水质大肠菌群(MPN)检索表
大肠菌群最可能数(MPN)检索表1
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一种微生物活菌数快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：ａ）样品的选择：检测样品分为固体样品和液体样品；ｂ）采样样品的制备：通过无菌操作取一定量溶液样品进行离心处理后，取上清液，再以更高的速度离心处理，弃去上清液，用移液器取出底部少量溶液；ｃ）微生物活菌数的检测：将移液器取出的底部溶液，涂在载玻片上，经干燥固定，用美兰染色，冲洗后用生物显微镜镜检，记录被美兰染色且呈现空心状态的图像的个数来计数微生物数量。
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大肠菌群计数含MPN表
大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。
一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。
例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。
活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。
若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。
从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。
然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。
虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml（ g ）95% 信赖界线下限上限0 0 0 < 30 0 1 3 < 5 90 1 0 3 < 5 130 2 0 - - -1 0 0 4 < 5 201 0 1 7 1 211 1 0 7 1 231 1 1 11 3 361 2 0 11 3 362 0 0 9 1 362 0 1 143 372 1 0 153 442 1 1 20 7 892 2 0 21 4 472 2 1 28 10 1502 3 0 - - -3 0 0 234 1203 0 1 39 7 1303 0 2 64 15 3803 1 0 43 7 2103 1 1 75 14 2303 1 2 120 30 3803 2 0 93 15 3803 2 1 15 30 4403 2 2 210 35 4703 3 0 240 36 1,300 3 3 1 460 71 2,400 3 3 2 1,100 150 4,800 3 3 3 > 1,100 > 150 > 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中，， ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。
大肠菌群计数含MPN表
大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。
一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。
例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。
活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。
若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。
从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。
然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。
虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml （ g ）95% 信赖界线下限上限000< 30013< 590103< 513020---1004< 5201017121110712311111336120113362009136201143372101534421120789220214472212810150230---30023412030139713030264153803104372103117514230312120303803209315380321153044032221035470330240361,300331460712,4003321,1001504,800333> 1,100> 150> 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中，， ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml （g）。
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群 （Coliforms）
一群在36℃培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性 厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品 的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
并非分类学概念，在生化及血清学方面并非完全一致。 一般认为包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯 氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群计数MPN法流程图
GB 4789.3-2016（第一法）
检样
稀释
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气 大肠菌群阴性
产气 大肠菌群阳性
报告
初发酵 复发酵
大肠菌群计数MPN法示意图
25g
移1ml
O26等） 侵袭性大肠杆菌（EIEC)——杆菌性痢疾 粘附性大肠杆菌（EAEC)——急慢性腹泻
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的关系
EIEC
ETEC
EHEC
O157：H7；O104：H4等
食品卫生学意义
是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，粪便中既有正常肠道菌，也可能
注意事项
归纳总结
目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位 MPN/100mL（g）不一致。中华人民共和国卫生部公告 2009第16号正式公告：现行食品标准 中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学 检验大肠菌群测定》（GB/T 4789.3-2003）进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/ 克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》（GB/T 4789.3-2008） 进行检测。
大肠杆菌及菌落总数
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏3.0 g 蛋白胨10.0g NaCl 5.0g 水1000mL pH7.4～7.6 将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。
也可放在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
在上述烧杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。
将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达7.6。
反之，用1mol/LHCL 进行调节。
无菌生理盐水：需用生理盐水浓度是0.9%：称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
2)器材试剂：牛肉膏蛋白胨 NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCL 灭菌水高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙pH试纸（pH5.5-9.0）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸量筒玻璃棒电热炉称量杯灭菌三角瓶灭菌的具塞三角瓶灭菌平皿灭菌吸管灭菌试管高压蒸气灭菌：1.将内层锅去处，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。
大肠菌群最可能数(MPN)检索表
阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.10.010.001上限下限0.10.010.001上限下限000<3.0——9.522021 4.542 001 3.00.159.6221288.794 010 3.00.1511222358.794 011 6.1 1.218230298.794 020 6.2 1.218231368.794 0309.4 3.63830023 4.694 100 3.60.1718301388.7110 1017.2 1.3183026417180 10211 3.638310439180 1107.4 1.3203117517200 11111 3.63831212037420 12011 3.64231316040420 12115 4.5423209318420 13016 4.54232115037420 2009.2 1.43832221040430 20114 3.642323********* 20220 4.542330********* 21015 3.742331460902000 21120 4.54233211001804100 212278.794333>1100420——注 1：本表采用 3 个稀释度【 0.1g(mL) 、 0.01g(mL)注 2：表内所列检样量如改用1g(mL) 、0.1g(mL) 和表内数字应相应提高10 倍，其余类推。
和 0.001g(mL)] ，每个稀释度接种0.01g(mL) 时，表内数字应相应降低3 管。
10 倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)0.0001g(mL)时，则一种微生物活菌数快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：ａ）样品的选择：检测样品分为固体样品和液体样品；ｂ）采样样品的制备：通过无菌操作取一定量溶液样品进行离心处理后，取上清液，再以更高的速度离心处理，弃去上清液，用移液器取出底部少量溶液；ｃ）微生物活菌数的检测：将移液器取出的底部溶液，涂在载玻片上，经干燥固定，用美兰染色，冲洗后用生物显微镜镜检，记录被美兰染色且呈现空心状态的图像的个数来计数微生物数量。
大肠菌群计数含MPN表
大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。
一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。
例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。
活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。
若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。
从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。
然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。
虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表3 3 1 460 71 2,4003 3 2 1,100 150 4,8003 3 3 > 1,100 > 150 > 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中0.1，0.01，0.001 ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。
若稀释倍数为原液，10，100倍(即每ml LST中含1，0.1，0.01ml之检体而EC接种之正反应试管数亦为3-1-0，则该检体大肠杆菌MPN数为43÷10=4.3/ml。
总大肠菌群
2 总大肠菌群2. 1 多管发酵法2. 1. 1 范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。
2. 1. 2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
2. 1.2. 1总大肠菌群total culiforms总大肠菌群指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
2.1.3 培养基与试剂2.1.3.1 乳糖蛋白胨培养液2.1.3.1.1 成分A 蛋白胨10 gB 牛肉膏 3 gC 乳糖 5 gD 氯化钠 5 gE 溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L) 1 mLF 蒸馏水1000 mL2.1.3.1.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1 mL 16 g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95 kPa (115℃，10 lb）高压灭菌20 min，贮存于冷暗处备用。
2.1.3.2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液(2.1.3.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。
2. 1.3.3 伊红美蓝培养基2. 1.3. 3.1 成分A蛋白胨10 gB 乳糖10 gC 磷酸氢二钾 2 gD 琼脂20 g~30 gE 蒸馏水l000 mLF 伊红水溶液（20 g/L) 20 mLG 美蓝水溶液（5 g/L) 13 mL2. 1.3. 3.2 制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95 kPa (115℃，10 lb）高压灭菌20 min。
临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。
2.1.3.4 革兰氏染色液2.1.3.4.1 结晶紫染色液A 成分：a 结晶紫 1 gb 乙醇（95%，体积分数）20 mLc 草酸铵水溶液（10 g/L）80 mLB 制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
游泳池水中大肠菌群检验方法
游泳池水中大肠菌群检验方法一、大肠菌群多管发酵法测定1定义大肠菌群（coliform bacteria）系指一群在36±1℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2 仪器见《公共场茶具的大肠菌群测定方法》。
3培养基和试剂3.1乳糖蛋白胨培养液3.1.1成分：蛋白胨 10g牛肉膏 2g乳糖 5g氯化钠 5g1.6%（V/V）溴甲酚紫乙醇溶液 1mL蒸馏水 1000mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
3.1.2配法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解，调pH到]7.2～7.4。
再加入1ml 1.6%溴甲酚指示剂，充分混匀，分装到含有倒管的试管中，115℃高压灭菌15min。
3.2伊红美兰琼脂见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.3革兰氏染色液风《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.4染色法见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
4推测性试验4.1在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。
4.2在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10ml。
4.3轻摇试管，使液体充分混匀，置36±1℃培养箱中，培养24h。
4.4观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
5证实试验5.1平板分离自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
5.2复发酵试验挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36±1℃培养箱中，培养24h。
5.3凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的最大可能数（MPN）检索表得出1000ml水样中总大肠菌群的MPN值。