵流水下冲净。用75%酒精棉球擦拭前后外壁,臵 灭菌搪瓷盘上待干.然后用灭菌剪子剪开成左右两片,再用双手将一片 蟹体的胸部肌肉挤出(用手指从足根一端向剪开的一端挤压),称取25g, 臵灭菌乳钵内。以下操作同鱼类检样处理。 贝壳类：采样部位为贝壳内容物。先用流水刷洗贝壳,刷净后放在铺有 灭菌毛巾的清洁的搪瓷盘或工作台上,采样者将双手洗净并用75%酒精 棉球涂擦消毒后，用灭菌小钝刀从贝壳的张口处隙缝中徐徐切入,撬开 壳盖,再用灭菌镊子取出整个内容物,称取25g臵灭菌乳钵内,以下操作 同鱼类检样处理。
每皿内加入适量营养琼脂
菌落计数
报告
食品菌落总数检测标准
食品菌落总数检测标准食品安全一直是人们关注的焦点，而食品中的菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标之一。
菌落总数是指在一定条件下，菌落在寄主（通常是琼脂培养基）上生长并形成可见菌落的数量。
食品中的菌落总数一般反映了食品是否受到了污染，以及食品是否在生产、加工、储存和运输过程中得到了适当的处理和保护。
根据《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定 GB 4789.2-2010》，食品中的菌落总数检测应该遵循以下步骤和标准：1. 样品的准备。
在进行菌落总数检测之前，首先需要准备好样品。
样品的准备应该符合相应的标准，避免样品受到二次污染或者样品本身就存在菌落过多的情况。
2. 菌落总数的测定方法。
菌落总数的测定方法一般采用平板计数法。
具体操作包括在琼脂培养基上平铺待测样品，然后在适当的温度下培养一定时间，再进行菌落的计数。
在进行菌落总数检测时，需要注意培养基的选择、温度的控制、培养时间等因素，以保证检测结果的准确性。
3. 结果的判定。
根据国家标准，食品中的菌落总数应该符合相应的标准要求。
一般来说，菌落总数超过一定的标准值就属于不合格。
对于不同类型的食品，其菌落总数的标准值也有所不同。
因此，在进行菌落总数检测时，需要参照相应的标准进行判定。
4. 结果的记录和报告。
检测结果应该及时记录并形成检测报告。
检测报告应包括样品的信息、检测方法、检测结果以及判定结果等内容。
检测报告应该保存一定的时间，并且在需要时能够提供给相关部门或者客户查阅。
总之，食品中的菌落总数检测是保障食品安全的重要环节，严格按照国家标准进行检测是确保食品质量的关键。
只有加强对食品菌落总数的检测，才能更好地保障人们的饮食安全，促进食品行业的健康发展。
菌落总数测定的步骤
菌落总数测定的步骤以菌落总数测定的步骤为标题，写一篇文章：菌落总数测定是微生物学实验中常用的方法之一，用于确定水样、食品样品或其他物质中的微生物菌落数。
下面将详细介绍菌落总数测定的步骤。
一、准备工作在进行菌落总数测定之前，首先需要准备好所需的实验材料和设备。
这些包括培养基、平板、培养皿、移液器、恒温培养箱、显微镜等。
二、样品处理1. 从待测样品中取一定量，如10毫升。
2. 将样品加入到含有适当培养基的培养皿中。
3. 使用移液器将样品均匀涂布在培养基表面。
三、培养条件1. 将涂有样品的培养皿放入恒温培养箱中。
2. 设置适当的温度和培养时间。
四、计数菌落1. 取出培养皿，使用显微镜观察培养基表面的菌落。
2. 通过目测或使用计数板等工具，对菌落进行计数。
五、计算菌落总数1. 根据所使用的培养皿和所涂布的样品量，计算菌落形成的单位。
2. 将计数结果乘以单位，得到菌落总数。
六、结果分析通过菌落总数测定，可以得到待测样品中的微生物菌落数。
根据菌落总数的大小，可以初步判断待测样品是否符合微生物质量标准。
需要注意的是，在进行菌落总数测定时，应注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作的要求，以避免外界微生物的污染。
2. 培养基的选择要根据待测样品的特性，以确保菌落的生长和形成。
3. 培养条件的控制要准确，包括温度、湿度、氧气浓度等。
4. 在计数菌落时，要注意避免重复计数同一个菌落，以保证结果的准确性。
菌落总数测定是微生物学中常用的定量方法之一，它可以快速、准确地确定待测样品中微生物菌落的数量。
通过合理的实验步骤和操作，可以得到可靠的结果，并为食品、水质等领域的微生物质量控制提供参考依据。
菌落总数测定的方法
菌落总数测定的方法
菌落总数测定是一种常见的微生物检测方法，用于检验食品、水、药物、化妆品等样品中微生物的数量。
其测定步骤如下：
1. 准备好样品。
2. 将样品按一定比例加入培养基中，使得微生物得以繁殖。
3. 将培养基混匀后，将其倒入培养皿中，使得培养基均匀分布。
4. 使用平板法、斜板法或混合法等方法将培养皿中的培养基表面均匀涂布。
可根据样品中微生物的预估数量选择相应的涂布方式。
平板法适用于样品量较小的场合，斜板法适用于样品数量较大且需要进行质粘分析的场合，混合法适用于样品中微生物数量较低的情况。
5. 使用孔气道计数器或无菌的计数棒对培养皿进行计数，并计算得到菌落总数。
菌落总数可以根据前述涂布方式和培养时间进行调整。
通常，气道计数器需要在24-48小时内完成计数，而计数棒测定则需要在3-5天后进行。
6. 记录测定结果和样品信息，并分析评估菌落总数是否符合卫生标准。
菌落总数的检测方法
菌落总数的检测方法菌落总数是指在一定条件下，菌落在寒暖培养基上生长形成的一定大小的菌落总数。
菌落总数检测方法是食品微生物检测中的重要内容之一，也是评价食品卫生质量的重要指标之一。
正确的菌落总数检测方法可以有效地评估食品的卫生状况，为食品生产和加工提供重要依据。
本文将介绍菌落总数的检测方法及其步骤。
首先，准备好所需的材料和设备。
菌落总数的检测需要使用培养基、试剂、培养皿、移液器、恒温箱等设备。
在进行检测之前，要确保这些材料和设备的清洁和消毒，以避免外源污染对检测结果的影响。
其次，取样并制备样品。
从待检测的食品样品中取一定量的样品，然后按照一定比例将样品与生理盐水等稀释液混合均匀，制备出不同稀度的样品溶液。
制备好的样品溶液将作为后续菌落总数检测的样品。
接下来，进行菌落总数的检测操作。
将制备好的样品溶液分别均匀涂布在寒培养基和温培养基的培养皿上，然后在恒温箱中进行培养。
寒培养基通常在25℃左右培养，温培养基通常在37℃左右培养。
培养一定时间后，观察培养皿上的菌落情况，根据菌落的数量和大小进行计数和分析，得出菌落总数的检测结果。
最后，进行结果的统计和分析。
根据菌落总数的检测结果，可以对食品样品的卫生状况进行评价和分析，为食品生产和加工提供指导和依据。
同时，还可以根据检测结果对食品生产过程中的卫生管理和控制措施进行调整和改进，以确保食品的安全和卫生。
总之，菌落总数的检测方法是食品微生物检测中的重要内容，正确的检测方法和操作步骤对评价食品的卫生质量具有重要意义。
通过本文介绍的菌落总数检测方法及其步骤，希望能够为食品生产和加工提供有益的参考，保障食品的安全和卫生。
食品中菌落总数测定
知识点：菌落总数测定情境：微生物检测技术任务：菌落总数测定课程：食品微生物技术菌落总数测定原理一、菌落总数什么叫菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。
二、菌落总数测定原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
菌落总数测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
2.梯度稀释❞用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
❞按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
四、倒平板❞根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
❞及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
五、培养❞（1）待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48 h±2 h。
水产品30℃±1℃培养72h±3 h。
❞（2）如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板36℃±1℃培养48 h±2 h。
国标菌落总数检测方法
国标菌落总数检测方法国标菌落总数检测方法是一种常用的微生物检测方法，用于评估给定样品中的微生物污染水平。
该方法可以应用于食品、环境、水源等多个领域，以评估样品中微生物的数量。
下面将详细介绍国标菌落总数检测方法的步骤和原理。
一、步骤1.准备培养基：根据需要进行培养的菌种不同，可以选择适当的培养基。
通常，使用含水解鱼肉膏、蛋白胨、肉汤、大豆胨等成分的富含营养物质的琼脂培养基。
2.准备样品：样品可以是食品、水样、环境表面样品等。
根据不同的样品，采取适当的方法进行取样，确保样品代表性。
3.稀释样品：为了获得适当的菌落数，通常需要对样品进行稀释。
将一定数量的样品与适量的稀释液混合均匀，得到一系列不同浓度的稀释液。
4.涂布方法：将上一步稀释好的样品涂布于琼脂培养基上。
可以采用平板涂布法或膜过滤法。
平板涂布法是将稀释好的样品倒入已凝固的琼脂平板上，用涂布棒均匀涂布。
膜过滤法是将稀释好的样品过滤到已凝固的膜上，将膜放在培养基上。
5.培养条件：根据需要培养的菌种不同，选择合适的培养温度和时间。
一般而言，大多数细菌在30-37℃下培养24-48小时。
6.菌落计数：培养一定时间后，可以观察到样品中的菌落。
使用显微镜或计数板等工具，对菌落进行计数。
7.统计和计算：根据计数结果和稀释倍数，可以计算出原始样品中的菌落总数。
二、原理微生物培养基提供了微生物生长所需的营养物质。
在适当的温度和湿度下，微生物会在培养基上生长形成菌落。
每个菌落代表一种或多种微生物。
根据菌落的形态、大小和颜色等特征，可以初步推测菌种。
计数并统计菌落总数可以评估样品中微生物的数量。
在菌落总数检测方法中，样品的稀释是为了确保菌落的数量适宜且分散均匀。
过高的菌落数量可能导致菌落过于密集，不容易准确计数。
过低的菌落数量可能导致菌落太稀疏，有些菌落容易被忽略。
选择合适的稀释倍数可以使得菌落数量适宜，方便计数并计算菌落总数。
总结起来，国标菌落总数检测方法是一种常用的微生物检测方法，通过样品的稀释、涂布、培养和计数等步骤，评估给定样品中的微生物数量。
食品微生物菌落总数测定方法
食品微生物菌落总数测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
3 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂4 设备和材料4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 天平。
4.5 电炉。
4.6 吸管。
4.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.8 玻璃珠：直径约5mm。
4.9 平皿：直径为90mm。
4.10 试管。
4.11 放大镜。
4.12 菌落计数器。
4.13 酒精灯。
4.14 均质器或乳钵。
4.15 试管架。
4.16 灭菌刀或剪子。
4.17 灭菌镊子。
5 培养基和试剂5.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
5.3 生理盐水。
5.4 75％乙醇。
6 检验程序菌落总数的检验程序如下。
┌─────┐│ 检 样 │└─────┘↓┌─────────────┐│ 做成几个适当倍数的稀释液 │└─────────────┘↓┌──────────────┐│ 选择2～3个适宜稀释度 ││ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │└──────────────┘↓┌─────────────┐│ 每皿内加入适量营养琼脂 │└─────────────┘36±1℃ ↓ 48±2h┌─────┐│ 菌落计数 │└─────┘↓┌──────┐│ 报告 │└──────┘7 操作步骤7.1 检样稀释及培养7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
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食品微生物菌落总数测定方法
1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语
菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时
间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食
品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
3 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
4 设备和材料
4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 天平。
4.5 电炉。
4.6 吸管。
4.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.8 玻璃珠：直径约5mm。
4.9 平皿：直径为90mm。
4.10 试管。
4.11 放大镜。
4.12 菌落计数器。
4.13 酒精灯。
4.14 均质器或乳钵。
4.15 试管架。
4.16 灭菌刀或剪子。
4.17 灭菌镊子。
5 培养基和试剂
5.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
5.3 生理盐水。
5.4 75％乙醇。
6 检验程序
菌落总数的检验程序如下。
┌─────┐
│ 检 样 │
└─────┘
↓
┌─────────────┐
│ 做成几个适当倍数的稀释液 │
└─────────────┘
↓
┌──────────────┐
│ 选择2～3个适宜稀释度 │
│ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │
└──────────────┘
↓
┌─────────────┐
│ 每皿内加入适量营养琼脂 │
└─────────────┘
36±1℃ ↓ 48±2h
┌─────┐
│ 菌落计数 │
└─────┘
↓
┌──────┐
│ 报告 │
└──────┘
7 操作步骤
7.1 检样稀释及培养
7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8 000～10 000r/min的速度处理1min,
做成1∶10的均匀稀释液。
7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶10
0的稀释液。
7.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,
即换用1支1mL灭菌吸管。
7.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2～3个适宜稀释度,分别
在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
7.1.5 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
7.1.6 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h。
7.2 菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
在记下各平板
的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7.3 菌落计数的报告
7.3.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平
板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以
无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一
半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状
菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落；如果有不同来源
的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
7.3.2 稀释度的选择
7.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表中例1)。
7.3.2.2 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30～300之间,则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2,应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。
7.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以
释稀倍数报告之(见表中例4)。
7.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀
释倍数报告之(见表中例5)。
7.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表中例6)。
7.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
7.3.3 菌落数的报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效
数字后面的数值,以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来
表示(见表中“报告方式”栏)。
稀释度选择及菌落数报告方式
──┬─────────────┬──────┬────┬─────────│ 稀释液及菌落数 │ │菌落总数│ 报告方式
例次├────┬────┬───┤两稀释液之比│个/g或mL│ 个/g或mL
│ 10-1 │ 10-2 │ 10-3 │ │ │
──┼────┼────┼───┼──────┼────┼─────────
1 │多不可计│ 164 │ 20 │ - │ 16 400 │16 000或1.6×10**4
2 │多不可计│ 295 │ 46 │ 1.6 │ 37 750 │
3 8000或3.8×10**4
3 │多不可计│ 271 │ 60 │ 2.2 │ 27 100 │27 000或2.7×10**4
4 │多不可计│多不可计│ 313 │ - │ 313 000│31 000或3.1×10**5
5 │ 27 │ 11 │ 5 │ - │ 270 │270或2.7×10**2
6 │ 0 │ 0 │ 0 │ - │ ＜1×10│ ＜10
7 │多不可计│ 305 │ 12 │ - │ 30 500│31 000或3.1×10**4
──┴────┴────┴───┴──────┴────┴─────────
──────────。