沉降法检测空气中微生物数量
空气中菌落总数计算公式
空气中菌落总数计算公式
计算空气中菌落总数的方法有很多，以下是两种常用的方法：
1. 采用平皿沉降法测定空气中菌落总数，计算公式为：细菌数（CFU）/
m3=N×100/A×5/T×1000/10=50000N/AT。
其中，A代表平板面积（cm2），T代表平板暴露时间（min），N代表平板平均菌落数（CFU）。
2. 菌落总数的计算公式为：菌落总数=（检测样品中菌落数量/空气采样量）×（采样时间/采样量）。
其中，检测样品中菌落数量是实验室检测得出的结果，一般使用平板计数法进行测定。
空气采样量是指在单位时间内采集的空气体积，常用立方米（m³）表示。
采样时间是指进行空气采样的时间，常
用分钟表示。
采样量是指从环境中采集的样品量，常用毫升（mL）表示。
以上信息仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关书籍或咨询专业人士。
食品车间沉降菌标准
食品车间沉降菌标准
食品车间沉降菌标准是指在食品生产车间内，空气中沉降的微生物数
量的限制标准。
这一标准是保障食品生产安全的重要措施之一，也是
食品生产企业必须遵守的法规。
根据国家标准《食品生产车间卫生标准》（GB 14880-2012），食品车间沉降菌标准分为三个等级：一级车间沉降菌数量不得超过每平方
米每小时100个；二级车间沉降菌数量不得超过每平方米每小时200个；三级车间沉降菌数量不得超过每平方米每小时300个。
在实际生产中，食品生产企业应该根据自身的生产情况和产品特点，
选择适当的沉降菌标准等级，并采取相应的措施进行控制。
一般来说，食品生产车间应该保持良好的通风、清洁和消毒，定期对空气进行检
测和监测，及时发现和处理问题。
此外，食品生产企业还应该加强员工的卫生教育和培训，提高员工的
卫生意识和操作技能，避免人为因素对沉降菌数量的影响。
同时，企
业还应该建立完善的质量管理体系，对生产过程进行全面监控和管理，确保产品的质量和安全。
总之，食品车间沉降菌标准是食品生产企业必须遵守的法规，也是保
障食品生产安全的重要措施之一。
企业应该根据自身的生产情况和产品特点，选择适当的沉降菌标准等级，并采取相应的措施进行控制，加强员工的卫生教育和培训，建立完善的质量管理体系，确保产品的质量和安全。
沉降法检测空气中微生物数量
广东工业大学实验报告实验 二 题目： 沉降法检测空气中微生物数量 第16周 星期 三 第 10-12 节（一） 实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材1、 试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 1.0g, 蛋白胨 2g ，NaCl 1g, 琼脂粉 4g 水200mL ，pH 7.2~7.42、仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1、倒平板：按常法配置上述培养基，装于500mL 三角瓶中，高压灭菌备用。
冷却至45-47℃左右，在超净工作台，倒8个平板备用。
2、暴露取样在指定的地点各放2皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3、培养观察： 细菌置于37℃培养，培养48h 计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4、计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
X=2100100r N π⨯⨯ X ：每m 3空气中的细菌数N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数r ：平皿底半径（㎝）（五）实验结果1、列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？X=01001002=π⨯⨯rN （六）思考题1．对沉降测定法的结果，进行分析。
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较
空气细菌总数测定中自然沉降法和撞击法的应用与比较摘要：目的：对自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用效果进行探究。
方法：选择酒店室内和室外以及万级实验室作为研究对象，分别使用自然沉降法与撞击法来获得三个环境中空气细菌总数情况，对测定结果进行对比分析。
结果：空气细菌总数的自然沉降发和撞击法测定结果存在正的线性相关关系，在测定灵敏度上，撞击法优于自然沉降法（P＜0.05），差异有统计学意义。
结论：撞击法具有较高的灵敏度，能够较为准确的反映空气中细菌含量情况，但当采样时间较长时，其准确度会下降。
关键词：自然沉降法；撞击法；空气细菌总数；应用效果比较随着人们保护意识的不断增强，对空气环境的质量提出了更高的要求，细菌等空气微生物的危害得到人们的充分重视，加强空气细菌的检测，对于提高控制质量水平十分重要[1]。
本文就对分别选择了酒店室内和室外以及公司无菌实验室空气环境为研究对象，探讨自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的效果，以提高空气细菌检测工作水平，现报道如下：1材料和方法1.1实验材料仪器准备，空气微生物采样器，型号TYK-6型；营养琼脂培养基，批号20131125-00；培养皿，直径9cm。
1.2空气环境采样对象：某酒店室内和室外以及公司万级实验室。
1.3空气细菌总数测定方法1.3.1自然沉降法测定1.3.1.1根据现场大小，选择3~5个采样点（室内面积不足50m2，设置3个采样点；50m2以上的设置5个采样点；采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
）采样高度为1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m，避开通风口、通风道等。
1.3.1.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，分别自然暴露在空气中，时间为5min和10min，盖上皿盖，采样完成。
1.3.1.3将平板倒置放入35℃~37℃恒温培养箱中，培养48h后取出，进行菌落计数[4]。
空气培养的采样方法
空气培养的采样方法空气质量的监测对于确保人们的健康和环境的安全至关重要。
空气中存在着各种微生物、细菌和真菌等微粒，这些微粒可能对我们的健康带来潜在风险。
因此，采用适当的方法进行空气培养的采样非常重要，以监测和控制空气质量。
本文将介绍几种常见的空气培养采样方法。
一、沉降法沉降法是一种传统的采样方法，通过在培养基上沉降空气中的微生物颗粒来进行采样。
操作时，将含有培养基的琼脂板暴露在待测空气中，微生物颗粒会在板上沉积。
然后，将琼脂板置于适当的条件下孵育，促使沉降的微生物生长成可见的菌落。
通过对菌落的形态、颜色和数量进行观察和分析，可以推测出空气中的微生物群落。
二、空气取样器法空气取样器法是一种较为先进的采样方法，利用专用的空气取样器来实现对微生物的定量采样。
这些取样器通常使用有缺氧培养基的样品容器，可控制吸样的流速和时间。
通过将容器连续暴露在空气中，在一定时间内收集微生物颗粒。
随后，将培养基中的微生物进行培养和分析，并计算微生物浓度。
三、空气动力学采样法空气动力学采样法是一种常用的空气采样方法，通过气流对微生物颗粒进行采集。
这种方法使用专门设计的杆状装置，装有用于捕捉微生物的培养基或滤膜。
杆状装置通常与采样泵相连，产生一定的流速将空气中的微生物吸附或拦截在培养基或滤膜上。
随后，将培养基或滤膜进行培养并进行分析。
四、微生物粒子计数器法微生物粒子计数器法是一种基于颗粒计数的空气采样方法。
这种方法使用一种特殊的计数器来测量空气中悬浮微粒的数量，并根据微粒尺寸和百分比来估算微生物数量。
通过将采样器暴露在空气中，它会迅速和准确地计算出微生物的浓度。
结论空气培养的采样方法是监测和控制空气质量的重要手段之一。
沉降法、空气取样器法、空气动力学采样法和微生物粒子计数器法是常用的采样方法，每种方法都有其优劣势。
在选择采样方法时，需根据实际需求和监测目的综合考虑。
在执行采样操作时，要严格遵守操作规程，并确保采样装置的无菌和避免外部污染。
平皿沉降法测定空气中细菌原理
平皿沉降法测定空气中细菌原理
3. 采样：在待测空气环境中使用采样器或空气采样器采集空气样品。可以使用灭菌的采样 器或空气采样器，通过吸气或冲击采样的方式，将空气中的微生物颗粒收集到培养基上。
4. 培养：将采样后的平皿放置在恰当的温度和湿度条件下，让培养基中的细菌进行生长。 一般会在适宜的温度下（如30-37摄氏度）培养24-48小时。
平皿沉降法测定空气中细菌原理
平皿沉降法是一种常用的方法，用于测定空气中细菌的数量和种类。其原理基于细菌在空 气中的沉降速度不同，通过将空气中的微生物沉降到培养基上，然后在适宜条件下培养和计 数。
以下是平皿沉降法测定空气中细菌的基本步骤和原理：
1. 准备培养基：选择适合细菌生长的培养基，如营养琼脂平板。确保培养基的质量和无菌 性。
Байду номын сангаас
5. 计数：在培养时间结束后，观察平皿上的菌落并进行计数。可以使用显微镜或计数器来 辅助计数。细菌形成的菌落会在平皿上形成可见的斑点。
平皿沉降法测定空气中细菌原理
通过计算菌落的数量和面积，可以估算空气中细菌的浓度。通常以CFU（菌落形成单位） /m³作为表示细菌浓度的单位。
需要注意的是，平皿沉降法只能测定空气中的沉降菌落，无法测定悬浮在空气中的微生物 。此外，平皿沉降法也无法区分不同种类的细菌，只能提供总体的细菌数量信息。因此，在 使用平皿沉降法时，需要结合其他方法和技术，综合评估空气中微生物的情况。
空气中微生物的检测
2011.11.21
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一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
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一、实验目的和意义
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
学习对室内空气进行初步的微生物学评价
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3
实验意义
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三、实验步骤
1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓
培养皿暴露空气中5min/10min ↓
37℃温箱培养24h ↓
计数和结果评价
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采样布点原则 a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，
小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个 ；100m2以上至少5个点 b. 采样高度 和人呼吸高度一致（1.2～1.5m） c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样 时关闭门窗，减少人员走动
空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
用于医院、公共场所等空气质量的评价
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二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法）
根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的 作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。
特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
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各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
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特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
自然沉降法实验报告
实验名称：空气中微生物数量的检测实验目的：1. 了解自然沉降法在空气中微生物数量检测中的应用。
2. 掌握自然沉降法的操作步骤及注意事项。
3. 分析实验结果，评估空气中微生物数量的分布。
实验原理：自然沉降法是一种用于检测空气中微生物数量的常用方法。
其原理是利用空气中的微生物在空气中沉降到采样平皿上的特性，通过培养和计数平皿上的菌落数来估算空气中的微生物数量。
实验材料：1. 空气采样平皿（直径9cm）2. 营养琼脂3. 灭菌棉塞4. 移液器5. 培养箱6. 空气采样器7. 计时器8. 计数器实验步骤：1. 准备工作：将营养琼脂加热融化后，待其冷却至45℃左右，倒入采样平皿中，使其厚度均匀。
2. 灭菌：将采样平皿置于超净工作台中，用灭菌棉塞封口，进行灭菌处理。
3. 空气采样：将灭菌后的采样平皿置于采样器下，开启采样器，对空气进行采样。
采样时间根据实验需求设定，一般为30分钟。
4. 沉降：关闭采样器，将采样平皿放置在培养箱中，使微生物自然沉降。
5. 培养与计数：将沉降后的采样平皿置于37℃培养箱中培养24小时，待菌落生长成熟后，用计数器对菌落数进行计数。
实验结果与分析：1. 通过自然沉降法，我们共检测出空气中的微生物数量为X个。
2. 实验结果显示，空气中微生物数量分布不均，可能与采样时间、采样地点、采样环境等因素有关。
3. 由于自然沉降法只能检测到部分微生物，实验结果可能存在偏差。
为了提高检测精度，可以考虑采用多种检测方法相结合的方式。
实验结论：1. 自然沉降法是一种简单、实用的空气中微生物数量检测方法。
2. 通过实验，我们了解到空气中微生物数量的分布特点，为相关研究提供了数据支持。
3. 在实际应用中，应根据具体需求选择合适的检测方法，以提高检测精度。
注意事项：1. 在操作过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 采样时间、采样地点、采样环境等因素会影响实验结果，应尽量保持一致。
3. 在计数过程中，应注意区分不同类型的菌落，避免误计。
沉降菌单位
沉降菌单位沉降菌单位是一个用于衡量空气中微生物污染程度的重要指标。
在环境监测、食品卫生、医疗卫生等领域，沉降菌单位的检测和控制都扮演着至关重要的角色。
本文将详细介绍沉降菌单位的概念、检测方法以及其在各个领域中的应用。
一、沉降菌单位的概念沉降菌单位，通常是指在一定时间内，通过自然沉降方式收集到的空气中的微生物数量。
这些微生物可能包括细菌、真菌等。
沉降菌单位的计量通常以每平方米面积上的菌落形成单位（CFU）来表示，用于评估空气的微生物污染程度。
二、沉降菌单位的检测方法沉降菌单位的检测方法通常包括以下步骤：1.选择合适的采样点，设置沉降平板。
2.在一定时间内（如30分钟），让空气中的微生物自然沉降到平板上。
3.将平板送到实验室，进行适当的培养条件，使微生物生长成菌落。
4.计数平板上的菌落数量，并转换为每平方米面积上的CFU。
通过这种检测方法，我们可以得到空气中微生物的污染程度，从而为后续的防控措施提供依据。
三、沉降菌单位在各领域的应用1.环境监测：沉降菌单位是评价空气质量的重要指标之一。
通过定期检测沉降菌单位，可以及时发现空气中的微生物污染，采取相应措施保护环境和人类健康。
2.食品卫生：在食品生产过程中，沉降菌单位的检测对于确保食品安全至关重要。
如果生产环境中的沉降菌单位超标，可能导致食品受到微生物污染，引发食品安全问题。
3.医疗卫生：医院等医疗机构的环境中，沉降菌单位的控制更为重要。
医疗环境中微生物的污染可能增加患者感染的风险。
通过定期监测和控制沉降菌单位，可以降低医疗机构内的感染风险，提高患者的安全性。
四、沉降菌单位的意义与未来展望沉降菌单位作为一种评估空气微生物污染程度的指标，对于我们理解和改善环境质量、保障食品安全和医疗卫生等方面具有重要意义。
随着科学技术的不断进步，未来我们有望发展更加快速、准确的沉降菌单位检测方法，以提高防控措施的针对性和效率。
同时，在大数据和人工智能等技术的支持下，我们可以更深入地分析沉降菌单位与各种环境因素之间的关系，为实现更加精细化的环境管理和健康保护提供科学依据。
d级洁净区沉降菌标准
d级洁净区沉降菌标准一、洁净度级别D级洁净区是指洁净环境中空气含尘浓度需满足以下标准的区域：1.粒径限值（按粒子计数法）：≥5.0μm的粒子数允许在每立方厘米空气中含最高不超过10万个；≥0.5μm的粒子数允许在每立方厘米空气中含最高不超过50万个。
2.微生物限值：浮游菌数不得超过500个每立方米；沉降菌数不得超过10个每皿。
二、浮游菌浮游菌是指悬浮在空气中的、不沉降于物体表面的活菌。
在D级洁净区，浮游菌数应符合以下要求：1.浮游菌数应不超过500个每立方米。
2.浮游菌数的测定应在洁净室（区）内消毒和人员净化后、操作前进行，测定时应采用经过校正的采样器和规定体积的撞击法空气采样器，采样时气流量应稳定，采样效率应符合要求。
3.浮游菌采样器应按照国家有关标准进行校验。
三、沉降菌（F90mm）沉降菌是指经过自然沉降聚集在物体表面及地面的活菌。
在D级洁净区，沉降菌数应符合以下要求：1.沉降菌数应不超过10个每皿。
2.沉降菌的测定应在洁净室（区）消毒后、操作前进行，取直径90mm培养皿若干个，打开皿盖在空气中暴露至少90分钟，盖上皿盖倒置于恒温培养箱中培养48小时，取出检查，每皿生长的菌落数应符合以下要求：低限标准3个皿仅一皿生长；中限标准3个皿有二皿生长；高限标准3个皿有三皿生长。
3.培养皿应使用经过校正的计时仪器，如电子计时器等。
4.培养皿应按照国家有关标准进行校验。
四、表面微生物表面微生物是指附着在洁净室（区）内表面上的活菌。
在D级洁净区，表面微生物应符合以下要求：1.表面微生物数量应不超过10个每平方厘米。
2.表面微生物的测定应在洁净室（区）消毒后、操作前进行，采用涂抹法进行采样和检测，采样点应包括设备、器具、内表面、地面等，采样方法和检测方法应符合国家有关标准。
3.表面涂抹采样器应使用经过校正的采样器和规定面积的接触法采样器。
4.表面微生物的检测仪器应按照国家有关标准进行校验。
五、房间换气次数房间换气次数是指洁净室（区）内每小时换气次数。
II、III、IV类环境空气消毒效果监测(沉降法)标准操作规程
3.必要时准备空白对照培养皿，做好标记。
2.怀疑医院感染暴发与空气污染有关时∶ 随机监测。
采样方法（沉降法）
布点图示
结果判定
1.II类环境∶ 空气中的细菌菌落总数≤4CFU/（15分钟·直径9mm平皿）。
2.II类和IN类环境∶空气中的细菌菌落总数≤4CFU/（5分钟·直径9mm平皿）
3.必要时分离致病性微生物。
注意事项
1.采样前应关闭门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟。
II、III、IV类环境空气消毒效果监测（沉降法）标准操作规程
持有部门： 文件编号：
制定者： 审核者： 版次：
制定日期： 审核日期： 执行日期：
适用范围∶
1.感染高风险部门日常监测。
2.当怀疑医院感染暴发与空气污染有关时，暴发调查时应进行目标微生物定的通风换气后、从事医疗活动前采样。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
生产卫生微生物检验标准和车间洁净度检验标准
（2）细菌总数用平板计数法测定，大肠菌群用MPN计数法。
3.空气中沉降菌菌落总数检测方法：
（1）车间空气沉降菌的检测应在开始生产之前进行。
用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，涂抹的时候棉签要随时转动，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（2）细菌总数用平板计数法测定，大肠菌群用MPN计数法。
2.人手表面细菌检测方法：
（1）采样方法：
三、检测规定
1.每两星期检测一次。
2.食品接触面是指接触人类食品那些表面以及在正常加工过程中会将水滴溅在食品上或与食品接触的表面上的那些表面。
3.测量车间空气中的沉降菌时使用的培养皿必须是塑料一次性培养皿，以防止玻璃培养皿在生产车间打碎导致食品安全事故。
四、测定方法
1.食品接触面的细菌检测方法：
（1）采样方法：
（2）采用平板空气暴露法，直径9cm的普通肉汤琼脂平板在加工场所离地0.8-1.5m高度的空气中暴露30分钟后经37度培养48h的方法进行检测。
五、异常处理
当产品检验微生物指标发生异常时，应该立即增加上述的检测频次和增加取样对象，尽早排除因不卫生造成的品质问题。
一、生区生产卫生微生物检验标准和车间洁净度检验标准
项目
微生物检验标准
备注
食品接触面
经清洁消毒后食品接触面的细菌总数≤100个/cm2，大肠菌群＜3个/cm2。
检验员
车间洁净度检验标准
菌落沉降法
菌落沉降法
菌落沉降法是一种通过收集和培养空气中的微生物粒子，以测定洁净环境内活微生物数的方法。
该方法采用沉降法原理，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数。
具体步骤如下：
1.准备所需材料，包括培养皿、培养基、计时器、温度计、湿度计等。
2.选择一个待测的洁净环境，确保室内无人走动，关闭门窗，避免外界污染物进入室内。
3.将培养皿放置在室内中央的干净台面上，打开计时器，记录沉降时间。
4.在沉降过程中，注意保持培养皿的清洁，避免污染。
5.在沉降时间结束后，关闭计时器，取下培养皿，翻转培养皿，使菌落面朝上，放在恒温培养箱内进行培养。
6.观察并记录菌落的生长情况，记录菌落的数目和形态特征。
7.根据记录的数据计算出空气中的活微生物数，并以此评估洁净环境的洁净度。
需要注意的是，菌落沉降法只是一种测定空气中微生物数量的方法，不能代表全部环境中的微生物情况。
此外，在进行测试时，需要严格遵守操作规程，保证测试结果的准确性。
iso14698沉降菌标准
iso14698沉降菌标准ISO 14698 沉降菌标准是用来评估和测量洁净室（区）空气中微生物污染水平的标准。
该标准规定了在一定时间内，通过沉降法收集到的空气中的细菌、霉菌和酵母菌的数量。
以下是ISO 14698 沉降菌标准的详细内容：1. 目的本标准规定了洁净室（区）空气中微生物污染的测量方法，包括沉降菌法的采样时间、采样方法和结果计算等内容。
通过对沉降菌的监测，可以了解洁净室（区）的微生物污染情况，为生产过程的控制和产品质量提供依据。
2. 适用范围本标准适用于医药、食品、化妆品等行业的洁净室（区）空气中微生物的监测。
3. 引用标准ISO 14698-1：2016 洁净室及相关控制环境中使用的空气净化器第1部分：性能测量和评估方法ISO 14698-2：2016 洁净室及相关控制环境中使用的空气净化器第2部分：微生物去除效果的测量和评估方法4. 定义沉降菌：在空气中浮游的微生物，在重力作用下以孢子或菌体的形式降落到物体表面或其他支持物上。
5. 采样时间采样时间应根据生产工艺的特点和产品的特性等因素来确定。
一般情况下，应至少每周采样一次，每次采样时间应不少于2小时。
在生产过程或产品质量出现异常时，应增加采样次数。
6. 采样方法（1）采样点设置：每个采样点应设置在洁净室（区）操作区内，并尽量均匀分布。
每个采样点的间距不应小于1米，并应避免采样点设置在涡流区或通风死区内。
（2）采样高度：采样点的高度应设置在距离地面0.8米至1.5米的范围内，并尽量保持一致。
（3）采样方法：将沉降菌培养皿放置在采样点上，打开培养皿盖，使培养皿正面向上，待规定时间后盖上培养皿盖，取下培养皿。
采样过程中应避免人员或其他物体对培养皿产生干扰。
7. 结果计算（1）培养皿计数法：将采样后的培养皿放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养，观察并记录每个培养皿中的菌落数。
根据菌落形态和颜色等特征，区分细菌、霉菌和酵母菌等不同类型的微生物。
空气中细菌的测定
高压蒸气灭菌器
恒温培养箱
玻璃平皿或一次性灭菌平皿，9cm
六级筛孔撞击式空气微生物采样器
环境卫生学
（四）试剂 营养琼脂培养基 （五）操作方法 布点要求 采样点选择根据采样点面积及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点。室内面积不
足50m2的设置1个采样点， 50~200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3~5个采样点。采 样点按均匀布点原则布置，室内1个采样点的设置在中央， 2个采样点的设置在室内对称点上，3 个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点，其他的按均匀布 点原则布置。采样点距离地面高度1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m。采样点应避开通风口、通风 道等。 采样器准备 ① 仪器的清洁消毒：根据采样点的洁净要求，对仪器表面进行不同程度的清洁或消毒处理。 ② 采样装置的清洁灭菌：取下采样装置上的盖子和端盖，用酒精棉球火焰灭菌约1min，然后将其
置于储存盒内。同一点应重复采样3次，按上述各步骤进，于恒温培养箱中，37 ℃培养24h后计数菌落数。 菌落计数 计数培养后每皿所生长的菌落数，并求出同一点重复采样的平均菌落数。 空气中细菌总数的计算 根据平皿菌落计数结果，用下列公式换算成每立方米空气中的菌落数，以
移回采样装置上，冷却。
环境卫生学
采样 ① 按仪器说明书操作，将采样时间的旋钮调到选定的采样时间档上。选择直流或交流电源，打开
电源开关，设定好采样时间。 ② 将采样的平皿盖略松开，打开已冷却的端盖，将无菌采样平皿置于采样装置座的平皿托架上，
旋紧端盖。 ③ 按下计时开关，仪器便开始采样和计时，调节流量（28.3L/min），采样5~15min。 ④ 设定的采样时间归零后，仪器自动关机，采样结束。旋开端盖，立即将平皿盖盖上，将平皿倒
公共场所卫生检验方法 细菌总数 自然沉降法
公共场所卫生检验方法细菌总数自然沉降法1. 适用范围本方法规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。
本方法适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定，其他场所可参照执行。
注：本方法中同一个指标如果有2个或2个以上检验方法时，可根据技术条件选择使用。
2. 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1 细菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃〜37℃、48h 培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
2.2 真菌总数公共场所空气中采集的样品，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃，5d培养所形成的菌落数。
2.3 β-溶血性链球菌公共场所空气中采集的样品，经35℃〜37℃、24h〜48h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。
2.4 嗜肺军团菌样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落，并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板上不生长，进一步经生化试验和血清学鉴定确认的菌落。
2.5 撞击法采样撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经实验室培养后得到菌落数的测定方法。
2.6 自然沉降法将营养琼脂平板暴露在空气中，微生物根据重力作用自然沉降到平板上，经实验室微生物培养后得到菌落数的测定方法。
3. 细菌总数3.1 原理采用撞击式或自然沉降法采样，营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。
3.2 撞击法（省略）3.3自然沉降法3.3.1仪器和设备3.3.1.1高压蒸汽灭菌器3.3.1.2恒温培养箱3.3.1.3平皿：直径90 mm3.3.1.4采样支架3.3.2 培养基3.3.3采样3.3.3.1采样点：见附录A。
3.3.3.2采样环境条件；见3.2.3.2。
3.3.3.3采样方法；将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min。
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环境科学与工程学院 生物工程10（1）班 叶智源 3110007848
实验二 沉降法检测空气中微生物数量
（一） 实验目的
1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物 2．了解空气中微生物的分布状况 （二）实验原理
在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材
1． 试剂
牛肉蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 5.0g, 蛋白胨 10.0g ，NaCl 5g, 水1000ml ，pH 7.2~7.4 马铃薯培养基配方：
马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方：
淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品
高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等
（四）实验方法
1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。
临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。
2．暴露取样
在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。
细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。
计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4.计算1m 3
空气中微生物的数目
奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2
的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
X=
X ：每m 3
空气中的细菌数
N ×100×100
πｒ2
N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数 r ：平皿底半径（㎝） （五）实验结果
1．列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？
用沉降法计算1m 3
空气环境中所含菌数。
（六）思考题
1．对沉降测定法的结果，进行分析。
分析：从沉降测定法的结果看出，空气中的细菌数是从低到高呈现逐渐减少的趋势。
当然，由于实验组数较少的原因，实验结果不太理想。
菌落平均数 环境
菌落数
细菌数/m 3
1楼 5min 3 472 1楼 5min 4 629 3楼 5min 2 314 3楼 5min 2 314 5楼 5min 0 0 5楼 5min 0 0 7楼 5min 2 314 7楼
5min
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