牛血清白蛋白的提取与鉴定

电泳： 电泳： 1）点样
取一张膜条，将膜条无光泽面向下， 取一张膜条，将膜条无光泽面向下，放入 培养皿中得巴比妥缓冲液中使膜条侵透，取出， 培养皿中得巴比妥缓冲液中使膜条侵透，取出， 用玻璃纸吸干，以薄膜的无光泽面距一端1.5 1.5厘 用玻璃纸吸干，以薄膜的无光泽面距一端1.5厘 米处做点样线， 米处做点样线，将牛血清样品与待测的牛血清 白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样 线处不同位置点样。 线处不同位置点样。
实验八 牛血清白蛋白 的提取与鉴定
一、实验目的：1.掌握对清蛋白的wk.baidu.com取 实验目的： 掌握对清蛋白的提取
及鉴定。 及鉴定。 2.熟悉电泳的基本原理。 熟悉电泳的基本原理。 熟悉电泳的基本原理
二、实验原理：带点粒子在电场中移 实验原理：
动的现象为电泳。 动的现象为电泳。通过电泳技术对蛋白 的提取， 醋酸纤维素薄膜分离出血清 的提取，在醋酸纤维素薄膜分离出血清 蛋白中的各种蛋白。 蛋白中的各种蛋白。
4．观察结果 ．
比较样品与待测液中白蛋白在 薄膜上的电泳结果。 薄膜上的电泳结果。
• 实验仪器：离心管、离心机、试管、 实验仪器： 玻璃纸、烧杯、滴管、玻璃棒、电 泳仪、醋酸纤维素薄膜、分光光度 计。 • 实验试剂：待测的牛血清、牛血清 实验试剂： 样品、PBS液、Ph=7.2的饱和硫酸 铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、 氨基黑10B染液、漂洗液、0.4N氢 氧化钠溶液。
透析： 透析： 取玻璃纸一张，折成袋形， 取玻璃纸一张，折成袋形， 将离心后的上清液倒入袋内， 将离心后的上清液倒入袋内，用 线扎紧上口（注意要留有空隙）， 线扎紧上口（注意要留有空隙）， 放入装有自来水的小烧杯中透析， 放入装有自来水的小烧杯中透析， 要不断振动，每隔2分钟换一次 要不断振动，每隔 分钟换一次 共换水15次 水，共换水 次。
三、实验步骤： 实验步骤： 盐析： 盐析： 牛血清0.5毫升 毫升+PBS液 取小 牛血清 毫升 液 0.5毫升 饱和硫酸铵 毫升， 毫升+饱和硫酸铵 毫升， 毫升 饱和硫酸铵2.3毫升 充分混匀，静止20分钟 分钟， 充分混匀，静止 分钟，2500 分离心10分钟 转/分离心 分钟。 分离心 分钟。
2）电泳
将点样后的膜条置于电泳槽架上， 将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时 无光泽面向下，点样端置于阴极，平衡5分钟， 无光泽面向下，点样端置于阴极，平衡5分钟， 开电源160 60分钟 160伏 分钟， 开电源160伏60分钟，关闭电源后用镊子将膜条 取出。 取出。
3）染色 将膜条直接浸于盛有氨基黑 10B的染料中 的染料中， 分钟取出， 10B的染料中，染2分钟取出，立 即浸于漂洗液中， 即浸于漂洗液中，分别在漂洗液 中各漂洗5分钟， Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5分钟，直至 背景漂洗干净为止。 背景漂洗干净为止。