微生物培养与分离方法
微生物的分离方法
微生物的分离方法
微生物的分离方法是指将混合的微生物菌落分离出来，单独培养，以便进行鉴定和研究。
常见的分离方法有以下几种：
1.平板分离法：将微生物接种在含有固体培养基的平板上，使微生物随机分布并生长形成菌落，然后使用无菌的环针将单个菌落挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
2.液体分离法：将微生物接种在含有液体培养基的试管中，经过适当的震荡或搅拌，使细菌均匀分散在培养基中，再逐步地将其中的微生物转移到新的培养基上进行单独培养。
3.滤膜分离法：将微生物培养在含有滤膜的培养基中，待微生物穿过滤膜并在其表面生长形成菌落后，用无菌的镊子将单个菌落挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
4.扩散分离法：将微生物接种在含有半固态培养基的试管中，将试管在水平面上移动，使微生物扩散生长，最终形成一个斑点，再使用无菌的环针将单个斑点挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
以上是常见的微生物分离方法，不同的方法适用于不同类型的微生物，选择合适的方法对于微生物研究和鉴定具有重要意义。
- 1 -。
微生物的分离和纯培养
在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。
由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
一、无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。
因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。
1、微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不合任何生物。
培养微生物的营养物质[称为培养基(culture medium)]可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。
为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。
2、接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。
由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。
微生物纯培养—分离纯化方法汇总
微生物纯培养—分离纯化方法汇总含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（mixed culture）。
如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（pureculture）。
在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。
得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。
１、倾注平板法首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。
单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。
首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。
３、平板划线法最简单的分离微生物的方法是平板划线法。
用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。
富集培养法的方法和原理非常简单。
我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。
如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。
通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
５、厌氧法在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。
然后快速冷却，并进行接种。
接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。
另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。
微生物的分离和纯培养无菌技术无菌技术
连续培养：在微生物培养的过程中，不 断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌 体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物 长时间地处于对数生长期，以利于微生物 的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 连续培养理论基础：由于对典型生长曲 线中稳定期到来原因的认识，采取相应有 效措施推迟其来临，从而发展出现在的连 续培养技术。
连续培养原理 当微生物在单批培养方式下生长达到对 数期后期时，一方面以一定的速度流进新 鲜培养基并搅拌，另一方面以溢流方式流 出培养液，使培养物达到动态平衡，其中 的微生物就能长期保持对数期的平衡生长 状态和稳定的生长速率。
连续培养和单批培养的比较
连续流入 新鲜培养液 单批培养 恒浊法
lg细胞数（个/ml）
4、选择性培养分离法 为了从混杂的微生物群体中分离出某种 微生物，可以根据该微生物的特点，包括 营养、生理、生长条件等，采用选择培养 的方法进行分离。 利用选择培养基进行直接分离 富集培养
三、微生物的培养
1、好氧培养和厌氧培养 好氧培养以空气为氧的来源。实验室 的培养方法用平皿培养和斜面培养；工业 生产时用自然对流和机械通风法来供氧； 液体培养时微生物利用培养液中的溶解氧； 液体三角瓶培养时利用摇床机达到供氧的 目的；发酵罐培养时用通入无菌压缩空气 达到供氧的目的。
微生物的分离和纯培养
一、无菌技术
无菌技术：是将微生物分离、转接及培 养时防止被其它微生物污染的技术。 1、对使用的器皿及用具的灭菌 2、对培养基的灭菌 通常使用的方法有高温蒸汽灭菌和高 温干热灭菌，效果达到无菌（不含任何微 生物)。
3、无菌的环境 （1）在操作过程中的无菌要求：接种、 分离过程的无菌效果（在火焰上部进行操 作）。 （2）在超净工作台、无菌室和无菌箱中 进行操作。使用甲醛、紫外线、75%的乙 醇等进行预处理及其他的必要措施。 （3）如进行好氧培养需对空气进行处理， 实验室用多层纱布、棉塞和硅胶塞过滤空 气，工业中使用空气过滤器过滤空气。
微生物的分离方法
微生物的分离方法
微生物的分离方法可以根据具体的研究目的和微生物的特性选择不同的方法。
以下是一些常用的微生物分离方法：
1. 均匀涂布法：将微生物样品均匀涂布在培养基上，适用于寻找和分离菌落。
2. 稀释法：将微生物样品逐渐稀释成一定浓度，在培养基上涂布，以分离单个菌落。
3. 筛选法：使用特定的筛选培养基，如差凝固培养基、高盐培养基等，培养出特定菌种。
4. 血平板法：将微生物样品与含有血液成分的平板培养基接触，以便检测对血液的反应，如血清试验。
5. 选择性培养法：使用含有特定抑制剂的培养基，可抑制某些微生物的生长，从而选择性地培养目标菌种。
6. 过滤法：将微生物悬液通过滤膜，滤膜上的微生物可通过培养和分离。
7. 对流传播法：通过将液体培养基倒于分性培养皿内，当液滴干燥后会形成核，因范围受限，易于分离。
8. 转移法：通过转移微生物样品至不同培养基进行连续培养，以分离不同菌种。
9. 表面划线法：在平板培养基上进行菌落划线，可分离不同类型的菌落。
10. 生理生化性状检测：通过观察微生物的代谢及反应特性，如氧需求、乳酸发酵等，进行分离。
以上方法只是一些常用的微生物分离方法，具体的选择应根据研究目的和微生物的特性决定。
微生物的分离与培养
微生物的分离与培养实验原理：一、培养基的制备培养基通过人工加入微生物的生长所必需的各种成分，包括水，碳源，单元，无机盐和生长因子各种营养物质配置而成的养料。
二、微生物的接种微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的，培养基种类及容器等不同，所以接种方法不同。
用不同的接种方法以获得生长良好的纯种微生物。
三、微生物的培养不同的微生物对营养需求不同，根据这点可以通过培养基对微生物的做初步分离。
四、质粒的提取碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA和质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的。
在PH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断链，双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的大部分氢键也断链，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以PH4.8D的NaAc高盐缓冲液冲击去调节其PH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA 与不稳定的大分子RNA，蛋白质—SDS的复合物等一起沉淀下来而被除去。
五、PCR技术DNA的半保留复制时生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋或单链。
在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制或同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶，dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
六、琼脂糖凝胶电泳许多重要的生物，如蛋白质，核酸等都具有可电离的基因，在某一特定的PH下他们可以电离正电荷或负电荷，当加上电均后，这些带点分子就会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
而电泳技术就是利用在电均的作用下，由于待分离样品中各种分子带点性质，分子大小形状等的差异，从而产生不同的迁就率，对样品进行分离，鉴定或纯化的技术。
PCR产物的回收将含有质粒DNA的荧光色带切下，溶解后填充到硅胶柱中，利用硅胶在高盐低PH下吸附DNA，在低盐和高PH条件下DNA可在被洗脱的原理，进行DNA的回收和纯化。
微生物分离的方法
微生物分离的方法
微生物分离的主要方法包括传统培养法、筛选培养法和分离富集法。
1. 传统培养法：将微生物样品分散在富含营养物的培养基上，将其培养在适宜的温度和pH条件下。
通过不同培养基的选择、不同的温度、pH等条件的调节，可以促进特定微生物的生长和繁殖，从而分离出目标微生物。
2. 筛选培养法：筛选培养法是根据目标微生物的特殊生理特性和营养需求，设计特定的培养条件，以促进目标微生物的生长和繁殖。
例如，通过特定的培养基、温度、pH、气氛条件等，选择性地分离出某些特定类型的微生物，如厌氧菌、耐高盐菌等。
3. 分离富集法：分离富集法是根据微生物在自然环境中的特定生理特性和生境适应性，通过特定的分离富集技术，富集出目标微生物。
常用的富集方法包括传统的液体培养富集法、固体培养富集法和连续扩增培养富集法等。
这些方法通过提供适宜的环境条件，使目标微生物在其他微生物中相对优势，从而实现分离。
以上是常用的微生物分离方法，不同的方法适用于不同的微生物分离目的和环境条件。
在实际操作中，还可以根据具体情况，结合不同的方法进行综合分离。
第2章微生物的分离与纯培养
培养物：在一定条件下培养、繁殖得到的微生物群体 ① 混合培养物：含有多种微生物的培养物 ② 纯培养物： 只有一种微生物的培养物 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果
纯培养技术是进行微生物学研究的基础！
一、无菌技术
从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研 究和利用微生物的第一步。
用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
/v_show/id_XOTAzNjkwNzI=.html
二、用固体培养基分离纯培养
使微生物在固体培养基平板上形成单个菌 落的基本方法：
稀释！
1、涂布平板法（spread plate method)
使用较多的常规方法， 但有时涂布不均匀！
2、稀释倒平板法（pour plate method)
培养基类型
凝固剂含量 （以琼脂计）
主要用途
固体培养基
1.5%-2.0% 微生物分离、鉴定、计数
半固体培养基 0.5%-0.8% 观察微生物运动特征、鉴定菌种
液体培养基
大规模工业生产及在实验室进行
无
微生物的基础理论和应用方面的
研究
二、用固体培养基分离纯培养
菌落（colony）：
单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面 或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形 态结构的子细胞生长群体
注意：
在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要
结合显微镜检测个体形态特征后才能确定 有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过
程和多种特征鉴定才能得到
二、用固体培养基分离纯培养
4、厌氧微生物的分离
微生物的分离与培养技术
微生物的分离与培养技术微生物是指肉眼无法看到的微小生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
研究微生物的分离与培养技术对于了解微生物的特性、功能以及应用具有重要意义。
本文将介绍微生物的分离与培养技术的基本原理和步骤。
一、分离微生物的基本原理和方法分离微生物是指从混合微生物群落中将特定微生物种类单独分离出来。
这对于研究微生物种类的多样性和个体差异性非常重要。
下面将介绍两种常用的分离微生物的方法。
1. 肉眼分选法肉眼分选法适用于鉴定和培养易于在富含营养物质的培养基上生长的微生物。
该方法通常用于分离细菌和真菌。
具体步骤如下：a. 首先，将混合微生物群落接种于富含营养物质的琼脂平板上（如营养琼脂平板）。
b. 然后，通过观察生长在琼脂平板上的细菌或真菌的形态、大小、颜色等特征，选择目标微生物。
c. 最后，用无菌的接种环将目标微生物划取到新的培养基上进行单独培养。
2. 稀释涂布法稀释涂布法可用于分离微生物样本中的单个细胞。
该方法适用于细菌和真菌的分离。
具体步骤如下：a. 首先，将微生物样本逐渐稀释至一定浓度。
b. 然后，取少量稀释后的样本使用平板计数法（将稀释后的样本涂布在琼脂平板上，并按照一定比例稀释），以得到适宜的菌落数。
c. 最后，通过观察琼脂平板上的菌落形态，选择目标微生物，并用无菌的接种环将目标微生物划取到新的培养基上进行单独培养。
二、微生物的培养技术培养微生物是为了让细菌、真菌等微生物在富含营养物质的环境中生长和繁殖。
培养技术有助于了解微生物的生长特性和生理特点。
下面将介绍两种常用的微生物培养技术。
1. 液体培养法液体培养法是将微生物接种于富含营养物质的液体培养基中，通过培养瓶或试管中的液体环境，利用微生物对营养物的吸收和转化来进行培养。
具体步骤如下：a. 首先，准备好富含营养物质的液体培养基。
b. 然后，用无菌技术将微生物接种到培养基中。
c. 最后，将培养瓶或试管密封好，放入恒温摇床中，控制培养温度和培养时间，观察微生物的生长情况。
自然科学实验中的微生物分离与培养技巧与方法
自然科学实验中的微生物分离与培养技巧与方法微生物是自然界中广泛存在的一类生物，它们对于生态系统的平衡和人类的生活具有重要意义。
在自然科学研究中，研究微生物的分离与培养技巧与方法是非常关键的。
本文将从微生物分离、培养基的选择以及培养条件的控制等方面，介绍一些常用的技巧与方法。
一、微生物分离技巧微生物分离是指从混合物或环境样品中将目标微生物分离出来，以便进行进一步的研究。
常用的微生物分离技巧包括稀释涂布法、表面涂布法和滴定法等。
稀释涂布法是最常用的微生物分离技巧之一。
它的原理是将待测样品逐渐稀释后，取一定体积的稀释液涂布在培养基上，利用微生物的生长特性，使得每个培养基上只有一个菌落。
通过对菌落的形态、颜色、大小等特征的观察，可以初步判断菌落的种类。
表面涂布法适用于含有大量微生物的样品。
它的原理是将样品均匀涂布在固体培养基的表面上，利用微生物的生长特性，使得每个菌落形成一个孤立的圆斑。
这种方法可以快速筛选出不同形态的菌落，有助于后续的鉴定工作。
滴定法适用于含有较少微生物的样品。
它的原理是将待测样品逐滴加入液体培养基中，利用微生物的生长特性，使得每滴液体培养基上只有一个菌落。
这种方法对于微生物数量较少的样品非常有效，可以避免过度稀释导致微生物无法分离。
二、培养基的选择培养基是进行微生物培养的基础，它提供了微生物所需的营养物质和生长条件。
根据微生物的特性和研究目的，选择合适的培养基非常重要。
常见的培养基包括富含蛋白质的肉汤培养基、富含碳源的糖盐培养基和富含氮源的氨基酸培养基等。
在选择培养基时，需要考虑微生物的生长需求，如需氧气的微生物需要选择富含氧气的培养基，而厌氧微生物则需要选择不含氧气的培养基。
此外，还可以根据微生物的生理特性选择特定的培养基。
例如，选择含有特定抗生素的培养基可以筛选出对该抗生素具有抗性的微生物，从而研究其抗药性机制。
三、培养条件的控制微生物的生长需要适宜的环境条件，包括温度、pH值、氧气浓度等。
微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术是微生物学实验室中最基本、最重要的实验技术之一。
其主要原理是将混合微生物群落分离为单一的微生物菌落，并在适宜的环境条件下使其生长繁殖形成单一菌种培养物，以便进行鉴定和研究。
1.微生物的分离技术
（1）稀释涂布法：将微生物混合液逐渐稀释，然后取一定量的稀释液涂布在富养基平板上，待菌落形成后，挑取单一菌落进行培养和研究。
（2）过滤法：利用微孔膜或滤纸将混合液过滤，将过滤后留在微孔膜或滤纸上的微生物进行培养和研究。
（1）液体培养：将微生物接种在富足的液体富养基中，置于适当的温度、光照和通气条件下进行培养。
（3）混合培养：将两种或以上的微生物同时接种在同一富养基上进行培养，这一技术可同时培养多种微生物，缩短实验时间。
3.技术应用
微生物的分离与培养技术在微生物学研究、医学诊断、生物工程和食品工业等领域都得到广泛应用。
（1）微生物学研究：分离单一菌种进行研究，为微生物学研究提供基础。
（2）医学诊断：从临床样品中分离出致病微生物进行培养与鉴定，有助于快速准确地诊断、鉴定和治疗病原微生物感染。
（3）生物工程：在微生物培养基中添加营养物质，用微生物进行合成、代谢和分泌等反应。
（4）食品工业：将微生物培养在富有营养的富养基中进行发酵，生产出发酵食品。
微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏
微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏微生物纯培育分别技术菌种的分别纯化平板涂布法由于将微生物悬液先加到较烫的培育基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采纳稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学讨论中常用的纯种分别方法是涂布平板法。
用途：一般多用于从菌种的纯化；优点：可以观看菌落特征，对混合菌进行分别；缺点：不能计数；平板划线法最简洁的分别微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培育基表面多次作"由点到线'稀释而达到分别目的的。
划线的方法许多，常见的比较简单消失单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培育基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观看菌落特征。
缺点：汲取量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，简单扩散。
假如菌液密度大的话，长不出单菌落。
大肠菌种的培育鉴定菌种保藏试验材料和器材1.乳糖胆盐液体培育基：由蛋白胨、乳糖、溴甲酚紫和胆盐组成，属液态、鉴别、增值、半合成培育液，试验中用于废水中菌群的培育；2.伊红美蓝琼脂：含蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、伊红-美蓝和琼脂。
琼脂平板用于分别纯化肠道致病菌，特殊是大肠菌群和粪大肠菌群；3.养分琼脂培育基：含牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和琼脂。
用于分别纯化后的菌体培育。
试验方法和步骤1.试验支配试验预备；采样、恒温培育富集及初筛；观看产气状况及稀释、倒培育基、划线、涂布、倒置培育；鉴定、接种；菌种保藏。
2.详细操作步骤试验预备①配置培育基(伊红美兰琼脂培育基：7.4g+200mL无菌水、调pH7.2～7.4，养分琼脂培育基：6.6g+200mL无菌水、调pH7.40.2,0.85%生理盐水、乳糖胆盐液体培育基2.6g+100mL无菌水，调pH7.40.2),，装瓶，高压蒸汽灭菌。
②包扎好培育皿，移液管，试管，进行干热灭菌。
③将配好的乳糖胆盐液体培育基分装入三个试管中，每个大约十毫升，包扎，灭菌。
微生物分离原理
微生物分离原理
微生物分离是一种常用的实验方法，用于分离和培养单一的微生物菌株。
其原理主要包括以下几个方面。
1. 稀释法：通过将微生物污染物或样品进行一系列的稀释，依靠概率的随机分布，使微生物个体分散在培养基上。
然后，通过无菌的针筒或平板涂布法将其分散均匀后进行培养。
2. 针对性分离法：针对自然样品中特定的微生物，根据其特性选择特定的培养基，包括特异的生理反应、生长因子等，并结合不同的温度、pH等环境条件，使目标微生物菌株生长而其他的微生物不能生长。
3. 选择培养基法：针对特定微生物的特异性要求，设计配制一种特定的培养基，只有特定的微生物能够在该培养基上生长而其他的微生物不能生长。
4. 纯化分离法：通过连续传代培养，将混合培养物中的微生物不断分离纯化，直至获得单一的纯培养物。
5. 涂布法：通过将微生物样品均匀涂布在培养基表面，利用微生物的生长特点形成独立的菌落，从而分离出单一的微生物。
6. 降温法：依靠微生物的生长特性和温度敏感性，通过一定的温度处理，使目标微生物因为生长受到抑制而其他微生物得到排除。
通过以上不同的分离方法，可以有效地从混合的微生物中获取纯净的单一微生物菌株，为后续的实验研究提供可靠的基础。
微生物的分离和纯培养
一、微生物的分离和纯培养•混合培养物：含有两种以上微生物的培养物。
•纯培养技术：把特定微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的技术。
•纯培养（pure culture）：微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。
1.平板划线分离法（Streak Plate）将纯菌或含菌材料用微生物接种针在固体培养基表面进行划线，使微生物的单个细胞能分散在平板上。
2.倾注平板分离法（pour plate）将待分离的材料用无菌生理盐水进行一系列稀释,然后取不同稀释液少许(一般是1ml)分别置于无菌平皿中，而后倾入熔化并冷却到50℃左右的琼脂培养基，均匀混匀，冷凝后进行培养.3.涂布平板分离法（spread plate）先用固体培养基制成无菌平板,然后将一定稀释度的少量样品(一般是0.2-0.5ml)加到平板上,并用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布到整个平板表面,经过培养后挑取单个菌落。
4.液体稀释法待分离材料→接种于培养液中→培养→测定或估计单位容积中的含菌数目→稀至两、三滴液体中只含有一个微生物个体→每次取一滴至另一盛有新鲜培养基的试管中→摇匀，培养→观察→大多数试管无微生物生长，少数管底有一菌落，可能由一个细胞繁殖而来。
5.选择性培养分离法为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。
5.单细胞（单孢子）分离法采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。
该方法要在显微镜下进行。
毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。
显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。
小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。
微生物分离的方法
微生物分离的方法微生物分离是指将微生物从复杂的微生物群体中分离出来，单独培养和研究的过程。
微生物分离的方法有很多种，根据不同的目的、微生物类型和样本来源，可以选择不同的分离方法。
1. 纯培养法纯培养法是最常用的微生物分离方法，常用于培养细菌、真菌和酵母等微生物。
首先，需要从样本中制备适量的稀释液，然后取适量的稀释液分别均匀涂布在不同的培养基上。
在合适的培养条件下（如温度、pH值等），通过单菌落的形成，筛选出单个微生物菌株，并进行进一步的纯化和鉴定。
2. 过筛法过筛法是利用不同的筛孔大小来筛选微生物的方法。
主要可以分为通过粗糙的筛网和细孔的纱布进行筛选。
首先将样品溶于适当的溶剂，然后通过筛网或纱布过滤。
微生物细胞会被截留在筛网或纱布上，而溶液则通过筛孔流出。
将筛得的微生物脱落至培养基上，进行纯化和鉴定。
3. 稀释落数法稀释落数法是将样品稀释成一系列不同浓度的稀释液，然后取适量的稀释液均匀涂布在培养基上。
采用这种方法不仅可以分离出单个微生物菌落，还可以计算微生物的含量，如细菌菌落数量。
通过在不同浓度上形成不同的菌落形态，可以用于鉴定微生物的生长特性和生理功能。
4. 筛选富营养培养基法筛选富营养培养基法是通过调整培养基的成分，选择特定条件下生长特定微生物的方法。
例如，根据微生物对碳源、氮源、矿物质、酸碱度等因素的要求，选择不同类型的培养基，使特定菌株优先生长。
这种方法可以筛选特定的微生物群体，有助于深入研究微生物群落结构和微生物的代谢特性。
5. 抗生素抑制法抗生素抑制法是利用抗生素的选择性杀菌作用，从样品中分离出特定微生物的方法。
根据不同微生物菌株对抗生素的抗性差异，可以选择适当抗生素制备培养基，将样品接种于含有抗生素的培养基上。
抗生素会抑制非目标微生物的生长，而目标微生物则能够原样分离出来。
6. 过滤法过滤法是将样品通过微孔滤膜过滤，将微生物分离出来的方法。
根据滤膜的孔径大小，可以选择性地分离出不同大小的微生物。
实验11微生物的分离、培养
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结
01 实验目的
掌握微生物分离、培养的基本原理
微生物分离
通过选择适当的培养基和分离方 法，将目标微生物从混合样本中 分离出来。
微生物培养
在适宜的生长条件下，使目标微 生物生长繁殖，获得纯培养物或 特定微生物群体。
在医学领域的应用
在医学领域，微生物分离、培养技术可用于疾病诊断和治疗。通过对病原微生物的分离、培养和研究， 可以深入了解疾病的发病机制和传播途径，为疾病的预防和治疗提供有力支持。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
在生物工程领域的应用
微生物分离、培养技术在生物工程领域有着广泛的应用，如用于生产生物制品、生物燃料等。随着生物工程技术的不 断发展，该技术的应用前景将更加广阔。
在环境治理领域的应用
微生物分离、培养技术也可应用于环境治理领域，如污水处理、土壤修复等。通过分离、培养具有特定功能的微生物 ，可以实现环境的有效治理和修复。
生长曲线绘制
通过定时测量菌落大小或菌液OD值， 绘制生长曲线，分析微生物的生长规 律。
生长速率计算
根据生长曲线，计算不同时间段的生 长速率，了解微生物的生长动态。
生长条件优化
根据生长曲线，分析微生物的生长条 件需求，优化培养条件，提高生长速 率和产量。
生长限制因素分析
根据生长曲线，分析影响微生物生长 的限制因素，为进一步优化培养条件 提供依据。
微生物培养
将分离得到的微生物接种到适宜的培养基上，在 适宜的温度和湿度条件下进行培养。
观察与记录
定期观察微生物的生长情况，记录生长曲线、菌落特征 等信息。
微生物纯培养的方法精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版微生物纯培养的方法一、固体培养基分离1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。
但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。
2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。
但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。
3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。
应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。
并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。
和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。
4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。
应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。
二、液体培养基分离1、稀释法特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。
应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。
2、富集培养特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。
应用：（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。
三、显微操作单细胞（孢子）挑取特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。
而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。
应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物培养与分离方法
大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。
只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。
一、接种与分离方法
根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类，采用不同的接种方法。
1．平板划线分离培养法
对混有多种细菌的临床标本，采用划线分离和培养，使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得纯种。
临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。
平板划线分离法通常有两种方法：
（1）分区划线分离法：此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。
先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线。
每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。
一个成功分区划线的平板，培养后分别观察1区形成菌苔，2区菌落连成线，3区和4区可分离到单个菌落。
（2）连续划线分离法：此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。
方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹，然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种，直至划满琼脂平板表面。
琼脂斜面接种法
主要用于菌落的移种，以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。
用接种环（针）挑取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后再从底部沿直线向上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。
生化鉴定培养基斜面接种，用接种针挑取待鉴定细菌的菌落，从斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。
3．穿刺接种法
此法多用于半固体培养基或双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种，半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。
接种时用接种针挑取菌落，由培养基中央垂直刺入至距管底0.4cm处，再沿穿刺线退出接种针。
双糖铁等有高层及斜面之分的培养基，穿刺高层部分，退出接种针后直接划线接种斜面部分。
4．液体培养基接种法
用于各种液体培养基如肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等的接种。
用接种环挑取单个菌落，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研磨接种物（以试管直立后液体淹没接种物为准）。
此接种法应避免接种环与液体过多接触，更不应在液体中混匀、搅拌，以免形成气溶胶，造成实验室污染。
5．倾注平板法
本法主要用于饮水、饮料、牛乳和尿液等标本中的细菌计数。
取纯培养物的稀释或原标本1ml至无菌培养皿内，再将已融化并冷却至45~50℃左右的琼脂培养基15~20ml倾注入该无菌培养皿内，混匀，待凝固后置37℃培养，长出菌落后进行菌落计数，以求出每毫升标本中所含菌数。
先数6个方格（每格为1cm2）中菌落数，求出每格的平均菌落数，并算出平皿直径，然后按下列公式计数，求出每毫升标本中的细菌数。
全平板菌落数=每方格的平均菌落数×лr2
每ml标本中的细菌数=全平板菌落数×稀释倍数
6．涂布接种法
本法多用于纸片扩散法药敏试验的细菌接种。
将一定量或适量的菌液加到琼脂培养基表面，
然后用灭菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反复涂布，使被接种液均匀分布于琼脂表面，然后贴上药敏纸片，或直接培养，本法经培养后细菌形成菌苔。
二、细菌的培养方法
根据不同的标本及不同的培养目的，可选用不同的培养方法。
通常把细菌的培养方法分为需氧培养、二氧化碳培养、微需氧培养和厌氧培养四种。
1．需氧培养
是指需氧菌或兼性厌氧菌在有氧条件下的培养，将已接种好的平板、斜面、液体培养基等在空气中置35℃孵育箱内孵育18~24h，无特殊要求的细菌均可生长。
少数生长缓慢的细菌需要培养3-7d甚至1个月才能生长。
为使孵育箱内保持一定的湿度，可在其内放置一杯水。
对培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞好棉塞或硅胶塞后用石蜡-凡士林封固，以防培养基干裂。
2．二氧化碳培养
某些细菌，如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、布鲁氏菌和流感嗜血杆菌等的培养，特别是在初次分离时，须在5%~10 %二氧化碳环境中培养才能生长。
常用的培养法如下。
（1）二氧化碳培养箱法：二氧化碳孵箱能自动调节二氧化碳的含量、温度和湿度，培养物置于孵育箱内阁，孵育一定时间后可直接观察生长结果。
（2）烛缸培养法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，将接种好的培养基放入缸内，点燃蜡烛后放在缸内稍高于培养物的位置上，缸盖或缸口均涂以凡士林，加盖密闭。
因缸内蜡烛燃烧氧逐渐减少，数分钟后蜡烛自行熄灭，此时容器内二氧化碳含量约占5%~10%。
将缸置于35℃普通孵育箱内孵育。
（3）气袋法：选用无毒透明的塑料袋，将已接种标本的培养皿放入袋内，尽量祛除袋内空气后将开口处折叠并用弹簧夹夹紧袋口。
使袋呈密闭状态，执断袋内已置的二氧化碳产气管（安瓿）产生二氧化碳，数分钟内就可达到需要的二氧化碳培养环境，置于35℃孵育箱内孵育。
（4）化学法：常用碳酸氢钠-盐酸法。
按每升容积称取碳酸氢钠0.4g与浓盐酸0.35ml比例，分别置容器内，连同容器置于玻璃缸内，盖紧密封，倾斜缸位使盐酸与碳酸氢钠接触而生成二氧化碳。
于35℃孵育箱内孵育。
3．微需氧培养
微需氧菌培养在大气中及绝对无氧环境中均不能生长，在含有5%-6% 氧气，5%-10%二氧化碳和85%氮气的气体环境中才可生长，将标本接种到培养基上，置于上述气体环境中，35℃进行培养即微需氧培养法。
4．厌氧培养
厌氧菌对氧敏感，培养过程中需造成低氧化还原电势的厌氧环境。
厌氧培养常用的方法有：物理法、化学法、生物法。
如厌氧罐培养法、气袋法、厌氧手套箱法、需氧菌共生厌氧法等。
微生物检验技术三、染色标本检查
细菌标本经染色后，由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比，故在普通光学显微镜下可清楚地观察到细菌的形态特征（如细菌的大小、形状、排列等）和某些特殊结构（如荚膜、鞭毛、芽孢等），并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。
（一）细菌染色的一般程序
细菌染色的一般程序是：涂片（干燥）—固定—染色（媒染）—（脱色）—（复染）。
1．涂片制备
血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液体培养物，直接在载玻片上作薄膜涂片；尸检或感染动物组织，病变局部涂抹采样的棉拭子直接涂片。
固体培养基上的菌落或菌苔的制片，先用接种环取一环生理盐水置载玻片中央，再用无菌接种环取少量的培养物在生理盐水中磨匀，涂
布成1cm2大小的涂面，置室温下自然干燥或远火慢慢烘干。
2．固定
目的是杀死细菌，凝固细菌蛋白及结构，便于染色；促使细菌粘附在载玻片上，避免在水洗过程中被水冲掉；改变细菌对染料的通透性，有利于菌细胞内结构的染色。
通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。
3．染色
根据检验目的不同，选择不同的染色方法进行染色。
染色时滴加染液，以复盖标本为度。
4．媒染
凡能增强染料和被染物的亲和力，使染料固定于被染物及能引起细胞膜通透性改变的物质，称媒染剂。
常用的有明矾、鞣酸、金属盐和碘等，也有用加热法促进着色。
媒染剂可用于初染与复染之间，也可用于固定之后或含于固定液、染色中。
5．脱色
凡能使已着色的被染物脱去颜色的化学试剂称为脱色剂。
常用乙醇、丙酮等作为脱色剂。
脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。
6．复染
已脱色处理的细菌或其结构常以复染液作复染以便于观察。
复染液与初染液的颜色不同而成一鲜明对比。
复染不宜太强，以免掩盖初染的颜色。