实验三动物组织DNA的提取
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。
核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95%乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10%NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。
有机碱和戊糖。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。
还原成兰色的钼兰。
常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。
H3PO4＋12H2Mo04→H3PO4·12Mo03+12H20H3P04·12Mo03
H3P04·6Mo03·3Mo205
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(⑴)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖:在强酸中加热，可生成o一羟基y一酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。
实验三、动物组织DNA的提取
三．实验器材与试剂 1. 0.15mol/LNaCl-0.015mol/L 柠檬酸钠溶液（ PH7.0 ） : 称取 8.77g 氯化 钠、4.41g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解，调节pH值至7.0稀释至100ml。 2. 0.15mol/LNaCl-0.1mol/LEDTA-Na2 溶液（ PH8.0 ） : 称取 8.77g 氯化钠、 37.2g EDTA-Na2 溶于 800ml 蒸馏水中，以 0.1mol/L 氢氧化钠调至 PH8.0 ， 最后定容至1000ml。 3. 5mol/L 氯化钠：称取 292.2gNaCl 溶于 800ml 蒸馏水中，最后定容至 1000ml。 4. 5%SDS溶液：称取5gSDS，溶至100ml的45%乙醇中。 5. 氯仿-异戊醇溶液：按氯仿︓异戊醇=24︓1（V/V）配制。 6. 95%乙醇，75%乙醇。 7. 组织捣碎机（或玻璃匀浆器），移液管，离心机，锥形瓶，天平，容 量瓶，剪刀。
研磨匀浆
匀浆转入离心管
离心后的匀浆
分离得到dna核蛋白后应进一步十二烷基硫酸钠使蛋白质变性用含有异戊醇的氯仿除去变性的蛋白质以得到游离的dna4dna分子大而长其水溶液呈粘稠状可用玻璃棒搅缠起来
动物生物化学实验报告
——动物组
织DNA的提取
班级：动科1143 姓名：李胜浩 学号：201411331312
பைடு நூலகம்
一．实验目的 掌握从动物组织中分离DNA的基本原理和方法。 二．基本原理 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白，能溶解在纯水或1mol/L 的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。2.在0.1mol/LNaCl溶液 中，DNA核蛋白的溶解度最小，仅为在纯水中的1%左右，而 RNA核蛋白的溶解度最大；但在1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋 白的溶解度却增大，至少是在纯水中的两倍，而RNA核蛋白 的溶解度却明显下降。3.分离得到DNA核蛋白后，应进一步 十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，用含有异戊醇的氯仿除去变 性的蛋白质，以得到游离的DNA。4.DNA分子大而长，其水溶 液呈粘稠状，可用玻璃棒搅缠起来。为了获得大的DNA分子， 在试验中应尽量避免剧烈震荡、用力过猛。
动物基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
实验三 动物组织基因组DNA提取
龙志敏 200930220121 09制药一班实验三动物组织基因组DNA提取一、实验目的掌握动物组织基因组DNA提取的原理和方法二、实验原理真核生物DNA以染色体形式存在于细胞核内，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离；EDTA则抑制细胞中DNase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
三、仪器、试剂和材料1、仪器设备恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸嘴2、试剂（1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM Tris-HCl (pH8.0)，25mM EDTA (pH 8.0)（2）2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS（3）蛋白酶K：双蒸水配制10mg/mL，-20℃保存（4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存（5）平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1）（6）3 M NaAc、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水3、材料新鲜动物（鸡）肝脏组织四、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物肝脏组织块0.1g，用冷生理盐水洗3次，置于培养皿中剪碎（动作要快）。
将碎肝脏组织转入玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液，匀浆至不见组织块（低温操作）；2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防止未碎的组织进入离心管），5000rpm离心2min；3、弃上清，沉淀加0.25 mL无菌水，用微量移液器吸嘴吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细胞裂解缓冲液，盖上离心管盖子，颠倒混匀；4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心管数次；5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀，冰上静置10min，12000 rpm离心10min；6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另一新1.5mL 离心管中（注意不可吸取两相间的蛋白质）；7、估算上清体积，加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢颠倒混匀，12000 rpm离心10min；8、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇，盖上离心管盖子，缓慢颠倒混匀，冰浴30 min后10000 rpm离心5min；9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口的残余液滴除掉；10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心1min；11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口的液滴，短暂离心，用吸嘴将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥；12、加100μLTE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃或-20℃保存备用。
动物组织中总DNA的提取
试剂
提取缓冲液：200 mmol/L Tris·Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS
24：1的氯仿：异戊醇 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方(1000ml):
操作步骤
1. 肝脏1g左右, (剪碎) 置研钵中，加入2-3mL提取缓
目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 CTAB法和使DNA得以 游离出来）。
SDS法提取动物组织DNA
SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性 剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉 淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等 有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因 核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提 液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入 乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， 即DNA溶液。
絮状DNA沉淀。
结果分析与讨论
DNA提取原则
保证DNA结构的完整性
纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
实验原理
细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 中，而不溶于有机溶剂。
冲液， 研磨成浆；吸入10mL EP管中，摇动混匀；
2. 60℃水浴保温20min，不时颠倒混匀； 3. 室温下3000rpm离心10min； 4. 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1
的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀；
5. 室温下3000rpm离心10min； 6. 小心将上层水相吸入另一只离心管中； 7. 重复4-5步2-3次; (此步不做） 8. 加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现
实验三、小鼠肝DNA提取及鉴定
操作步骤
（三）DNA的含量测定 的含量测定
取0.5ml DNA样品加 TE缓冲液至 样品加 缓冲液 4ml，用4ml 0mlTE缓冲液调零，用紫外 ， 缓冲液调零， 分光光度计测A260值和 值和A280值。 分光光度计测 值和 值
（四）计算DNA浓度并判断样品组成 计算 浓度并判断样品组成
操作步骤
3．小心取上清液约0.4-0.5ml ，加入 ml ．小心取上清液约 加入0.5 氯仿:异戊醇 异戊醇(24:1)，混匀，室温放 氯仿 异戊醇 ，混匀，室温放5min， ， 12000rpm离心 离心5min。 离心 。 4．取上清液0.2 ml ，加入 体积（即60µl) ．取上清液 加入0.3体积 体积（ 体积（ 的NH4Ac，2.5体积（即0.5ml)的无水乙醇 ， 体积 的无水乙醇 充分混匀， 离心5min，小心倒去 充分混匀，12000rpm离心 离心 ， 溶液，吸干。 沉淀加入1.0mlTE缓冲 溶液，吸干。DNA沉淀加入 沉淀加入 缓冲 液溶解。 液溶解。
操作步骤
(一）肝匀浆的制备 （二）提取DNA 提取 1．取0.5ml匀浆液加入 ． 匀浆液加入1.5ml离心管中，加 离心管中， 匀浆液加入 离心管中 溶液0.1ml，颠倒混匀后，室温 入 10％SDS溶液 ％ 溶液 ，颠倒混匀后， 5min； ； 2．在上述溶液中加入饱和酚0.25ml，氯仿 ．在上述溶液中加入饱和酚 ，氯仿: 异戊醇(24:1) 0.25ml，充分混匀，室温放 异戊醇 ，充分混匀， 5min，12000rpm离心 离心5min; ， 离心
A260的应用
1. DNA或RNA的定量 或 的定量 A260=1.0相当于 相当于 50μg/ml双链 μ 双链DNA 双链 40µg/ml单链 单链DNA（或RNA） 单链 （ ） 20µg/ml寡核苷酸 寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 判断核酸样品的纯度 DNA纯品 A260/A280 = 1.8 纯品: 纯品 RNA纯品 A260/A280 = 2.0 纯品: 纯品
基因组DNA提取
基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。
实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。
置于液氮中冻结。
2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。
3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。
4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。
如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。
如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。
5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。
6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。
7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。
二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。
实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。
将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。
2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。
3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。
动物dna的提取实验报告
动物dna的提取实验报告动物DNA的提取实验报告一、引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内负责遗传信息传递的重要分子。
通过提取动物体内的DNA，我们可以更深入地了解动物的遗传特征和进化历程。
本实验旨在探究动物DNA的提取方法，并观察提取到的DNA的形态和纯度。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 实验动物：我们选择了小鼠（Mus musculus）作为实验对象。
- 实验器材：离心管、显微镜、酒精灯、显微镜玻片等。
- 实验试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、乙酸酒精、异丙醇、盐酸、乙醇等。
2. 实验步骤：a) 准备工作：将实验器材消毒并摆放整齐，准备所需试剂。
b) 细胞裂解：将小鼠组织样本切碎并转移到离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，并加入蛋白酶K，进行细胞裂解。
c) 蛋白质去除：加入盐酸和异丙醇，使蛋白质凝固并沉淀，离心后将上清液倒掉。
d) DNA沉淀：加入乙酸酒精，使DNA沉淀出来，用离心机离心后将上清液倒掉。
e) 洗涤与纯化：加入乙醇洗涤沉淀的DNA，用离心机离心后将上清液倒掉，重复此步骤两次。
f) DNA溶解：加入适量的去离子水，使DNA溶解。
三、实验结果与讨论通过以上步骤，我们成功地提取到小鼠的DNA，并进行了初步观察和分析。
1. DNA形态观察：在显微镜下观察提取到的DNA样本，我们可以看到DNA呈现出长丝状的形态，这是由于DNA分子的高度聚合性所致。
此外，我们还观察到DNA的颜色呈现出乳白色，与DNA的理化性质相符。
2. DNA纯度分析：为了进一步评估提取到的DNA的纯度，我们使用了比色法和吸光度测定法进行分析。
结果显示，提取到的DNA的吸光度比值（A260/A280）为1.8，接近1.8-2.0的理想范围，表明提取到的DNA相对纯净。
3. 实验优化与改进：在实验过程中，我们发现了一些问题和改进的空间。
首先，细胞裂解的时间和温度对DNA的提取效果有一定影响，可以进一步优化条件以提高DNA的提取率。
动物组织基因组DNA的提取
二、实验原理
7、核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质 温度： ① 4℃ ——最佳最简单； ② -70℃——长期保存的良好温度； ③ -20℃ ； 保存介质： TE缓冲液（最常用） 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0 1mmol/L EDTA pH 8.0
三、实验试剂、仪器和耗材
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解； ② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法——蛋白酶、胰蛋白酶； 冰冻法 —— 反复冻融或液氮冻后 组织捣碎； ③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎； 以上原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。 DNA ，抑制 Dnase 活力很容易，但防止机械拉 力张力更重要； RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但 抑制 Rnase 活力较难，故在 RNA 提取中设法抑制 Rnase更重要。
二、实验原理
4、核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质， 用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂， 去垢剂的作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； ② 溶解核糖体上面的蛋白，使其解聚，将核酸 释放出来； ③ 对Rnase和Dnase有一定的抑制作用； 如: SDS，脱氧胆酸钠，4-氨基水杨酸钠，萘-1， 5-二磺酸钠等
DNA提取PPT课件
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37
引物设计的原则（二）
④避免引物内部出现二级结构
– 避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体， 产生非特异性的扩增条带。
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100 Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入P.CR，使利用热变性解链DNA模板可30行。
(%)
PCR反应循环
94℃
变性
55℃
退火
PCR循环
.
72℃
延伸
31
引物
5’
3’
3’
5’
变性、退火
延伸
变性、退火
延伸
PCR的指数. 扩增（2n）
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33
G+C含量以40-60%为宜。引物退火温度计算：Tm=2（A+T）+4（C+G）。 Tm在55-65 ℃最好。
– G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。
– ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
– 引物的解链温度：两个引物之间的 Tm 值差异最好在 5℃之内。
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5
（二）提DNA
酚抽提法： ① 加RNase，37℃1 h， ② 加蛋白酶K，50 ℃ ，3 h ； 或 37 ℃ 12 h , 不时mix
③ 加等体积酚，充分mix，9000rpm，3min，小心吸取上层粘稠水相。 ④ 加等体积酚，充分mix，9000rpm， 3min，小心吸取上层粘稠水相。 ⑤ 氯仿-异戊醇(24:1)抽提1次。9000rpm ，3min，小心吸取上层粘稠水
的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能 和多糖结合，有效去除多糖。
DNA提取
实验1、从动物组织中提取基因组DNA（一）实验目的通过实验掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和基本方法。
(二) 实验原理在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K笑话细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动物基因组DNA，用此法得到的DNA长度为100-150kb，适用于噬菌体构建基因组文库和DNA 印迹分析。
（三）试剂、材料、仪器与器材1. 试剂与材料1)Tris–HCL 1mol/L PH8.0 50ml配制方法：40ml双蒸水，6.057g固体Tris放入烧杯中溶解，用浓盐酸调PH值到8.0，转移到50ml 容量瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
2)生理盐水: 0.85%NaCL 100ml配制方法：在20ml双蒸水中溶解0.85g固体NaCL，加水定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
3)EDTA 0.5mol/L PH8.0 50ml配制方法：将9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40ml双蒸水，用1g的NaOH颗粒（慢慢逐步加入）调PH值到8.0，用50ml容量瓶定容，如果EDTA难溶，先加NaOH溶解，然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。
4)TES缓冲液（释放DNA） 100ml配制方法：将0.5844g的5 mol/lNaCl溶解于80ml双蒸水，在分别加入1ml的0.5 mol/l EDTA、0.2ml的Tris-HCl (pH=8.0)，加定容至100ml, 摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。
5)10% SDS（变性剂破细胞壁）100ml配制方法：将10g的十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于80ml双蒸水于68℃加热溶解，用浓HCl调至PH=7.2，定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，4℃保存备用。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 样品，为后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等物质结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。
细胞裂解可以使用物理方法（如研磨、超声破碎）或化学方法（如使用裂解液）。
去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。
DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解，而在乙醇中会沉淀，利用这一特性可对其进行纯化。
三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物叶片。
（二）实验试剂1、细胞裂解液：包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分，用于破坏细胞膜和核膜，释放 DNA。
2、蛋白酶 K：能分解与 DNA 结合的蛋白质。
3、酚/氯仿/异戊醇混合液：用于去除蛋白质。
4、无水乙醇、70%乙醇：用于沉淀和洗涤 DNA。
5、 NaCl 溶液：提供适当的离子强度。
6、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）：用于保存 DNA。
（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤（一）样本处理1、动物组织：将新鲜的动物组织剪碎，放入匀浆器中，加入适量的裂解液，匀浆至组织完全破碎。
2、植物叶片：取适量新鲜叶片，液氮研磨成粉末，加入裂解液。
（二）细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中，在 55℃水浴中孵育 1 2 小时，期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡，以促进细胞裂解。
（三）去除蛋白质1、加入蛋白酶 K，使其终浓度达到一定值，在 55℃继续孵育 1 2小时。
2、冷却至室温后，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。
3、吸取上清液至新的离心管中，重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次，直至中间层无白色蛋白质沉淀。
动物组织基因组的提取讲解
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌 体，其或只含DNA，或只含有RNA。
2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在
微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂
在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
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组织匀浆液 （装入10ml离心管中） 10ml
100mmol／L NaCl：0.2ml（5M NaCl） 25 mmol／L EDTA(pH8.0)： 0.5ml（ 0.5M EDTA pH8.0) l0mmol／L Tris·HCIpH 8.0)：0.1ml（1M Tris·HCIpH 8.0) 加三蒸水: 9.2ml
DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
动物组织基因组DNA的提取
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四、实验步骤
11 再次将Spin Colomn于10000g离心1min，并将Spin Colomn转移至一个新的1.5ml离心管； 12 向Spin colomn中加入100ul-200ul Elution Buffer, 并于室温放置1min。 13 10000g离心1min，并弃去Spin Colomn, 1.5 ml离心 管中液体含有DNA。
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二、实验原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
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二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。
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五、实验结果
检测DNA的浓度和质量： 取出一部分的DNA，用elution buffer稀释到一定的倍 数 ， 用 紫 外 分 光 光 度 计 分 别 测 定 OD260 ， OD280 ， OD320. DNA浓度: （ug/ml）= 50 x OD260 x 稀释倍数
DNA质量: 2.0 ≥ OD260-320/OD280-320 ≥ 1.7
如：苯酚、氯仿、盐பைடு நூலகம்胍、DEPC
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二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
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二、实验原理
6、核酸制备的步骤
破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解；
② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研 磨。
动物肝脏dna的提取实验报告
动物肝脏dna的提取实验报告实验报告：动物肝脏DNA的提取一、实验目的本实验旨在提取动物肝脏中的DNA，了解和掌握动物组织中DNA提取的基本原理和方法，通过实验操作培养实验技能和加深对生物化学知识的理解。
二、实验原理DNA提取主要是根据DNA和蛋白质的理化性质，利用酶解、吸附和解吸附等步骤将DNA从动物组织中分离出来。
动物肝脏中含有丰富的核苷酸，因此成为DNA提取的理想材料。
本实验将采用试剂盒法提取动物肝脏DNA。
三、实验步骤1.准备所需试剂和器材，包括动物肝脏组织、DEPC水、DNA提取试剂盒、离心管、移液器等。
2.将动物肝脏组织放入研钵中，加入适量DEPC水研磨成匀浆。
3.将研磨后的匀浆转入离心管中，加入适量DNA提取试剂盒中的裂解液，轻轻混匀。
4.将混合液放入离心机中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出上清液。
5.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的酚-氯仿混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
6.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇混合液，轻轻混匀后离心10分钟，分离出上清液。
7.将上清液转移至新的离心管中，加入适量DNA沉淀剂，轻轻混匀后静置10分钟，使DNA充分沉淀。
8.将混合液倒入离心管中，以12000rpm的转速离心10分钟，分离出DNA沉淀。
9.用DEPC水溶解DNA沉淀，保存于-20℃冰箱中备用。
四、实验结果与分析1.通过观察和记录实验过程，我们成功地从动物肝脏组织中提取出了DNA。
在实验过程中，我们使用了DEPC水来消除组织中的RNase酶活性，确保了提取的DNA不会被降解。
同时，利用试剂盒中的裂解液和酚-氯仿、氯仿-异戊醇混合液等试剂将蛋白质和其他杂质去除，使DNA得到有效纯化。
2.通过比较实验前后的组织样品和提取的DNA溶液，我们可以看到组织样品的颜色为红色，而提取的DNA溶液呈现出透明无色，说明提取的DNA具有较高的纯度。
此外，通过观察和记录实验结果，我们可以看到在离心管中明显看到DNA沉淀，说明提取的DNA具有较高的浓度。
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四、实验步骤
1.本实验以鸡或兔的肝脏为材料。实验前动物应饥饿12h以上。 2.称取肝脏4g，放在培养皿中，用剪刀剪碎，放入匀浆器研磨，
加入6ml，氯化钠-柠檬酸钠缓冲液，装在10ml离心管中。将匀 浆物在4000r/min下离心10min。 3.将上述沉淀转入50ml大试管中，加入6ml氯化钠-柠檬酸钠缓 冲溶液、3ml氯仿-异戊醇混合液，0.5mlSDS使其终浓度为0.41%， 手摇15min，然后缓慢加入氯化钠固体（有0.55g），使其终浓 度为1mol/L。慢摇5min是氯化钠充分溶解。 4.将上述混合液在4000r/min离心15min，取上清液于50ml烧杯 中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在 玻璃棒的凝胶状物用滤纸吸取多余的乙醇，即得DNA粗品。 5.显色反应：取上述反应物2ml加入二苯胺试剂2ml沸水浴加热， 观察颜色。
三．实验器材与试剂
1. 0.15mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠溶液（PH7.0）:称取8.77g氯化 钠、4.41g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解，调节pH值至7.0稀释至100ml。
2. 0.15mol/LNaCl-0.1mol/LEDTA-Na2溶液（PH8.0）:称取8.77g氯化钠、 37.2g EDTA-Na2溶于800ml蒸馏水中，以0.1mol/L氢氧化钠调至PH8.0， 最后定容至1000ml。
研磨匀浆
匀浆转入离心管
离心后的匀浆
3. 5mol/L氯化钠：称取292.2gNaCl溶于800ml蒸馏水中，最后定容至 1000ml。
4. 5%SDS溶液：称取5gSDS，溶至100ml的45%乙醇中。
5. 氯仿-异戊醇溶液：按氯仿︓异戊醇=24︓1（V/V）配制。
6. 95%乙醇，75%乙醇。
7. 组织捣碎机（或玻璃匀浆器），移液管，离心机，锥形瓶，天平，容 量瓶，剪刀。
动物生物化学实验报告
——动物组 织DNA的提取源自班级：动科1143 姓名：李胜浩 学号：201411331312
一．实验目的 掌握从动物组织中分离DNA的基本原理和方法。 二．基本原理 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白，能溶解在纯水或1mol/L 的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。2.在0.1mol/LNaCl溶液 中，DNA核蛋白的溶解度最小，仅为在纯水中的1%左右，而 RNA核蛋白的溶解度最大；但在1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋 白的溶解度却增大，至少是在纯水中的两倍，而RNA核蛋白 的溶解度却明显下降。3.分离得到DNA核蛋白后，应进一步 十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，用含有异戊醇的氯仿除去变 性的蛋白质，以得到游离的DNA。4.DNA分子大而长，其水溶 液呈粘稠状，可用玻璃棒搅缠起来。为了获得大的DNA分子， 在试验中应尽量避免剧烈震荡、用力过猛。