叶绿素的提取和分离.
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离一、实验过程1、提取绿色叶片中的色素将除去叶柄和粗叶脉的5g 左右新鲜绿色叶片（菠菜叶或白菜叶、女贞叶），剪碎，放在研钵中，加入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨，当研磨成糊状时，再加入5-6ml 丙酮，用杵棒迅速搅动后，静止3-5min，就可看到丙酮提取液为深绿色，再将澄清的提取液直接收集到有色的小广口瓶中（不经过滤）。
丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。
在进行实验操作时尽量少吸入丙酮，搅动后静止时，用纸或塑料薄膜盖在研钵上。
因为叶绿体中的各种色素都是脂类化合物，不溶于水，只溶于酒精、乙烷、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且用丙酮的效果较好，加入丙酮就是为了快速提取色素。
又因丙酮的化学性质不稳定，极易挥发，所以必须在充分的研磨后加入，而不在研磨前或研磨中加入。
在实验过程中，发现在研钵中加入2ml 丙酮，数量不足，色素提取液量不多，如果再经脱脂棉过滤，滤液几乎全被吸走，提取色素困难，所以改成加入丙酮5-6ml。
将色素收集到有色的小广口瓶中，目的是避免叶绿体中的色素，在接触空气或光照下遭到破坏。
2、制备滤纸条取一张预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成8-9cm 长，1cm 宽的滤纸条，再将滤纸条的一端对折剪去两角。
3、画滤液细线用牙签（或用钢笔尖、六号注射针头等）代替毛细吸管，蘸取有色小广口瓶中滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，划的线条越细越齐（直），而且待滤液干燥后，继续重复画4～5 遍，实验效果越好。
4、叶绿体中的色素分离将4ml 层析液倒入100ml 烧杯中，再将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯，滤纸上的滤液细线要与层析液离开一定的距离，即层析液不能没及滤纸条上的滤液细线。
5、实验结果的观察层析几分钟以后（约4～5min），滤纸条上便清楚地呈现出四条色素带，从上而下依次是胡萝卜素（橙黄色），叶黄素（黄色），叶绿素a（蓝绿色），叶绿素b（黄绿色）。
叶绿素的提取和分离
色素提取 色素分离
试剂 无水乙醇
层析液
原理
绿叶中的色素溶于有机溶剂 无水乙醇,而不溶于水。
各种色素在层析液中的溶解 度不同,溶解度高的随层析 液在滤纸条上扩散得快,反 之则慢。
层析液：20份石油醚,2份丙酮和1份苯混合而成,93 号汽油也可做层析液用
二、实验步骤：
三、实验结果：
四、色素种类及吸收光谱：
2、绿叶中色素提取分离异常现象分析:
1 收集到的滤液绿色过浅的原因分析: ①未加石英砂 二氧化硅 ,研磨不充分. ②使用放置数天的菠菜叶,滤液色素 叶绿素太少 . ③一次加入大量的无水乙醇,提取浓度太低 正确做 法:分次加入少量无水乙醇 。 ④未加碳酸钙或者加入过少,叶绿素被破坏。 2 滤纸条色素带重叠 ①滤液细线不直 ②滤液细线过粗 3 滤纸条无色素带： ①忘记画滤液细线 ②滤液细线接触到层析液,且时间较长,色素全部溶 解到层析液中。
经典高考题 图中①代表新鲜菠菜叶的光合色素纸层析
结果,则图②所示结果最有可能来自 A．水培的洋葱叶
。
D
B．生长的柳树幼叶
C．培养的衣藻
D．秋冬的银杏落叶
解析 新鲜菠菜叶中的光合色素种类齐全、含量丰富、完整,据 图①可知,滤纸上的四条色素带完整,从上到下依次为胡萝卜素、 叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。图②滤纸上的色素带不完整,只有 胡萝卜素、叶黄素。秋冬的银杏落叶呈黄色 或橙黄色 ,这是由于 低温破坏了叶绿素所致,因此叶片中几乎不含叶绿素。其他选项 中的材料中都含有四种色素。 答案 D
下 ,与正常叶片相比,实验结果是 A．光吸收差异显著,色素带缺第2条
。
B
B．光吸收差异不显著,色素带缺第2条
C．光吸收差异显著,色素带缺第3条
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离
叶绿素是植物和藻类中存在的一种绿色色素，它的提取和分离可以通过以下步骤进行：
1. 鲜叶采集：选择新鲜健康的叶子样品，并尽量避免阳光暴晒和长时间储存。
2. 研磨：将采集的叶子样品用搅拌机或者研钵研磨成细碎的绿色浆状物。
3. 植物组织破碎：将研磨好的样品浆液通过高速离心或搅拌法破碎细胞结构，并释放叶绿素。
4. 提取：将破碎的植物组织样品置于溶剂中，通常可以选择乙醇、丙酮、二甲亚砜或乙酸乙酯等有机溶剂。
在室温下浸泡一段时间，使叶绿素溶解到有机溶剂中。
5. 离心：将溶解了叶绿素的有机溶剂进行低速离心，以分
离溶剂和植物残渣。
6. 过滤：将离心后得到的溶剂进行滤过，以去除悬浮的杂质。
7. 浓缩：将过滤后的溶剂用恒温浓缩器或蒸发器进行浓缩，使其体积减小。
8. 纯化：对浓缩后的叶绿素溶液进行进一步纯化，可以使
用柱层析、薄层层析或高效液相层析等技术，以分离和纯
化叶绿素。
9. 干燥：将纯化后的叶绿素溶液进行干燥，可以通过喷雾
干燥、真空干燥或冷冻干燥等方法。
10. 得到叶绿素提取物：经过上述步骤后，叶绿素提取物便可以得到，并可以用于进一步的分析和应用。
需要注意的是，以上步骤仅为提取和分离叶绿素的一种常用方法，具体操作步骤和参数可根据实际情况进行调整。
同时，对于更为复杂的样品和目的，可能需要选择其他提取和分离技术进行操作。
实验二 叶绿素的提取与分离
实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm 处，平行点两点，两点相距1cm左右。
若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定姓名班级学号一、实验原理和目的目的：1.练习叶绿素提取和分离的方法2.进一步了解叶绿素色素成分提取、分离原理：1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。
滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
二、实验器具和步骤材料:新鲜植物叶片器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张试剂：95%乙醇，石油醚步骤：1.色素提取（乙醇粗提液）a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉称1g左右剪碎于研钵b.研钵中加3-5ml95%乙醇研磨成匀浆过滤于刻度试管残渣用少许乙醇冲洗一并过滤定容至10ml2.荧光观察将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光3.色素萃取（石油醚提取液）取乙醇提取液5ml与另一支试管加2ml石油醚摇荡静止片刻上层深绿色为石油醚提取液4.色素分离a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平）用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚迅速盖好培养皿。
c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称三、实验数据和作业四、数据分析研磨叶片不充分，提取的叶绿体色素溶液浓度稀，荧光现象不明显分离色带较少的原因：提取的叶绿素的浓度稀胡萝卜素叶黄素。
叶绿素的提取、分离和测定
Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
解方程式得
(二）步骤
称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL，避光静置5min。用移液管吸取上面的绿色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮4ml稀释，摇动试管，作测定用。
测量光密度值 取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于663及645nm下读取光密度值
计算结果代入公式求出各来自绿素的含量（单位mg/L）最后计算时需考虑稀释因子
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5 *25*2/1000 =0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等
01
95%酒精、石油醚
02
碳酸钙
03
（二）仪器和药品
（三）步骤
用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精5-10mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
取一张色层分析纸或定性滤纸代用，剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径；将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置，稍干后，再重复操作几次；然后取另一滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提取液，不久即可看到分离的各种色素的同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别为为663nm和645nm。
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项：
准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离
叶绿素是一种含有镁离子的绿色色素，广泛存在于植物、藻类和一些细菌中，是光合作用过程中吸收光能的重要物质。
叶绿素的提取和分离通常可以通过以下步骤实现：
1. 采集样品：首先需要采集含有叶绿素的植物、藻类或细菌样品，较好的样品应该是新鲜的、健康的、并且没有被过度受损。
2. 破碎细胞壁：将采集到的样品经过冷冻破碎或高速离心等处理，将细胞壁破碎并释放出细胞内的叶绿素。
3. 溶解蛋白质：用生理盐水或其他适当的缓冲液将样品中的细胞膜、蛋白质等溶解掉，并且使叶绿素以游离形式存在于溶液中。
4. 溶剂萃取：利用溶剂（如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等）对上述溶液中的叶绿素进行萃取，以分离出含有叶绿素的有机相。
5. 色谱分离：将通过溶剂萃取得到的含有叶绿素的色素混合物进行色谱分离，以分离出不同类型的叶绿素，并且去除杂质，获得纯度较高的叶绿素。
总之，叶绿素的提取和分离需要依次实施多个步骤，选择适当的解剖技术和实验方案可提高叶绿素的分离纯度和产量。
叶绿素的提取与分离
叶绿素的提取与分离
叶绿素是一种绿色的色素，存在于植物、藻类和一些细菌中。
叶绿素
的提取与分离是科学研究中常用的方法之一，可以用于制备药品、化妆品、食品添加剂等。
叶绿素的提取与分离通常包括以下步骤：
1.样品制备：将植物、藻类或细菌等材料研磨或破碎，使叶绿素暴露
在表面。
2.提取叶绿素：将样品放入提取液中，如乙醇、乙醚、丙酮、二甲基
亚砜等，将叶绿素溶解于提取液中。
3.分离叶绿素：通过色谱、凝胶电泳等分离方法分离叶绿素。
4.纯化叶绿素：将分离得到的叶绿素进一步纯化并测定其光谱特性，
以确保其纯度和质量。
除了以上常规方法，近年来一些新的叶绿素提取技术也被开发，如超
声波提取、微波提取、超临界流体提取等，这些技术可以提高叶绿素的提
取效率和纯度。
叶绿素的提取
叶绿素的提取与分离方法:1 纸层析法2 薄层色谱法3柱色谱法综合各方因素，经济，简便操作，易于获取等方面，考虑到实验无需过于精确，故此处采用第一种方法，以下是其详细说明：提取: (1) 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片(2g左右)，洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研。
(2) 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10-15ml 95%乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。
(3) 如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。
取新鲜叶片(以菠菜叶最好)，先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末，密闭储存。
用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并随时搅动。
待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。
分离: (1) 取圆形定性滤纸一张(直径11cm)，将其剪成滤纸条(9cm×3cm)，用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边(距边约1cm)，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次。
(2) 在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。
迅速盖好层析缸盖。
此时，推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可看到各种色素的条带。
(3) 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素:叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
用铅笔标出各种色素的位置和名称。
各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快:胡萝卜素次之:叶黄素次之:叶绿素A 最慢:叶绿素B 最宽的是叶绿素A 最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近另外，绿叶中的色素中叶绿素含量约占3/4 类胡萝卜素含量约占1/4 光照中，红光有利于淀粉合成，蓝紫光有利于蛋白质的合成以下是实验改进方面要求：1 实验材料的改进：应根据不同地区不用气候选用不同叶片，但切记一点不用含蜡质叶片2：提取液的改进：丙酮易挥发且有毒，可选用无水乙醇替代3：层析液改进：一般教材给出两种配方：93号汽油或者20份石油醚+2份丙酮+1份苯，经研究发现以下四种方法较好：1：CCI4+少许NASO42: 95%酒精3：9份95%酒精+1份苯4: 20份汽油+2份丙酮+2份石油醚+1份苯此处有一疑问：研磨时加碳酸钙是为了保护叶绿素不分解即叶绿素分子骨架中镁离子不被有机酸给置换出来，此处为何又要除镁离子呢？诸位可好生想下！除叶绿素中镁离子的方法1:选取黄色的叶子，此类树叶缺镁离子，因为镁离子可从老叶自由移动至新叶，故老叶无，即无须耗费精力去除了2:加酸，使所捣碎研磨液中含镁络合物吡啶环中镁离子被氢离子取代，3:加醋酸铜，铜离子取代镁离子，同上方法3:叶子未捣碎前浸入硫酸铜溶液使其染为绿色，铜代叶绿素。
叶绿体色素的提取、分离及理化性质鉴定
叶绿体色素的提取、分离及理化性质鉴定
实验目的了解叶绿素提取分离原理、方法，验证理化性质
实验原理叶绿素易溶于乙醇、丙酮，类胡萝卜素更易溶于苯；
叶绿素是双羧酸脂类，能与强碱发生皂化反应；
叶绿素分子中络合的镁能依次被H+、Cu2+取代；
叶绿素溶液光照后有荧光现象。
实验器材试管、研钵、太平、毛细滴管、剪刀、移液管、展层缸、滤纸、漏斗、50ml容量瓶、酒精灯、试管夹
实验试剂乙醇、丙酮、苯、盐酸氯化铜混和液、甲醇、氢氧化钾、石英砂
实验材料菠菜叶片
实验步骤
一、叶绿体色素的提取、分离
1、提取：叶片2g剪碎，放入研钵，加乙醇（或丙酮）5ml研磨匀浆，再加10ml，
过滤。
2、分离：滤纸一张，用毛细管在圆心处分次滴加提取液，圆心处穿孔，然后
插入滤纸圆芯；将其放入盛有展层液（汽油或丙酮：苯：石油醚＝9：1：
0.1混和液）的展层缸内，30min.后观察结果。
叶绿体色素被分离成从内
到外的篮绿（叶绿素a）、黄绿（叶绿素b）、浅黄（叶黄素）、橙黄（胡萝卜素）四个同心圆环。
二、叶绿素理化性质鉴定
1、荧光现象观察：浓提取液向光观察呈绿色，背光观察呈血红色（荧光）
2、皂化反应：加提取液0.5ml至试管，加入氢氧化钾的甲醇饱和液2ml，沿
管壁加水2ml，管内有乳白色沉淀出现（皂化）。
加苯1ml，静置5min，上层苯层呈深黄色（类胡萝卜素）。
3、取代反应：加提取液0.5ml至试管，加水2ml，加盐酸氯化铜混和液2ml，
用酒精灯慢慢加热，仔细观察溶液颜色依次有绿变褐（氢取代）再变篮绿（铜取代）。
叶绿素的提取与分离
叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体中，是胡箩卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在乙醚中溶解度较小。
·＞＞＞根据它们的化学特性，可将它们从植物叶片中提取出来，并通过萃取、沉淀和色谱方法将他们分离开来。
2、薄层色谱
①薄层色谱是用来快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
②薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
(1)吸附层析中样品在薄层板上经过连续、反复的被吸附剂吸附及展开剂解吸附过程，由于不同的物质被吸附剂吸附的能力及被展开剂解吸附的能力不同，放在薄层上以不同速度移动而得以分离。通常用比移值（Rf）表示物质移动的相对距离：
Rf=
图注：1—起点线；2—展开剂前沿；a—色斑最高浓度中心至原点中心的距离；b—展开剂前沿至原点中心的距离。
3、点样
用根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻点在距薄板一端1.5cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。若一次点样不够，可待样品溶液挥发后，再在原点处点第二次，但斑点直径不得超过2mm。
4、展开
先在层析缸中放入展开剂（石油醚（60~90℃）—丙酮—乙醚（体积比为3:2:1））加盖使缸内蒸气饱10min，再将薄板层斜靠于层析缸内壁。点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。待展开剂上升到距薄板层另一端1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，晾干。
2、试剂：硅胶、0.1%CMC、石油醚（60~90℃）、乙醇、丙酮、乙醚、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4。
四、实验步骤
1、制板
将硅胶加0.1%CMC，调成浆状（硅胶：CMC=1:3~4），将其涂在载玻片上，为使其坦平，可将载玻片用手端平晃动，至平坦为止，放在平静平坦的台面上，晾干之后放入105℃烘箱中活化1小时，取出放入干燥器内待用。
实验六 叶绿素的提取、分离【范本模板】
叶绿素的提取、分离一、实验目的1. 掌握从植物叶中提取叶绿素的方法.2。
了解纸层层析的原理,掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。
2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下,连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上,从而达到分离的目的。
剪纸形状滤液基线毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1) 取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右,洗净，用滤纸擦干,去掉叶柄和中脉剪碎,放入研钵。
（2) 研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4—5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后,过滤入50ml锥形瓶中加塞待用.分离:（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条(15cm×2cm）,将其2cm 一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0。
5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1—1.5cm）。
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引起的
紫
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
蓝 青
绿
黄 橙
红
光合作 用利用 可见光
叶绿素a、b吸收蓝紫光和红（橙）光
可见光: 390-760nm 不可见光:紫外线(5-370nm)和红外线(750-1000000nm)
类胡萝卜素吸收蓝紫光
题组二：考察实验结果分析及实验误差
(经典高考题)某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。将其
叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析(从上
至下)，与正常叶片相比，实验结果是 A．光吸收差异显著，色素带缺第2条 B．光吸收差异不显著，色素带缺第2条 C．光吸收差异显著，色素带缺第3条 (
B
)。
D．光吸收差异不显著，色素带缺第3条
解析 叶绿体中的叶绿素a和叶绿素b主要吸收蓝紫光和红光， 胡萝卜素和叶黄素主要吸收蓝紫光，所以当水稻叶黄素缺失突 变体进行红光照射时，光吸收差异不显著；对正常叶片叶绿体 中的色素提取后，层析的结果自上而下依次是胡萝卜素、叶黄 素、叶绿素a和叶绿素b，故B正确。 答案 B
(经典高考题)图中①代表新鲜菠菜叶的光合色素纸层析
结果，则图②所示结果最有可能来自 ( A．水培的洋葱叶 B．生长的柳树幼叶 C．培养的衣藻 )。
D
D．秋冬的银杏落叶
解析 新鲜菠菜叶中的光合色素种类齐全、含量丰富、完整， 据图①可知，滤纸上的四条色素带完整，从上到下依次为胡萝 卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。图②滤纸上的色素带不完 整，只有胡萝卜素、叶黄素。秋冬的银杏落叶呈黄色(或橙黄 色)，这是由于低温破坏了叶绿素所致，因此叶片中几乎不含叶 绿素。其他选项中的材料中都含有四种色素。 答案 D
考点1 绿叶中色素的提取和分离
题组一：考察实验选材、试剂的作用和实验操作： (2013· 江苏单科，5)关于叶绿体中色素的提取和分离实验的操 作，正确的是 ( )。 A．使用定性滤纸过滤研磨液 B．将干燥处理过的定性滤纸条用于层析 C．在划出一条滤液细线后紧接着重复划线2～3次 D．研磨叶片时，用体积分数为70%的乙醇溶解色素 解析 本题可排除错误选项。色素易被滤纸吸附，故用纱布过 滤，A错误；每次重复画色素滤液细线时，需等干燥后再进行， C错误；由于叶绿体中的色素不溶于水，因此研磨叶片时需用无 水乙醇或丙酮，D错误。 答案 B
四、色素种类及吸收光谱：
色素种类 吸收光 吸收光谱
叶绿素 叶绿素a 吸收蓝紫 （蓝绿色） （含量 光和红 约占3/4）叶绿素b （橙）光 （黄绿色） 类胡萝 胡萝卜素 （橙黄色） 吸收蓝 卜素 紫光 （含量 叶黄素 约占1/4）（黄色）
五、叶绿体色素的分布和功能 1、分布：叶绿体的 类囊体薄膜 上。 2、功能： 吸收、传递 光能（四种色素）、 转化 光能（只有少量特殊状态的叶 绿素a）
一、实验原理：
试剂 色素提取 原理 绿叶中的色素溶于有机溶剂 无水乙醇 无水乙醇，而不溶于水。
色素分离
层析液
各种色素在层析液中的溶解 度不同，溶解度高的随层析 液在滤纸条上扩散得快，反 之则慢。
（层析液：20份石油醚,2份丙酮和1份苯混合而成， 93号汽油也可做层析液用 ）
二、实验步骤：
三、实验结果：
(2017全国Ⅲ)植物光合作用的作用光谱是通过测量光合作用对 不同波长光的反应（如O2的释放）来绘制的。下列叙述错误
的是(
)
A
A．类胡萝卜素在红光区吸收的光能可用于光反应中ATP的合成
B．叶绿素的吸收光谱可通过测量其对不同波长光的吸收值来 绘制
C．光合作用的作用光谱也可用CO2的吸收速率随光波长的变化 来表示 D．叶片在640~660 nm波长光下释放O2是由叶绿素参与光合作用
易错警示！
过程 (1) (2) 提 (3) 取 色 (4) 素 (5)
1、实验中的注意事项及操作目的
操作目的 使滤液中色素含量高 溶解色素 研磨充分
注意事项 选新鲜绿色的叶片 研磨时加无水乙醇 加少量SiO2
加少量CaCO3
迅速、充分研磨
保护色素，防止叶绿素被破坏
防止乙醇挥发，充分溶解色素
(6) 盛放滤液的试管管口加棉塞 防止乙醇挥发和色素氧化 (1) 滤纸预先干燥处理 使层析液在滤纸上快速扩散 分 离 (2) 滤液细线要直、细、匀 使分离出的色素带平整不重叠 色 (3) 滤液细线干燥后再画－两次 使分离出的色素带清晰分明 素 (4) 滤液细线不触及层析液 防止色素直接溶解到层析液中
题组二：考察实验结果分析及实验误差
种类
颜色
含量
类胡萝卜素 (占总量1/4)
胡萝卜素 (橙黄色)
叶黄素 叶绿素a
(黄色) (蓝绿色)
叶绿素 叶绿素b (黄绿色) (占总量3/4)
溶解度 含量
注意：1.色素带的位置代表什么？宽度呢？ 2.若分离得到的色素带不明显，可能的原因？
2、绿叶中色素提取分离异常现象分析: （1）收集到的滤液绿色过浅的原因分析: ①未加石英砂)(二氧化硅),研磨不充分. ②使用放置数天的菠菜叶,滤液色素(叶绿素太少). ③一次加入大量的无水乙醇,提取浓度太低(正确做 法:分次加入少量无水乙醇)。 ④未加碳酸钙或者加入过少，叶绿素被破坏。 （2）滤纸条色素带重叠 ①滤液细线不直 ②滤液细线过粗 （3）滤纸条无色素带： ①忘记画滤液细线 ②滤液细线接触到层析液，且时间较长，色素全部 溶解到层析液中。