免疫试验一
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
大学生免疫实验报告范文
大学生免疫实验报告范文实验目的本次实验的目的是了解和研究大学生免疫系统的功能和特点。
通过分析大学生的免疫能力，有助于提高我们的健康意识和掌握自身免疫系统的保护机制。
实验材料和方法实验材料- 大学生志愿者- 免疫分析仪器- 免疫实验试剂盒实验方法1. 采集志愿者的血液样本。
2. 提取血液中的白细胞进行免疫分析。
3. 使用免疫分析仪器对样本中的免疫细胞数量和活性进行检测。
4. 根据实验结果分析大学生免疫系统的状态和免疫能力。
实验结果经过对志愿者血液样本的免疫分析，我们得到了以下结果：1. 白细胞数量：与正常数值相比，大学生的白细胞数量整体偏低，但仍处于正常范围内。
2. 免疫细胞活性：大学生的免疫细胞活性相对较高，表明其免疫系统对外界侵袭具有较好的响应能力。
3. 免疫抗体水平：志愿者的免疫抗体水平相对偏低，可能是由于日常生活中的不良生活习惯或营养不均衡所致。
实验分析与讨论通过对大学生免疫系统的实验分析，我们可以得出以下结论：1. 大学生免疫系统相对脆弱：大学生处于高强度的学习和生活压力之下，缺乏充足的休息和锻炼，容易导致免疫系统的不稳定，降低身体的抵抗力。
2. 免疫系统活性受到积极影响：尽管大学生面临许多应激因素，但他们的免疫细胞活性较高，可能与年轻人的新陈代谢活跃有关。
3. 不良生活习惯可能影响免疫系统：不规律的作息时间、饮食不平衡以及缺乏运动等不良生活习惯可能导致大学生免疫抗体水平相对较低，容易受到感染和疾病侵袭。
实验结论通过本次实验的研究和分析，得出以下结论：1. 大学生免疫系统整体较为脆弱，需要更加注重健康管理和保护自身的免疫系统。
2. 充足的休息、良好的饮食和适量的运动对大学生的免疫系统具有积极的影响。
3. 需要加强大学生对免疫系统的认识和健康教育，培养良好的生活习惯和健康意识。
参考文献- [免疫学基础教程](- [大学生免疫系统调查研究](。
免疫学实验ELISA双抗夹心法课件
小于判断值为阴性。 注：阴性对照OD值小于0.05按0.05计算，
大于0.05按实际OD值计算判断值。
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注意事项：
1. 试剂及待测标本使用前应平衡至室温，并将试剂混匀， 弃去1～2滴垂直滴加；
2. 严格按照操作程序依次加样，以保证实验结果准确性； 3. 应尽量避免孔中有气泡，以免所测得OD值不准确。
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思考题：
1.免疫标记技术有哪些？各有何特点？。 2.ELISA操作过程中应注意哪些问题？
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2009级医疗专科复习题
一、名词解释2.5*8,共20分
免疫、抗原、抗原决定基(表位)、异嗜性抗原、白细胞分 化抗原、TD-Ag、 TI-Ag、抗体、免疫球蛋白、单（多）克 隆抗体、补体、经典途径、旁路途径、细胞因子、IL、IFN、 CSF、TNF、MHC、MHC限制性、TCR、BCR、模式识别 受体（PRR）、抗原提呈细胞（ APC）、适应性免疫应答、 免疫耐受、免疫调节、超敏反应、人工主动免疫、人工被动 免疫、计划免疫 注：红色标记为要求掌握英文
实验原理：
酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原、抗体的特异性反应与酶对底 物的高效催化作用相结合的一种敏感性很高的实验技术，可用于检测体 液中微量的特异性抗体或抗原。首先，抗原、抗体的特异性反应在一种 固相载体表面－聚苯乙烯微量反应板孔中进行，通过洗涤去除多余的游 离反应物；然后加入酶标记的抗体或酶标记的抗抗体，从而形成抗体－ 抗原－酶标抗体复合物（双抗体夹心法）或抗原－抗体－抗抗体复合物 （间接法）；此时加入酶底物和显色剂，在酶催化底物后，液体呈现显 色反应。液体显色的强弱与复合物中待测抗原或抗体的量呈正比，借此 可检测待测抗原或抗体的有无及含量。
免疫检验实践报告模板
免疫检验实践报告模板实验目的和背景:免疫检验是一种重要的生命科学实验技术，常用于血液和组织样本中特定分子（抗原或抗体）的定量或定性检测。
本实验旨在学习和实践免疫检验技术，掌握基本的操作步骤和数据分析方法。
实验材料和仪器:1. 抗原样本（如蛋白质或病毒）2. 目标抗体或抗体标记物（如酶标记抗体）3. 酶标仪或荧光仪4. 显色底物或荧光底物5. 酶标板或微孔板6. 相关试剂和缓冲液实验步骤:1. 准备工作：将所需的试剂和材料准备好，按照实验方案设置实验组和对照组。
2. 样本处理：首先，对待测样本进行处理，如离心、稀释等，以获得适宜的浓度。
3. 样本孔的涂覆：将酶标板（或微孔板）中每个孔涂覆特定的抗原或样本。
4. 孵育：将酶标板置于恒温孵育箱或温床中进行适当时间的孵育，以促进抗原和抗体的结合。
5. 洗涤：将酶标板反复洗涤，以去除未结合的物质。
6. 抗体结合：加入特定的抗体或抗体标记物，使其与已结合的抗原发生特异性结合。
7. 洗涤：再次反复洗涤，以去除未结合的抗体或抗体标记物。
8. 底物反应：加入适当的底物，如显色剂或荧光底物，通过酶催化或荧光发射反应来检测特定信号。
9. 反应停止：加入适当的反应停止剂，终止底物反应，停止信号生成。
10. 读取数据：使用酶标仪或荧光仪测量孔的吸光度或荧光强度，获得相应的实验结果数据。
11. 数据分析：根据实验设计和对照组的结果，进行数据统计和分析，计算样本中目标分子的浓度或定性结果。
实验结果和讨论:根据实验所得的数据，对每组样本进行统计分析和比较，计算目标分子的浓度或定性结果。
分析结果可根据需求和目的，进行图表展示或其他形式的数据呈现。
根据数据分析结果，进一步讨论实验的准确性、可靠性和实用性，并与实验设计和预期结果进行比较和讨论，探讨可能的影响因素和改进措施。
结论:根据本次免疫检验实验的结果和讨论，得出对目标分子浓度或定性结果的结论。
根据实验的目的和背景，提出进一步的研究方向或实验优化建议。
医学免疫学实验指导
医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。
该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。
本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。
小鼠是啮齿目中体形较小的动物淋巴系统很发达包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。
本实验在带教老师?傅枷陆馄市∈蠊鄄煨叵佟⑵⒃嗟让庖咂鞴俨⒅蒲 科 鄄煨∈竺庖呦赴 ?一小鼠免疫器官解剖学观察【材料】动物昆明种小白鼠。
试剂3来苏尔水瑞特氏染液。
器材眼科镊眼科剪玻片。
【方法】小鼠脱臼处死投入盛有3来苏尔水的缸内浸泡5分钟。
取出小鼠仰卧位置于试验台上使动物腹部朝上。
以镊子提起耻骨处皮肤用剪刀沿正中线直剪开至下颌部然后钝性分离皮肤再把皮肤向四肢剪开。
注意观察腹壁用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开观察腹腔液量及性状观察脾脏。
切开膈肌剪断胸骨翻起胸骨观察胸腺、心脏及肺脏胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方内有许多大淋巴细胞即前胸腺细胞及特定的上皮网状细胞分泌胸腺激素。
解剖结束深埋动物。
二免疫细胞的形态观察【材料】动物昆明种小白鼠。
试剂3来苏尔水瑞特氏染液pH8.6硫酸盐缓冲液20盐酸甲醇。
器材眼科镊眼科剪玻片。
【方法】准备洁净玻片两张一张用于推片另一张用于固定标本。
剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血迅速在玻片上涂血膜制备血涂片自然干燥。
瑞氏染色染色甲醇固定标本分钟亦可省略滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜染色分钟再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水用洗耳球吹打使之与染液混匀静置染色810分钟弃去染料水洗。
脱色用20盐酸甲醇脱色肉眼观察玻片呈粉红色为宜显微镜下观察结果。
细胞特征细胞细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成的是淋巴细胞中数量最多、功能最复杂的一类细胞占外周血液淋巴细胞总数的7580。
免疫学实验报告
实验一免疫学实验一、免疫细胞检测：1、淋巴细胞转化试验2、E花环形成试验3、大吞噬试验4、小吞噬试验二、凝集试验（玻片法）凝集+ 不凝集-细菌鉴定结果：三、酶联免疫吸附试验（ELISA）示教原理：结果：实验二细菌形态观察及革兰染色一、观察细菌的基本形态：1、球菌2、杆菌3、螺形菌葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）二、观察细菌的特殊结构：1、芽胞2、荚膜3、鞭毛破伤风杆菌肺炎链球菌伤寒杆菌（革兰染色）（荚膜染色）（镀银染色）三、革兰染色1、步骤：2、结果：葡萄球菌呈色，为革兰性菌；大肠杆菌呈色，为革兰性菌。
3、简述革兰染色的技术关键及医学意义。
实验三细菌人工培养及其代谢产物的观察一、常用培养基的制备：1、怎样配制100ml普通肉汤培基？2、含有%琼脂的培基为固体培基，制成平板用于；制成斜面用于。
3、含有%琼脂的培基为半固体培基，主要用于。
二、细菌在培养基中的生长情况1、平板划线分离培养结果（记录菌落形态）2、在液体培基中的生长情况：葡萄球菌：枯草杆菌：链球菌：3、在半固体培基中穿刺接种培养结果伤寒杆菌呈生长，运动；痢疾杆菌呈 生长， 运动。
三、细菌代谢产物的观察 1、糖发酵试验：产酸产气产酸不产气＋ 不分解－2、蛋白质分解试验：阳性＋阴性－3、细菌的色素：4、简述细菌代谢产物检查的意义。
实验四消毒灭菌与细菌分布试验一、记录并分析细菌分布检查的结果：根据上述检查结果，简述其在医学、药学工作中的实际意义。
二、高压蒸汽灭菌常用压力、温度及时间为：高压蒸汽灭菌器的使用要注意的是：三、紫外线杀菌试验1、培养后菌苔生长情况（绘图）：2、简述紫外线杀菌的特点及适用范围。
实验五药物的抗菌试验一、琼脂扩散法1、纸片法2、打孔法二、液体培养基连续稀释法（试管法）药物：浓度：菌种：结果：报告MIC：实验六病原性细菌一、观察下列细菌形态并绘图链球菌淋杆菌结核杆菌（革兰染色）（革兰染色）（抗酸染色）二、化脓性球菌1、葡萄球菌：阳性＋阴性－2、链球菌：3、抗链球菌溶血素“O”试验（简称抗“O”或ASO试验）：抗体效价为：简述其原理及临床意义：三、肠道杆菌：1、观察大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌在SS平板和双糖铁培养基中的菌落特点、生化反应、动力等。
医学免疫学实验
第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。
2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。
3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。
4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。
6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。
7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。
8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。
9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。
主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。
10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。
11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。
中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。
12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。
当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。
填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。
2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。
3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。
免疫学实验一抗,二抗的选择与搭配原则和方法
单克隆二抗
来自单一克隆细胞株，识别单 一表位，具有高特异性和一致 性。
二抗选择依据
种属来源
选择与一抗相同或相近种属来源的二 抗，以减少背景噪音。
抗体类型
根据实验需求选择IgG、IgM等类型 的二抗。
特异性与交叉反应
选择高特异性、低交叉反应的二抗， 以确保实验结果的准确性。
荧光标记
根据实验需求选择不同荧光标记的二 抗，如FITC、PE、APC等。
抗体鸡尾酒法
将多种抗体按一定比例混合后，与样品孵育 ，可同时检测多个抗原并降低背景噪音。
03
二抗选择与搭配原则二抗类型及特点 Nhomakorabea01
02
03
04
IgG类二抗
针对特定种属的IgG，如小鼠、 大鼠、兔等，具有高特异性和 亲和力。
IgM类二抗
主要用于检测IgM抗体，常用 于病毒感染等研究。
多克隆二抗
由多种克隆细胞株混合而成， 可识别多个表位，增加检测灵 敏度。
免疫学实验一抗二抗的选择与 搭配原则和方法
目
CONTENCT
录
• 引言 • 一抗选择与搭配原则 • 二抗选择与搭配原则 • 实验方法与技术 • 结果分析与解读 • 实验案例分享与讨论
01
引言
实验目的与意义
探究抗原与抗体之间的特异性结合关系，为免疫学研究和医学诊 断提供理论支持和实践指导。
通过一抗二抗的选择与搭配，实现对抗原的高灵敏度、高特异性 检测，提高实验的准确性和可靠性。
免疫学实验概述
免疫学实验是研究抗原与抗体 相互作用及其相关生物学效应 的重要手段，涉及免疫学、生 物化学、分子生物学等多个学 科领域。
免疫学实验包括抗原抗体反应 、免疫细胞功能检测、免疫分 子检测等多个方面，其中抗原 抗体反应是免疫学实验的核心 内容之一。
免疫学实验报告
免疫学实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。
抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。
抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。
抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。
此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。
关键字：牛血清白蛋白（BSA) 抗血清抗体效价免疫实验过程：本次实验一共分为三个分实验：实验一：免疫实验二：抽血、放血，分离抗血清实验三：ELISA测定抗体效价实验一：免疫一、抗血清制备的原理用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。
抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。
二、目的制备高效价的抗血清三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：1mL 注射器，酒精棉球，剪刀材料：家兔，小鼠试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA)三、方法和步骤1、动物编号左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。
红色表示十位数,用黄色表示个位数。
免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。
2、动物抓取及注射按如下图所示抓取目标动物家兔为300～600 μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100 μg /次（10-20，20~40 μg / ml），每次不超过。
免疫学实验-凝集试验
实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
免疫实验 免疫学及免疫检测技术试验
2、加于淋巴细胞分离液上层，离心：500g 20min
（小于1000rpm)
！沿管壁滴加
!淋巴细胞分离液取法
离心
单个核细胞 （斜面！）
3、吸出细胞，悬于营养缓冲液（1～2倍量含5IU/ml 肝素、2％灭活小牛血清的PBS液 ），离心：200g 10min，除去血小板。
4、洗涤：同样营养液洗涤2次，洗去淋巴细胞分离 液，离心： 500g 10min
免疫学实验
实验一、外周血单个核细胞的分离
单个核细胞： 一、基本原理 ?常用哪些方法分离细胞，免疫学可采用哪些方法 本实验是利用不同的细胞之间密度不同的性质，通过 速度沉降法来分离制备外周血中单个核细胞。 二、操作： 1、稀释血：1ml血+1ml缓冲液（含5～10IU/ml肝素的 PBS，无血清 ）（用滴管）
•荧光各孔：阴性对照：Ab-Ag-FITC-Ab，阳性对照用 200ng/ml，500ng/ml
37℃，1hr，洗涤液洗涤三次
3、加酶标抗体、荧光标记抗体：
•所有ELISA各孔均加100ul（已稀释好,稀释倍数：2000
•各荧光孔不加酶标抗体，加荧光标记抗体100ul,(已稀释 好，稀释倍数：50)
实验四、免疫荧光检测技术
一、基本原理：
荧光双抗夹心法定位与定量抗原
二、操作：
1、抗体包被：（同实验二） 2、加样本：同实验二，但在本实验中不做标准曲 线，样品加两个稀释浓度，如1：20，1：40，另外 加一个阳性对照（用人IgG标准），每孔做一个复 孔，加空白对照共计8孔。 3、加荧光抗体：从这里开始与实验二不同之处是 一定要记得避光操作。按照要求加入一定稀释度的 荧光标记抗人IgG抗体（一般为1：80倍左右），避 光37℃保温箱中保温30-45分钟。
免疫学实验一抗,二抗的选择与搭配原则和方法
用含此片段域 的免疫原制备 出的抗体。
用含该表面蛋 白的胞外域来 免疫制备的抗 体。
• 3.样本的物种
选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与
不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸 序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说 明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体 不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种 尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方 法来预测交叉反应，可应用 Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同 源性比对。
【Anti-IgG还是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment】
➢在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞 等细胞内，通常含有较多的Fc受体，这时候选择二抗时最好选择AntiIgG, F（ab’）2 fragment这样的特异性二抗，这样就消除了由于Fc部 分与IgG的非特异性结合。 ➢常规的Anti-IgG （H+L）二抗与IgG的重链和轻链都有结合反应，即 与IgG的Fc的F（ab’）2片段都能结合； ➢由于IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此Anti-IgG （H+L） 与它们都有交叉反应。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment经过了IgG Fc 片段的吸附，因此只与IgG的F（ab’）2片段结合。
➢ 样本蛋白的结构域 全长蛋白、蛋白片段、多肽、
细菌、细胞
蛋白片断或一种 特殊的同型物或 蛋白全长的某一 区域
用FACS流式检 测活细胞的表面 蛋白
➢ 样本的提取和处理过程 某些抗体要求样本经过某些特殊处理，
例如：许多抗体只识别还原和变性的、 表位已暴露不受二级四级结构阻碍的 蛋白样本， 某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。 当选择免疫组化的抗体时，应注意某 些抗体只识别未固定的冷冻的组织， 另一些抗体则适用于无需抗原修复解 交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，
实验一_双向免疫扩散试验
实验一双向免疫扩散试验一、实验目的1、熟练掌握免疫扩散法的操作步骤2、掌握抗血清效价的测定和特异性抗体的分析技术二、实验原理在一定条件下，抗原能与相应的抗体相互作用，发生免疫沉淀反应。
免疫扩散法就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。
抗原抗体复合物的沉淀带是一种特异性的半渗透性屏障，它可以阻止免疫学性质与其相似的抗原抗体分子通过，而允许那些性质不相似的分子继续扩散，这样由不同抗原或不同抗体所形成的沉淀带各有各的位置，从而可以分离和鉴定混合系统。
利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状。
而且孔径很大，可以允许大分子物质（分子量自十几万到几百万以上）自由通过。
因为大多数抗原和抗体的分子量都在20 万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。
而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。
双向免疫扩散法测定时将加热溶化的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝固后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内，使抗原和抗体在琼脂板上相互扩散。
当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的结合且比例适当时，将会形成抗原抗体复合物的沉淀，该沉淀可在琼脂中呈现一条不透明的白色沉淀线。
如果抗原与抗体无关，就不会出现沉淀线，因此可以通过该试验，用特异性抗体鉴定抗原，或反之用已知抗原鉴定抗体。
三、实验仪器和试剂1、仪器设备载玻片、打孔器和挑针、湿盒、恒温箱、三角瓶、移液管、微量移液器2、试剂和材料（1）生理盐水（2）1.2%琼脂胶：称取1.2 g 琼脂糖，加100mL 生理盐水，加热溶解（3）抗原及相应免疫血清：抗原为人IgG，抗体为羊抗人IgG 免疫血清四、实验步骤1、制备琼脂玻片：将已加热溶化的1.2%琼脂5mL，迅速倾入洁净干燥的载玻片上，室温自然冷却凝固。
免疫学实验——精选推荐
免疫学实验实验⼀凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成⾁眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥⽽呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发⽣特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分⼦间的静电排斥⼒，此时已有凝集的趋向，在电解质（如⽣理盐⽔）参与下，由于离⼦的作⽤，中和了抗原抗体复合物外⾯的⼤部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥⼒，分⼦间相互吸引，凝集成⼤的絮⽚或颗粒，出现了⾁眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进⾏定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两⼤类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[⽬的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作⽅法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻⽚，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），⽛签或⽕柴棒，记号笔。
2. 灭菌的⽣理盐⽔，灭菌的0.5%⽯炭酸⽣理盐⽔。
3. 布⽒杆菌病试管凝集抗原，布⽒杆菌病平板凝集抗原，布⽒杆菌病虎红平板凝集抗原，布⽒杆菌病阳性⾎清，布⽒杆菌病阴性⾎清，被检⾎清（⽜、⽺或猪）。
4. 鸡⽩痢平板凝集抗原，鸡⽩痢阳性⾎清，鸡⽩痢阴性⾎清，被检鸡⾎清。
[实验内容及操作⽅法]（⼀）试管凝集试验以⽜布⽒杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份⾎清⽤试管4⽀，另取3⽀试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检⾎清有多份，对照只需做1份。
2. 被检⾎清稀释：第1管加⼊2.3ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔，第2、3、4管加⼊0.5 ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔；然后⽤加样器或刻度吸管吸取被检⾎清0.2 ml，加⼊第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加⼊第2管中，混匀后吸取0.5 ml加⼊第3管，依此类推⾄第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
免疫学实验实验一吞噬细胞的吞噬作用
无菌观念
严格贯彻“无菌概念”的培养和训练，严格实施“ 无菌操作”。
实验中如发生意外，如菌液洒在桌面或含活菌的 实验器材损坏使细菌溢出，污染衣物手指等，应 立即报告老师，及时进行消毒处理。
吸过菌液的吸管等要放在0.1%新洁尔灭溶液中 ，不得放在桌上，更不可冲洗于水槽内。用过的 带菌玻片也应放于含消毒液的容器内。
步骤
一滴抗凝剂 双凹片 1滴血，用采血针混 匀
点酒精灯 接种环烧3次 取3～4环菌液 加入血中用接种环混匀 温育（37度）30 分钟 推片（慢、厚） 自然干燥
加瑞氏染液2滴20秒 加缓冲液4滴（染液 与缓冲液比为1:2） 混匀 染色10分钟 冲洗 吸干 油镜观察
*纸 污物盆，针、双凹片 瓷缸（讲台）， 油片 玻璃缸（水池旁） 泡手
油镜的使用
保护：拿取手式 观察：标本固定载物台上 低倍镜找到标本
低倍镜移开 滴香柏油 换油镜 目镜观 察，微调至清晰 清洁：使用完毕立即用擦镜纸（滴加二甲苯 ）擦干镜头上的油
操作：小吞噬（中性粒细胞对小颗粒物质 的吞噬）
器材：采血针1根/人，棉签3根/人 载玻片1张/人，双凹片2张/2人 抗凝剂1支/桌，细菌1支/桌 酒精灯1个/2人，接种环1个/2人
示教片
大吞噬现象
1、淀粉溶液注入豚鼠腹腔内 2、次日再注入淀粉溶液，1小时后腹腔注入鸡血球 悬液 3、血球注入后1小时吸取豚鼠腹腔液，瑞氏染色 4、油镜观察，可见巨噬细胞内吞噬有鸡血球
免疫学实验技术
免疫学实验技术
免疫学实验技术是一种用于研究和分析免疫系统的实验方法。
它涉及到各种技术和手段，用于检测、分析和研究免疫细胞、免疫分子以及免疫反应。
其中一些常见的免疫学实验技术包括：
1. 流式细胞术：这是一种用于对单个细胞进行高速分析和分选的技术。
它可以用于检测细胞表面标志物、细胞内蛋白质、细胞功能等。
2. 免疫组织化学：该技术用于检测组织样本中的特定抗原或蛋白质。
通过使用特异性抗体与组织中的目标抗原结合，然后通过显色或荧光染料进行可视化。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是一种常用的检测体液中特定抗体或抗原的技术。
ELISA 利用抗体与抗原的特异性结合，并通过酶催化的显色反应来定量检测目标分子。
4. Western blotting：该技术用于检测蛋白质样本中的特定抗原。
它通过电泳分离蛋白质，然后将其转移到膜上，再使用特异性抗体进行检测。
5. 免疫沉淀：这是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术。
通过使用特异性抗体捕获目标蛋白质，然后通过沉淀和分析来确定与其相互作用的其他蛋白质。
6. 细胞培养和功能分析：免疫学实验常涉及细胞培养，如淋巴细胞的激活、增殖和功能测定，以研究免疫细胞的行为和应答。
这些技术在免疫学研究、疾病诊断、药物开发等领域都有广泛的应用。
随着技术的不断发展，新的免疫学实验技术也在不断涌现，为深入了解免疫系统的功能和机制提供了更多的手段和工具。
免疫试验
抗血清制备及抗体效价测定李嘉玲（华中农业大学生命科学技术学院生物技术1002班）【摘要】目的利用小鼠制备牛血清白蛋白抗血清并测定其效价。
方法以牛血清白蛋白作为抗原，通过腹腔注射免疫雄性小鼠，从而制备抗血清，通过ELISA测定抗血清的效价。
结果抗血清的最高效价1／16000。
结论通过酶联免疫吸附方法可以准确的测定抗体的效价。
【关键词】小鼠酶联免疫吸附抗血清效价Antiserum Preparation And Antibody Titer Analysis 【Abstract】Objective the antiserum were prepared against the BSA and use ELISA to analysis titer of antiserum. Method use BSA as antigen,immunized male mice by intraperitoneal injection to get antiserum,then use ELISA to analysis titer of antiserum.Result ELISA text gave a BSA antibody titer of 1／16000. Conclusion ELISA is a good way to ananlysis the titer of antibody.【Key words】mice ELISA antiserum titer前言BSA，牛血清白蛋白，一种白色结晶或类似白色冷冻干燥粉末，在酶切反应缓冲液中加入BSA，可以对酶起保护作用。
本实验主要利用其对小鼠的抗原性质制备抗血清。
本实验采用的抗体效价测定方法是ELISA，该方法操作渐渐，价格低廉，可进行大批量实验。
且使用方便，无放射性危害，有较高的敏感性和特异性。
1.材料与方法1.1材料与仪器适用适龄、健壮的雄性小鼠完全弗氏佐剂BSA PBST HRP标记羊抗鼠IgG 0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液洗涤液底物溶液2MH SO酶标仪酶标板保鲜膜排枪241.2方法1.2.1抗原制备完全弗氏佐剂：石蜡油（3—6份）、羊毛脂（1份）、卡介苗（3—5mg/ml）配制方法：石蜡油+羊毛脂（溶化按比例吸取）+ 卡介苗→混合→分装→保存1.2.2免疫制备抗血清1.2.2.1免疫途径小鼠腹腔注射：以左手抓取小鼠，使腹部朝上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.5~1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液。
免疫试验
实验七淋巴细胞增殖试验一、目的要求：1. 掌握淋巴增殖试验的原理与用途；2. 熟悉淋巴细胞增殖试验常用的技术方法。
二、实验原理：1.淋巴细胞增殖试验又称淋巴细胞转化试验（Lymphocyte proliferation / transformation test）,是指淋巴细胞在体外培养时，受到特异性抗原或非特异性促有丝分裂原如植物血凝素（PHA）或刀豆蛋白A (ConA)刺激后，可出现蛋白质及核酸合成增加，细胞体积增大，胞质增加，出现空泡，核仁明显，染色质疏松，并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞增殖或淋巴细胞转化，其增殖能力或转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平。
淋巴细胞增殖试验常用的方法有形态学方法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法，MTT 比色以及荧光染料流式细胞仪计数法等，可根据不同的试验条件及试验目的，选择不同的试验方法。
2.本试验目的是形态学方法，观察小鼠血液中的T淋巴细胞在体外培养过程中，当加入促有丝分裂原ConA(刀豆蛋白A)刺激后，可转化为体积较大的淋巴母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁，把细胞制成涂片，在显微镜下可观察到细胞转化的典型形态。
为什么只考虑T淋巴细胞而不考虑B淋巴细胞？因为：促有丝分裂原小鼠T细胞小鼠B细胞ConA / PHA + _也就是说，ConA / PHA能刺激T细胞增殖，而不能刺激B细胞，而其他细胞如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡成碎片。
三、应用：该实验是细胞免疫学功能检测的一项基本技术，即可在临床上作为测定机体细胞免疫功能的指标之一，也可用于免疫药理学的研究，T细胞功能检测（新药开发，疫苗研制）。
四、实验材料1.动物：清洁级小鼠20只/班；2.试剂：肝素抗凝剂，RPMI-1640完全细胞培养基，NH4cl (8.5g/L),甲醇，吉姆萨-瑞士染液，ConA；3.耗材：无菌青霉素小瓶，离心管，吸管，载玻片；4.仪器：离心机，水浴锅，CO2培养箱，显微镜。
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实验一凝集反应
一、概述
凝集反应是颗粒性抗原（如细菌、细胞抗原或包被有抗原的载体）与相应抗体结合后，在适宜条件下出现肉眼可见凝集块的反应。
凝集反应分为直接凝集反应、间接凝集反应、反向间接凝集反应、金黄色葡萄球菌协同凝集反应等不同类型。
凝集试验利用各种凝集反应来检测抗原或抗体，是抗原抗体检测方法中的一个大类，
二、常用术语
1、致敏载体：在间接凝集反应中预先包被可溶性抗原和抗体的载体称为致敏载体。
2、效价：通常以反应强度“＋＋”的孔的血清最高稀释度为试验效价，可反映待检抗体（或抗原）的含量，也称为滴度。
三、ABO血型鉴定试验（直接凝集反应）
1. 原理：直接凝集反应是细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适宜条件下出现肉眼可见凝集块的反应。
ABO血型鉴定试验利用直接凝集反应检测红细胞表面的A、B 抗原，进而判断血型。
ABO血型鉴定试验中，红细胞是颗粒性抗原，抗A、抗B是其相应抗体。
若红细胞表面有A抗原，和抗A抗体会形成肉眼可见凝集块；若有B抗原，和抗B 抗体会形成肉眼可见凝集块。
将受检血液分别与抗A或抗B混匀，根据是否出现凝集块判断红细胞表面是否有A抗原或B抗原，进而推断血型，若有A抗原无B抗原是A型血，若有B抗原无A抗原是B型血，若既有A抗原又有B抗原是AB型血，若无A或B抗原是O 型血。
2. 方法：消毒取耳垂或指尖血制备红细胞悬液→于白瓷板的两个孔内各加1滴抗A或1滴抗B→各加1滴红细胞悬液于抗A或抗B，混匀→5~10分钟后观察红细胞是否出现凝集→根据凝集情况判断血型。
3. 结果判断：
四、血清类风湿因子测定（间接凝集反应）
1. 原理：将可溶性抗原（蛋白质或多糖等）预先吸附于载体（细胞、细菌、乳胶颗粒等），相当于细胞或细菌性颗粒性抗原，再与相应抗体结合，适宜条件下出现凝集块，称为间接凝集反应，此反应为正向间接凝集反应。
血清类风湿因子测定试验利用（正向）间接凝集反应检测类风湿因子。
在类风湿关节炎等疾病患者的血清中可出现含量较高的类风湿因子，检测类风湿因子水平可作为类风湿关节炎等疾病诊断的辅助指标。
类风湿因子是抗变性IgG的抗体，人类自身变性IgG是其相对应抗原。
预先将人IgG吸附于红细胞表面而成为致敏红细胞（致敏载体），用来检测类风湿因子，若患者血清中有类风湿因子，将和致敏红细胞出现凝集。
2. 方法：。
V型微量反应板1至8孔倍比稀释法加入病人血清（病人血清预先1:10稀释）；同时设
阴性对照孔（第9孔）和阳性对照孔（第10孔）→1至10孔均加50ul致敏红细胞（此时1至8孔血清稀释度分别为1:40，1:80，1:160…）→微量振荡器振荡混匀1分钟，→37℃静置30分钟后观察结果。
3. 结果判断
（1）凝集程度判断：＋＋＋＋（所有红细胞凝集，均匀布满孔底，孔底中心无红点出现）；＋＋＋（大部分红细胞凝集，小部分红细胞未凝集沉积在孔底，在孔底中心出现小红点）；＋＋（一半红细胞凝集，一半红细胞未凝集沉积在孔底出现孔底中心红点）；＋（小部分红细胞凝集，大部分红细胞未凝集沉积在孔底，在孔底中心出现红点，红点比“＋＋”红点大，但比阴性对照小）；－（红细胞紧密集中于孔底，在孔底中心出现红点）（2）效价：以凝集程度“＋＋”的孔的血清最高稀释度为试验效价。
（3）根据1至8孔各孔凝集程度及其稀释度判断待检病人血清类风湿因子效价；凝集效价＞1:40判定为类风湿因子阳性。
五、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
1. 原理：金黄色葡萄球菌作为载体预先吸附抗体，再与相应抗原反应，可出现凝集块，此为金黄色葡萄球菌协同凝集试验。
协同凝集试验属于反向间接凝集试验（抗体预先吸附于载体，再与相应抗原反应，出现凝集块）。
金黄色葡萄球菌协同凝集试验可用于检测待检标本中是否有某种抗原。
2. 方法：按照实验指导进行操作。
3. 结果判断与分析：观察玻片第一格内的细小白色凝集块；分析第2、3格为何未出现凝集。
实验八非特异性免疫实验
一、概述
非特异性免疫实验是检测非特异性免疫各种成分功能的实验，如吞噬细胞（中性粒细胞、巨噬细胞）的吞噬功能检测。
二、常用术语
吞噬百分率=（吞噬异物的吞噬细胞数/观察记录的吞噬细胞总数）×100%
吞噬指数=（被吞噬的异物总数/观察记录的吞噬细胞总数）×100%
三、中性粒细胞的吞噬作用
该试验检测中性粒细胞的吞噬功能。
可以将葡萄球菌作为异物，加入到有中性粒细胞的外周血（体外法）或注射于小鼠腹腔（体内法），一定时间后，分别制备血片和腹腔液涂片，瑞氏染色后镜检，寻找中性粒细胞（核深染且分叶），随机连续计数100个中性粒细胞，分别计数其中吞噬有葡萄球菌的中性粒细胞数和吞噬的细菌总数，计算吞噬百分率和吞噬指数，反映中性粒细胞的吞噬功能。
该试验为示教试验，在显微镜下观察吞噬有葡萄球菌的中性粒细胞。
四、巨噬细胞的吞噬作用
该试验检测巨噬细胞的吞噬功能。
可以将鸡红细胞作为异物，注射于豚鼠腹腔内，1小时后，制备腹腔液涂片，瑞氏染色后镜检，寻找巨噬细胞，随机连续计数100个巨噬细胞，分别计数其中吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数，计算吞噬百分率和吞噬指数，反映巨噬细胞的吞噬功能。
该试验为示教试验，在显微镜下观察吞噬有鸡红细胞的
巨噬细胞。