肝素钠效价检测方法
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肝素钠效价检测方法
试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8
估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：
①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为
V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)
(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。)
待检样品效价计算公式：
F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数
注意事项：
4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ，盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域5min，5min后检查血浆是否凝固，如血浆凝固则可使用，未凝固则不能使用。4.2.2.6.3 如在检测过程中，标样的1∕2凝固点高于200ul，则需重新调整羊血浆的1∕2凝固点。方法如下：取3组各10只试管
组一： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
标样110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul
8%柠檬酸钠20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul
0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml
羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
组二： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
标样110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul
8%柠檬酸钠30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul
0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml
羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
组三： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
标样110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul
8%柠檬酸钠40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ul
0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml
羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样的1∕2凝固点及体积。如1∕2凝固点在110ul —200ul的，即可使用。选值最好在130ul—170ul范围内。
8%柠檬酸钠需用生理盐水配置。
4.2.2 效价（羊血浆法）
4.2.2.1、试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8
估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3 检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
4.2.2.4 凝固程度标准：
①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为
V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)
(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。)
4.2.2.5 待检样品效价计算公式：
F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数
4.2.2.6 注意事项：
4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ，盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入