染色体核型分析

小鼠：♂ 40，XY 、♀ 40，XX 人类：♂ 46，XY 、♀ 46，XX
分裂相
细胞分裂过程中每个时期的细胞形态特征，包括细胞的 总体形状和遗传物质的变化。
染色体核型分析
一、名词解释
（中期）分裂相
核型
数量变异
（性染色体丢失/增加、近端着丝粒染色体三体）
结构变异
（缺失、重复、倒位、易位）
染色体核型分析
防护：甲醇→毒性， 冰乙酸→刺激性和腐蚀性
制片
离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔 地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液0.5-1.0 mL，边 滴加边震荡均匀，静置5 min后离心弃上清。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获
低渗处理
预固定
固定
制片
（1）加入3ml固定液，静置30min，离心弃上清； （2）再次加入3ml固定液，吹打均匀并静置30min
便于染色。
配制： Giemsa原 液：磷酸缓冲液 （pH 7.4）= 1：9 ，现用现配。
预热胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min 。 清水冲洗染染色体液核，型分用析 吹风机吹干。
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
玻片颜色
蓝紫色
玫红色
着色浅
配制新的染液； 适当提高胰酶消化玻片的时间。
分裂相形态-紧密度
过密
适中
过密：适当提高固定液中冰醋酸比例； 过散：适当降低固定液中冰醋酸比例。
过散
染色体核型分析
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
分裂相形态
过密
适中
过散
过密：适当提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度； 过散：适当降低固定液中冰醋酸比例，减小滴片高度。
染色体核型分析
三、染色体核型分析
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
预热胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min 。 清水冲洗染染色体液核，型分用析 吹风机吹干。
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
要求：0.25%， pH6.8～7.2
作用：去除染色 体上的蛋白质，
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定
要求：洁净、冰冻 处理：逐片清洗（洗洁精→ 超声波→自来水→纯水）， 95%乙醇浸泡24 h，纯水逐片 刷洗，放置于装有纯水的器
皿中，4 ℃保存。
制片
用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片上，立即在 酒精灯的火焰下过火几次，置80℃烤箱中烤片2h。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
配制： 0.075 mol/L KCl溶液 作用：低渗作用
因素：时间、温度、浓度
加入37℃预热的低渗液（0.075 mol/L）5 ml，吹 打至均匀，37℃水浴15-20 min。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
玻片标本质量评价
分裂相形态
重叠
尽量将细胞吹打成单细胞悬液； 滴片时勿重复滴加同一区域。
染色体核型分析
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
染色体形态
适中
短小
过长
染色体核型分析
扭曲交联 消化过度
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三、染色体核型分析
计数标准
分裂相需完整独立，染色体不过于松散，周围无其他 距离很近的分裂相。
染色体形态适中，不过度短小或纤长，染色体彼此间 无交联缠绕或者交联的染色体能明确的区分。
细胞收获
低渗处理
预固定
固定
制片
离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔 地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液0.5-1.0 mL，边 滴加边震荡均匀，静置5 min后离心弃上清。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定
配制：甲醇：冰乙酸= 3：1 ，现用现配。
作用：固定并维持染色体结 构的完整性
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
消化并收集细胞至离心管，吹打成单细胞悬液， 250 g，5 min离心，弃上清
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获 低渗处理 预固定
固定 制片
加入37℃预热的低渗液（0.075 mol/L）5 ml，吹 打至均匀，37℃水浴15-20 min。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验步骤
细胞收获
低渗处理
预固定
固定
制片
离心弃上清液，根据细胞数量情况，加入1~2 mL固定 液，吹打细胞制成悬液，悬液呈微白色时为最佳。
染色体核型分析
二、染色体标本制备
实验内容
细胞收获
低渗处理
预固定
固定
制片
用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片上，立即在 酒精灯的火焰下过火几次，置80℃烤箱中烤片2h。
染色体核型分析
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
细胞密度
过密
适中
过稀
制备玻片时，对每一个样品都先进行试片，并在镜下观 察细胞密度，从而调整悬液密度。
染色体核型分析
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
分裂相密度
足够
稀少
适当提高固定液中冰醋酸比例；制备较多的玻片
染色体核型分析
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价
前期处理
样品要求：对数期生长， 状态良好，紧密度高，折 光性好，细胞量≥T25 / 60 mm平皿 差速贴壁法去除MEF（ KSR培养体系除外） 终止培养前1~2小时，加入秋水仙素（100ug/ml）， 最终浓度为0.1~0.2ug/ml。
作用：破坏纺锤体 防护：有剧毒、无挥发性 染色体核因型分素析：时间、浓度
染色体G显带普遍较清晰，质检人员能够精确的判断核 型位置。
合格指标
计数30个分裂相，正常比例≥50% →数量是否异常 暂不涉及核型排列 →结构是否异常
染色染体色标体本核型制分备析及核 型分析 质量保障部 Faye
染色体核型分析
一、名词解释
二、染色体标本制备
实验耗材 前期处理 实验步骤
三、染色体核型分析
玻片标本质量评价 计数标准、合格指标 染色体核型排列 核型检测的可重复性
染色体核型分析
一、名词解释
核型
一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征 顺序排列所构成的图像。
二、染色体标本制备
实验耗材
仪器设备： 超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、光学 显微镜、刻度离心管、乳头吸管、棕色试剂瓶、载玻片 、吹风机、玻片架、染色缸
主要试剂： 秋水仙素、低渗液、卡诺氏固定液、吉姆萨染液、胰酶 、1N HCl、1N NaOH、MEF培养基、PBS
染色体核型分析
二、染色体标本制备