第二讲免疫器官的观察与免疫细胞的分离
合集下载
免疫细胞的分离及检测技术课件
Ficoll分离液---聚蔗糖-泛影葡胺溶液
➢2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1 份34%泛影葡胺生理盐水溶液， 比重为1.077± 0.002
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
二 、淋巴细胞分离
（去单核细胞）
➢ 贴壁粘附法 ➢ 吸附柱过滤法 ➢ 磁铁吸引法 ➢ Percoll 分离液法
二、B细胞表面标志
➢ SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部 分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以 SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指 标。
➢ CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和 B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而 B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的
细胞活力的检测
常用方法是台盼蓝染色法。这种染料不能透过活 细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，死 亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细 胞而使细胞着色（蓝色）。
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志 是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。
➢ 根据T细胞的免疫效应功能和表面CD分 子表达至少可以分为：辅助性T细胞、细 胞毒性T细胞和调节性T细胞；SmIg为B 细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标， 以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1 和B2两个亚群；目前多以CD3-、 CD16+、CD56+ 作为NK细胞的典型标 志。
三、NK细胞表面标志
人类NK细胞表面标志主要以 CD16、CD56来认定，临床上将 CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为 NK细胞。
T细胞及NK细胞
第三节 其他的免疫细胞
抗原提呈类细胞表面标志
医学免疫学实验：免疫器官和免疫细胞
第一次实验：免疫器官和免疫细胞（示教）一、免疫器官免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。
在哺乳类动物，中枢免疫器官包括胸腺和骨髓；在禽类，中枢免疫器官包括胸腺和法氏囊。
外周免疫器官有淋巴结、脾脏等。
1.胸腺胸腺位于胸腔纵隔上部，胸骨后方。
胸腺的组织结构：胸腺分左右两叶，表面覆盖有一层结缔组织被膜，被膜深入实质将实质分割成若干小叶。
胸腺小叶的外层为皮质，内层为髓质。
胸腺皮质区分为浅皮质区和深皮质区。
皮质区内85%-90％的细胞为未成熟的T 细胞。
髓质区内有大量的胸腺上皮细胞和稀疏分散的较成熟的胸腺细胞、单核﹣巨噬细胞和树突状细胞。
人类胸腺在胚胎期及出生后2岁内生长很快，体积较大；2岁后到青春期发育仍很快；但青春期后开始萎缩，逐渐由脂肪组织所代替，它在机体免疫功能的建立上占有重要地位。
骨髓内有部分淋巴细胞迁移到胸腺内，在胸腺素的影响下，增殖分化成为具有免疫功能的T 细胞，再经血流输送到淋巴结和脾等周围免疫器官发挥免疫功能。
若新生期切除胸腺或胸腺生长肿瘤，可导致细胞免疫功能显著下降，常因感染而死亡。
胸腺组织切片2.骨髓骨髓位于骨髓腔中，分为红骨髓和黄骨髓。
红骨髓有造血功能，由造血组织和血窦构成。
造血组织主要由基质细胞和造血细胞组成。
基质细胞包括网状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等。
骨髓是各类血细胞和免疫细胞发生的场所。
骨髓又是B 细胞分化成熟的场所和体液免疫应答发生的场所。
因此骨髓既是中枢免疫器官又是外周免疫器官。
骨髓概述图3.法氏囊在禽类，法氏囊是位于泄殖腔上方的一个囊状物，内充满着淋巴组织，其中淋巴细胞不断受囊素的影响，发育成B 淋巴细胞。
若新生期切除法氏囊，抗体的形成将受影响，而细胞免疫功能不受影响。
对于 B 淋巴细胞发育而言，禽类的法氏囊具有哺乳类动物骨髓相似的作用。
法氏囊外观4.淋巴结淋巴结的实质分为皮质区和髓质区两部分。
皮质区分为浅皮质区和深皮质区两部分。
浅皮质区靠近被膜下，是B 细胞定居的场所，称为非胸腺依赖区。
2第二章 免疫器官和免疫细胞ok
各种与免疫有关的细胞
一、淋巴细胞
淋巴细胞是机体主要免疫细胞,分为许多表型和 功能均不同的群体:T、B、NK等。
未活化淋巴细胞直 径6～7微米，浆/ 核比例很小
透射电镜显示未活化 淋巴细胞胞核致密， 胞浆中细胞器很少
淋巴细胞的起源和分化
胸腺
特异抗原 识别受体 Ｂ细胞
转移到淋巴器官中
T细胞
转移到淋巴器官中
• 丝裂原—可直接诱导静息T细胞的活化、增殖和分化。 • T细胞表面有丝裂原受体。
（5）细胞因子受体 （6）主要组织相容性抗原（MHC分子）
MHC-I：所有T细胞表面均表达 MHC-II：活化后的T细胞表面表达 (这种代表个体特异性的同种异型抗原称移植抗原 或组织相容性抗原，其中能引起强而迅速排斥反应 的抗原称主要组织相容性抗原，引起较弱排斥反应 的抗原称次要组织相容性抗原。)
2.T淋巴细胞亚群及其功能
根据免疫效应功能分为
辅助性T细胞（TH） 细胞毒T细胞（CTL、TC） 调节性T细胞(TR)
CD4
+
T细胞
CD8
+
T细胞
根据是否表达CD4或CD8分子分为
+ + （1）CD4 辅助性T细胞（CD4 Th细胞)
• Th1细胞—细胞免疫,介导迟发型超敏反应。 • Th2细胞—促进体液免疫 参与超敏反应 抗寄生虫感染
（三）B淋巴细胞
三、其他免疫细胞
造血干细胞 粒细胞
肥大细胞
红细胞
血小板
THANK YOU
FOR YOUR ATTENTION!
返回总目录
骨髓
1.哺乳动物和人的造血器官 2.B细胞分化、发育、成熟的埸所
3.抗体产生的重要部位
免疫细胞的分离及检测课件
5
免疫磁珠分离法
6
（二）巨噬细胞的分离
☆斑蝥敷贴法分离人巨噬细胞 ☆动物的巨噬细胞直接从腹腔渗出液中获取
7
（三）中性粒细胞的分离
聚合物加速沉降法 可从外周血中分离出白细胞
WBC
• Ficoll分离法 可从白细胞中分离出纯化的中性粒细胞
血浆
RBC
RBC
(抗凝血)
8
Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离中性粒细胞
有或无
无
增多、嗜碱 增多、嗜碱
有或无
有或无
有或无
有或无
未转化的淋巴细胞
6～8
不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
3H-TdR掺入法
原理:
刺激物
外周血（T）G0期 37℃56h
G1期→ S1期
3H-TdR
合成DNA↑
DNA- 3H-TdR
37℃16h
测淋巴细胞内放射量（cpm） 判断淋巴细胞转化程度
34
淋巴细胞转化的检测方法
形态学检查法 3H-TdR掺入法 MTT比色法
35
形态学检查法
36
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
细胞大小(直径 μm) 核大小、染色质 核仁 有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡 伪足
37
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞
过渡型
12～20
12～16
增大、疏松 增大、疏松
清晰、1～4个 有或无
目录
第一节 吞噬细胞的分离和收集 第二节 外周血单个核细胞的分离和纯化 第三节 淋巴细胞及其亚群的分离
1
免疫细胞的分离及检测
免疫细胞的分离 是指将各种参与免疫反应的 细胞从血液或组织中分离出来
免疫磁珠分离法
6
（二）巨噬细胞的分离
☆斑蝥敷贴法分离人巨噬细胞 ☆动物的巨噬细胞直接从腹腔渗出液中获取
7
（三）中性粒细胞的分离
聚合物加速沉降法 可从外周血中分离出白细胞
WBC
• Ficoll分离法 可从白细胞中分离出纯化的中性粒细胞
血浆
RBC
RBC
(抗凝血)
8
Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离中性粒细胞
有或无
无
增多、嗜碱 增多、嗜碱
有或无
有或无
有或无
有或无
未转化的淋巴细胞
6～8
不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
3H-TdR掺入法
原理:
刺激物
外周血（T）G0期 37℃56h
G1期→ S1期
3H-TdR
合成DNA↑
DNA- 3H-TdR
37℃16h
测淋巴细胞内放射量（cpm） 判断淋巴细胞转化程度
34
淋巴细胞转化的检测方法
形态学检查法 3H-TdR掺入法 MTT比色法
35
形态学检查法
36
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
细胞大小(直径 μm) 核大小、染色质 核仁 有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡 伪足
37
转化的淋巴细胞
淋巴母细胞
过渡型
12～20
12～16
增大、疏松 增大、疏松
清晰、1～4个 有或无
目录
第一节 吞噬细胞的分离和收集 第二节 外周血单个核细胞的分离和纯化 第三节 淋巴细胞及其亚群的分离
1
免疫细胞的分离及检测
免疫细胞的分离 是指将各种参与免疫反应的 细胞从血液或组织中分离出来
免疫器官和免疫细胞ppt课件
免疫器官和免疫 细胞
一、中枢免疫器官
免疫细胞由不成熟发育为成熟的免疫功能 细胞的场所
１．骨髓
由骨髓基质细胞构成微环境
多能造血干细胞在骨髓中增殖，分化、发育， 成熟为粒细胞、单核细胞、红细胞、血小板 及B细胞
２．胸腺 Ｔｈｙｍｕｓ
T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官。 来自骨髓的始祖T细胞在胸腺上皮细胞及 其产生的胸腺素作用下→分化成熟T淋巴 细胞。
3）阴性选择
❖ 主要在胸腺皮质与髓质交界处进行。 ❖ 位于该处的巨噬细胞和树突状细胞高水平表达
MHC-I类和MHC-II类分子。 ❖ 在胚胎发育过程，机体自身抗原成份能与巨噬细胞
和树突状细胞表面MHC-II类或I类分子结合形成复 合物。则这细胞发生自身耐受，停止发育，表现为 对该种自身抗原的反正T细胞克隆清除或克隆存在 但功能丧失，即成为克隆无能状态。
❖ 只有那未跟巨噬细胞或树突状细胞表面自身 抗原肽-MHC-II类或I类分子复合物结合的SP 细胞，离开胸腺继续分化、发育为具有识别 非己抗原能力的T细胞。
(二)T细胞的表面标志
❖ 指存在于T细胞表面的膜分子,包括了T细胞表 面受体和T细胞表面抗原。
❖ T细胞表面抗原：参与T细胞抗原识别、信号 传导、及激活的抗原主要有MHC抗原和分化 抗原。
二、外周免疫器官
❖ （一）淋巴结 ❖ 主要含T、B细胞、巨噬细胞和树突然状细胞。
❖ 淋巴结是淋巴液的滤器，也是具有免疫活性 的T、B细胞移居和接受抗原刺激后产生免疫 应答的重要场所。
❖ 2、淋巴结的主要功能
❖ 1）、过滤淋巴液：通过淋巴窦→吞噬细胞、 抗体、杀伤作用→清除病原微生物及有毒物 质→防止病原体的扩散作用。
+、CD2+、CD3+、CD4-、
一、中枢免疫器官
免疫细胞由不成熟发育为成熟的免疫功能 细胞的场所
１．骨髓
由骨髓基质细胞构成微环境
多能造血干细胞在骨髓中增殖，分化、发育， 成熟为粒细胞、单核细胞、红细胞、血小板 及B细胞
２．胸腺 Ｔｈｙｍｕｓ
T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官。 来自骨髓的始祖T细胞在胸腺上皮细胞及 其产生的胸腺素作用下→分化成熟T淋巴 细胞。
3）阴性选择
❖ 主要在胸腺皮质与髓质交界处进行。 ❖ 位于该处的巨噬细胞和树突状细胞高水平表达
MHC-I类和MHC-II类分子。 ❖ 在胚胎发育过程，机体自身抗原成份能与巨噬细胞
和树突状细胞表面MHC-II类或I类分子结合形成复 合物。则这细胞发生自身耐受，停止发育，表现为 对该种自身抗原的反正T细胞克隆清除或克隆存在 但功能丧失，即成为克隆无能状态。
❖ 只有那未跟巨噬细胞或树突状细胞表面自身 抗原肽-MHC-II类或I类分子复合物结合的SP 细胞，离开胸腺继续分化、发育为具有识别 非己抗原能力的T细胞。
(二)T细胞的表面标志
❖ 指存在于T细胞表面的膜分子,包括了T细胞表 面受体和T细胞表面抗原。
❖ T细胞表面抗原：参与T细胞抗原识别、信号 传导、及激活的抗原主要有MHC抗原和分化 抗原。
二、外周免疫器官
❖ （一）淋巴结 ❖ 主要含T、B细胞、巨噬细胞和树突然状细胞。
❖ 淋巴结是淋巴液的滤器，也是具有免疫活性 的T、B细胞移居和接受抗原刺激后产生免疫 应答的重要场所。
❖ 2、淋巴结的主要功能
❖ 1）、过滤淋巴液：通过淋巴窦→吞噬细胞、 抗体、杀伤作用→清除病原微生物及有毒物 质→防止病原体的扩散作用。
+、CD2+、CD3+、CD4-、
免疫细胞的分离技术
CD80 (B7-1)、CD86 (B7-2) 、CD267(TACI)、CD268(BAFFR)、
CD269(BCMA)、CD307(IRTA2)
髓样细胞 CD14、CD35(CR1)、CD64 (FcRI)、CD256(APRIL)、
CD257(BAFF)、CD312(EMR2)
血小板 CD36、CD41(整合蛋白IIb)、CD42aCD42d、CD51(整合蛋白v) 、
➢ 不同细胞密度不同 ➢ 不同细胞表面生物学特性不同 ➢ 不同细胞表面分化抗原不同
17
免疫细胞的分离技术
根据不同的实验目的可以采取下列不同的分离方法
1、密度梯度离心法 2、黏附分离法（尼龙毛法、贴壁法、亲和板法） 3、磁性分离法 4、荧光激活分离法 5、其他分离法（花环沉降法）
18
（一）外周血单个核细胞分离
加工处理抗原，将抗原肽提呈给抗原特异性淋巴细胞的 一组免疫细胞。血液中主要的APC细胞主要包括单核细 胞、树突状细胞、B细胞
10
其他细胞
自然杀伤(NK)细胞，肥大细胞，嗜酸性粒细胞，嗜中 性粒细胞，嗜碱性粒细胞，血小板等
NK细胞 肥大细胞 嗜酸性粒细胞 嗜中性粒细胞 嗜碱性粒细胞 血小板
11
免疫细胞的特征
39
方法 （以CD4+T细胞为例）
1. 羊抗兔Ig包被平皿 2. CD4 一抗培育T细胞，倒入平皿，4℃孵育1小时； 3. 收集未粘附的CD4-T细胞 4. PBS漂洗非特异吸附的CD4-T细胞 5. 收集粘附的CD4+T细胞，可以用刮板刮取并在显微
镜下观察
40
免疫磁珠法 （Magnetic activated cell
CD55(DAF)、CD59、CD252(OX40L)、 CD279(PD1)、
(精品课件)免疫细胞分离及表面标志检测
3
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
4
一、外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte）。
聚蔗糖-泛影葡 胺 聚乙烯吡咯烷酮 处理的硅胶颗粒
24
2 .细胞活力测定 细胞活力常用活细胞占总细胞的百分比表示，细
胞活力的测定常用的简便方法是台盼蓝(trypan blue)染色法。死细胞着色，染成蓝色；活细胞拒染。
用血细胞计数器在显微镜下观察到着色和不着色 的细胞，计数200 个细胞，以不着色细胞的百分率 即代表细胞的活力。
25
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
22
四、不同细胞分离方法的综合评价
早期
细胞物理属性 细胞生物属性
分辨率和灵敏度不高
现在（根据细胞表面标志）
免疫磁珠 流式细胞仪
分辨率和灵敏度高
缺点：不适用于细胞表面分子不清的细胞分离，试剂和仪器昂贵
23
五、分离细胞的保存和活力检测
1.分离细胞的保存 对保存液的要求：等渗，具pH 缓冲作用， 并对细胞无毒性（Hanks、Tc-199、 RPMI 1640 ）。如需短期保存，置4℃放 置较好，可减低细胞代谢活动。如需长期 保存，应放入液氮罐中在深低温(-196℃) 条件下保存细胞。
死细胞 血小板 单核细胞
淋巴细胞
粒细胞 红细胞
13
三、T、B细胞和T细胞亚群 的分离
• 磁性微球分离法 • 荧光激活细胞分离仪分离法
14
1. 磁性微球分离法
磁性微球：金属小颗粒（Fe2o3, Fe3o4)，其表面包裹有高 分子材料（聚苯乙烯，聚氯乙烯等），表面有活性基团 （氨基、羧基和羟基），可结合生物大分子物质（抗原， 抗体，核酸等）。 免疫磁珠：微球表面包被有免疫物质称免疫磁珠。
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
4
一、外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte）。
聚蔗糖-泛影葡 胺 聚乙烯吡咯烷酮 处理的硅胶颗粒
24
2 .细胞活力测定 细胞活力常用活细胞占总细胞的百分比表示，细
胞活力的测定常用的简便方法是台盼蓝(trypan blue)染色法。死细胞着色，染成蓝色；活细胞拒染。
用血细胞计数器在显微镜下观察到着色和不着色 的细胞，计数200 个细胞，以不着色细胞的百分率 即代表细胞的活力。
25
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
22
四、不同细胞分离方法的综合评价
早期
细胞物理属性 细胞生物属性
分辨率和灵敏度不高
现在（根据细胞表面标志）
免疫磁珠 流式细胞仪
分辨率和灵敏度高
缺点：不适用于细胞表面分子不清的细胞分离，试剂和仪器昂贵
23
五、分离细胞的保存和活力检测
1.分离细胞的保存 对保存液的要求：等渗，具pH 缓冲作用， 并对细胞无毒性（Hanks、Tc-199、 RPMI 1640 ）。如需短期保存，置4℃放 置较好，可减低细胞代谢活动。如需长期 保存，应放入液氮罐中在深低温(-196℃) 条件下保存细胞。
死细胞 血小板 单核细胞
淋巴细胞
粒细胞 红细胞
13
三、T、B细胞和T细胞亚群 的分离
• 磁性微球分离法 • 荧光激活细胞分离仪分离法
14
1. 磁性微球分离法
磁性微球：金属小颗粒（Fe2o3, Fe3o4)，其表面包裹有高 分子材料（聚苯乙烯，聚氯乙烯等），表面有活性基团 （氨基、羧基和羟基），可结合生物大分子物质（抗原， 抗体，核酸等）。 免疫磁珠：微球表面包被有免疫物质称免疫磁珠。
医学免疫学PPT：免疫器官与免疫细胞
Mo
腺 微
DC
环
成纤维细胞择性发育
17
胸腺 （thymus）
（二） 胸腺微环境
胸腺上皮细胞在微环境中作用：
1. 分泌细胞因子和胸腺肽类分子 2. 细胞-细胞间相互接触
DC树突细胞 （高水平MHCⅡ） 巨噬细胞 （低水平MHCⅡ） 细胞外基质 维持胸腺内细胞的正常生理功能、促进细胞 间的相互接触、促进胸腺细胞移行成熟。
13
骨髓 （bone marrow)
二 骨髓的功能 1. 各类血细胞和免疫细胞发生的场所 2. B细胞和NK细胞分化成熟的场所 3. 体液免疫应答的发生场所
6
1. 各类血细胞和免疫细胞发生的场所
CFU
7
2. B细胞和NK细胞分化成熟的场所
骨髓
NK cell
9
3. (再次)体液免疫应答的发生场所
外周免疫器官又称次级免疫器官，是 成熟免疫细胞居留和发挥免疫效应的 场所。包括淋巴结、脾脏、黏膜相关 淋巴组织。
4
骨髓 （bone marrow)
一 骨髓的结构与微环境
基质细胞
造血组织
网状细胞 成纤维细胞 血管内皮细胞 巨噬细胞等
红骨髓 黄骨髓
血窦构成
造血细胞
基质细胞 及分泌的细胞因子
（IL-3,4,6,7, SCF,GM-CSF等） 细胞外基质
骨髓
经淋巴液和血液
分化成熟
浆细胞
在外周免疫器官 受抗原活化
大量抗体（IgG为主）
记忆性B细胞
血液
再次免疫应答在： 外周免疫器官： 抗体产生速度快，但持续时间较短
骨髓： 抗体产生持久，为血清抗体主要来源 10
骨髓 （bone marrow)
免疫器官和免疫细胞PPT课件
1. 自然杀伤功能：不需要抗原致敏的杀伤作用，即自然杀伤 细胞（NK）
2. 抗体活化的杀伤作用：通过表面IgG的Fc受体（CD16）杀伤 与抗体结合的细胞。即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 （ADCC）
3. 免疫调节细胞：被IL-2活化的NK细胞产生IL-1、IFN、TNF 等细胞因子对免疫功能进行调节。
其它淋巴细胞
LAK细胞：需在IL-2等细胞因子诱导下，才能发挥杀 伤作用，即淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK）。 运用LAK细胞治疗对Tc细胞和NK细胞不敏感的肿 瘤。
（二）抗原提呈细胞（APC）
1. 单核-巨噬细胞 2. 树突状细胞（DC） 3. B细胞
单核-巨噬细胞 表面受体： 1. IgGFc受体（FcγR）：参与调理吞噬与ADCC作用。 2. 补体受体：CRⅠ可与C3b结合，参与调理吞噬及免
免疫学检验
第二章 免疫器官和免疫细胞
本章要点
1. 免疫系统的组成。 2. 中枢免疫器官与外周免疫器官的组成和
功能。 3. 免疫细胞的分类 4. 淋巴细胞的主要表面标志。
4
目录
1 免疫系统的组成 2 免疫器官的分类及其功能 3 免疫细胞的分类 4 淋巴细胞的表面标志
免疫系统
概念：是由具有免疫功能的器官、细胞和分子组成的 。具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定 和生理平衡的功能，是执行体液免疫和细胞免疫的物 质基础。Leabharlann T淋巴细胞——T淋巴细胞亚群
T细胞共同的标志：TCR、CD3和CD2分子 CD4+T细胞：具有CD4分子的T细胞，即辅助性T细胞（Th） 1.Th1细胞：引起炎症反应与迟发型超敏反应，炎性T细胞（
TDTH细胞），效应细胞，产生IL-2、IFN-γ、TNF-β 2.Th2细胞：诱导B细胞增殖、分化产生抗体，参加体液免疫
2. 抗体活化的杀伤作用：通过表面IgG的Fc受体（CD16）杀伤 与抗体结合的细胞。即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 （ADCC）
3. 免疫调节细胞：被IL-2活化的NK细胞产生IL-1、IFN、TNF 等细胞因子对免疫功能进行调节。
其它淋巴细胞
LAK细胞：需在IL-2等细胞因子诱导下，才能发挥杀 伤作用，即淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK）。 运用LAK细胞治疗对Tc细胞和NK细胞不敏感的肿 瘤。
（二）抗原提呈细胞（APC）
1. 单核-巨噬细胞 2. 树突状细胞（DC） 3. B细胞
单核-巨噬细胞 表面受体： 1. IgGFc受体（FcγR）：参与调理吞噬与ADCC作用。 2. 补体受体：CRⅠ可与C3b结合，参与调理吞噬及免
免疫学检验
第二章 免疫器官和免疫细胞
本章要点
1. 免疫系统的组成。 2. 中枢免疫器官与外周免疫器官的组成和
功能。 3. 免疫细胞的分类 4. 淋巴细胞的主要表面标志。
4
目录
1 免疫系统的组成 2 免疫器官的分类及其功能 3 免疫细胞的分类 4 淋巴细胞的表面标志
免疫系统
概念：是由具有免疫功能的器官、细胞和分子组成的 。具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定 和生理平衡的功能，是执行体液免疫和细胞免疫的物 质基础。Leabharlann T淋巴细胞——T淋巴细胞亚群
T细胞共同的标志：TCR、CD3和CD2分子 CD4+T细胞：具有CD4分子的T细胞，即辅助性T细胞（Th） 1.Th1细胞：引起炎症反应与迟发型超敏反应，炎性T细胞（
TDTH细胞），效应细胞，产生IL-2、IFN-γ、TNF-β 2.Th2细胞：诱导B细胞增殖、分化产生抗体，参加体液免疫
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第 二 讲 免疫器官的观察与 免疫细胞的分离
Department of Immunology
实验目的
掌握小白鼠的捉拿与处死方法 掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断 熟悉血细胞计数板的构造及使用方法
Department of Immunology
免疫器官的观察
Department of Immunology
【实验结果】
细胞计数
• 随机计数100个细胞，并数出其中活细胞 数
结果计算
• 细胞活力＝活细胞数／细胞总数 × 100%
Department of Immunology
实验操作录像
实验报告
实验原理
实验方法
实验结果及分析
Department of Immunology
【台盼兰拒染法原理】
活细胞 死细胞
通透性 死细胞 高
着色 易
颜色 蓝
体积 大
活细胞
低
难
无色
小
Department of Immunology
注意事项
脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分 研磨时不可用力过大，时间不宜过长 染色时间不宜过长或过短 血细胞计数板的使用方法（10倍镜、暗 视野）
Department of Immunology
粒细胞 红细胞
离心前
离心后
密度梯度离心法
Department of Immunology
淋巴细胞及其亚群的分离
Department of Immunology
抗原肽-MHC 分子四聚体技术
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠 笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣 扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双 耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手 掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾 部，即可将小鼠完全固定。
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
Department of Immunology
小白鼠的处死方法
颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住 鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上 方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓 断离，动物立即死亡。
【实验步骤】
1. 颈椎脱臼法处死小白鼠，取其脾脏 2. 将脾脏放入适量（约15ml）生理盐水 中，除去筋膜 3. 取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成 10ml细胞悬液 4. 取１ml细胞悬液于试管中，加入１滴 台盼蓝染液 5. 混匀后静置3分钟，低gy
Department of Immunology
小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）
Department of Immunology
倒 T 字开腹
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠胸腺
Department of Immunology
小白鼠胸腺
Department of Immunology
【实验器材】
小白鼠
手术器械，解剖台,血细胞计数板, 显微镜 0.2％的台盼蓝染液
Department of Immunology
免疫细胞种类
Department of Immunology
免疫细胞分离技术
花环沉降法 密度梯度离心法 抗原肽-MHC分子四聚体技术 荧光激活细胞分选仪分离法 免疫吸附分离法 磁珠分离法
Department of Immunology
外周血单核细胞的分离
稀释抗凝血
血浆 单个核细胞
淋巴细胞分离液
血细胞记数板
细胞计数池
Department of Immunology
血细胞计数池的构造
白细胞计数区：
无效计数区
红细胞计数区：
Department of Immunology
【计数原则】
计左不计右，计上不计下 1、
√ √ √ ×
2、“ S ”形随机计数
Department of Immunology
Department of Immunology
实验目的
掌握小白鼠的捉拿与处死方法 掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断 熟悉血细胞计数板的构造及使用方法
Department of Immunology
免疫器官的观察
Department of Immunology
【实验结果】
细胞计数
• 随机计数100个细胞，并数出其中活细胞 数
结果计算
• 细胞活力＝活细胞数／细胞总数 × 100%
Department of Immunology
实验操作录像
实验报告
实验原理
实验方法
实验结果及分析
Department of Immunology
【台盼兰拒染法原理】
活细胞 死细胞
通透性 死细胞 高
着色 易
颜色 蓝
体积 大
活细胞
低
难
无色
小
Department of Immunology
注意事项
脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分 研磨时不可用力过大，时间不宜过长 染色时间不宜过长或过短 血细胞计数板的使用方法（10倍镜、暗 视野）
Department of Immunology
粒细胞 红细胞
离心前
离心后
密度梯度离心法
Department of Immunology
淋巴细胞及其亚群的分离
Department of Immunology
抗原肽-MHC 分子四聚体技术
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠 笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣 扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双 耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手 掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾 部，即可将小鼠完全固定。
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
Department of Immunology
小白鼠的抓取和固定
Department of Immunology
小白鼠的处死方法
颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住 鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上 方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓 断离，动物立即死亡。
【实验步骤】
1. 颈椎脱臼法处死小白鼠，取其脾脏 2. 将脾脏放入适量（约15ml）生理盐水 中，除去筋膜 3. 取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成 10ml细胞悬液 4. 取１ml细胞悬液于试管中，加入１滴 台盼蓝染液 5. 混匀后静置3分钟，低gy
Department of Immunology
小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）
Department of Immunology
倒 T 字开腹
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠脾脏
Department of Immunology
小白鼠胸腺
Department of Immunology
小白鼠胸腺
Department of Immunology
【实验器材】
小白鼠
手术器械，解剖台,血细胞计数板, 显微镜 0.2％的台盼蓝染液
Department of Immunology
免疫细胞种类
Department of Immunology
免疫细胞分离技术
花环沉降法 密度梯度离心法 抗原肽-MHC分子四聚体技术 荧光激活细胞分选仪分离法 免疫吸附分离法 磁珠分离法
Department of Immunology
外周血单核细胞的分离
稀释抗凝血
血浆 单个核细胞
淋巴细胞分离液
血细胞记数板
细胞计数池
Department of Immunology
血细胞计数池的构造
白细胞计数区：
无效计数区
红细胞计数区：
Department of Immunology
【计数原则】
计左不计右，计上不计下 1、
√ √ √ ×
2、“ S ”形随机计数
Department of Immunology