免疫试验一

实验一凝集反应

一、概述

凝集反应是颗粒性抗原（如细菌、细胞抗原或包被有抗原的载体）与相应抗体结合后，在适宜条件下出现肉眼可见凝集块的反应。

凝集反应分为直接凝集反应、间接凝集反应、反向间接凝集反应、金黄色葡萄球菌协同凝集反应等不同类型。

凝集试验利用各种凝集反应来检测抗原或抗体，是抗原抗体检测方法中的一个大类，

二、常用术语

1、致敏载体：在间接凝集反应中预先包被可溶性抗原和抗体的载体称为致敏载体。

2、效价：通常以反应强度“＋＋”的孔的血清最高稀释度为试验效价，可反映待检抗体（或抗原）的含量，也称为滴度。

三、ABO血型鉴定试验（直接凝集反应）

1. 原理：直接凝集反应是细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适宜条件下出现肉眼可见凝集块的反应。ABO血型鉴定试验利用直接凝集反应检测红细胞表面的A、B 抗原，进而判断血型。ABO血型鉴定试验中，红细胞是颗粒性抗原，抗A、抗B是其相应抗体。若红细胞表面有A抗原，和抗A抗体会形成肉眼可见凝集块；若有B抗原，和抗B 抗体会形成肉眼可见凝集块。将受检血液分别与抗A或抗B混匀，根据是否出现凝集块判断红细胞表面是否有A抗原或B抗原，进而推断血型，若有A抗原无B抗原是A型血，若有B抗原无A抗原是B型血，若既有A抗原又有B抗原是AB型血，若无A或B抗原是O 型血。

2. 方法：消毒取耳垂或指尖血制备红细胞悬液→于白瓷板的两个孔内各加1滴抗A或1滴抗B→各加1滴红细胞悬液于抗A或抗B，混匀→5~10分钟后观察红细胞是否出现凝集→根据凝集情况判断血型。

3. 结果判断：

四、血清类风湿因子测定（间接凝集反应）

1. 原理：将可溶性抗原（蛋白质或多糖等）预先吸附于载体（细胞、细菌、乳胶颗粒等），相当于细胞或细菌性颗粒性抗原，再与相应抗体结合，适宜条件下出现凝集块，称为间接凝集反应，此反应为正向间接凝集反应。血清类风湿因子测定试验利用（正向）间接凝集反应检测类风湿因子。在类风湿关节炎等疾病患者的血清中可出现含量较高的类风湿因子，检测类风湿因子水平可作为类风湿关节炎等疾病诊断的辅助指标。类风湿因子是抗变性IgG的抗体，人类自身变性IgG是其相对应抗原。预先将人IgG吸附于红细胞表面而成为致敏红细胞（致敏载体），用来检测类风湿因子，若患者血清中有类风湿因子，将和致敏红细胞出现凝集。

2. 方法：。

V型微量反应板1至8孔倍比稀释法加入病人血清（病人血清预先1:10稀释）；同时设

阴性对照孔（第9孔）和阳性对照孔（第10孔）→1至10孔均加50ul致敏红细胞（此时1至8孔血清稀释度分别为1:40，1:80，1:160…）→微量振荡器振荡混匀1分钟，→37℃静置30分钟后观察结果。

3. 结果判断

（1）凝集程度判断：＋＋＋＋（所有红细胞凝集，均匀布满孔底，孔底中心无红点出现）；＋＋＋（大部分红细胞凝集，小部分红细胞未凝集沉积在孔底，在孔底中心出现小红点）；＋＋（一半红细胞凝集，一半红细胞未凝集沉积在孔底出现孔底中心红点）；＋（小部分红细胞凝集，大部分红细胞未凝集沉积在孔底，在孔底中心出现红点，红点比“＋＋”红点大，但比阴性对照小）；－（红细胞紧密集中于孔底，在孔底中心出现红点）（2）效价：以凝集程度“＋＋”的孔的血清最高稀释度为试验效价。

（3）根据1至8孔各孔凝集程度及其稀释度判断待检病人血清类风湿因子效价；凝集效价＞1:40判定为类风湿因子阳性。

五、金黄色葡萄球菌协同凝集试验

1. 原理：金黄色葡萄球菌作为载体预先吸附抗体，再与相应抗原反应，可出现凝集块，此为金黄色葡萄球菌协同凝集试验。协同凝集试验属于反向间接凝集试验（抗体预先吸附于载体，再与相应抗原反应，出现凝集块）。金黄色葡萄球菌协同凝集试验可用于检测待检标本中是否有某种抗原。

2. 方法：按照实验指导进行操作。

3. 结果判断与分析：观察玻片第一格内的细小白色凝集块；分析第2、3格为何未出现凝集。

实验八非特异性免疫实验

一、概述

非特异性免疫实验是检测非特异性免疫各种成分功能的实验，如吞噬细胞（中性粒细胞、巨噬细胞）的吞噬功能检测。

二、常用术语

吞噬百分率=（吞噬异物的吞噬细胞数/观察记录的吞噬细胞总数）×100%

吞噬指数=（被吞噬的异物总数/观察记录的吞噬细胞总数）×100%

三、中性粒细胞的吞噬作用

该试验检测中性粒细胞的吞噬功能。可以将葡萄球菌作为异物，加入到有中性粒细胞的外周血（体外法）或注射于小鼠腹腔（体内法），一定时间后，分别制备血片和腹腔液涂片，瑞氏染色后镜检，寻找中性粒细胞（核深染且分叶），随机连续计数100个中性粒细胞，分别计数其中吞噬有葡萄球菌的中性粒细胞数和吞噬的细菌总数，计算吞噬百分率和吞噬指数，反映中性粒细胞的吞噬功能。该试验为示教试验，在显微镜下观察吞噬有葡萄球菌的中性粒细胞。

四、巨噬细胞的吞噬作用

该试验检测巨噬细胞的吞噬功能。可以将鸡红细胞作为异物，注射于豚鼠腹腔内，1小时后，制备腹腔液涂片，瑞氏染色后镜检，寻找巨噬细胞，随机连续计数100个巨噬细胞，分别计数其中吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数，计算吞噬百分率和吞噬指数，反映巨噬细胞的吞噬功能。该试验为示教试验，在显微镜下观察吞噬有鸡红细胞的

巨噬细胞。