医疗药品无菌检查法验证培训课件
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无菌检查法培训-PPT课件
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
Βιβλιοθήκη 菌悬液在室温下放置应在 2小时内使用,若保 存在2~8℃可在 24小时内使用。黑曲霉孢子 悬液可保存在 2~8℃,在验证过的贮存期内 使用。 培养基接种 取每管装量为 12ml的硫乙醇酸 盐流体培养基 9支,分别接种小于100 cfu的金 黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆 菌、生孢梭菌各 2支,另 1支不接种作为空白 对照,培养3天;取每管装量为9ml的改良马 丁培养基5支,分别接种小于 100 cfu的白色念 珠菌、黑曲霉各 2支,另 1支不接种作为空白 对照,培养5天。逐日观察结果。 结果判定 空白对照管应无菌生长,若加菌的 培养基管均生长良好,判该培养基的灵敏度 检查符合规定。
薄膜过滤法,应增加 1/2的最小检验数量作阳性对 照用;若采用直接接种法,应增加供试品 1支(或 瓶)作阳性对照用。)
表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽 验样品的最少检验数量
无 菌 检 查 法
表3. 固体制剂最少检验量及上市抽 检样品的最少检验数
金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis)〔CMCC(B)63 501〕 生孢梭菌( Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕 白色念珠菌( Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉( Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
《无菌检验方法验证》课件
无菌检验方法验证的目的
在本节中,我们将阐明无菌检验方法验证的目的和重要性,以及验证结果对 无菌产品质量的影响。
方法证的无菌检验方法。
2
步骤二
制定验证计划和实施方案,包括验证样品的选择和实验室条件的准备。
3
步骤三
进行实际的验证实验,收集和记录数据。
《无菌检验方法验证》 PPT课件
欢迎大家参加今天的课程!在这个课件中,我们将深入探讨无菌检验方法验 证的重要性和步骤,帮助您更好地理解这一关键概念。
概述
本节将介绍无菌检验方法验证的基本概念和背景,以及其在医疗和制药领域 中的重要性。
无菌检验的定义和意义
这一部分将详细说明无菌检验的定义和意义,以及无菌状态在医疗设备和药品生产中的关键作用。
4
步骤四
数据分析和结果解释,评估无菌检验方法的准确性和有效性。
验证设计和执行
验证设计
根据验证目标和要求,选择合适 的无菌检验设备和方法。
验证执行
由经过培训和资质认证的人员执 行验证实验,确保实验过程的准 确性和可靠性。
验证报告
记录并总结验证过程的结果和结 论,生成详细的验证报告。
结果分析和解释
在本节中,我们将分析和解释验证结果,评估无菌检验方法的优缺点以及改 进措施。
结论和建议
最后,我们将通过对整个无菌检验方法验证过程的总结,给出结论和建议, 以帮助您更好地应用于实际工作中。
无菌检查法培训PPT课件
无 菌 检 查 法
表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
1
无 菌 检 查 法
2
表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量
1
无 菌 检 查 法
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表3. 固体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数
无 菌 检 查 法
五、实验材料的准备
培养基及稀释液 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
实验设备 过滤装置(无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子) 电子天平 压力蒸汽灭菌器 电热鼓风干燥箱 恒温培养箱 集菌仪
无 菌 检 查 法
5、供试品的准备
操作前,用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒,如果供试品容器内有一定的真空度,可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤器的针头)向容器内导入无菌空气,再按无菌操作起开容器取出内容物。
无 菌 检 查 法
以上材料可以采用干热灭菌(只限于剪刀、镊子,灭菌时将剪刀和镊子装入专用灭菌器具内)或湿热灭菌。干热灭菌为160℃ 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
无 菌 检 查 法
培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查:每批培养基随机取不少于 5 支(瓶),培养 14 天,应无菌生长。
无 菌 检 查 法
202X
无Байду номын сангаас检查法培训
01.
无
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03.
检
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表 1 批出厂产品最少检验数量
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表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量
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表3. 固体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数
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五、实验材料的准备
培养基及稀释液 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
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无 菌 检 查 法
实验设备 过滤装置(无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子) 电子天平 压力蒸汽灭菌器 电热鼓风干燥箱 恒温培养箱 集菌仪
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5、供试品的准备
操作前,用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒,如果供试品容器内有一定的真空度,可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤器的针头)向容器内导入无菌空气,再按无菌操作起开容器取出内容物。
无 菌 检 查 法
以上材料可以采用干热灭菌(只限于剪刀、镊子,灭菌时将剪刀和镊子装入专用灭菌器具内)或湿热灭菌。干热灭菌为160℃ 2小时,或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
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培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查:每批培养基随机取不少于 5 支(瓶),培养 14 天,应无菌生长。
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药品无菌检查课件
药品无菌检查课件
• 药品无菌检查概述 • 药品无菌检查的方法与流程 • 药品无菌检查的实验操作 • 药品无菌检查的常见问题与解决方案 • 药品无菌检查的案例分析
目录
药品无菌检查概述
定义与目的
定义
药品无菌检查是指对药品中是否 含有微生物的检查,特别是致病 性微生物的检查。
目的
确保药品在生产和处理过程中没 有受到微生物污染,保障药品的 安全性和有效性。
常见问题三:实验操作失误问题
药品无菌检查的案例分析
案例一:某注射液的无菌检查
总结词
操作规范、结果准确
详细描述
某注射液的无菌检查过程严格遵循中国药典规定,采用薄膜过滤法进行检验。 通过控制实验条件,确保了检验结果的准确性和可靠性。
案例二:某胶囊剂的无菌检查
总结词
高效检测、无菌保证
详细描述
某胶囊剂的无菌检查采用了直接接种法,该方法具有较高的检测效率和无菌保证。 在操作过程中,严格控制实验条件,确保了结果的准确性和可靠性。
药品无菌检查的重要性
保障公众健康
无菌药品用于治疗疾病和预防感 染,如果药品中含有微生物,将
给患者带来健康风险。
维护药品质量
微生物污染可能导致药品变质、药 效降低或产生不良反应,因此无菌 检查是保证药品质量的重要环节。
符合法规要求
各国药品监管机构要求对药品进行 无菌检查,确保药品符合相关法规 和标准。
案例三:某原料药的无菌检查
总结词
全面检测、排除污染
详细描述
某原料药的无菌检查采用了多种方法进行全面检测,包括直接接种法和薄膜过滤法等。在操作过程中, 严格控制实验条件,确保了结果的准确性和可靠性,有效排除了污染的可能性。
THANKS
• 药品无菌检查概述 • 药品无菌检查的方法与流程 • 药品无菌检查的实验操作 • 药品无菌检查的常见问题与解决方案 • 药品无菌检查的案例分析
目录
药品无菌检查概述
定义与目的
定义
药品无菌检查是指对药品中是否 含有微生物的检查,特别是致病 性微生物的检查。
目的
确保药品在生产和处理过程中没 有受到微生物污染,保障药品的 安全性和有效性。
常见问题三:实验操作失误问题
药品无菌检查的案例分析
案例一:某注射液的无菌检查
总结词
操作规范、结果准确
详细描述
某注射液的无菌检查过程严格遵循中国药典规定,采用薄膜过滤法进行检验。 通过控制实验条件,确保了检验结果的准确性和可靠性。
案例二:某胶囊剂的无菌检查
总结词
高效检测、无菌保证
详细描述
某胶囊剂的无菌检查采用了直接接种法,该方法具有较高的检测效率和无菌保证。 在操作过程中,严格控制实验条件,确保了结果的准确性和可靠性。
药品无菌检查的重要性
保障公众健康
无菌药品用于治疗疾病和预防感 染,如果药品中含有微生物,将
给患者带来健康风险。
维护药品质量
微生物污染可能导致药品变质、药 效降低或产生不良反应,因此无菌 检查是保证药品质量的重要环节。
符合法规要求
各国药品监管机构要求对药品进行 无菌检查,确保药品符合相关法规 和标准。
案例三:某原料药的无菌检查
总结词
全面检测、排除污染
详细描述
某原料药的无菌检查采用了多种方法进行全面检测,包括直接接种法和薄膜过滤法等。在操作过程中, 严格控制实验条件,确保了结果的准确性和可靠性,有效排除了污染的可能性。
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4无菌检验方法验证 PPT课件
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无菌检验方法验证
无菌检验方法 验证的意义
1.符合国家药典标准,与先进国家的药典和药品 技术审评接轨 2.是分析测量科学的基本要求,是各种法规遵循 工作的基础。 3.通过验证试验,可对每种药品的具体检验方法 的可靠性和结果的准确性予以确认,从而形成标 准化的操作。 4.通过对同品种,但不同批号或不同生产厂家的 产品的微生物学验证试验比较,可以发现产品所用 原料质量或工艺流程中是否存在污染抑菌物质的 YOUR SITE HERE 问题,具有药品质量控制的意义。
2、样品的前处理方法 为达到制备成均匀的供试液及为后续采取消除抑菌活 性的方法作准备,将所采取的前处理方法应用和参加 到验证试验中,以证明所用处理方法对各试验菌的生 长无影响。 按供试品的性状选用以下适宜的方法,或几种方法联 合使用:
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无菌检验方法验证
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方法二:用实验确定是否具有抑菌性的方法 在规定量的供试液中加入实验用微生物10~100个, 如微生物生长良好,即说明供试品对该种微生物无抑 菌活性。如已用药典规定的各试验菌试验,结果均能 生长良好,说明供试品无抑菌性,可用常规方法检验 之。将这些试验记录在案——就是证明该供试品无抑 菌性的验证试验部分;如加入的微生物不生长或生长 缓慢,说明供试品有抑菌性,将这些试验记录在案— —就是证明该供试品有抑菌性的验证试验部分;如加 入的微生物中有某一种菌最不能生长或生长最缓慢, 这一种菌就是该样品的敏感菌。
4.four
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无菌检验方法验证
验证的重点环节
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无菌检验法验证
验证报告的重点
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT课件1【精编】
药品无菌检查及相关知识
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
• 定义及特点 • 培养基、冲洗液 • 方法学验证 • 供试品的无菌检查 • 无菌检查的要点
药品无菌检查法
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量:一次试验所用供试品最小包装容器的数量
出厂产品按表1,上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量:按表3,采用薄膜过滤法时,只要供试品特性允 许,应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】 药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】 药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
流乙醇酸盐流体培养3天,胰酪大豆胨液体 5天, 空白对 照管应无菌生长,若加菌的培养基管均生长良好,判断该 培养基的灵敏度符合规定
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查法
• 冲洗液 • 0.1%蛋白胨水溶液 • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 • 可选用其他经验证过的适宜的溶液
• 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、 及其他品种是否无菌的一种方法。
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
• 定义及特点 • 培养基、冲洗液 • 方法学验证 • 供试品的无菌检查 • 无菌检查的要点
药品无菌检查法
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量:一次试验所用供试品最小包装容器的数量
出厂产品按表1,上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量:按表3,采用薄膜过滤法时,只要供试品特性允 许,应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】 药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】 药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
流乙醇酸盐流体培养3天,胰酪大豆胨液体 5天, 空白对 照管应无菌生长,若加菌的培养基管均生长良好,判断该 培养基的灵敏度符合规定
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查及相关知识培训教材PPT 课件1 【精编 】
药品无菌检查法
• 冲洗液 • 0.1%蛋白胨水溶液 • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 • 可选用其他经验证过的适宜的溶液
• 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、 及其他品种是否无菌的一种方法。
无菌检查法 ppt课件
FT接种金葡、铜绿、生 孢、枯草;改良马丁接 种白念和黑曲霉
2
2015版与2010版药典无菌检查法对比
改变项目 方法适用性检查
2015版
2010版
菌种:金葡、枯草、生 菌种:金葡、枯草、铜 孢、大肠埃希菌、白念、 绿、白念、黑曲霉 黑曲霉
2015版药典三部保留了生物制品无菌检查法的特点,如检验数量、 硫乙醇酸盐流体培养基接种份数和培养温度等。 由于培养基的改变,培养基的灵敏度和方法适用性试验也进行了修 订。
最少抽检数量 5个 10个 20个
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无菌检查法(2010版)
• 供试品接种及培养基接种 • 薄膜过滤法
采用封闭式薄膜过滤器,滤膜孔径应不大于0.45μm,直径约为 50mm,根据供试品及其容剂的特性选择滤膜材质。使用时应保证滤 膜在过滤前后的完整性。 • 水溶性供试品溶液过滤前先将少量的冲洗液润湿滤膜,油类供试品, 其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率, 应注意保持供试品溶液和冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试品溶液经 薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗,每张滤膜每次冲洗量一般为 100mL,总冲洗量不得超过1000mL,以避免滤膜上的微生物受损伤。 • 水溶液供试品:取规定量,每支(瓶)供试品装量为5mL及以下者, 全部转移至含适量稀释液的无菌容器内,混匀,立即过滤。 • 水溶液固体供试品:取规定量,加适宜的稀释液溶解或按标签说明 复溶,然后按水溶液供试品项下的方法操作。
• 无菌检查人员必须具备微生物专业知识,并经过无菌技术的培训。
2
无菌检查法(2010版)
• 所用到的培养基: 硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基
• 培养基的适用性检查: 无菌检查用硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基应符合无菌性检查 和培养基灵敏度检查要求。本检查可在供试品无菌检查前或与供试品无 菌检查同时进行。
无菌检查法方法验证及操作要点31页PPT
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂,怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
无菌检查法方法验证及Байду номын сангаас作要点
16、人民应该为法律而战斗,就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ,并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ,而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令,就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律,其真实含 义是财 富。— —爱献 生
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医疗药品无菌检查法 验证
一、概述:
1.1 定义:系用于检查药典要求的无菌的药品、医疗 器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方 法。
2.1验证的必要性和意义:① 确认Biblioteka 采用的方法检查供试品无菌的适合性。
② 保证检查结果的准确性、可靠性、准确性和 重现性;检查方法的完整性。
③ 与同药品无菌检查接轨。
① 确定抑菌作用(抑细菌、真菌试验验证),选择 敏感菌株对供试品抑菌活性去除效果检验(阳性 菌回收试验)。
② 消除样品抑菌性的方法验证:
医疗药品无菌检查法验证
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a) 化学钝化中和法(化学试剂中合法):利用化学 (生物)专属性灭活,常用钝化剂有:对氨基苯 甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。薄膜过滤法和 直接接种法也可用。对化学中和剂不敏感的样品, 用酶中和,如β -内转氨酶。
医疗药品无菌检查法验证
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三、无菌检查的试验要求:
3.1 环境:10000级局部以下100级,布局符合无菌 操作要求;或隔离系统(生物安全柜)。
3.2 人员:必须具备微生物专业知识,并经培训。
3.3 设备、器件、材料:经处理必须符合无菌要求, 培养箱的温度指示装置要校验。
3.4 培养基:
3.4.1 按药典规定处方配制,采用经验证合格的灭菌程序 灭菌。
3.5.3 依据供试品的特性选择稀释液、冲洗液。
医疗药品无菌检查法验证
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四、无菌检查法验证:
4.1 原理:验证的所有环境、培养基、菌株、稀释液、 冲洗液均与日常检查方法相一致、并符合相关规 定。
4.2 验证分类: ① 前验证:建立无菌检查方法时。 ② 再验证:修订检查方法时。 ③ 定期验证:供试品组合或原检查条件改变。
生长良好,培养基灵敏度符合要求。
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3.5 稀释液、冲洗液:
3.5.1 按药典规定配制后采用经验证的灭菌程序灭菌。 3.5.2常用稀释液、冲洗液:
0.1%蛋白胨水液 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 无菌0.1%氯化钠液 中性磷酸盐缓冲液 含0.1%聚山梨酯(吐温-80 ℃)的0.1%蛋白胨水溶液
b) 稀释中和法:利用降低供试品的相对浓度,将样 品稀释至最低抑菌浓度下进行。
c) 薄膜过滤法:利用体积差异分离,通过薄膜过滤, 微生物被截于滤膜,培养薄膜观察有无微生物生 长。各方法组合运用,效果更好。
医疗药品无菌检查法验证
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③ 验证方法:
a.验证分组:
A组:样品组,适当方法中和样品,加入少量验证微 生物(接种量少于100cfu)。
3.4.2 保存:2-25 ℃避光保存;期限:非密闭容器3周, 密闭容器1年。
3.4.3 培养基适用性、无菌性、灵敏度检查。
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3.4.4 灵敏度检查:
3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。 3.4.4.2常用菌株: 金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003) 铜像假单胞菌[CMCC(B)10104] 枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501] 生孢梭菌[CMCC(B)64941] 白色念珠菌[CMCC(F)98001] 黑曲霉[CMCC(F)98003] 3.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。 3.4.4.4结果判断:空白对照应无细菌增长,加菌液的培养基管均
医疗药品无菌检查法验证
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4.3 验证方案制定原则:
① 供试品的抑菌性,敏感菌种选择;适当的方法消除 或降低抑菌性。
② 样品的预处理方式能有效抵消(或中和)产品的 抑菌性。
③ 样品的预处理方式、检验过程、培养条件均不影 响样品中微生物的生长。
④ 验证记录真实完整地记录所做试验。
医疗药品无菌检查法验证
5.2供试品无菌检查方法和检验条件与验证方法相同。
5.3直接接种法验证试验:
5.3.1 供试品有抑菌时,按培养基灵敏度试验的菌种,向该种 无菌检查培养基内加入该微生物,每种培养基接2瓶,每 瓶接种量控制10-100cfu之间。
5.3.2 参照药典规定确定培养基用量,按无菌检查要求向上 述其中一瓶加入规定量供试品,另一瓶为阳性对照。
④ 通过对不同品种、批号的无菌检查比较;对 产品生产全过程进行质量监控。
医疗药品无菌检查法验证
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二、存在问题:
2.1 专业人才少,缺乏相应的培训和管理。 2.2 工作量大,导致操作不规范。 2.3 检验方法缺陷,如直接种法可操作性差,引入
污染的风险较大。 2.4 试验条件的影响 ① 环境影响 ② 培养基、稀释剂、冲洗液。 ③ 所用品、器具清洁灭菌。
B组:对照组,0.1%蛋白胨或PH7.0无菌氯化钠蛋 白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu).
C组:阳性对照组,不经中和处理,将实验菌株 直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。
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五、供试品无菌检查验证:
5.1 按药典要求确定检验数量、检验量、设立阳性对 照和阴性对照。
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4.4 验证重点环节分布:
样品
需前处理 不需前处理
验证前处理方法对污染菌生长,检出影响
有抑菌作用
通过验证 实验判
无抑菌作用
去除抑菌作用 验证抑菌活性去除方法的有 效性及对污染菌检出物影响
检验
医疗药品无菌检查法验证
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4.5 验证方法:
4.5.1 制备验证试验菌液,按药典方法配制菌液。 4.5.2 选择配制适合的培养基、稀释液、冲洗液。 4.5.3 供试品的处理: ① 验证所用的溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等
5.3.3 将种好的容器按药典规定温度培养14 days。
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5.3.4 验证结果评价:
供试品与阳性对照相比、供试品容器内微生物生长不明显, 说明有抑菌性。可使用中和剂如比温-80。 β-内酰胺酶 等消除抑菌效果。中和剂不能消除抑菌作用,适当增加培 养基体积稀释。
5.4 薄膜过滤法验证试验:
的有效性,使用量及微生物生长无影响。 ② 验证加热温度、离心速度和时间对微生物生长或
分布无影响。 ③ 不需前处理的供试品免做。
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4.5.4 无抑菌性样品的验证方法:依据产品溶解性和 微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释, 用直接接种法验证,常用中性稀释液或淋洗液。
4.5.5 具有抑菌性样品的验证方法:
一、概述:
1.1 定义:系用于检查药典要求的无菌的药品、医疗 器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方 法。
2.1验证的必要性和意义:① 确认Biblioteka 采用的方法检查供试品无菌的适合性。
② 保证检查结果的准确性、可靠性、准确性和 重现性;检查方法的完整性。
③ 与同药品无菌检查接轨。
① 确定抑菌作用(抑细菌、真菌试验验证),选择 敏感菌株对供试品抑菌活性去除效果检验(阳性 菌回收试验)。
② 消除样品抑菌性的方法验证:
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a) 化学钝化中和法(化学试剂中合法):利用化学 (生物)专属性灭活,常用钝化剂有:对氨基苯 甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。薄膜过滤法和 直接接种法也可用。对化学中和剂不敏感的样品, 用酶中和,如β -内转氨酶。
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三、无菌检查的试验要求:
3.1 环境:10000级局部以下100级,布局符合无菌 操作要求;或隔离系统(生物安全柜)。
3.2 人员:必须具备微生物专业知识,并经培训。
3.3 设备、器件、材料:经处理必须符合无菌要求, 培养箱的温度指示装置要校验。
3.4 培养基:
3.4.1 按药典规定处方配制,采用经验证合格的灭菌程序 灭菌。
3.5.3 依据供试品的特性选择稀释液、冲洗液。
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四、无菌检查法验证:
4.1 原理:验证的所有环境、培养基、菌株、稀释液、 冲洗液均与日常检查方法相一致、并符合相关规 定。
4.2 验证分类: ① 前验证:建立无菌检查方法时。 ② 再验证:修订检查方法时。 ③ 定期验证:供试品组合或原检查条件改变。
生长良好,培养基灵敏度符合要求。
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3.5 稀释液、冲洗液:
3.5.1 按药典规定配制后采用经验证的灭菌程序灭菌。 3.5.2常用稀释液、冲洗液:
0.1%蛋白胨水液 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 无菌0.1%氯化钠液 中性磷酸盐缓冲液 含0.1%聚山梨酯(吐温-80 ℃)的0.1%蛋白胨水溶液
b) 稀释中和法:利用降低供试品的相对浓度,将样 品稀释至最低抑菌浓度下进行。
c) 薄膜过滤法:利用体积差异分离,通过薄膜过滤, 微生物被截于滤膜,培养薄膜观察有无微生物生 长。各方法组合运用,效果更好。
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③ 验证方法:
a.验证分组:
A组:样品组,适当方法中和样品,加入少量验证微 生物(接种量少于100cfu)。
3.4.2 保存:2-25 ℃避光保存;期限:非密闭容器3周, 密闭容器1年。
3.4.3 培养基适用性、无菌性、灵敏度检查。
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3.4.4 灵敏度检查:
3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。 3.4.4.2常用菌株: 金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003) 铜像假单胞菌[CMCC(B)10104] 枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501] 生孢梭菌[CMCC(B)64941] 白色念珠菌[CMCC(F)98001] 黑曲霉[CMCC(F)98003] 3.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。 3.4.4.4结果判断:空白对照应无细菌增长,加菌液的培养基管均
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4.3 验证方案制定原则:
① 供试品的抑菌性,敏感菌种选择;适当的方法消除 或降低抑菌性。
② 样品的预处理方式能有效抵消(或中和)产品的 抑菌性。
③ 样品的预处理方式、检验过程、培养条件均不影 响样品中微生物的生长。
④ 验证记录真实完整地记录所做试验。
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5.2供试品无菌检查方法和检验条件与验证方法相同。
5.3直接接种法验证试验:
5.3.1 供试品有抑菌时,按培养基灵敏度试验的菌种,向该种 无菌检查培养基内加入该微生物,每种培养基接2瓶,每 瓶接种量控制10-100cfu之间。
5.3.2 参照药典规定确定培养基用量,按无菌检查要求向上 述其中一瓶加入规定量供试品,另一瓶为阳性对照。
④ 通过对不同品种、批号的无菌检查比较;对 产品生产全过程进行质量监控。
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二、存在问题:
2.1 专业人才少,缺乏相应的培训和管理。 2.2 工作量大,导致操作不规范。 2.3 检验方法缺陷,如直接种法可操作性差,引入
污染的风险较大。 2.4 试验条件的影响 ① 环境影响 ② 培养基、稀释剂、冲洗液。 ③ 所用品、器具清洁灭菌。
B组:对照组,0.1%蛋白胨或PH7.0无菌氯化钠蛋 白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu).
C组:阳性对照组,不经中和处理,将实验菌株 直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。
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五、供试品无菌检查验证:
5.1 按药典要求确定检验数量、检验量、设立阳性对 照和阴性对照。
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4.4 验证重点环节分布:
样品
需前处理 不需前处理
验证前处理方法对污染菌生长,检出影响
有抑菌作用
通过验证 实验判
无抑菌作用
去除抑菌作用 验证抑菌活性去除方法的有 效性及对污染菌检出物影响
检验
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4.5 验证方法:
4.5.1 制备验证试验菌液,按药典方法配制菌液。 4.5.2 选择配制适合的培养基、稀释液、冲洗液。 4.5.3 供试品的处理: ① 验证所用的溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等
5.3.3 将种好的容器按药典规定温度培养14 days。
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5.3.4 验证结果评价:
供试品与阳性对照相比、供试品容器内微生物生长不明显, 说明有抑菌性。可使用中和剂如比温-80。 β-内酰胺酶 等消除抑菌效果。中和剂不能消除抑菌作用,适当增加培 养基体积稀释。
5.4 薄膜过滤法验证试验:
的有效性,使用量及微生物生长无影响。 ② 验证加热温度、离心速度和时间对微生物生长或
分布无影响。 ③ 不需前处理的供试品免做。
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4.5.4 无抑菌性样品的验证方法:依据产品溶解性和 微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释, 用直接接种法验证,常用中性稀释液或淋洗液。
4.5.5 具有抑菌性样品的验证方法: