蘑菇属中国新记录种—细丛卷毛柄蘑菇

蘑菇属中国新记录种—细丛卷毛柄蘑菇
通过详细的形态学和基于ITS序列的分子系统学研究方法，鉴定了来自云南南滚河国家级自然保护区的一份标本为Agaricus flocculosipes。

该种是蘑菇属一个具有食用价值的野生种，在我国首次发现，对该种进行详细描述，给予中文名称为细丛卷毛柄蘑菇。

蘑菇科；ITS序列；野生食用菌；中国新记录种
蘑菇属（Agaricus）是蘑菇科（Agaricaceae）的模式属，属于担子菌纲（Basidiomycetes），伞菌目（Agaricales）。

该属的野外鉴定特征是菌褶离生，初期白色，粉红渐变褐色或黑褐色；孢子印棕色；菌柄具有菌环。

微观特征是多具囊状的褶缘囊状体；担孢子棕色、光滑、椭圆形；菌盖表皮细胞菌丝状，平伏交织。

蘑菇属真菌属于非菌根菌，广泛分布于世界各地，多在田野、草原、森林地上生长，营腐生生活。

2008年，世界范围内发现的蘑菇属种类有200余种[1]，其中多数种类都具有食用或药用价值。

著名的商业化栽培种有：双孢蘑菇（A.bisporus）、姬松茸（A.blazei）等，据报道还有大量的可食用物种已被人工驯化，如：赭鳞蘑菇（ngei ）[2]、双环林地蘑菇（A.placomyces）[3]、白杵蘑菇（A.osecanus）[4] 、圆孢蘑菇（A.gennadii）[5]、大肥蘑菇（A.bitorquis）[67]。

关于蘑菇属的基础性研究，在国外（主要是欧洲和北美地区）已有200多年的历史，有相关的论文或专著出版[89，20，22]。

我国前期的研究资料比较匮乏，共报道了该属物种约40种，在我国各地广泛分布[1113，23]。

该属的分子系统学研究最早发表于1999年[14]，其后不断有新的进展[1517]，其中该属的最新、更全面的系统发育研究发表于2011年[18]，其研究结果揭示蘑菇属的物种远远高于已报道的200余种[1]。

南滚河国家级自然保护区位于云南临沧地区沧源和耿马两县境内，海拔480～2977 m。

其山体为横断山南端余脉、怒山山脉南延部分，与缅甸接壤，植被类型主要为热带季雨林和南亚热带季风常绿阔叶林。

2012年雨季（7月）笔者对该保护区的大型真菌资源做了系统调查，发现了一个蘑菇属的中国新纪录种Agaricus flocculosipes R.L.Zhao，Desjardin，Guinb.&.D.Hyde [19]，此蘑菇最早采集于法属马约特岛和泰国北部，具有潜在栽培价值，笔者对此进行详细描述，并给予中文名称——细丛卷毛柄蘑菇。

1材料与方法
1.1标本采集
在南滚河自然保护区内走访，选择大型真菌分布较为集中的区域进行标本的调查采样。

每份标本在采集前拍照记录其自然状态下的生长情况，并用锡箔纸包
裹带回室内。

1.2形态学研究
对新鲜的标本及时进行宏观形态特征（包括菌盖、菌柄、菌褶和菌环等）描述并进行测量；然后将标本放入烘干器中烘干，装入自封袋保存。

把每份标本先经无水乙醇软化后，对菌盖表皮和菌褶分别进行徒手切片，观察并记录微观形态特征（包括菌褶及菌髓结构、担孢子、担子及囊体的形态大小、菌盖表皮的解剖结构类型等）。

活菌株是在野外通过组织分离保存下来，标本和菌株保存于西南林业大学林学院真菌标本馆。

1.3分子系统学研究
利用E.Z.N.A.TM Forensic Kit，D359101试剂盒（Omega BioTek，美国）提取DNA，用引物ITS4/ITS5[24]对标本进行PCR扩增，具体的扩增反应体系和条件见参考文献[19]，将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，送往昆明硕阳生物科技公司进行正反双向测序。

将获得的ITS序列在BioEdit软件中进行复检，经过人工校正排除程序误读。

然后和从GenBank下载的30条序列一起构成数据集，其中包括5条Agaricus flocculosipes序列（JF691547为该种的模式标本序列）及蘑菇属中现广泛承认的8个组的代表物种[22]。

数据集在BioEdit软件中通过ClustalX程序进行初步校对以及序列长度处理，利用网络数据库TCOFFEE（http：///Projects/tcoffee/）进行数据比对，再进行人工调整校对。

在系统发育分析中，采用软件MrModeltest2.2选择最佳分析模型，用MrBayes 3.0b4 软件构建贝叶斯系统发育树，并计算后验概率来检验系统树的可靠性[2526]。

2结果与分析
2.1形态学研究结果
细丛卷毛柄蘑菇 A.flocculosipes R.L.Zhao，Desjardin，Guinb.&.D.Hyde
Mycoscience，2012.53 （4）：302。

菌盖表面干燥，棕色，被有细小的纤维状鳞片；菌盖直径160 mm，初期圆锥形至宽圆锥形，后渐平展，菌肉白色、肉质、厚8 mm。

菌褶离生，密，有8种不同长度的菌褶，宽8 mm，初期白色至粉红色，后变深棕色。

菌柄长140 mm，近菌盖直径15 mm，近基部直径25 mm，长圆柱形，基部明显球状膨大；中空；菌柄菌肉白色，近表层部分稍带赭色；表面干燥，白色，被有明显竖立絮状、锥状丛毛或直立的鳞片。

菌环膜质，大型，单菌环，下垂，上表面光滑，下表面带有白色絮状鳞片或疣突。

气味芬芳，带有苦杏仁味。

触摸及受伤后颜色变化不明显。

5%氢氧化钠试剂反应呈黄色；Schffer 反应呈桔红色。

孢子6～8 μm × 3～6 μm，宽椭圆形，无芽孔，光滑，棕色，细胞壁加厚。

担子14～16 × 5～8 μm，无色，棒状，具4个担子小梗。

褶缘囊体13～16 μm × 6～9 μm，宽棒状，棒状单生。

菌盖表皮细胞菌丝状，匍匐交织排列，菌丝直径2～7 μm，光滑，部分细胞在分隔处轻微缢缩，含有浅棕色细胞膜色素。

生境：单生或散生于森林草地上。

标本信息：云南省临沧地区沧源县南滚河国家级自然保护区（勐角乡糯掌村）（zrl2012105）；采集人赵瑞琳，2012年7月6日。

2.2分子系统学研究结果
数据由31条序列构成，分别代表了蘑菇属中广泛承认的8个组，26个种，长度为690 bp。

Arvenses 组在系统树中的单系发生，并具有100%的后验概率支持率。

采自南滚河的样品zrl2012105和其它5个从GenBank下载的，分别来自法属马约特岛和泰国的A.flocculosipes （包括该种的模式标本序列）聚在一起，并有100%的支持率（见图1）。

样品zrl2012105的ITS序列已提交GenBank，其序列号为KF986323。

于清华，等：蘑菇属中国新记录种—细丛卷毛柄蘑菇
3讨论
细丛卷毛柄蘑菇（A.flocculosipes）属于蘑菇属中的Arvenses组，该组包含有许多世界著名的可食用种，如 A.arvensis，A. blazei （= A.subrufescens ）[9] 等。

该种主要形态特征是它的菌柄表面有直立的絮状鳞片[19] （见图2 B），有较大的子实体（菌盖直径通常在110～180 mm之间），另外还有相对较小的担孢子[19]。

A.flocculosipes的菌盖附有橙褐色或淡褐色的颗粒状鳞片，菌盖在潮湿环境下常常具有不规则的粉红色，这一点使它容易与北部温带种类 A. arvensis 和A. augustus区分开来[19]。

笔者报道的在国内采到的标本形态特征和A. flocculosipes的原始描述一致[19]，但值得注意的是，该种的褶缘囊体的形态变化比较大，在原始描述中就清楚的表明该种的褶缘囊体可以为椭圆形、棒状单生或近球形囊体短链状串生；甚至在有的标本中未能检出[19] （图2B展示了串生成短链的褶缘囊体）。

虽然存在这种形态学的变化，但分子系统学支持为同一个种[19]。

采自国内的这份标本的褶缘囊体表现为原始描述中的棒状，此外，ITS的分析也支持其为 A. flocculosipes。

从生境来看，A. flocculosipes 的原产地在泰国以及位于中非的法属马约特岛[19]，这两个地方都位于热带地区，因此，A. flocculosipes被认为是一个热带起源种。

本研究的标本采自位于热带地区的云南南滚河自然保护区，该自然保护区是A.flocculosipes 的一个新分布。

据笔者的前期研究，该种已初步实现人工驯化，食用口感较好。

由于该种分布广泛，为蘑菇的杂交育种提供材料。

致谢：感谢云南省森林保护重点学科、云南省灾害预警与控制重点实验室为研究提供仪器设备。

感谢法国农科院Philippe Callac、Jacques Guinberteau博士，比利时国家植物园Olivier Raspe博士，研究生田清同学在样品的采集记录以及实验中所给予的帮助。

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