人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞冻存方法

STEM-CELLBANKER® 使用方法

人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞冻存方法（参考例）

冻存

1.按照常规方法收集干细胞于冻存管中

2.不进行细胞离心步骤，使用吸液器弃去细胞培养基 *1。

3.直接添加500μL预先4℃冷却的STEM-CELLBANKER® *2 至细胞冻存管中。

4.将细胞冻存管置于预先4℃冷却的程序降温盒*3后，将该程序降温盒放入负80℃冰箱。

5.翌日，将已冻结的细胞冻存管移置于负196℃液氮罐。

※进行上述第5和第6步骤时速度要快。

＊1：可收集干细胞于离心管中，再以300rpm(20G) 条件进行离心弃去上清液。少量残存的细胞培养基对冻存结果影响不大。

＊2：预先添加Rho-associated kinase (ROCK) inhibitor和Y-27632 (Merck)于STEM-CELLBANKER® （调配至最终浓度＝10μM) 有助提高复苏细胞存活率。

＊3：可使用Nalgene Freezing Container “Mr. Frosty” (5100-0001) (Nalge Nunc)或BICELL DEWAR FLASK (Nihon Freezer)等程序降温盒。

复苏

1.从冰箱里取出细胞冷冻保存管后立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。

2.待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即使用8 -10 m l细胞培养基或 「CELLOTION TM」

細胞洗涤回収液*1离心洗涤细胞*2。

3.吸弃上清液后加入适量培养基吹打均匀。

4.将细胞液移至细胞培养瓶，按常规方法进行培养。

＊1：使用「CELLOTION TM」清洗细胞有助于提高细胞回收率。

http://www.zenoaq.jp/cellbanker/ja/cellotion.html

＊2：参考离心条件为300G、5～10分钟。

产品保存方法

保存于2－8℃环境中。质量保障期从产品的生产日期起算，为期3年。

对开封后产品进行长期（3个月以上）保存时，推荐分装小瓶后存放于－20°C冰箱。

3次以上的重复冻结-解冻过程可能劣化产品质量和导致性能降低，须避免。