酶促化学发光法
化学发光法技术概要
磁分离模块：
底吸还是侧吸？磁力大小的选择？磁分离时间？ 永磁还是顺磁？
需要解决的关键点（2）
混匀模块：
试剂架的混匀功能？混匀频率和混匀方式？反应 槽是否带有混匀功能？
样品针和试剂针：
怎样防止样品与试剂，试剂与试剂之间的交叉污 染？怎样保证加液量准确？怎样防止针头堵塞？
谢谢观看！
ADVIA Centaur
Access Access2 Vidas Dimension Xpand Dimension RXL Immulite Immulite2000 Vitros
18
15 15 30 16 16 15 35 24
240
100 100 60 250 165－700 120 200 90
全自动仪器其他要求
样品加量10µl~200
µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。 洗涤液加量不小于350 µl。 发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。 带有内置计算浓度功能及校准功能。
需要解决的关键点（1）
洗涤模块：
洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否 带超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？
化学发光法技术概要 及自动化免疫分析仪 技术要点
科华生物研发中心光免小组 李 基 2010.7.14
化学发光法反应基本原理
抗原-抗体反应
抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反 应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。
酶促底物发光
将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标 记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测 目标抗体或抗原的浓度。
促甲状腺激素酶免疫化学发光法正常值
促甲状腺激素酶免疫化学发光法正常值下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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化学发光方法学比较汇总
免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。
现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。
发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。
70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。
1、化学发光化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。
通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。
退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。
其主要特点为消耗发光剂。
同时量子效率相对较低。
1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。
其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。
酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。
因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。
酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。
而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。
非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。
所以重复性较差。
酶促化学发光法与酶联免疫法检测乙肝表面抗原低浓度值灵敏度的比较
酶促化学发光法与酶联免疫法检测乙肝表面抗原低浓度值灵敏度的比较摘要】目的：比较酶促化学发光法（CLIA）与酶联免疫法（ELISA）检测乙肝表面抗原（HBsAg）低浓度值的灵敏度。
方法：收集不同年龄段2017年3月至2018年1月门诊与住院患者CLIA法乙肝检测中HBsAg结果≥0.05 IU/ml（判断为阳性）的标本1018例，同时用ELISA方法对其进行检测并记录S/CO值，以S/CO 值≥1判断为阳性。
结果：各年龄组HBsAg在CLIA法检测低浓度值（0.05-0.20IU/ml）时总例数为135例，约占总阳性例数的13.3%。
这135例用ELISA法检测S/CO值≥1（即判断为阳性）例数仅为44例。
显示CLIA法和ELISA法两者的检测灵敏度有明显差异，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论：CLIA法灵敏度高于ELISA法，HBsAg作为术前和献血、输血前检查应将CLIA作为首选方法；但由于ELISA法方便操作，适用于大量筛查，因此在大量体检时，HBsAg将ELISA作为首选方法。
CLIA法和ELISA法只是HBsAg筛查方法，若要确诊是否为乙肝病毒携带者，还应做乙肝DNA或中和试验来确诊。
【关键词】乙肝表面抗原；酶促化学发光法；酶联免疫吸附法【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）14-0066-02我国是乙肝病毒感染的高发地区。
不仅危害人们的身体健康，也给人们造成不小的经济负担，因此乙肝病毒检测已成为了人们体检的常规项目。
乙肝表面抗原（HBsAg）是人体是否受乙肝病毒感染的重要指标，而越早检测出是否感染乙肝病毒越早接受治疗对人体的伤害越小，现今检验HBsAg的方法主要有CLIA与ELISA[1]，现对这两种方法检测HBsAg结果的灵敏度进行比较。
1.资料与方法1.1 仪器日本东曹AIA～900化学发光仪；深圳雷杜RT～6100酶标仪。
降钙素原的测定及临床意义
汇报人： 日期:
目录
• 降钙素原测定方法 • 降钙素原的临床意义 • 降钙素原测定的临床应用 • 降钙素原测定的局限性及未来发展 • 临床案例分析
ห้องสมุดไป่ตู้1
降钙素原测定方法
免疫学测定法
01
02
03
放射免疫分析法
利用放射性核素标记抗体 ，检测血清中降钙素原的 浓度。
酶联免疫吸附法
PCT水平的变化与病情严重程度相关，可以作为评估病情严重程度及预后的指标之一。例如，在脓毒症、败血症等严重感染 时，PCT水平会明显升高，提示预后不良；而在轻症感染时，PCT水平通常不升高或仅轻度升高，提示预后较好。
04
降钙素原测定的局限性及未来发 展
局限性
技术限制
降钙素原的测定技术仍存在一些挑战。目前，大部分检测 方法仍需要使用专业的仪器设备和专业的技术人员，这限 制了其在临床的广泛应用。
详细描述
对于重症肺炎患者，降钙素原测定可帮助医生判断病情的严重程度 和感染类型，从而指导抗生素的选择和治疗方案的制定。
参考价值
降钙素原测定对于重症肺炎患者的诊断和治疗具有重要的参考价值 。
案例二
01
总结词
降钙素原测定可反映自身免疫性疾病患者的炎症水平，并指导治疗反应
的评估。
02 03
详细描述
在自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、红斑狼疮等患者中，降钙素原测 定可帮助医生了解疾病的活动度和炎症水平，评估治疗效果和调整治疗 方案。
酶促化学发光法
利用酶促反应将降钙素原转化为 具有发光特性的产物，通过发光 强度计算降钙素原浓度。
电化学发光法
直接电化学发光法
利用直接电化学发光技术，将特异性 抗体与降钙素原的结合反应转化为光 信号，通过发光强度计算降钙素原浓 度。
化学发光测定仪
待测物 酶标记抗体
超顺磁珠
试剂1
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
化学发光原理
化学发光检测主要是借助抗原和抗体在体 外特异结合后出现的各种现象，对样品中 的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检 测。 抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答 的物质。 抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结 合某种物质的球蛋白。
化学发光反应基本原理
双抗体夹心法（三明志法）原理
贝克曼
1.酶促化学发光 2.纯液相反应 3.通用型纳米免疫磁 珠 4.亲和素-生物素免疫 放大系统 5.碱性磷酸酶发光体 系 真正的全自动无人伺 候
方 法 学
检测 试剂
自动化 程度
真正的全自动无人伺候
真正的全自动无人伺 候
真正的全自动无人伺候
仪 器 性 能 及 参 数
检测速 度
单机检测速度最快一步法 ：恒速400test/h；两步法 ：恒速200test/h，自测试 开始第16.5分钟出第一个 测试结果，以后每隔9秒 出一个结果
线性范围
待测物浓度（ X ）
发光免疫分析基本操作步骤（一步法）
待测样品 酶标记抗体或抗 原 标记生物素的抗体或抗原 超顺磁珠 反应 管 反应10分钟 磁场中洗涤去除未结合的反 应物
反应0-5分钟 发光底物 仪器检测
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
超顺磁珠 待测样品 标记生物素的抗体或抗原 反应 管 反应10分钟 酶标记抗体或抗 原
化学发光——杨晓林
增强剂（Enhancer）
OH R
N
R B OH
OH
R
OH
S
商业化产品中常见的化学发光系统
O
O OCH 3
O
AP
O OCH 3
OPO32-
OOCH3
AMPPD及其衍生物 的化学发光系统
O
O
*
光子(477nm)
+
O-
商业化产品中常见的化学发光系统
CH3 N+ CH3 N CH3 N + H2O
吖 啶 酯 化 学 发 光 系 统
主要不足
工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移
试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积 分法）需原位进样(In Situ Injector)仪器 成本及维护费用较高试剂成本较高
时间分辨荧光
铕（Eu）、镝(Dy)、 灵敏度较高、试剂较 钐（Sm）、铽 稳定 （Tb）、等络合物 脉冲光源激发
钌(Ru)的络合物脉 冲电场激发
均相法 （Homogeneous）
非均相法 （Heterogeneous）
均相法（Homogeneous）
免疫凝集法： 自然凝集：血型测定 肥达氏反应； 敏化凝集：血球凝集法 凝胶（微粒）比浊法 免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，
酶--辅酶（亚基）配位法
荧光偏振法，荧光共振法 吖啶酯水解法，生物传感器
对于患者来讲，最佳的参考值是自己以往的测定数据，即自身对照； 因此积累病人的基础数据非常重要。
FSH
尤其是性激素、生长激素、胰岛素等具有周期性分泌或释放规律的激素。
某一患者变化规律 （无排卵峰） 正常人平均值变化规律
正常参考值范围
化学发光免疫分析方法的种类
【化学发光免疫分析种类】
1.直接化学发光
A 吖啶酯发光
原理：纳米磁珠分离后的吖啶酯标记的抗原抗体复合物，在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。
特点：发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。
代表仪器：拜耳公司的ACS180。
【化学发光免疫分析种类】
B 异鲁米诺发光
原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点。
代表仪器：德国Byk–Sangtec公司的LIAISON
C 电化学发光
原理：纳米磁珠分离后的三联吡啶钌标记的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化还原反应，发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。
特点：激发发光过程复杂，时间长，每一个发光过程约需25秒，测试速度慢。
代表仪器：瑞士ROCHE公司的ELECSYS 1010和ELECSYS 2010。
【化学发光免疫分析种类】
•2、酶促化学发光或持久发光
•原理：酶促化学发光一般是将碱性磷酸酶标记在抗体或抗原上，纳米磁珠分离后的碱酶标
记的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD作用下，持续发出可见光，通过光电倍增管读取光信号。
•特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。
•代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS，雅培公司的AXSYM。
生物体系中的化学发光
生物体系中的化学发光自然界中，许多生物如萤火虫、蚯蚓、菌类等能够通过化学反应产生明亮的发光现象，这被称为化学发光或生物发光。
这些发光作用在生态系统中起到了重要的作用，如萤火虫的发光能够吸引异性萤火虫找到交配对象，而深海中很多生物能够利用发光来进行捕食和逃避天敌。
本文将介绍生物体系中的化学发光现象和背后的化学原理。
萤火虫发光萤火虫是最为人们熟知的能够发光的生物之一。
萤火虫的发光器官位于腹部末端，内部包裹着称为荧光素的物质。
当荧光素和ATP（三磷酸腺苷）遇到氧气时，会产生光化学反应，发出明亮的绿色荧光。
这种反应是由荧光素酶催化的，因此其也被称为酶促发光（bioluminescence）。
蛍光素和ATP之间的反应可以分为两步。
首先，蛍光素酶（luciferase）将ATP转化为反式-酮酰胺，并同时释放出辅酶A和一分子焦磷酸酯。
然后，在产生的反式-酮酰胺作为底物的情况下，蛍光素酶催化荧光素的氧化反应，在生成氧化荧光素和二氧化碳的同时释放出能量，形成明亮的发光。
这种发光现象只在萤火虫体内发生，不受外界光照或其他因素的影响。
海洋生物发光不仅在陆地上，很多生物在海洋中也能发光，如海藻、水母、虾、鱼类等。
其中，虾和鱼类的发光机制大部分由细菌造成。
细菌感染虾或鱼体内的发光器官，当其寄生在虾或鱼的体内时，以寄生虫的方式利用体内物质提供养分和生长环境。
而虾和鱼则可以利用这些生物的发光来吸引猎物或伴侣。
例如，深海中的鱼类往往具有自发光的发光器官，能发出红色或蓝绿色的光，这能够帮助它们融入周围的环境，以避免被海底掠食者发现。
背后的化学原理虽然生物的化学发光现象看起来非常神秘，但其背后的化学原理是已经被研究清楚的。
根据国际生物发光计量委员会（ICBL）的定义，生物发光是指任何真核生物和原核生物通过生化反应而发出的光。
这些反应可以大致分为两类：一类是芳香环氧化还原反应，该反应主要发生在昆虫、海洋动物等的发光器官或体内物质中；另一类是氧化酶促反应，该反应主要发生在真菌和低等动物中。
用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨
用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨摘要】目的通过实验研究找到用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认的方法，最大程度地避免漏检或误检。
方法将高浓度值血清标本作一系列的倍比稀释，同时用酶促化学发光法、ELISA法和金标法检验，研究发现三种方法的相关性，从中找出规律性。
结果酶促化学发光法检测线性范围较宽，但在0.15ng/ml附近易出现不确定检测结果，ELISA法检测线性范围稍窄，在0.30ng/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，金标法检测灵敏度最低，在3.5ng/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，更低的浓度则出现假阴性的结果。
结论根据酶促化学发光法定量检测值，可选择金标法、单孔ELISA法或选择用抗-HBs阳性血清进行中和确认乙肝表面抗原。
【关键词】酶促化学发光法 ELISA法金标法复检1 前言化学发光免疫分析技术，将酶的化学发光与免疫反应结合起来，凭借其灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等优点，在免疫分析领域得以迅速地发展起来。
但在乙肝表面抗原检测实践中，我们不时发现了假阳性检测结果、检测重复性也不易于把握等问题，于是提出了用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的研究课题。
在实验室现有条件下，我们选择了ELISA法和金标法作为确认实验的观察方法。
2 材料与方法2.1 试剂酶促化学发光法试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供，ELISA法试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，金标法试剂为北京万泰生物药业股份有限公司提供。
2.2 仪器Autobio e-LISA全自动样品处理系统，Thermo MULTISKAN MK3酶标仪，Autobio LUMO化学发光分析仪，Rayto RT-3000型全自动洗板机。
2.3 标本准备找到上一日HBsAg检测为高浓度值的血清标本若干份备用；为了避免基质效应对实验系统的影响，找出上一日HBsAg、HBsAb检测同时为0值的血清标本若干份，制备成混合血清备用[1]；用0值混合血清作为稀释液，对HBsAg高浓度值血清标本逐一进行倍比稀释，制备成一系列的待检血清标本。
酶促化学发光法
酶促化学发光法酶促化学发光法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用于生物化学、生物医学和生物技术领域的实验技术，广泛应用于生物分析和生物探测等领域。
本文将从原理、应用、优势和限制等方面介绍酶促化学发光法。
一、原理酶促化学发光法是一种基于酶促反应的光学检测方法。
它的基本原理是利用酶作为介体，将待测物与特异性抗体进行结合，通过酶反应来放大分析信号，最后通过化学发光反应测定待测物的浓度。
二、应用 1. 生物医学研究：ELISA广泛应用于疾病的早期诊断与预测、临床生物标志物的检测、疫苗制备、药物筛选等领域。
例如，ELISA可以用于检测病毒、细菌、肿瘤标志物、激素、抗体等生物分子。
2. 环境监测：ELISA可以应用于环境中污染物的检测，如水质中的重金属、有机化合物和农药残留等。
3. 食品安全检测：ELISA 可以用于食品中有害物质（如致病菌、毒素等）的检测，如检测牛奶中的三聚氰胺、水产品中的重金属等。
三、优势 1. 高灵敏度：酶促化学发光法可以通过酶反应放大检测信号，提高检测的灵敏度，能够检测到低浓度的目标物。
2. 特异性高：ELISA可以通过特异性抗体的使用，实现对特定目标物的识别与定量分析，具有很高的特异性。
3. 操作简便：ELISA的操作相对简单，只需要进行样品处理、抗体反应、洗涤、发光反应等步骤即可完成。
4. 高通量：通过微型化技术和自动化设备的应用，ELISA可以实现对多样本、多分析物进行高通量的检测。
四、限制 1. 基质干扰：在复杂基质中进行检测时，可能受到其它物质的干扰，影响检测结果的准确性。
2. 交叉反应：一些酶促反应可能出现交叉反应，导致误判或假阳性结果。
3. 只能检测目标物浓度范围：ELISA对于样品中高浓度和低浓度的目标物检测效果可能有限，需要选用不同的检测方法来实现全面分析。
总之，酶促化学发光法是一种非常重要的实验技术，在生物医学、生物分析等领域有着广泛的应用。
化学发光法原理及应用
化学发光
2、酶促化学发光免疫分析
酶促化学发光免疫分析（chemiluminescentenzymeimmunoassay，CLELA）是以酶标 记抗原或抗体进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作 用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定，酶的浓度决定了化学发光的强度。辣根过 氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)为化学发光酶免疫分析常用的标记酶，发光底物以 鲁米诺、AMPPD（1，2-二氧环乙烷衍生物，一种碱性磷酸酶底物）为代表。
发光反应室
光检测器
信号放大器
显示与记录
目录
CONTENTS
1
化学发光原理
2 化学发光在免疫分析上的应用
3
化学发光-分子印迹技术
4
优缺点分析
化学发光
化学发光免疫分析
1977年，Halman等将化学发光与抗原抗体免疫反应相结合，创建了化学发光免疫分析 方法（chemiluminescent immunoassay，CLIA），相较于传统免疫技术（放射免疫技术、 酶免疫技术、荧光免疫技术等），CLIA具有自动化程度高、特异性好、精确度高、检测 范围广等优势。
化学发光 化学发光免疫分析的分类
根据标记物的不同 ➢ 直接化学发光免疫分析
CLIA可分为三大类： ➢ 酶促化学发光免疫分析
➢ 电化学发光免疫分析
化学发光
1、直接化学发光免疫分析
化学发光剂直接标记抗体或抗原的免疫测定方法称为化学发光免疫分析。
直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需要酶的催化作用，直接参与发 光反应，他们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗 体，目前常见的直接化学发光标记物主要有吖啶酯类化学发光剂。
cea化学发光法参考值 -回复
cea化学发光法参考值-回复什么是化学发光法？化学发光法是一种利用化学反应产生的光来检测物质的分析方法。
它基于一种特殊的化学反应——发光反应。
在发光反应中，特定的物质（称为发光试剂）与被测物质（称为分析物）发生反应，产生一种或多种新的化合物，从而释放能量，并转化为可见光。
通过测量产生的光的强度或波长，可以求得分析物的浓度，从而实现对该物质的定量分析。
常见的化学发光试剂有荧光染料、荧光标记的抗体等。
这些试剂在特定的条件下与分析物发生反应后，诱导产生荧光或磷光，而荧光或磷光的强度与分析物的浓度成正比。
化学发光法的原理：化学发光法的原理是基于发光的化学反应。
当被测物质与发光试剂发生相应的化学反应时，会产生能量并转化为光，这种光的强度与浓度呈线性关系。
一种常见的化学发光反应是通过酶的作用来催化产生发光。
这种酶法发光技术被广泛应用于生物分析、临床诊断和环境监测中。
例如，酶促化学发光技术（ECL）是一种特殊的化学发光法，它结合了化学发光与酶反应的优势，具有高灵敏度和高选择性的特点。
步骤一：试剂准备在进行化学发光法分析之前，首先需要准备好相应的试剂。
这包括所需的发光试剂、缓冲液、辅助试剂等。
试剂的选择取决于被测物质的性质和要求。
步骤二：样品处理样品处理是化学发光法分析的重要步骤之一。
样品的处理可以包括净化、提取、稀释等步骤，以获得适合分析的样品。
这一步骤的目的是去除可能干扰分析的物质，并使样品达到分析的要求。
步骤三：反应过程在准备好试剂和样品后，将它们按照一定的比例混合在一起，使之发生化学反应。
反应的条件如温度、pH值和反应时间等也需要根据具体分析方法的要求进行调节。
步骤四：测量光信号发生化学反应后，会产生光信号。
这些光信号可以在特定的光谱仪器中进行检测。
利用光谱仪器，我们可以测量光的强度、波长等参数，并将其与标准曲线进行比较，从而获得分析物的浓度。
步骤五：数据处理和结果分析最后一步是对测量结果进行数据处理和结果分析。
酶促化学发光免疫检测技术总结
酶促化学发光免疫检测技术总结本人在酶促化学发光免疫检测领域工作已经有4个年头了，期间不仅学习并从事了酶促化学发光免疫诊断试剂的开发，同时很幸运地受聘于天众达公司，学习了化学发光免疫检测仪器的开发、生产全过程。
这意味着本人经过了多年的努力，对酶促化学发光免疫检测技术有了较高层次的了解和掌握。
虽然酶促化学发光免疫检测技术应用于临床检验约有10年的历史，但是遗憾的是，目前国内缺乏专门针对这一技术领域的学术专著。
大多数用户对酶促化学发光免疫检测技术的原理、特点、影响因素等缺乏全面系统的了解。
再加上某些不负责任的厂家的不专业的技术支持，造成了许多模糊和错误的认识，导致了酶促化学发光免疫检测技术在国内临床的实际应用情况非常糟糕。
使得酶促化学发光免疫检测技术的优越性无法在临床检验中得到充分发挥。
经过多年的实践，本人深深体会到，只有真正做好技术支持工作，一个新检测技术才能普及推广，才能完全发挥其优越性，造福国民。
因此，就有了下面本人多年来的总结试剂篇酶促化学发光免疫检测技术属于体外免疫分析检测技术范畴常用体外免疫分析技术有:免疫比浊分析放射免疫分析酶联免疫分析化学发光免疫分析时间分辨荧光免疫分析金标免疫分析化学发光免疫分析检测技术包括:直接化学发光免疫分析检测技术酶促化学发光免疫分析检测技术电化学发光免疫分析检测技术化学发光(chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象。
通常是氧化反应产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象，其特点为消耗发光剂，同时量子效率相对较底，通常，可以用于分析化学的化学发光系统的量子产率值在0.01~0.20之间。
一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下三个条件:第一，反应中可提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光;第二，有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态;第三，激发态分子具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。
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酶促化学发光法
引言
酶促化学发光法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的生物分析技术，广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域。
它通过检测酶的活性来间接或直接测定样品中的目标物质，具有高灵敏度、高特异性和高度自动化的特点。
原理
酶促化学发光法的原理基于酶促反应和化学发光的原理，主要分为间接法和直接法两种。
间接法
间接法是最常用的酶促化学发光法。
其原理如下：
1.将待测物质（抗原或抗体）固定在固相载体上，如酶标板。
2.加入特异性抗体或抗原，与待测物质发生特异性结合。
3.洗涤去除非特异性结合物质。
4.加入酶标记的二抗，与第二抗体或抗原结合。
5.再次洗涤去除非特异性结合物质。
6.加入底物，经酶催化反应产生可发光的产物。
7.通过化学发光系统测定发光信号的强度，与待测物质的浓度呈正相关。
直接法
直接法是一种简化的酶促化学发光法。
其原理如下：
1.将待测物质（抗原或抗体）固定在固相载体上，如酶标板。
2.加入特异性酶标记的第二抗体或第二抗原，与待测物质发生特异性结合。
3.洗涤去除非特异性结合物质。
4.加入底物，经酶催化反应产生可发光的产物。
5.通过化学发光系统测定发光信号的强度，与待测物质的浓度呈正相关。
实验步骤
酶促化学发光法的实验步骤如下：
1.准备试剂和样品：包括酶标板、抗体、底物等试剂，以及待测样品。
2.酶标板涂覆：将待测物质固定在酶标板上，通常是通过吸附或共价结合的方
式。
3.反应：加入特异性抗体或抗原，与待测物质发生特异性结合，形成抗原-抗
体复合物。
4.洗涤：用缓冲液洗涤酶标板，去除非特异性结合物质。
5.加入酶标记的二抗：与第二抗体或抗原结合，形成酶标记的复合物。
6.再次洗涤：用缓冲液洗涤酶标板，去除非特异性结合物质。
7.加入底物：底物与酶催化反应，产生可发光的产物。
8.发光信号测定：通过化学发光系统测定发光信号的强度，与待测物质的浓度
呈正相关。
9.数据分析：根据标准曲线或计算方法，计算出待测样品中目标物质的浓度。
应用领域
酶促化学发光法广泛应用于医学、生物学和生物化学领域，具有以下特点和应用：1.临床诊断：酶促化学发光法可用于检测血清中的肿瘤标志物、病毒抗体、药
物浓度等，用于疾病的早期诊断、疗效监测和预后评估。
2.免疫学研究：酶促化学发光法可用于检测免疫相关分子的表达和功能，如细
胞因子、免疫球蛋白等，用于研究免疫系统的调节和疾病的发生机制。
3.生物化学研究：酶促化学发光法可用于测定蛋白质、核酸、酶活性等生物分
子的含量和活性，用于研究生物分子的结构和功能。
4.药物筛选：酶促化学发光法可用于高通量筛选药物靶点和药物活性，加速新
药研发过程。
优势和局限性
酶促化学发光法具有以下优势：
1.高灵敏度：酶促化学发光法的灵敏度可达到亚皮克级别，能够检测极低浓度
的目标物质。
2.高特异性：酶促化学发光法通过抗原抗体的特异性结合来检测目标物质，具
有高特异性。
3.高度自动化：酶促化学发光法可以配备自动化仪器，实现高通量检测和数据
处理。
4.宽线性范围：酶促化学发光法的线性范围广，适用于不同浓度范围的样品。
然而，酶促化学发光法也存在一些局限性：
1.依赖标准曲线：酶促化学发光法需要建立标准曲线来计算待测样品中目标物
质的浓度，因此需要标准品和标准曲线的准备。
2.可能受干扰：酶促化学发光法可能受到抗体交叉反应、非特异性结合、样品
干扰等因素的影响，导致结果的误差。
3.成本较高：酶促化学发光法相对于其他检测方法来说，试剂成本较高，需要
专门的仪器和设备。
结论
酶促化学发光法是一种常用的生物分析技术，通过检测酶的活性来间接或直接测定样品中的目标物质。
它具有高灵敏度、高特异性和高度自动化的特点，广泛应用于医学、生物学和生物化学领域。
酶促化学发光法的优势在于高灵敏度、高特异性、高度自动化和宽线性范围，但也存在一些局限性，如依赖标准曲线、可能受干扰和成本较高。
随着技术的不断发展，酶促化学发光法在生命科学研究和临床诊断中的应用前景将更加广阔。